本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2012年7月12日、申請(qǐng)?zhí)枮?01280033148.4、發(fā)明名稱為“新型fxr(nr1h4)結(jié)合及活性調(diào)節(jié)化合物”的發(fā)明專利申請(qǐng)(國(guó)際申請(qǐng)?zhí)杙ct/ep2012/002941)的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及結(jié)合至nr1h4受體(fxr)并作為fxr的激動(dòng)劑或調(diào)節(jié)劑的化合物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述化合物通過用該化合物結(jié)合所述核受體用于治療及/或預(yù)防疾病和/或病癥的用途。
背景技術(shù)：
：多細(xì)胞有機(jī)體依賴于在細(xì)胞與體液房室之間的高級(jí)信息傳輸機(jī)制。所傳導(dǎo)的信息可以是高度復(fù)雜的并且可以造成涉及細(xì)胞分化、增生或復(fù)制的基因程序的改變。所述信號(hào)，或激素，通常為低分子量分子，諸如肽、脂肪酸或膽固醇衍生物。許多這些信號(hào)通過最終改變特定基因的轉(zhuǎn)錄而產(chǎn)生其效應(yīng)。一組已經(jīng)深入研究過的調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)各種信號(hào)應(yīng)答的蛋白質(zhì)為已知為核受體的轉(zhuǎn)錄因子家族，以下經(jīng)常稱為“nr”。該組成員包括：甾類激素、維生素d、蛻皮激素、順式和反式維生素a酸、甲狀腺激素、膽汁酸、膽固醇-衍生物、脂肪酸(及其他過氧化物酶體增值物)的受體；以及所謂的孤兒受體(orphanreceptors)，也即結(jié)構(gòu)類似于該組其他成員的蛋白質(zhì)，但是對(duì)其沒有已知的配體。孤兒受體可能指示細(xì)胞中未知的信號(hào)通道或者可能是不需要配體激活就可以起作用的核受體。用這些孤兒受體中的一些進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄激活可能在缺乏外源配體的情況下和/或通過起源自細(xì)胞表面的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)生(d.mangelsdorf等人，cell1995，83，835；r.m.evans，mol.endocrinol.2005，19(6)，1429)。通常，在nr中已經(jīng)限定了三個(gè)功能區(qū)域。氨基末端區(qū)域被認(rèn)為是具有一些調(diào)節(jié)功能。其后是dna結(jié)合域，以下簡(jiǎn)稱為“dbd”，通常包括兩個(gè)鋅指單元并且識(shí)別在應(yīng)答基因的啟動(dòng)子中的特定激素應(yīng)答元件(以下簡(jiǎn)稱為“hre”)。在“dbd”中的特定氨基酸殘基已經(jīng)被證實(shí)賦予dna序列結(jié)合特異性(m.schena和k.r.yamamoto，science1988，241，965)。配體結(jié)合域，以下簡(jiǎn)稱為“l(fā)bd”，位于已知nr的羧基末端區(qū)域。在沒有激素的情況下，lbd顯示出會(huì)干擾dbd與其hre的相互作用。激素結(jié)合似乎導(dǎo)致在nr中的構(gòu)象變化并由此開啟了這種干擾(a.brzozowski等人，nature1997，389，753)。沒有l(wèi)bd的nr組成型激活轉(zhuǎn)錄，但是水平較低。有人已提出輔激活因子或者轉(zhuǎn)錄激活因子除了影響靶細(xì)胞的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)以外，還在序列特異轉(zhuǎn)錄因子(基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄機(jī)制)之間建立聯(lián)系。幾種像src-1、actr和grip1的蛋白質(zhì)以配體增強(qiáng)的方式與nr發(fā)生相互作用(d.heery等人，nature，1997，387，733；t.heinzel等人，nature1997，387，43；k.nettles和g.greene，annu.rev.physiol.2005，67，309)。像類固醇激素的核受體調(diào)節(jié)劑通過結(jié)合到細(xì)胞內(nèi)受體上并形成核受體-配體復(fù)合物來影響特定細(xì)胞的生長(zhǎng)與功能。然后核受體-激素復(fù)合物與特定基因的控制區(qū)域內(nèi)的激素應(yīng)答元件(hre)發(fā)生相互作用并且改變特定的基因表達(dá)(a.aranda和a.pascual，physiol.rev.2001，81，1269)。類法尼醇x受體α(當(dāng)指的是人類受體時(shí)下文也常稱為nr1h4)是一種原型2型核受體，其在以雜二聚體方式和類法尼醇x受體一起結(jié)合到靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域時(shí)激活基因(b.forman等人，cell1995，81，687)。nr1h4的相關(guān)生理性配體為膽汁酸(d.parks等人，science1999，284，1365；m.makishima等人，science，1999，284，1362)。最有潛力的一個(gè)是鵝脫氧膽汁酸(cdca)，其調(diào)節(jié)參與膽汁酸體內(nèi)平衡的幾種基因的表達(dá)。法尼醇及其衍生物，一起被稱為類法尼醇，最初描述為在高濃度時(shí)激活大鼠直向同源物，但是他們不激活人類或者小鼠受體。fxr在肝、包括食道、胃、十二指腸、小腸、結(jié)腸在內(nèi)的整個(gè)胃腸道、卵巢、腎上腺和腎中表達(dá)。除了控制細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)外，fxr似乎還通過上調(diào)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子15(嚙齒動(dòng)物)或19(猴、人)參與旁分泌和內(nèi)分泌信號(hào)傳導(dǎo)(j.holt等，genesdev.2003，17，1581；t.inagaki等人，cellmetab.2005，2，217)。充當(dāng)fxr調(diào)節(jié)劑的小分子化合物已經(jīng)在下列出版物中公開：wo2000/037077、wo2003/015771、wo2004/048349、wo2007/076260、wo2007/092751、wo2007/140174、wo2007/140183、wo2008/051942、wo2008/157270、wo2009/005998、wo2009/012125、wo2008/025539和wo2008/025540。最近已經(jīng)綜述了更多的小分子fxr調(diào)節(jié)劑(m.l.crawley，expertopinther.pat.2010，20，1047；d.merk等人，futuremed.chem.2012，4，1015)。在wo2011/020615中，我們公開了下面通式的手性環(huán)亞丙基化合物：其中所述變量的定義與本申請(qǐng)類似。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明所要解決的問題是產(chǎn)生這樣的fxr激動(dòng)劑，特別是與在wo2011/020615中要求保護(hù)的化合物相比，其具有總體上改進(jìn)的物化性質(zhì)，以及降低的疏水性、改進(jìn)的水溶性和更好的膜滲透性。該問題已經(jīng)通過根據(jù)下面通式(1)的化合物、其對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、溶劑化物、前藥和藥物學(xué)上可接受的鹽而解決：其中，r選自coor6、conr7r8、四唑基、so2nr7r8、c1-6烷基、so2-c1-6烷基和h，r6獨(dú)立地選自：h或c1-6烷基，以及r7和r8獨(dú)立地選自：h、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6亞烷基-r9、so2-c1-6烷基，其中r9選自：cooh、oh和so3h；a選自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲哚基、噻吩基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并異噁唑基、苯并呋喃基、苯并三唑基、呋喃基、苯并噻唑基、噻唑基、噁二唑基，它們各自任選地被獨(dú)立地選自oh、o-c1-6烷基、o-鹵代c1-6烷基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c3-6環(huán)烷基和鹵素中的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)所取代；q選自苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基、嘧啶基，它們各自任選地被獨(dú)立地選自c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、鹵素和cf3中的一個(gè)或兩個(gè)基團(tuán)所取代；y選自n或ch；z選自其中，x＝ch、n、no；r1選自氫、c1-3烷基、c3-6環(huán)烷基、c4-5烷基環(huán)烷基，其中c1-3烷基任選地被獨(dú)立地選自鹵素、羥基或c1-6烷氧基中的1-3個(gè)基團(tuán)所取代；r2和r3獨(dú)立地選自氫、c1-3烷基、c1-3鹵代烷基、c1-3烷氧基、c1-3鹵代烷氧基和鹵素。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，在根據(jù)通式(1)的化合物中的r-a選自：在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，在根據(jù)通式(1)的化合物中的q為：在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，在根據(jù)通式(1)的化合物中的z為：在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，根據(jù)通式(1)的化合物選自：在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，根據(jù)通式(1)的化合物為：其中，r選自co2h、conhso2me和四唑基。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及用作藥物的根據(jù)通式(1)的化合物。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及用于預(yù)防和/或治療由fxr介導(dǎo)的疾病的根據(jù)通式(1)的化合物。在另一實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)通式(1)的化合物用于制備預(yù)防和/或治療由fxr介導(dǎo)的疾病的藥物的用途。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述疾病選自：慢性肝內(nèi)或某些形式的肝外膽汁郁積性病癥；肝纖維化；肝的梗阻性或慢性炎性紊亂；肝硬化；脂肪肝及并發(fā)癥；與酒精引發(fā)的肝硬化或與病毒傳染性形式的肝炎相關(guān)的膽汁郁積性和纖維變性效果；在部分肝切除術(shù)后的肝衰竭或肝缺血；化療相關(guān)的脂肪性肝炎(cash)；急性肝衰竭；和/或炎性腸道疾病。