本發(fā)明涉及一種含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)的脂質(zhì)體制備方法。

背景技術(shù)：

石墨烯量子點(diǎn)(gqds)是小于100nm的石墨烯單層薄片，雖然石墨烯量子點(diǎn)(gqds)也是石墨烯材料中的一種，但相比于石墨烯，石墨烯量子點(diǎn)(gqds)卻具有邊緣效應(yīng)和量子效應(yīng)的特點(diǎn)，這些特點(diǎn)使其在電子及光電子方面比石墨烯具有更好的發(fā)展?jié)摿?，可?yīng)用于光催化劑、電化學(xué)傳感器等方面。而且石墨烯量子點(diǎn)(gqds)還具有低毒性、熒光穩(wěn)定性和生物相容性等特性，其在藥物/基因載帶、熒光探針和生物成像領(lǐng)域同樣具有廣泛的發(fā)展前景。

長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體是磷脂依靠疏水締合作用在水中自發(fā)形成的一種多層囊泡結(jié)構(gòu)的分子有序組合體。長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體能夠通過(guò)實(shí)體瘤的高通透性和滯留效應(yīng)被動(dòng)靶向腫瘤組織，減少化學(xué)藥物毒副作用，而且能夠在循環(huán)系統(tǒng)中保護(hù)藥物不被降解，延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間。因此長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體主要運(yùn)用于治療藥物的載帶,然而，單一的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體存在載藥量較少的問(wèn)題，而且也不能精確的了解脂質(zhì)體進(jìn)入細(xì)胞后的藥物釋放的情況及藥物的釋放效果。

通過(guò)將石墨烯量子點(diǎn)(gqds)和長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體兩者的優(yōu)點(diǎn)相結(jié)合，可制備出包裹石墨烯量子點(diǎn)(gqds)的脂質(zhì)體。在長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的作用下，不僅可以使治療藥物可以長(zhǎng)時(shí)間停留在腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)對(duì)治療藥物的吸收，減少對(duì)非腫瘤細(xì)胞的副作用，而且可防止石墨烯量子點(diǎn)(gqds)和治療藥物被降解。而在石墨烯量子點(diǎn)(gqds)的作用下，可使載帶的治療藥物能更精確的進(jìn)入腫瘤細(xì)胞并有效釋放藥物，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的熒光成像。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)的脂質(zhì)體制備方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)的脂質(zhì)體制備方法，該方法具體步驟如下：

(1).稱(chēng)取1.2～1.5g的碳纖維（cf）加入到250～500ml的圓底三口燒瓶中，再加入混酸混合，在室溫下將混合液超聲2～3h，再將超聲后的混合液放置在80～100℃的油浴鍋中，加熱回流24～36h；反應(yīng)后冷卻至室溫，向混合液中加入400～800ml的去離子水，用離心機(jī)以6000～8000rpm的轉(zhuǎn)速離心30～45min，除去下層沉淀物，收集上層黑色溶液，再對(duì)黑色溶液用0.22～0.45μm的過(guò)濾膜抽濾，除去較大顆粒的物質(zhì)，用3500d的透析袋對(duì)其進(jìn)行透析3～5天，即可得到石墨烯量子點(diǎn)(gqds)溶液，所述的混酸是硫酸和硝酸的混合物，h2so4:hno3=(3～4):1；

(2).取10ml濃度為10～12mg/l的步驟(1)得到的石墨烯量子點(diǎn)(gqds)溶液加入到85ml去離子水，再加入5ml的有機(jī)溶劑(dmf)，得到100ml濃度為1～1.2mg/ml的石墨烯量子點(diǎn)(gqds)溶液；然后將放在室溫下超聲分散30～45min，超聲分散后放入聚乙烯薄膜袋中，充入氮?dú)鈔2以排出空氣，將聚乙烯薄膜袋熱封，將熱封后的薄膜袋平鋪，，將聚乙烯薄膜袋平鋪置于電子加速器輻照所用的傳送帶上，用電子束流強(qiáng)度為8ma的電子束下對(duì)上述傳送帶上的聚乙烯薄膜袋進(jìn)行輻照30～60min，輻照后，用1000d的透析袋對(duì)輻照后的溶液進(jìn)行透析，透析3～5天，得到輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)溶液；

(3).稱(chēng)量188～376mg氫化大豆磷脂(hspc)、46～92mg高純膽固醇(cho)和34～68mg二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇(dspe-peg2000)混合，將上述混合物加入到3ml氯仿和1ml的甲醇中溶解；然后量取600～800μl上述溶液加入到100～200ml的梨形瓶中，在60～65℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，除去有機(jī)溶劑氯仿和甲醇，30～45min后，在梨形瓶的底部形成一層均勻的脂質(zhì)體，取出，向梨形瓶中加入4～5ml濃度為2～3mg/ml的上述步驟(2)得到的輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)溶液經(jīng)震蕩混合處理后，放入到溫度為60～65℃、轉(zhuǎn)速為200～300rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行水化，水化30～45min，將其進(jìn)行超聲分散處理，使其充分分散，然后，將分散后的脂質(zhì)體溶液通過(guò)脂質(zhì)體擠壓器擠壓，擠壓后，將擠壓后的脂質(zhì)體溶液放置于4～5℃的冰箱中，所述的氫化大豆磷脂(hspc)：高純膽固醇(cho)：二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇(dspe-peg2000)的摩爾比為67:30:3；