在與任一上述或下列實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述疾病選自：脂質(zhì)和脂蛋白紊亂；ii型糖尿病以及i型和ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥，包括糖尿病性腎病、糖尿病性神經(jīng)病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、及臨床顯性長(zhǎng)期糖尿病的其它觀察到的效果；由于強(qiáng)迫脂質(zhì)，特別是甘油三酯蓄積，然后促纖維化途徑激活導(dǎo)致的慢性脂肪性和纖維性變性引起的病癥和疾病，例如非酒精性脂肪肝病(nafld)或非酒精性脂肪性肝炎(nash)；肥胖或代謝綜合征(血脂障礙、糖尿病和體重指數(shù)異常高的合并病癥)；和/或急性心肌梗塞、急性中風(fēng)或作為慢性梗阻性動(dòng)脈粥樣硬化終點(diǎn)發(fā)生的血栓形成。在與任一上述或下列實(shí)施方式相結(jié)合的另一個(gè)實(shí)施方式中，所述疾病選自非惡性過度增殖性紊亂和惡性過度增殖性紊亂，特別是肝細(xì)胞癌、結(jié)腸腺瘤和息肉病、結(jié)腸腺癌、乳腺癌、胰腺癌、巴特氏食管癌和胃腸道和肝臟的其它形式的腫瘤性疾病。已經(jīng)通過在代替前者的1,2-環(huán)亞丙基的1,3-環(huán)亞丁基或1,3-亞氮雜環(huán)丁烷基上引入極性羥基實(shí)現(xiàn)了改進(jìn)的物化性能。令人驚奇地，所得化合物保持了在fxr受體上的活性，而且顯現(xiàn)出改進(jìn)的物化性能，例如較高的水溶性和/或膜滲透性。本發(fā)明的化合物共享權(quán)利要求1中根據(jù)通式(1)的共同化學(xué)結(jié)構(gòu)。在與任一上述或下列實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及根據(jù)通式(1)的對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體、或藥物學(xué)上可接受的鹽。在與任一上述或下列實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，通式(1)中的r選自coor6、conr7r8、so2nr7r8和so2-c1-6烷基。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，通式(1)中的r6為h。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，通式(1)中的r7和r8彼此獨(dú)立地選自h和so2-c1-6烷基。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，通式(1)中的r7為h。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，通式(1)中的r8為so2-c1-6烷基。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，a選自苯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、吲唑基和噁二唑基。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，a由選自c1-6烷基，更優(yōu)選c1-3烷基中的一或兩個(gè)基團(tuán)取代。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，a為未取代的。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，q為苯基。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，q由選自鹵素中的一或兩個(gè)基團(tuán)取代，更優(yōu)選由選自鹵素中的一個(gè)基團(tuán)，特別是cl取代。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，z為在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，x＝ch。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，r1為c3-6環(huán)烷基，特別是環(huán)丙基。在與任一上述或下述實(shí)施方式相結(jié)合的優(yōu)選實(shí)施方式中，r2和r3獨(dú)立地選自鹵素，特別是cl。本發(fā)明的化合物可以為前藥化合物的形式?！扒八幓衔铩敝傅氖且环N衍生物，其在活體內(nèi)在生理?xiàng)l件下通過與酶、胃酸等的反應(yīng)，例如通過氧化、還原、水解等(每一個(gè)反應(yīng)都是在酶促下進(jìn)行的)而轉(zhuǎn)變?yōu)楸景l(fā)明的化合物。所述前藥的實(shí)例為這樣的化合物，其中本發(fā)明化合物中的氨基被?；⑼榛蛘吡姿峄纬?，例如，二十酰氨基、丙氨酰氨基、新戊酰氧甲氨基，或者其中羥基被?；?、烷基化、磷酸化或者被轉(zhuǎn)化為硼酸酯，例如乙酰氧基、棕櫚酰氧基、新戊酰氧基、琥珀酰氧基、富馬酰氧基、丙氨酰氧基，或者其中的羧基被酯化或者酰胺化。這些化合物可以根據(jù)公知的方法由本發(fā)明的化合物制備。所述前藥的其它實(shí)例為這樣的化合物，其中本發(fā)明化合物中的羧酸部分被轉(zhuǎn)化為，例如，烷基-、芳基-、膽堿-、氨基、酰氧甲基酯、亞麻?；ァ１景l(fā)明化合物的代謝物也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。當(dāng)本發(fā)明的化合物或者他們的前藥可能發(fā)生互變異構(gòu)，例如酮-烯醇互變異構(gòu)時(shí)，則各種形式，例如酮式和烯醇式，以及它們?nèi)魏伪壤幕旌衔锒荚诒景l(fā)明的范圍之內(nèi)。相同的情形也適用于立體異構(gòu)體，例如對(duì)映異構(gòu)體、順式/反式異構(gòu)體、構(gòu)象異構(gòu)體等。如果需要，可以用在本領(lǐng)域中公知的方法，例如用液相色譜法，將異構(gòu)體分離。相同的情形適用于用例如手性固定相法分離對(duì)映異構(gòu)體。另外，可以通過將對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化為非對(duì)映異構(gòu)體來將它們分離，也即，將它們和對(duì)映體純的輔助化合物結(jié)合，隨后分離所得到的非對(duì)映異構(gòu)體并裂解所述輔助殘基。或者，可以由利用光學(xué)純?cè)牧系牧Ⅲw選擇性合成來獲得本發(fā)明化合物的任何對(duì)映異構(gòu)體。從外消旋混合物獲得純的對(duì)映異構(gòu)體的另一種方式可采用手性抗衡離子的對(duì)映體選擇性結(jié)晶。本發(fā)明的化合物可以是藥物學(xué)上可接受的鹽或者溶劑化物的形式。術(shù)語“藥物學(xué)上可接受的鹽”指的是由藥物學(xué)上可接受的無毒性堿或者酸，包括無機(jī)堿或者酸和有機(jī)堿或者酸，制備的鹽。當(dāng)本發(fā)明的化合物包含一種或多種酸性或者堿性基團(tuán)時(shí)，本發(fā)明也包括它們相應(yīng)的藥物學(xué)上或者毒理學(xué)上可接受的鹽，特別是它們藥物學(xué)上可利用的鹽。因此，含有酸性基團(tuán)的本發(fā)明的化合物可以用這些組表示并且可以根據(jù)本發(fā)明以例如堿金屬鹽、堿土金屬鹽或者銨鹽而使用。這些鹽的更具體實(shí)例包括鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、或者與氨或者有機(jī)胺，比如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或者氨基酸形成的鹽。含有一種或多種堿性基團(tuán)(也即可以被質(zhì)子化的基團(tuán))的本發(fā)明化合物可以以它們與無機(jī)或者有機(jī)酸的加成鹽的形式存在并根據(jù)本發(fā)明而使用。適合的酸的實(shí)例包括氯化氫、溴化氫、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水楊酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、特戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富馬酸、馬來酸、蘋果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗壞血酸、異煙酸、檸檬酸、己二酸以及本領(lǐng)域中技術(shù)人員公知的其它酸。當(dāng)本發(fā)明化合物在分子中同時(shí)含有酸性和堿性基團(tuán)時(shí)，除了所提及的鹽形式之外，本發(fā)明還包括內(nèi)鹽或者內(nèi)銨鹽(兩性離子)。各個(gè)鹽可以用本領(lǐng)域中技術(shù)人員公知的常規(guī)方法來制備，例如，通過在溶劑或者分散劑中將這些化合物與有機(jī)或無機(jī)酸或者堿相接觸，或者通過與其它鹽的陰離子交換或者陽離子交換。本發(fā)明還包括本發(fā)明化合物的所有鹽，其由于較低的生理相容性不適合直接用在藥品中，但是其可用作，例如，化學(xué)反應(yīng)或者制備藥物學(xué)上可接受的鹽的中間體。本發(fā)明的化合物還可以以溶劑合物的形式存在，例如包含溶劑化水，或者藥學(xué)上可接受的溶劑化物質(zhì)，例如醇，尤其是乙醇的那些。而且，本發(fā)明提供了藥物組合物，其包含作為活性成分的至少一種本發(fā)明的化合物、或者其前藥化合物、或者其藥物學(xué)上可接受的鹽或者溶劑化物，以及還包含藥物學(xué)上可接受的載體?！八幬锝M合物”指的是一種或多種活性成分和一種或多種構(gòu)成載體的惰性成分以及任何產(chǎn)物，所述產(chǎn)物直接或者間接地源自任何兩種或者多種所述成分的組合、絡(luò)合或者集合，或者一種或多種所述成分的分解，或者一種或者多種所述成分的其它類型的反應(yīng)或者相互作用。因此，本發(fā)明的藥物組合物涵蓋了通過混合本發(fā)明的至少一種化合物和藥物學(xué)上可接受的載體而制備的任何組合物。本發(fā)明的藥物組合物可以另外包含作為活性成分的一種或多種其它的化合物，例如前藥化合物或者其它的核受體調(diào)節(jié)劑。雖然在任一給定的情況下最合適的給藥方法依賴于所治療病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及所述活性成分的性質(zhì)，但是所述組合物適于經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)局部、經(jīng)胃腸外(包括皮下、肌注和靜脈內(nèi))、經(jīng)眼睛(眼的)、經(jīng)肺(鼻或者口腔吸入)或者經(jīng)鼻給藥。它們可以方便地以單位劑型存在并用藥物領(lǐng)域中公知的任何方法制備。本發(fā)明的化合物可以通過在反應(yīng)式i至iii中描述的方法的組合進(jìn)行制備。如反應(yīng)式i中所繪，在3-位置中用取代基a取代的4元環(huán)酮可在非質(zhì)子溶劑中及優(yōu)選在低溫下與金屬化的芳環(huán)或雜芳環(huán)m-q-o-ch2z(m＝金屬，例如li)反應(yīng)，獲得用羥基取代且?guī)в腥〈鵤及q的4元環(huán)。在y為ch的情況中，可形成二種異構(gòu)體(a及q呈順或反式彼此跨環(huán))。在優(yōu)化條件下，可實(shí)現(xiàn)主要形成二種異構(gòu)體中的一種。這二種異構(gòu)體可通過本領(lǐng)域中已知的適當(dāng)方法分離，如例如硅膠色譜法或制備型rp-hplc。反應(yīng)式i在反應(yīng)式ii中總結(jié)了用來制備合成本發(fā)明的化合物所需的4元環(huán)酮的方法。在選項(xiàng)a)中，帶有乙烯基的中間體(例如，通過乙烯化含鹵素的相應(yīng)起始材料r-a-x(x＝鹵素)而制備)可以與原位形成的α,α-二氯烯酮反應(yīng)，形成2,2-二氯環(huán)丁酮。在脫鹵反應(yīng)(例如，與zn在醋酸中回流)后，得到想要的3-取代環(huán)丁酮類化合物?；蛘?，所述乙烯基中間體可以與原位產(chǎn)生的未取代烯酮反應(yīng)，一步獲得想要的環(huán)丁酮中間體。在選項(xiàng)b)中使用3-亞曱基環(huán)丁烷腈作為起始材料。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法在幾個(gè)步驟內(nèi)從氰基建立取代的雜環(huán)化合物?？墒褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件及試劑通過氧化斷裂該環(huán)外雙鍵(例如，使用oso4、臭氧或rhcl3/naio4作為氧化劑)來獲得想要的環(huán)丁酮類化合物。選項(xiàng)c)顯示用于制備所述取代氮雜環(huán)丁酮類化合物的方法。cu-或pd-催化的3-羥基-氮雜環(huán)丁烷和鹵代芳香環(huán)或鹵代-雜芳環(huán)之間的c-n交叉偶聯(lián)反應(yīng)得到相應(yīng)的n-取代3-羥基氮雜環(huán)丁烷化合物，其可以通過氧化轉(zhuǎn)換成所期望的氮雜環(huán)丁酮類化合物。反應(yīng)式ii反應(yīng)式iii舉例說明了在形成所述帶羥基的4元環(huán)后修飾a基團(tuán)處的取代基的一些可能性。例如，離去基團(tuán)x(例如，溴)可通過過渡金屬催化的交叉偶聯(lián)反應(yīng)由氰基、羧酸酯、曱磺?；蛄蛎讶〈?。所獲得的衍生物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)一步轉(zhuǎn)換成其它衍生物。例如，氰基及酯基可在堿性條件下水解以獲得羧酸，其隨后可轉(zhuǎn)換成酰基-磺酰胺類化合物。芐基硫醚可被氯化來得到氯磺酰基中間體，其與氨反應(yīng)生成相應(yīng)的磺酰胺類化合物。反應(yīng)式iii因此，本發(fā)明涉及根據(jù)通式(1)的化合物，其結(jié)合至fxr并作為fxr的激動(dòng)劑或調(diào)節(jié)劑起作用。本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述化合物通過用該化合物結(jié)合所述核受體用于治療和/或預(yù)防疾病和/或病癥的用途。本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述化合物在制備用于通過用所述化合物結(jié)合所述核受體來治療和/或預(yù)防疾病和/或病癥的藥物中的用途。具體說，本發(fā)明涉及根據(jù)通式(1)的化合物在制備用于預(yù)防和/或治療以下疾病的藥物中的用途，所述疾病包括：慢性肝內(nèi)或一些形式的肝外膽汁郁積病癥，慢性膽汁郁積病癥導(dǎo)致的肝纖維化，急性肝內(nèi)膽汁郁積病癥，不恰當(dāng)?shù)哪懼M成導(dǎo)致的梗阻性或慢性炎癥，伴隨飲食脂肪和脂溶性飲食維生素?cái)z取減少的胃腸道病癥，炎性腸疾病，脂質(zhì)和脂蛋白紊亂，ii型糖尿病以及i型和ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥，由于強(qiáng)迫脂質(zhì)和特異性甘油三酯蓄積然后促纖維化途徑激活導(dǎo)致的慢性脂肪和纖維變性引起的疾病和病癥，肥胖和代謝綜合征(血脂障礙、糖尿病和異常高的體重指數(shù)的合并病癥)，急性心肌梗死，急性中風(fēng)，慢性梗阻性動(dòng)脈粥樣硬化的終末點(diǎn)發(fā)生的血栓形成，胞內(nèi)細(xì)菌或寄生原生動(dòng)物的持久性感染，非惡性過度增殖性疾病，惡性過度增殖性疾病，結(jié)腸腺癌、特別是肝細(xì)胞癌，肝臟皮脂腺病及相關(guān)的綜合征，慢性肝臟疾病或外科手術(shù)肝臟切除導(dǎo)致的肝衰竭或肝臟功能障礙，乙型肝炎病毒感染，丙型肝炎病毒感染和/或與酒精誘導(dǎo)的肝硬化或者與肝炎的帶病毒形式有關(guān)的膽汁郁積和纖維變性效果。本文所述的藥物可以通過常規(guī)方法制備，包括將根據(jù)本發(fā)明的化合物與藥學(xué)上可接受的載體組合。fxr被認(rèn)為是核膽汁酸敏感元件。因此，它同時(shí)調(diào)節(jié)在肝臟中膽汁酸合成產(chǎn)出和它們?cè)谀c內(nèi)的再循環(huán)(通過調(diào)節(jié)膽汁酸結(jié)合蛋白)。但是除了膽汁酸生理機(jī)能以外，fxr似乎涉及調(diào)節(jié)許多在病原學(xué)上相關(guān)的各種各樣的生理過程，并用于治療各種各樣的疾病，例如膽固醇膽結(jié)石；例如ii型糖尿病、血脂異常或者肥胖的代謝紊亂；例如炎性腸病或者慢性肝內(nèi)形式的膽汁淤積的慢性炎性疾病和許多其它疾病(t.claudel等人，arterioscler.thromb.vasc.biol.2005，25，2020；y.d.wang等人，cellres.2008，18，1087)。fxr調(diào)節(jié)肝臟和胃腸道中應(yīng)答基因的復(fù)雜模式?；虍a(chǎn)物對(duì)多種生理過程都有影響。在fxr的功能分析的過程中，進(jìn)行分析的第一個(gè)調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)是調(diào)節(jié)膽汁酸的合成。當(dāng)經(jīng)由調(diào)節(jié)核受體lrh-1的誘導(dǎo)，lxr誘導(dǎo)將膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸的關(guān)鍵酶cyp7a1時(shí)，fxr通過上調(diào)編碼shp的mrna抑制cyp7a1的誘導(dǎo)，shp是顯性抑制lrh-1的另外的核受體。因?yàn)閒xr與該途徑的最終產(chǎn)物，初級(jí)膽汁酸，例如膽酸(ca)或者鵝脫氧膽酸(cdca)結(jié)合，這可以被認(rèn)為是在基因表達(dá)水平上反饋抑制的一個(gè)實(shí)例(b.goodwin等人，mol.cell2000，6，517；t.t.lu等人，mol.cell2000，6，507)。除了經(jīng)由shp抑制膽汁酸合成以外，fxr還誘導(dǎo)一系列所謂的abc(atp結(jié)合盒)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，所述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白負(fù)責(zé)將有毒的膽汁酸從肝細(xì)胞細(xì)胞溶膠中輸出到小管(產(chǎn)生膽汁的小膽管分枝)中。通過對(duì)fxr基因敲除小鼠的分析，fxr的肝保護(hù)功能第一次變得明顯(c.j.sinal等人，cell2000，102，731)，其中顯示了幾種abc-轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在肝臟中的表達(dá)不足或者超量表達(dá)。進(jìn)一步的詳細(xì)分析揭示了主要的膽汁鹽排泄泵bsep或者abcb11(m.ananthanarayanan等人，j.biol.chem.2001，276，28857；j.r.plass等人，hepatology2002，35，589)以及介導(dǎo)從脂蛋白到磷脂的脂質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶pltp(n.l.urizar等人，j.biol.chem.2000，275，39313)，和用于磷脂的兩個(gè)關(guān)鍵小管膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，mrp-2(abcc4)(h.r.kast等人，j.biol.chem.2002，277，2908)和mdr-3(abcb4)；l.huang等人，j.biol.chem.2003，278，51085)是通過fxr的配體導(dǎo)向轉(zhuǎn)錄激活的直接靶標(biāo)(概括在下列文獻(xiàn)中：m.miyata，j.pharmacol.exp.ther.2005，312，759；g.rizzo等人，curr.drugtargetsimmuneendocr.metabol.disord.2005，5，289)。fxr似乎是膽汁酸的合成、輸出和再循環(huán)的主要代謝敏感元件和調(diào)節(jié)子的事實(shí)使人想到使用fxr配體來誘導(dǎo)膽汁流并使膽汁酸組合物朝著更親水組合物的方向變化。隨著作為工具化合物的第一個(gè)合成的fxr配體gw4064(p.r.maloney等人.，j.med.chem.2000，43，2971；t.m.willson等人，med.res.rev.2001，21，513)和半合成人工膽汁酸配體6-α-乙基-cdca的開發(fā)，可以分析由強(qiáng)力激動(dòng)劑產(chǎn)生的fxr的超刺激效果。結(jié)果表明在膽管結(jié)扎的動(dòng)物中兩種配體都誘導(dǎo)了膽汁流。此外，除了利膽效果以外，也顯示了肝保護(hù)效果(r.pellicciari等人，j.med.chem.2002，45，3569；y.liu等人，j.clin.invest.2003，112，1678)。這個(gè)肝保護(hù)效果被進(jìn)一步縮小到抗纖維化效果，該抗纖維化效果來自于由fxr激動(dòng)劑產(chǎn)生的基質(zhì)-金屬蛋白酶組織抑制劑timp-1和2的抑制、在肝星狀細(xì)胞中膠原沉淀解析基質(zhì)-金屬蛋白酶2(mmp-2)的誘導(dǎo)以及隨后的兩者均為促纖維化因子的α-膠原mrna和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(tgf-β)mrna的減少(s.fiorucci等人，gastroenterology2004，127，1497；s.fiorucci等人，j.pharmacol.exp.ther.2005，314，584)。而且，在膽管結(jié)扎動(dòng)物模型以及在雌激素誘導(dǎo)的膽汁淤積的動(dòng)物模型中顯示了抗膽汁淤積活性(s.fiorucci等人，j.pharmacol.exp.ther.2005，313，604)。遺傳研究表明，在膽汁淤積的遺傳類型(進(jìn)行性家族性肝內(nèi)膽汁淤積＝pfic，類型i～iv)中，或者由于在fic1基因中的突變減少了fxr自身的核定位(在pfic類型i中，也稱為拜勒病)(f.chen等人，gastroenterology2004，126，756；l.alvarez等人，hum.mol.genet.2004，13，2451)或者減少了編碼mdr-3磷脂輸出泵的fxr靶基因水平(在pfic類型iii中)。總之，不斷增加的證據(jù)表明fxr結(jié)合化合物將在慢性膽汁淤積病癥，例如原發(fā)性膽汁性肝硬化(pbc)或者原發(fā)性硬化性膽管炎(psc)的治療方法中顯示實(shí)際的臨床應(yīng)用(綜述參見：g.rizzo等人，curr.drugtargetsimmuneendocr.metabol.disord.2005，5，289；g.zollner等人，mol.pharm.2006，3，231；s.y.cai等人，expertopin.ther.targets2006，10，409)。fxr激活對(duì)膽汁酸代謝和排泄的縱深影響不僅與膽汁淤積綜合癥相關(guān)并且甚至更直接地與膽結(jié)石形成的治療相關(guān)。由于膽固醇(其主動(dòng)從肝細(xì)胞泵入到小管的內(nèi)腔中)的低溶解度而形成了膽固醇膽結(jié)石。三個(gè)主要組分，膽汁酸、磷脂和游離膽固醇的含量的相對(duì)百分?jǐn)?shù)決定了混合膠束的形成并由此決定了游離膽固醇在膽汁中的表觀溶解度。fxr多態(tài)性經(jīng)數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)分析而定位為導(dǎo)致膽結(jié)石疾病的一個(gè)因素(h.wittenburg，gastroenterology2003，125，868)。