(4).將1ml的上述擠壓后的脂質(zhì)體溶液加入到葡聚糖g-(100～150)凝膠分離柱內(nèi)，以速率為2～4ml/min的去離子水洗脫未包封的游離輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)，洗脫2～5min，其中將粒徑較小的輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)較晚洗脫，粒徑較大的脂質(zhì)體會(huì)較早洗脫，收集1～2min之間的洗脫液，即得到粒徑均勻的含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)的脂質(zhì)體。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，具有的優(yōu)點(diǎn)如下：

本發(fā)明的方法，采用混酸加入少量有機(jī)溶劑(dmf)，用電子束對(duì)石墨烯量子點(diǎn)(gqds)溶液進(jìn)行輻照處理，即可得到能在365nm紫外燈照射下發(fā)白色熒光的良好水溶性的輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)，本發(fā)明過(guò)程簡(jiǎn)單，環(huán)境友好，易控制，得到的脂質(zhì)體包封率高。

本發(fā)明所制備的含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體生物毒性更低，具有較好的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1是本實(shí)施例中制備的一種含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的透射電鏡照片。

圖2是本實(shí)施例中制備的一種含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的冷凍電鏡照片。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。

一種含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)的脂質(zhì)體制備方法，該方法具體步驟如下：

(1).稱(chēng)取1.2g的碳纖維（cf）加入到250ml的圓底三口燒瓶中，再加入混酸混合，在室溫下將混合液超聲2h，再將超聲后的混合液放置在80℃的油浴鍋中，加熱回流24h；反應(yīng)后冷卻至室溫，向混合液中加入400ml的去離子水，用離心機(jī)以6000rpm的轉(zhuǎn)速離心30min，除去下層沉淀物，收集上層黑色溶液，再對(duì)黑色溶液用0.22μm的過(guò)濾膜抽濾，除去較大顆粒的物質(zhì)，用3500d的透析袋對(duì)其進(jìn)行透析5天，即可得到石墨烯量子點(diǎn)(gqds)溶液；

(2).取10ml濃度為10mg/l的步驟(1)得到的石墨烯量子點(diǎn)(gqds)溶液加入到85ml去離子水，再加入5ml的有機(jī)溶劑(dmf)，得到100ml濃度為1mg/ml的石墨烯量子點(diǎn)(gqds)溶液；然后將放在室溫下超聲分散30min，超聲分散后放入聚乙烯薄膜袋中，充入氮?dú)鈔2以排出空氣，將聚乙烯薄膜袋熱封，將熱封后的薄膜袋平鋪，，將聚乙烯薄膜袋平鋪置于電子加速器輻照所用的傳送帶上，用電子束流強(qiáng)度為8ma的電子束下對(duì)上述傳送帶上的聚乙烯薄膜袋進(jìn)行輻照60min，輻照后，用1000d的透析袋對(duì)輻照后的溶液進(jìn)行透析，透析5天，得到含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)溶液；

(3).稱(chēng)量188mg氫化大豆磷脂(hspc)、46mg高純膽固醇(cho)和34mg二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dspe-peg2000)混合，將上述混合物加入到3ml氯仿和1ml的甲醇中溶解；然后量取600μl上述溶液加入到100ml的梨形瓶中，在60℃下在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行旋蒸，除去有機(jī)溶劑氯仿和甲醇，30min后，在梨形瓶的底部形成一層均勻的脂質(zhì)體，取出，向梨形瓶中加入4ml濃度為2mg/ml的上述步驟(2)得到的輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)溶液經(jīng)震蕩混合處理后，放入到溫度為60℃、轉(zhuǎn)速為200rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行水化，水化30min，將其進(jìn)行超聲分散處理，使其充分分散，然后，將分散后的脂質(zhì)體溶液通過(guò)脂質(zhì)體擠壓器擠壓，擠壓后，將擠壓后的脂質(zhì)體溶液放置于4℃的冰箱中；

(4).將1ml的上述擠壓后的脂質(zhì)體溶液加入到葡聚糖g-150凝膠分離柱內(nèi)，以速率為2ml/min的去離子水洗脫未包封的游離輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)，洗脫2min，其中將粒徑較小的輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)較晚洗脫，粒徑較大的脂質(zhì)體會(huì)較早洗脫，收集0～2min之間的洗脫液，即得到粒徑均勻的含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)的脂質(zhì)體。

最終制備得到的含有輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)的脂質(zhì)體如圖1、圖2所示，從圖中可以看到，輻照石墨烯量子點(diǎn)(igqds)已順利包裹進(jìn)脂質(zhì)體中。