使用合成性fxr工具化合物gw4064，可以表明，fxr的激活導(dǎo)致膽固醇飽和指數(shù)(csi)的改善并直接導(dǎo)致c57l易成石小鼠中膽結(jié)石形成的停止，而在fxr基因敲除小鼠中的藥物治療顯示對(duì)膽結(jié)石形成沒有效果(a.moschetta等人，naturemedicine2004，10，1352)。這些結(jié)果證明fxr為一種良好的靶標(biāo)，其可用于開發(fā)可用于防止膽固醇膽結(jié)石形成或者防止在手術(shù)切除或者震波碎石后膽結(jié)石重新形成的小分子激動(dòng)劑(論述參見：s.a.doggrell，curr.opin.investig.drugs2006，7，344)。因此，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，式(i)的化合物和包含該化合物的組合物用于預(yù)防和/或治療不恰當(dāng)?shù)哪懼M成導(dǎo)致的梗阻性或慢性炎癥如膽石病，也稱為膽固醇膽結(jié)石。除了在肝臟中小分子刺激活化后顯示的強(qiáng)效肝臟保護(hù)和利膽以及抗纖維化作用之外，fxr似乎還具有保護(hù)小腸免于致瘤性轉(zhuǎn)化以及在腸道中形成息肉形成及其轉(zhuǎn)化為腺癌的作用(s.modica等人，cancerres.2008，68，9589和r.r.maran等人，j.pharmacol.exp.ther.2009，328，469)。類似于小腸的情況，缺乏fxr導(dǎo)致最普遍的肝癌形式-肝細(xì)胞癌(hcc)的形成大幅提高(i.kim等人，carcinogenesis2007，28，940和f.yang等人，cancerres.2007，67，863)。而功能性fxr防止結(jié)腸腺癌和肝細(xì)胞癌形成，fxr活化誘導(dǎo)肝切除后的肝臟再生(w.huang等人，science2006，312，233)。與fxr活化相關(guān)的肝臟保護(hù)、抗癌和肝臟再生作用的組合可以治療性利用，采用fxr激動(dòng)劑治療嚴(yán)重的肝臟疾病。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物和包含該化合物的組合物可用于治療肝臟疾病，例如肝細(xì)胞癌(hcc)，刺激肝臟再生，緩解與主要肝切除、各種病因的肝硬化相關(guān)的副作用，以及在肝臟移植或主要肝臟手術(shù)的過程中預(yù)防或治療肝臟缺血。自從發(fā)現(xiàn)第一個(gè)合成fxr激動(dòng)劑并將其給藥嚙齒動(dòng)物后，事實(shí)證明fxr是血清甘油三酸脂的關(guān)鍵調(diào)節(jié)物(p.maloney等人，j.med.chem.2000，43，2971；t.willson等人，med.res.rev.2001，21，513)。在過去的六年里，已經(jīng)發(fā)表的累計(jì)證據(jù)表明通過合成激動(dòng)劑產(chǎn)生的fxr激活不但導(dǎo)致血清甘油三酸脂的明顯減少，主要以減少的vldl的形式，并且導(dǎo)致總血清膽固醇的減少(h.r.kast等人，mol.endocrinol.2001，15，1720；n.l.urizar等人，science2002，296，1703；g.lambert等人，j.biol.chem.2003，278，2563；m.watanabe等人，j.clin.invest.2004，113，1408；a.figge等人，j.biol.chem.2004，279，2790；s.bilz等人，am.j.physiol.endocrinol.metab.2006，290，e716)。但是血清甘油三酸脂的降低不是一個(gè)孤立的效果。用合成fxr激動(dòng)劑gw4064治療db/db或者ob/ob小鼠導(dǎo)致血清甘油三酸脂、總膽固醇、游離脂肪酸、比如3-羥基丁酸鹽的酮體的顯著和聯(lián)合減少。此外，fxr激活涉及在肝細(xì)胞中的細(xì)胞內(nèi)胰島素信號(hào)通道，導(dǎo)致來自肝臟糖原異生的葡萄糖輸出的減少但是伴隨著肝臟糖原的增加。胰島素敏感度以及葡糖耐量受到fxr治療的正面影響(k.r.stayrook等人，endocrinology2005，146，984；y.zhang等人，pnas2006，103，1006；b.cariou等人，j.biol.chem.2006，281，11039；k.ma等人，j.clin.invest.2006，116，1102；d.duran-sandoval等人，biochimie2005，87，93)。最近在用高脂飲食過度飼喂的小鼠中也觀察到體重減輕的效果(c.lihong等人，美國(guó)糖尿病協(xié)會(huì)(ada)第66界科學(xué)年會(huì)，2006年6月，摘要編號(hào)856-p)。這種體重減輕效果可能得自于fgf-19(一種已知導(dǎo)致體重減輕和運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)型的成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)的fxr誘導(dǎo)(j.holt等人，genesdev.2003，17，1581；e.tomlinson等人，endocrinology2002，143，1741)。在新近的專利申請(qǐng)中，顯示了fxr激動(dòng)劑在體重減輕上的效果(wo2004/087076；wo2003/080803)?？傊琭xr激動(dòng)劑的這些藥理學(xué)效果可以在不同的治療方法中使用：由于fxr結(jié)合化合物的胰島素敏化、葡萄糖異生作用和降脂效果，它們被認(rèn)為是治療ii型糖尿病的良好候選。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物和包含所述化合物的藥物組合物用在ii型糖尿病的預(yù)防和/或治療中，該疾病可以通過fxr-介導(dǎo)的在肝臟內(nèi)系統(tǒng)胰島素敏感度和細(xì)胞內(nèi)的胰島素信號(hào)的上調(diào)、增加周邊的葡萄糖吸收和代謝、增加肝臟中的糖原存儲(chǔ)、減少?gòu)母闻K負(fù)荷的糖原異生產(chǎn)生的葡萄糖向血清中的輸出而得到治療。在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物和藥物組合物用于治療慢性肝內(nèi)膽汁淤積病癥，例如pbc、psc、進(jìn)行性家族性膽汁淤積(pfic)、乙醇誘導(dǎo)的肝硬化和相關(guān)的膽汁淤積，以及有些形式的肝外膽汁淤積病癥或者肝臟纖維化。本發(fā)明也涉及用于預(yù)防和/或治療減少對(duì)飲食中脂肪和脂溶性飲食維生素的吸收的胃腸道病癥的通式(i)的化合物或者含有所述化合物的藥物組合物，所述病癥可通過增加腸內(nèi)膽汁酸和磷脂的水平而得到治療。在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物或者藥物組合物用于防止和/或治療選自下組中的疾?。褐|(zhì)和脂蛋白紊亂，例如作為臨床表現(xiàn)癥狀的高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，其可以通過fxr對(duì)降低血漿總膽固醇、降低血清甘油三酸脂、增加肝臟膽固醇向膽汁酸的轉(zhuǎn)化和增加在肝臟中的vldl和其它脂蛋白的清除和代謝性轉(zhuǎn)化的有益效果而得到緩解。在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物和藥物組合物用于預(yù)防和/或治療這樣的疾病，其中fxr-靶向藥劑的降脂、抗膽汁淤積和抗纖維化聯(lián)合效果可以用于治療肝臟脂肪變性和相關(guān)癥狀，例如非酒精性脂肪性肝炎(“nash”)或者用于治療與乙醇誘導(dǎo)的肝硬化或者病毒負(fù)荷形式的肝炎相關(guān)的膽汁淤積和纖維化效果。結(jié)合降血脂效果，也表明功能性fxr的喪失導(dǎo)致在apoe基因敲除小鼠中動(dòng)脈粥樣硬化的增加(e.a.hanniman等人，j.lipidres.2005，46，2595)。因此，fxr激動(dòng)劑可能具有作為抗動(dòng)脈粥樣硬化和保護(hù)心臟藥物的臨床用途。在血管平滑肌細(xì)胞中內(nèi)皮肽-1的下調(diào)也可能導(dǎo)致這樣的有益治療效果(f.he等人，circ.res.2006，98，192)。本發(fā)明也涉及通式(i)的化合物或者含有所述化合物的藥物組合物，其用于預(yù)防性和創(chuàng)傷后治療心血管紊亂，比如急性心肌梗塞、急性中風(fēng)或者血栓形成，它們作為慢性梗阻性的動(dòng)脈粥樣硬化的最終結(jié)果而發(fā)作。除了控制小腸和結(jié)腸息肉形成，fxr似乎還在乳腺癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)并且與er陽性乳腺癌細(xì)胞中的雌激素受體相互作用，但健康乳腺組織不表達(dá)(k.e.swales等人，cancerres.2006，66，10120和f.journe等人，breastcancerres.treat.2009，115，523)。這使得人們考慮fxr也可以作為治療增殖性疾病，尤其是表達(dá)fxr的小分子響應(yīng)形式的轉(zhuǎn)移癌形式的潛在靶標(biāo)。在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述化合物和藥物組合物用于預(yù)防和/或治療惡性過度增殖性疾病，例如各種形式的癌癥，尤其是某些乳腺癌、肝癌或結(jié)腸癌形式)，其中用fxr配體干擾具有有益的影響。最后，fxr似乎也涉及調(diào)控在腸中的抗菌防御(t.inagaki等人，pnas.2006，103，3920)，雖然沒有提供確切的作用機(jī)制。但是從這些發(fā)表的數(shù)據(jù)中，人們可以得出結(jié)論，采用fxr激動(dòng)劑的治療可能在炎性腸病(ibd)，特別是影響腸道的上段(回腸)部分的那些形式(例如，回腸克羅恩病)的治療中具有有益的影響，因?yàn)檫@似乎是fxr調(diào)控細(xì)菌滋長(zhǎng)的作用位置。在ibd中，適應(yīng)性免疫反應(yīng)的脫敏作用在腸內(nèi)免疫系統(tǒng)中不知何故被削弱了。由此細(xì)菌的過度生長(zhǎng)可能造成觸發(fā)慢性炎性響應(yīng)的建立。由此細(xì)菌的過度生長(zhǎng)可能造成觸發(fā)慢性炎性響應(yīng)的建立。因此，由fxr-負(fù)荷機(jī)制抑制細(xì)菌滋長(zhǎng)可能是防止急性炎性病癥的關(guān)鍵機(jī)制。因此，本發(fā)明也涉及通式(i)的化合物或者包含所述化合物的藥物組合物，其用于防止和/或治療與炎性腸病，例如克羅恩病或者潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)的疾病。fxr-介導(dǎo)的腸內(nèi)障礙功能的恢復(fù)和非共生細(xì)菌負(fù)荷量的減少被認(rèn)為是有助于減少細(xì)菌性抗原暴露于腸內(nèi)免疫系統(tǒng)并且因此可以減少炎性響應(yīng)。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種化合物或者藥物組合物，其用于預(yù)防和/或治療肥胖癥和相關(guān)的紊亂，比如代謝性綜合征(血脂異常、糖尿病和不正常的高體重指標(biāo)的組合病癥)，所述病癥可以通過fxr-介導(dǎo)的血清甘油三酸脂、血糖降低和胰島素敏感度的增加以及fxr-介導(dǎo)的體重減輕而得到治療。在又一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的化合物或者藥物組合物用于防止和/或治療i型和ii型糖尿病的臨床并發(fā)癥。這些并發(fā)癥的實(shí)例包括糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性神經(jīng)病變、周圍組織動(dòng)脈梗阻性疾病(paod)。本發(fā)明還包括糖尿病的其它臨床并發(fā)癥。此外，那些由于增強(qiáng)的脂質(zhì)和特別是甘油三酸脂的累積和隨后促纖維化通道的激活導(dǎo)致的器官的慢性肥胖和纖維化病變而產(chǎn)生的病癥和疾病也可以通過施用本發(fā)明的化合物或者藥物組合物而得到預(yù)防和/或治療。這樣的病癥和疾病包括在肝臟中的非酒精性脂肪性肝炎(nash)和慢性膽汁淤積病癥、在腎臟中的腎小球硬化癥和糖尿病性腎病、在眼中的黃斑變性和糖尿病性視網(wǎng)膜病以及神經(jīng)變性疾病，比如在腦中的阿爾茨海默病或者在周圍神經(jīng)系統(tǒng)中的糖尿病性神經(jīng)病變。在實(shí)際用途中，本發(fā)明的化合物可以作為活性成分根據(jù)常規(guī)藥物配制技術(shù)與藥物載體一起均勻結(jié)合在混合物中。根據(jù)給藥所要求的制劑形式，例如口服或者胃腸外的(包括靜脈內(nèi)的)，載體可以為各式各樣的形式。當(dāng)制備用于口服劑型的組合物時(shí)，可以使用任何常規(guī)的藥物介質(zhì)，例如，在制備口服液體藥劑例如懸浮液、酏劑和溶液時(shí)使用水、乙二醇、油、醇、芳香劑、防腐劑、著色劑等等；或者在制備口服固體制劑例如粉末、硬膠囊和軟膠囊和片劑時(shí)使用例如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋劑、成粒劑、滑潤(rùn)劑、粘合劑、崩解劑等等，其中固體口服制劑是比液體藥劑更優(yōu)選的。因?yàn)槠瑒┖湍z囊劑容易服用，所以它們代表了最有利的口服劑量單位形式，在這種情況下明顯使用固體藥物載體。如果需要的話，可以用標(biāo)準(zhǔn)水溶液或者非水溶液技術(shù)將片劑包衣。這樣的組合物和制劑應(yīng)當(dāng)含有至少百分之0.1的活性化合物。當(dāng)然，可以改變?cè)谶@些組合物中的活性化合物的百分比，并且該百分比可以方便地在單位重量的約2％到約60％之間。在此類治療上有用的組合物中的活性化合物的含量應(yīng)能得到有效劑量。也可以采用例如液滴或者噴霧劑的形式鼻內(nèi)給藥該活性化合物。所述片劑、藥丸、膠囊劑等也可以包含：粘合劑比如黃蓍樹膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或者明膠；賦形劑比如磷酸二鈣；崩解劑比如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、藻酸；滑潤(rùn)劑比如硬脂酸鎂；和甜味劑比如蔗糖、乳糖或者糖精。當(dāng)劑量單位形式是膠囊時(shí)，除了上述類型的材料以外，它可以包含液體載體比如脂肪油?？梢源嬖诟鞣N各樣的其它材料作為包衣或者來改變所述劑量單位的外形。例如，片劑可以用蟲膠、糖或者兩者進(jìn)行包衣。除了所述活性成分以外，糖漿劑或者酏劑可以包含作為甜味劑的蔗糖、作為防腐劑的對(duì)羥基苯甲酸甲酯或丙酯、染料和例如櫻桃味或者橙味的調(diào)味劑。由于本發(fā)明的化合物大多代表羧酸或其類似的陰離子等構(gòu)物，并且由于眾所周知離子化藥物化合物的鹽形式可顯著改變藥物化合物的生物利用度，也可以用各種抗衡陽離子使本發(fā)明的化合物形成鹽以產(chǎn)生可口服利用的制劑。這些藥學(xué)上可接受的陽離子可以是單價(jià)或二價(jià)離子，例如銨離子，堿金屬鈉或鉀，或堿土金屬鎂或鈣，某些藥學(xué)上可接受的胺如三(羥甲基)氨基甲烷、乙二胺、二乙胺、哌嗪或其它，或某些陽離子氨基酸如賴氨酸或精氨酸。本發(fā)明的化合物也可以經(jīng)胃腸外給藥?？梢栽谒信c表面活性劑比如羥丙基纖維素適當(dāng)?shù)鼗旌蟻碇苽溥@些活性物質(zhì)的溶液或者懸浮液。在甘油、液體聚乙二醇及其混合物中和在油中也可以制備分散劑。在常見的儲(chǔ)存和使用條件下，這些制劑含有防腐劑以防止微生物生長(zhǎng)。適于注射用途的藥品形式包括無菌水溶液或者分散劑和用于即時(shí)制備無菌可注射溶液或者分散劑的無菌粉末。在所有的情況下，所述藥品形式都必須是無菌的并且必須是以容易注射的形式存在的流體。它在制造和貯存的條件下必須是穩(wěn)定的并且必須在抗微生物比如細(xì)菌和真菌的污染作用的條件下保存。載體可以是溶劑或者分散介質(zhì)，其含有，例如，水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)、它們適合的混合物和植物油?？梢允褂萌魏芜m合的給藥途徑向哺乳動(dòng)物，尤其是人提供有效劑量的本發(fā)明化合物。例如，可以使用經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)局部、經(jīng)胃腸外、經(jīng)眼、經(jīng)肺、經(jīng)鼻等給藥方法。劑型包括片劑、錠劑、分散劑、懸浮劑、溶液劑、膠囊劑、乳劑、軟膏劑、氣溶膠等。優(yōu)選本發(fā)明的化合物經(jīng)口服給藥。根據(jù)所使用的具體化合物、給藥方式、所治療的病癥和被治療的病癥的嚴(yán)重程度可以改變所使用的活性成分的有效劑量。這樣的劑量可由所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的專業(yè)人員容易地確定。當(dāng)治療或者預(yù)防本發(fā)明化合物所指示的fxr介導(dǎo)的病癥時(shí)，通常以約0.1毫克至約100毫克/千克動(dòng)物體重的每日劑量，優(yōu)選以單次日劑量、或者以兩到6次每天的分劑量、或者以緩釋形式施用給藥本發(fā)明的化合物時(shí)獲得了滿意的效果。對(duì)于大多數(shù)大型哺乳動(dòng)物，每日總劑量為約1.0毫克至約1000毫克，優(yōu)選約1毫克至約50毫克。對(duì)于70公斤的成年人，每日總劑量一般為7毫克至約350毫克。可以調(diào)整這個(gè)劑量方法以提供最佳治療效果。本發(fā)明化合物可以根據(jù)下面的反應(yīng)式和實(shí)施例的步驟使用適當(dāng)?shù)夭牧现苽洳⑶疫M(jìn)一步通過下面的具體實(shí)施例來進(jìn)行舉例說明。此外，通過使用在這里描述的步驟，結(jié)合在本領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)，可以容易地制備在本申請(qǐng)中主張的其它本發(fā)明化合物。但是，在所述實(shí)施例中闡明的化合物不能被理解為是構(gòu)成被認(rèn)為是本發(fā)明的唯一化合物。所述實(shí)施例進(jìn)一步闡明了用于制備本發(fā)明化合物的細(xì)節(jié)。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易理解，可用以下制備步驟的條件和過程的已知變化來制備這些化合物。本發(fā)明化合物一般以它們的藥物學(xué)上可接受的鹽(比如上面描述的那些)的形式進(jìn)行分離。相應(yīng)于所分離的鹽的游離胺堿可以通過與適當(dāng)堿，例如碳酸氫鈉、碳酸鈉、氫氧化鈉和氫氧化鉀水溶液的中和，以及將釋放出的游離胺堿萃取到有機(jī)溶劑中，隨后蒸發(fā)來制備?？梢詫⒂眠@種方式分離的游離胺堿通過溶解在有機(jī)溶劑中，隨后加入適當(dāng)?shù)乃岷秃罄m(xù)的蒸發(fā)、沉淀或者結(jié)晶進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N藥物學(xué)上可接受的鹽。與所分離的鹽相對(duì)應(yīng)的游離羧酸可以通過與適當(dāng)?shù)乃?，比如鹽酸、硫酸氫鈉、磷酸二氫鈉水溶液中和，以及將釋放出的游離羧酸萃取到有機(jī)溶劑中，隨后蒸發(fā)來制備。可以將用這種方式分離的羧酸通過溶解在有機(jī)溶劑中，隨后加入適當(dāng)?shù)膲A和后續(xù)的蒸發(fā)、沉淀或者結(jié)晶進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N藥物學(xué)上可接受的鹽。具體實(shí)施方式下文中舉例說明了本發(fā)明化合物的制備。除非另外在方法中指明，所述變量具有如上所述的相同意義。下面給出的實(shí)施例意圖解釋本發(fā)明的具體實(shí)施方式。在如下所述的合成中使用的適當(dāng)起始原料、基本成分和試劑為市售的，可從下列公司購(gòu)買到：例如，西格瑪奧德里奇(sigma-aldrich)或者acrosorganics，或者用在下列文獻(xiàn)中描述的步驟常規(guī)制備：例如《馬氏高等有機(jī)化學(xué)：反應(yīng)、機(jī)理和結(jié)構(gòu)》(march′sadvancedorganicchemistry：reactions，mechanisms，andstructure)第5版，johnwiley&sons；或者t.eicher，s.hauptmann的《雜環(huán)化學(xué)；結(jié)構(gòu)、反應(yīng)、合成和應(yīng)用》(thechemistryofheterocycles；structures，reactions，synthesisandapplication)，第2版，wiley-vch2003；fieser等人的《菲氏有機(jī)合成試劑》fiesers′reagentsfororganicsynthesis》，johnwiley&sons，2000。實(shí)施例實(shí)施例1：3-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)苯甲酸甲酯(1)步驟1：4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)-異噁唑(1a)向(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(13g，45.8mmol)在ch2cl2(dcm)(200ml)中的溶液中滴加socl2(40ml，336mmol)。所得混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，并減壓去除溶劑。將殘余物溶解在n,n-二甲基甲酰胺(dmf)(200ml)中，并向該溶液中加入4-溴-3-氯苯酚(9.7g，47mmol)、k2co3(40g，290mmol)和nai(12g，80mmol)。將混合物在60℃攪拌過夜，然后冷卻至室溫，用水(1000ml)稀釋并用乙酸乙酯(ea)(500ml×3)萃取。有機(jī)相合并，用鹽水(500ml×3)洗滌，用na2so4干燥，并真空濃縮。殘余物用在硅膠上的快速色譜法(cc)純化得到題述化合物1a(19g，88％)，為白色固體。步驟1：3-(2,2-二氯-3-氧代環(huán)丁基)苯甲酸甲酯(1b)在氮?dú)鈿夥障拢谂鋫溆欣淠?、頂置式攪拌器和壓力平衡滴液漏斗?口圓底燒瓶中，將3-乙烯基苯甲酸甲酯(5g，31mmol)溶解在干燥et2o(150ml)中。該燒瓶中加入鋅粉(6g，3當(dāng)量)，并超聲處理該反應(yīng)30分鐘。在此時(shí)間后，逐滴加入三氯乙酰氯(8.7ml，2.5當(dāng)量)在干燥et2o(50ml)中的溶液，同時(shí)在下一個(gè)30分鐘內(nèi)進(jìn)行進(jìn)行超聲處理。在該步驟過程中，反應(yīng)混合物被加熱至35℃。在回流下繼續(xù)進(jìn)行超聲處理2.5小時(shí)，并且通過1hnmr分析顯示反應(yīng)完成。使反應(yīng)冷卻至室溫并用水(～50ml)淬滅。因?yàn)榉艧岱磻?yīng)延遲發(fā)生，所以該步驟以逐滴加入的方式幾分鐘穿插幾次完成。在水中攪拌20分鐘后，反應(yīng)混合物通過硅藻土墊過濾并用et2o淋洗。有機(jī)層用幾部分的水(2x250ml)、飽和碳酸氫鈉(2x250ml)和鹽水(1x250ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并減壓濃縮得到粗產(chǎn)物1b，為暗黃色稠油(粗產(chǎn)物8.7g)。步驟2：3-(3-氧代環(huán)丁基)苯甲酸甲酯(1c)在氮?dú)鈿夥罩性趫A底燒瓶中，將粗產(chǎn)物化合物1b(8.7g)溶解在冰醋酸(55ml)中。向該燒瓶中加入鋅粉(4.6g，2.2當(dāng)量)，并攪拌該反應(yīng)并加熱至120℃進(jìn)行3小時(shí)。在冷卻至室溫后，將混合物進(jìn)過硅藻土墊過濾，將此用幾部分ea洗滌。在溶解在ea(500ml)之前，溶液合并并減壓濃縮，用鹽水(150mlx2)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過濾并再次濃縮。將粗產(chǎn)物混合物在氯仿(250ml)中攪拌5分鐘，并且經(jīng)過燒結(jié)漏斗過濾。將濾液濃縮得到粗產(chǎn)物，為淡黃色油狀物。通過cc在(pe/ea＝9:1，pe＝石油醚)中純化該粗產(chǎn)物得到所需產(chǎn)物1c(2.5g，兩步總產(chǎn)率38％)，為淡黃色油狀物。步驟3：3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)苯甲酸甲酯(1)在氮?dú)鈿夥障略?78℃向化合物1a(1.67g，3.5mmol)在干燥thf(30ml)中的溶液中在10分鐘內(nèi)滴加n-buli(2.5m在己烷中，1.2當(dāng)量，1.69ml)。將其在該溫度下攪拌1小時(shí)，然后滴加化合物1c(0.72g，1當(dāng)量)在干燥thf(10ml)中的溶液，并在此溫度下攪拌1小時(shí)。將混合物緩慢升溫至室溫并攪拌過夜。反應(yīng)用飽和氯化銨溶液(50ml)和ea(250ml)的溶液淬滅。分離有機(jī)層，并用ea(2x100ml)洗滌水溶液層。有機(jī)萃取液合并，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到粗產(chǎn)物，為棕色油狀物。在用pe/ea(19:1至3:1)cc后分離產(chǎn)物。以相同規(guī)模重復(fù)該反應(yīng)和純化兩次，并在相同條件下再純化合并后的產(chǎn)物(3.13g)得到最終產(chǎn)物1(1.7g，19％)。1hnmr(cdcl3)：7.93(m，1h)，7.90-7.85(m，1h)，7.50-7.30(m，5h)，6.88(s，1h)，6.75-6.72(m，1h)，4.80(s，2h)，3.88(s，3h)，3.20-3.10(m，1h)，3.00-2.91(m，2h)，2.60-2.49(m，2h)，2.15-2.08(m，1h)，1.30-1.25(m，2h)，1.15-1.10(m，2h)。實(shí)施例2：3-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)苯甲酸(2)在室溫下將化合物1(1.7g，2.84mmol)溶解在thf(100ml)中。加入lioh(285mg，4.2當(dāng)量)在水(20ml)中的溶液并攪拌該溶液并升溫至35℃保持三天。在此時(shí)間后，減壓除去thf。剩下的水溶液用水(25ml)稀釋并用et2o(2x50ml)洗滌。然后將水溶液層轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，并使用1nhcl酸化至ph6。過濾出所形成的白色沉淀，并在50℃減壓干燥得到題述化合物2(1.3g，78％，通過1h-nmr和lc-ms確定為單一異構(gòu)體)，為白色固體。1hnmr(400mhz，cd3od)δ：7.98(s，1h)，7.86(d，j＝7.6hz，1h)，7.58-7.46(m，5h)，7.41(t，j＝7.6hz，1h)，6.91(d，j＝2.4hz，1h)，6.80(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)，4.95(s，2h)，3.29-3.25(m，2h)，2.96(m，1h)，2.55-2.49(m，2h)，2.37(m，1h)，1.24-1.22(m，4h)。ms(esi-)m/z：584(582)[m-1]-。相關(guān)強(qiáng)度noes(從roesy光譜獲得；下面的箭頭)指示出，二個(gè)芳香族部分在實(shí)施例2中為1,3-反式定向。實(shí)施例2的替代路線步驟1：3-(3-溴苯基)環(huán)丁酮(2a)將n,n-二甲基乙酰胺(9.0g，103mmol)溶解在1,2-二氯乙烷(200ml)中。將溶液冷卻至0℃，然后加入三氟甲磺酸酐(63g，223mmol)。反應(yīng)在0℃再攪拌60分鐘。然后加入1-溴-3-乙烯基苯(15g，81.9mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(10.5g，86.6mmol)。將該反應(yīng)加熱至回流過夜，通過加入水(300毫升)淬滅并在室溫下攪拌2小時(shí)?；旌衔镉胐cm(300ml×3)萃取。有機(jī)層合并，用na2so4干燥，并真空濃縮。用cc(ea/pe＝1:20)純化得到題述化合物2a(5.0g，27％)，為淡黃色固體。步驟2：3-(3-溴苯基)-1-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)環(huán)丁醇(2b)向在-78℃的化合物1a(14g，29.6mmol)在干燥thf(500ml)中的溶液中滴加n-buli(18.5ml，1.6m在己烷中，29.6mmol)。將該混合物在-78℃再攪拌1小時(shí)，然后滴加化合物2a(6.5g，28.9mmol)在干燥thf(50ml)中的溶液。將所得混合物在-78℃攪拌1小時(shí)，然后升溫至室溫，并用飽和nh4cl水溶液(500ml)淬滅?；旌衔镉胑a(500ml×2)萃取，有機(jī)層合并，用鹽水洗滌，用na2so4干燥，并真空濃縮。殘余物用cc(ea/pe＝1:5)純化得到題述化合物2b(6.5g，37％)，為白色固體。步驟3：3-(3-氰基苯基)-1-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)環(huán)丁醇(2c)在氬氣氣氛下向化合物2b(3.1g，5mmol)在dmf(50ml)的溶液中加入zn(cn)2(500mg，4.3mmol)、pd2(dba)3(300mg，0.33mmol)和4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(xantphos)(150mg，0.31mmol)。在微波輻照下將該混合物在115℃攪拌10小時(shí)。在冷卻至室溫后，用水(250ml)稀釋反應(yīng)混合物并用ea(250ml×2)萃取。有機(jī)相合并，用鹽水(100ml×3)洗滌并用na2so4干燥。殘余物用cc(ea/pe)純化得到題述化合物2c(1.2g，42％)，為淡黃色固體。步驟4：3-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)苯甲酸(2)向化合物2c(15g，24.2mmol)在etoh(750ml)的溶液中加入naoh水溶液(在100ml水中40g)。將所得混合物加熱至回流過夜，然后冷卻至室溫。真空濃縮反應(yīng)除去揮發(fā)性溶劑，用水(1000ml)稀釋，并用稀鹽酸(1n)調(diào)節(jié)ph至2。過濾收集形成的沉淀得到粗產(chǎn)物，為黃色固體(13.8g)。用制備反相hplc(rp-hplc)純化得到題述化合物2(8.0g，56％，用1h-nmr驗(yàn)證為單一異構(gòu)體)，為白色固體。制備實(shí)施例3步驟1：3-(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)苯甲酸甲酯(3a)向3-碘苯甲酸甲酯(4.5g，17.2mmol)在dmso(30ml)的溶液中加入3-氮雜環(huán)丁烷-3-醇鹽酸鹽(1.3g，11.8mmol)、cs2co3(9.5g，29.2mmol)、cui(446mg，2.3mmol)和l-脯氨酸(540mg，4.7mmol)，然后將該混合物在氬氣氣氛下在90℃加熱18小時(shí)。溶液用ea和水稀釋，然后將有機(jī)層用鹽水洗滌三次，減壓濃縮，并用cc(pe/ea＝2:1)純化得到化合物3a(1.6g，66％)，為黃色固體。步驟2：3-(3-氧代氮雜環(huán)丁烷-1-基)苯甲酸甲酯(3)在0℃向化合物3a(1.60g，7.7mmol)在干燥dcm(30ml)的溶液中加入戴斯-馬丁氧化劑(dess-martinperiodinane)(6.5g，15.4mmol)，并在n2氣氛下將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅該混合物并用ea稀釋。有機(jī)部分用鹽水洗滌，用na2so4干燥，過濾，減壓濃縮，然后用cc(pe/ea＝4:1)純化得到化合物3(1.2g，75％)，為白色固體。實(shí)施例4：3-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-n-(甲基磺?；?苯甲酰胺(4)向化合物2(100mg，0.17mmol)在dcm(5ml)的溶液中加入edci·hcl(100mg，0.52mmol)、dmap(100mg，0.81mmol)和meso2nh2(40mg，0.42mmol)。將該混合物在30℃攪拌過夜，然后用ea稀釋，用h2o、鹽水洗滌，并用na2so4干燥。真空濃縮并用制備薄層層析(prep-tlc)純化得到粗目標(biāo)化合物，為淡黃色固體。rp-hplc純化得到題述化合物4(38mg，33％)，為白色固體。1hnmr(400mhz，cd3od)δ：7.87(s，1h)，7.74(d，j＝7.6hz，1h)，7.61-7.53(m，5h)，7.50(t，j＝7.6hz，1h)，6.91(d，j＝2.4hz，1h)，6.80(dd，j＝8.8，2.4hz，1h)，4.95(s，2h)，3.30-3.26(m，2h)，3.01(m，1h)，2.57-2.51(m，2h)，2.37(m，1h)，1.25-1.23(m，4h)。ms(esi-)m/z：659[m-1]-。實(shí)施例5：3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)苯磺酰胺(5)步驟1：3-(3-(芐硫基)苯基)-1-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)環(huán)丁醇(5a)在氬氣氣氛下向化合物2b(619mg，1mmol)在甲苯(20ml)中的溶液中加入k2co3(276mg，2mmol)、苯甲硫醇(125mg，1mmol)、pd2(dba)3(200mg，0.22mmol)和4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(75mg，0.16mmol)。然后將混合物在115℃攪拌4小時(shí)。在冷卻至室溫后，用水(100ml)稀釋反應(yīng)物并用ea(100ml×2)萃取。有機(jī)相合并，用鹽水(100ml×2)洗滌，用na2so4干燥，并濃縮至干燥狀態(tài)。用cc純化得到化合物5a(200mg，30％)，為淡黃色固體。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ：7.36-7.32(m，3h)，7.28-7.07(m，9h)，7.01(d，j＝7.2hz，1h)，6.82(d，j＝2.0hz，1h)，6.66(dd，j＝8.8，2.0hz，1h)，4.75(s，2h)，4.04(s，2h)，3.06-3.00(m，2h)，2.84-2.78(m，2h)，2.44-2.38(m，3h)，2.09(m，1h)，1.24-1.18(m，2h)，1.11-1.08(m，2h)。ms(esi+)m/z：662[m+1]+。步驟2：3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)苯-1-磺酰氯(5b)向化合物5a(34mg，0.05mmol)在ch3cn/hoac/h2o(1ml/37μl/25μl)中的溶液中加入2,4-二氯-5,5-二甲基乙內(nèi)酰脲(20mg，0.1mmol)。將該混合物在0-5℃攪拌2小時(shí)。將反應(yīng)物用水稀釋并用ch2cl2萃取。有機(jī)層合并，用5％nahco3溶液、鹽水洗滌，并用na2so4干燥。濃縮至干燥狀態(tài)得到粗產(chǎn)物5b(30mg)，為無色油狀物，其直接用作下一步中。步驟3：3-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)苯磺酰胺(5)向化合物5b(30mg)在ch3cn(2ml)中的溶液中加入nh4oh(0.3ml)。將該混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮至干燥狀態(tài)并用制備rp-hplc純化得到題述化合物5(3.5mg，兩步總產(chǎn)率10％)，為白色固體。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ：7.85(s，1h)，7.77(d，j＝7.6hz，1h)，7.54-7.41(m，5h)，7.35(d，j＝8.4hz，1h)，6.90(s，1h)，6.75(d，j＝8.4hz，1h)，4.83(s，2h)，4.77(s，寬，2h)，3.20(t，j＝10.4hz，2h)，3.04(m，1h)，2.58(t，j＝10.6hz，2h)，2.17(m，1h)，1.31-1.30(m，2h)，1.20-1.16(m，2h)。ms(esi-)m/z：617[m-1]-實(shí)施例6：1-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-(3-(甲基磺?；?苯基)環(huán)丁醇(6)向化合物2b(200mg，0.32mmol)在dmso中的溶液中，加入甲烷亞磺酸鈉(50mg，0.46mmol)、cui(20mg，0.1mmol)、l-脯氨酸(37mg，0.32mmol)和二異丙基乙胺(diea)(41mg，0.32mmol)。將該混合物在95℃攪拌過夜，然后用水稀釋并用ea萃取。有機(jī)層合并，用水洗滌并用na2so4干燥。減壓濃縮至干并用制備rp-hplc純化得到題述化合物6，為白色固體(35mg，21％，用1hnmr和lc-ms驗(yàn)證為單一異構(gòu)體)。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ：7.84(s，1h)，7.79(d，j＝7.6hz，1h)，7.60(d，j＝7.6hz，1h)，7.53(t，j＝7.6hz，1h)，7.44-7.41(m，3h)，7.34(t，j＝7.2hz，1h)，6.90(d，j＝2.8hz，1h)，6.75(dd，j＝8.4，2.0hz，1h)，4.83(s，2h)，3.24-3.19(m，2h)，3.08-3.04(m，4h)，2.62-2.56(m，2h)，2.17(m，1h)，1.31-1.29(m，2h)，1.20-1.16(m，2h)。ms(esi+)m/z：618(620)[m+1]+，600(602)[m-h2o+1]+。實(shí)施例7：5-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-異丁基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(7)步驟1：1-異丁基-5-乙烯基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(7a)將甲基三苯基溴化鏻(2.69g，7.52mmol)在干燥thf(40ml)中的懸浮液冷卻至-78℃，并滴加正丁基鋰(在己烷中的1.6m溶液，3.7ml，5.91mmol)。將該橙黃色懸浮液在-78℃攪拌50分鐘，然后滴加5-甲?；?1-異丙基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(按照wo2011/020615中的描述制備，1.05g，5.37mmol)在干燥thf(10ml)的溶液。將該混合物在-78℃攪拌1.75小時(shí)，移除冷卻浴，并將該混合物(灰白色懸浮液)在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將水溶液層用ea(每次50ml)萃取兩次，并將有機(jī)層合并，用水(每次50ml)洗滌兩次，并在沒有干燥的情況下濃縮得到2.74g黃色油狀物，其緩慢結(jié)晶。用cc(用ch2cl2預(yù)吸附，己烷/ea4:1)純化該粗產(chǎn)物得到烯烴7a(590mg，57％)，為無色油狀物。1hnmr(dmso-d6)δ：7.02(s，1h)，6.87(dd，j＝17.3，11.2hz，1h)，5.94(dd，j＝17.3，1.3hz，1h)，5.45(dd，j＝11.2，1.3hz，1h)，4.80(sept，j＝6.6hz，1h)，3.79(s，3h)，1.38(d，j＝6.6hz，6h)。c10h14n2o2(194.23)。lc-ms(esi)：195[m+h]+。步驟2：1-異丁基-5-(3-氧代環(huán)丁基)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(7b)反應(yīng)在兩個(gè)干燥的密封試管中進(jìn)行(等量的兩個(gè)批次)。將所述批次合并以進(jìn)行檢測(cè)和純化。單批次程序：在氮?dú)鈿夥障略?15至-20℃向n,n-二甲基乙酰胺(0.22ml，2.34mmol)在1,2-二氯乙烷(12ml)中的溶液中滴加三氟甲磺酸酐(0.43ml，2.57mmol)，形成渾濁懸浮液。將該混合物在-15℃攪拌10分鐘，然后滴加烯烴7a(151mg，0.78mmol)和對(duì)稱三甲基吡啶(0.42ml，3.12mmol)在1,2-二氯乙烷(3ml)中的溶液(形成黃色溶液)。滴加完成后，移除冷卻浴，將混合物升溫至室溫(橙色渾濁液)，并將試管密封。然后將該混合物在90℃攪拌15小時(shí)(棕色混合物)。在室溫加入水(5ml)，并將混合物在100℃攪拌2小時(shí)(渾濁的兩相溶液)。在冷卻至室溫后，合并混合物并在稀nahco3水溶液和ch2cl2之間分配，并將水溶液層用ch2cl2(每次30ml)萃取三次。將有機(jī)層合并，干燥(na2so4)、過濾并濃縮得到棕色油狀物(2.2g)。用cc(6×13cm，用ch2cl2預(yù)吸附，甲苯/ea3:1)純化得到環(huán)丁酮7b(115.5mg，31％)，為黃色油狀物。1hnmr(dmso-d6)δ：6.81(s，1h)，4.58(sept，j＝6.5hz，1h)，3.78(s，3h)，3.85-3.73(m，1h)，3.59-3.45(m，2h)，3.37-3.24(m，2h，被水信號(hào)部分重疊)，1.39(d，j＝6.6hz，6h)。c12h16n2o3(236.27)。lc-ms(esi)：237[m+h]+。步驟3：5-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-異丁基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(7)將溴化物1a(368mg，0.78mmol)在干燥thf(6ml)中的溶液冷卻至-78℃，并滴加在己烷中的1.6m正丁基鋰溶液(0.48ml，0.76mmol)。將該混合物在-78℃攪拌20分鐘，然后滴加環(huán)丁酮7b(164mg，0.69mmol)在干燥thf(4ml)中的溶液。將該混合物在-78℃攪拌2.5小時(shí)，并在該溫度下滴加飽和nh4cl水溶液(1ml)。移除冷卻浴，并將該混合物升溫至室溫并在室溫下攪拌0.5小時(shí)。然后將該混合物加入到稀nh4cl水溶液中并用ea萃取三次。將有機(jī)層合并，干燥(na2so4)、過濾并濃縮得到516mg幾乎無色的油狀物。用cc(4.5×23cm，用ch2cl2預(yù)吸附，洗脫液己烷/丙酮2:1)純化得到回收的環(huán)丁酮7b(31.3mg，19％，稍黃色油狀物)和不純的產(chǎn)物(333mg)。用cc(4×22cm，己烷/ea＝1:1)或prep-tlc再純化得到純產(chǎn)物7(210mg，48％)，為白色泡沫。1hnmr(dmso-d6)δ：7.65(d，j＝2.1hz，1h)，7.62(s，1h)，7.59-7.48(m，2h)，6.92(d，j＝2.4hz，1h)，6.76(dd，j＝8.6，2.6hz，1h)，6.66(s，1h)，5.49(s，1h)，4.92(s，2h)，4.42(類似六重峰的m，j＝6.5hz，1h)，3.78(s，3h)，3.24-3.11(m，2h，被水信號(hào)部分重疊)，3.04-2.90(m，1h)，2.54-2.33(m，3h，被dmso信號(hào)部分重疊)，1.32(d，j＝6.5hz，6h)，1.26-1.08(m，4h)。c31h30cl3n3o5(630.95)。lc-ms(esi)：630，632[m+h]+。實(shí)施例8：5-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-異丁基-1h-吡唑-3-甲酸(8)將酯7(98.3mg，0.156mmol)溶解在thf(7.5ml)、meoh(2.5ml)和水(2.5ml)的混合物中，并在室溫下加入lioh·h2o(65mg，1.56mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?8小時(shí)。將該混合物在稀nh4cl水溶液和ea之間分配，然后將有機(jī)層用水洗滌一次。將水溶液層合并并用ea萃取兩次。將有機(jī)層合并，干燥(na2so4)、過濾并濃縮得到103mg幾乎白色的固體。將該產(chǎn)物用cc(3×3.5cm，ea/etoh＝10:1至1:4)純化得到8(94.8mg，99％)，為白色固體。1hnmr(dmso-d6)δ：7.66-7.60(m，1h)，7.62(s，1h)，7.59-7.49(m，2h)，6.91(d，j＝2.5hz，1h)，6.76(dd，j＝8.6，2.4hz，1h)，6.38(s，1h)，5.51(s，1h，與d2o可交換)，4.92(s，2h)，4.31(類似六重峰的m，j＝6.5hz，1h)，3.25-3.08(m，2h，被水信號(hào)部分重疊)，2.93-2.77(m，1h)，2.57-2.43(m，1h，被dmso信號(hào)遮蔽)，2.43-2.29(m，2h，被dmso信號(hào)部分重疊)，1.29(d，j＝6.5hz，6h)，1.26-1.08(m，4h)。在光譜中沒有顯現(xiàn)co2h信號(hào)。c30h28cl3n3o5(616.92)。lc-ms(esi)：616，618[m+h]+。實(shí)施例8的替代路線步驟1：1-(3-亞甲基環(huán)丁基)乙酮(8a)將亞甲基環(huán)丁烷甲腈(5.0g，53.7mmol)溶解在干燥乙醚(25ml)中，在冰浴中冷卻，并滴加memgbr(26.8ml，80.5mmol，3m在乙醚中)。將該混合物在室溫?cái)嚢柽^夜，冷卻至0℃，用15％nahso4水溶液(100ml)小心淬滅。將該混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后分層。將水溶液相用戊烷(50ml)和乙醚(50ml)萃取。有機(jī)層合并，用鹽水洗滌并用na2so4干燥。在室溫下真空除去溶劑，得到粗產(chǎn)物，為淡黃色液體。步驟2：4-(3-亞甲基環(huán)丁基)-2,4-二氧代丁酸乙酯(8b)將鈉(1.15g，49.9mmol)溶解在干燥etoh(30ml，用5％乙醚變性)中。將化合物8a(5.5g，49.9mmol，粗產(chǎn)物)溶解在干燥etoh(45ml)中，并加入上述制備的乙醇鈉溶液。將該混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，然后滴加草酸二乙酯(6.8ml，49.9mmol)。將反應(yīng)混合物置于預(yù)熱(至67℃)的油浴中，并在此溫度下攪拌4.5小時(shí)。將該混合物在室溫下靜置過夜。除去溶劑，加入ea(100ml)和1mhcl(70ml)，并分離有機(jī)相。將水溶液相用ea(50ml)再次萃取。有機(jī)層合并，用水、鹽水洗滌，并用無水na2so4干燥。減壓除去溶劑，并將殘余物用己烷/mtbe9:1作為洗脫液在硅膠上純化得到純化合物8b。產(chǎn)量：6.29g，兩步驟總產(chǎn)率56％。1h-nmr(cdcl3)，δ(ppm)：6.36(s，1h)，4.85-4.80(m，2h)，4.34(q，j＝8.0hz，2h)，3.35-3.25(m，1h)，3.05-2.85(m，4h)，1.36(t，j＝8.0hz，3h)。步驟3：1-異丁基-5-(3-亞甲基環(huán)丁基)-1h-吡唑-3-甲酸乙酯(8c)將化合物8b(6.29g，29.9mmol)溶解在干燥etoh(65ml，用5％的meoh變性)中，并加入異丙基肼鹽酸鹽(3.97g，35.9mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。除去溶劑，并向油狀殘余物中順序加入ea(100ml)、水(50ml)和飽和nahco3(50ml)。分離有機(jī)層，并用ea(50ml)再萃取水溶液層。有機(jī)相合并，用鹽水(70ml)洗滌，并用無水na2so4干燥。真空除去溶劑，并減壓干燥殘余物。產(chǎn)量：7.23g(通過nmr驗(yàn)證包含3.4％的etoac，重新計(jì)算的凈產(chǎn)量：6.98g，94％)。通過hplc和nmr驗(yàn)證，粗產(chǎn)物8c為98％純度。1h-nmr(cdcl3)，δ(ppm)：6.62(s，1h)，4.88-4.82(m，2h)，4.42-4.32(m，3h)，3.56-3.45(m，1h)，3.17-3.07(m，2h)，2.88-2.79(m，2h)，1.49(d，j＝8.0hz，6h)，1.37(t，j＝8.0hz，3h)。步驟4：1-異丁基-5-(3-氧代環(huán)丁基)-1h-吡唑-3-甲酸乙酯(8d)將化合物8c(6.45g，26.0mmol)溶解在mecn(77ml)和水(13ml)的混合物中，并在冰浴中冷卻。向該溶液中加入rucl3×h2o(0.19g，0.86mmol)，隨后分批加入naio4(19.35g，90.9mmol)。在該加料過程中觀察到放熱。將所得稠漿在室溫下攪拌45分鐘。將反應(yīng)混合物用na2s2o3水溶液(10％，260ml)、水(50ml)和dcm(100ml)稀釋。發(fā)生相分離，并用dcm(2×70ml)萃取水溶液相。有機(jī)相合并，用na2s2o3水溶液(10％，50ml)、水(100ml)、鹽水(100ml)洗滌，并用無水na2so4干燥。粗產(chǎn)物(6.5g)使用己烷/mtbe洗脫在硅膠上純化得到純化合物，為油狀物，在-20℃儲(chǔ)存時(shí)凝固。產(chǎn)量：5.8g(兩步驟總產(chǎn)率78％)。1h-nmr(dmso-d6)，δ(ppm)：6.78(s，1h)，4.57(h，j＝8.0hz，1h)，4.26(q，j＝8.0hz，2h)，3.85-3.75(m，1h)，3.58-3.45(m，2h)，3.35-3.25(m，2h)，1.39(d，j＝8.0hz，6h)，1.28(t，j＝8.0hz，3h)。步驟5：4-((4-溴-3-氯苯氧基)甲基)-5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑(8e)將3-氯-4-溴苯酚(3.8g，18.3mmol)與(5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲醇(3.47g，12.2mmol)和三苯基膦(6.41g，24.4mmol)在甲苯(150ml)中混合。將該混合物在冰浴中冷卻，并滴加溶液形式的diad(4.8ml，24.4mmol)(甲苯(10ml)中)。將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?1小時(shí)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去溶液，留下黃色油狀殘余物。將該殘余物溶解在dcm(200ml)中，加入硅膠(～20g)，并將該混合物蒸發(fā)至干燥狀態(tài)。將該材料負(fù)載在硅膠柱頂部并使用己烷/mtbe9:1洗脫進(jìn)行純化。合并包含產(chǎn)物的餾分并減壓除去溶劑，留下純產(chǎn)物8e，為無色油狀物，其在真空下干燥過夜時(shí)結(jié)晶。產(chǎn)量：5.07g(88％)。1h-nmr(cdcl3)，δ(ppm)：7.45-7.30(m，4h)，6.90(s，1h)，6.60-6.55(m，1h)，2.15-2.07(m，1h)，1.32-1.25(m，2h)，1.20-1.11(m，2h)。步驟6：5-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-異丁基-1h-吡唑-3-甲酸乙酯(8f)在室溫下將licl(0.684g，16.15mmol)溶解在thf(20ml)中，并加入iprmgcl(2.0m在thf中，8.1ml，16.15mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘，在冰浴中冷卻，并在5分鐘內(nèi)加入化合物8e(2.55g，5.38mmol)在thf(20ml)中的溶液。移除冷卻浴，并將該混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。將該混合物冷卻至-10℃，并快速加入化合物8d(1.48g，5.92mmol)在thf(16ml)中的溶液。將該混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘，然后加入0.5mnahso4水溶液(35ml)和ea(50ml)。將所得混合物攪拌10分鐘，分層并將水溶液層用ea(30ml)萃取。有機(jī)相合并，用nahco3水溶液(50ml)、鹽水(50ml)洗滌，并用無水na2so4干燥。除去溶劑得到粗產(chǎn)物(3.79g)，為白色泡沫。用己烷/ea3:2洗脫在硅膠柱上純化3.6g的該粗產(chǎn)物得到純化合物8f，為固體泡沫。產(chǎn)量：1.62g(49％)。1h-nmr(dmso-d6)，δ(ppm)：7.65-7.47(m，4h)，6.93-6.91(m，1h)，6.79-6.72(m，1h)，6.65(s，1h)，5.48(s，1h)，4.92(s，2h)，4.42(h，j＝8.0hz，1h)，4.26(q，j＝8.0hz，2h)，3.32(s，2h)，3.22-3.14(m，2h)，3.05-2.90(m，1h)，2.45-2.35(m，2h)，1.35-1.10(m，14h)。步驟7：5-((1s,3s)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-異丁基-1h-吡唑-3-甲酸(8)將化合物8f(1.60g，2.48mmol)溶解在thf(100ml)中，然后順序加入meoh(50ml)、水(50ml)和lioh×h2o(1.04g，24.8mmol)。將該混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，然后減壓濃縮除去meoh和thf。通過加入1mhcl水溶液(24ml)酸化剩余的水溶液至ph4.05(ph電極參比)。在大約ph7時(shí)，開始形成沉淀。過濾出所形成的固體，在過濾器上用水洗滌，并在室溫下真空干燥得到產(chǎn)物8，為白色粉末。產(chǎn)量：1.40g(92％)。1h-nmr(cdcl3)，δ(ppm)：7.44-7.32(m，4h)，6.91(d，j＝4.0hz，1h)，6.78(s，1h)，6.75(dd，j＝4.0hz，j＝8.0hz，1h)，4.83(s，2h)，4.35-4.20(m，1h)，3.25-3.14(m，2h)，3.04-2.90(m，1h)，2.62-2.54(m，2h)，2.21-2.11(m，1h)，1.46(d，j＝8.0hz，6h)，1.34-1.28(m，2h)，1.20-1.14(m，2h)。13c-nmr(cdcl3)，δ(ppm)：172.7，164.8，159.2，158.4，147.2，141.3，135.8，134.1，132.8，131.3，128.1，127.6，127.3，117.7，113.3，110.0，106.3，73.1，59.8，51.1，41.7，22.6，22.0，8.5，7.8.ms(esi+)m/z：616.4[m+1]+。實(shí)施例8a：5-((1r,3r)-3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-異丁基-1h-吡唑-3-甲酸鹽(8a)實(shí)施例8a可以如下制備：通過將粗產(chǎn)物8f進(jìn)行如對(duì)于8所述的酯水解反應(yīng)，并通過制備rp-hplc以次異構(gòu)體的形式從粗產(chǎn)物8中分離。1h-nmr(cdcl3)，δ(ppm)：7.42-7.30(m，2h)，7.11(d，j＝8.0hz，1h)，6.75-6.65(m，1h)，6.57(s，1h)，4.79(s，2h)，4.50-4.41(m，1h)，3.96-3.85(m，1h)，2.98-2.90(m，2h)，2.67-2.57(m，2h)，2.20-2.09(m，1h)，1.51(d，j＝8.0hz，6h)，1.32-1.14(m，4h)。13c-nmr(cdcl3)，δ(ppm)：172.6，166.2，159.2，158.4，147.4，141.2，135.7，134.6，132.8，131.3，128.1，127.7，127.5，116.8，113.5，110.0，105.8，75.1，59.8，51.2，41.8，25.4，22.6，8.5，7.8.ms(esi+)m/z：616.3[m+1]+。主異構(gòu)體(化合物8)和次異構(gòu)體(化合物8a)的跨環(huán)構(gòu)型通過noe實(shí)驗(yàn)證實(shí)。所檢測(cè)到的質(zhì)子間的指示性noes在下式中用雙箭頭標(biāo)示。對(duì)于帶有芳香族部分的1,3-反式跨環(huán)構(gòu)型的實(shí)施例8所檢測(cè)的noes對(duì)于帶有芳香族部分的1,3-順式跨環(huán)構(gòu)型的實(shí)施例8a所檢測(cè)的noes實(shí)施例9：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-甲基-1h-吲唑-3-甲酸甲酯(9)步驟1：1-甲基-6-乙烯基-1h-吲唑-3-甲酸甲酯(9a)向6-溴-1-甲基-1h-吲唑-3-甲酸甲酯(60mg，0.22mmol)在dmf(10ml)中的溶液中，加入三丁基(乙烯基)錫(99μl，0.34mmol)、pd(ph3)4(11mg，9μmol)。加料完成后，在氬氣氣氛下將該混合物在90℃攪拌4小時(shí)。然后檢測(cè)除去溶劑。用cc純化得到化合物9a(52mg，88％)。步驟2：1-甲基-6-(3-氧代環(huán)丁基)-1h-吲唑-3-甲酸甲酯(9b)按照在實(shí)施例7/步驟2描述的程序，從9a得到化合物9b，產(chǎn)率57％。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ：8.14(d，j＝8.4hz，1h)，7.31(s，1h)，7.23(d，j＝8.8hz，1h)，4.13(s，3h)，3.99(s，3h)，3.87-3.79(m，1h)，3.58-3.51(m，2h)，3.33-3.26(m，2h)。m/z：259[m+1]+。步驟3：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-甲基-1h-吲唑-3-甲酸甲酯(9)按照在實(shí)施例7/步驟3描述的程序，從9b得到化合物9，產(chǎn)率40％。實(shí)施例10：6-(3-(2-氯-4-((5-環(huán)丙基-3-(2,6-二氯苯基)異噁唑-4-基)甲氧基)苯基)-3-羥基環(huán)丁基)-1-甲基-1h-吲唑-3-甲酸(10)按照在實(shí)施例8描述的程序，從化合物9得到化合物10，產(chǎn)率45％，為白色固體。1hnmr(400mhz，cdcl3)δ：8.14(d，j＝8.0hz，1h)，7.48(d，j＝8.8hz，1h)，7.43-7.32(m，4h)，7.29(m，1h)，6.92(d，j＝2.4hz，1h)，6.76(dd，j＝7.2hz，2.4hz，1h)，4.84(s，2h)，4.18(s，3h)，3.45-3.40(m，1h)，3.28-3.23(m，2h)，3.19-3.10(m，1h)，2.68-2.63(m，2h)，2.21-2.14(m，1h)，1.33-1.29(m，2h)，1.20-1.15(m，2h)。m/z：638[m+1]+。制備實(shí)施例11步驟1：5-(3-羥基氮雜環(huán)丁烷-1-基)煙酸甲酯(11a)將5-溴煙酸甲酯(2.00g，9.26mmol)、氮雜環(huán)丁烷-3-醇(1.01g，9.26mmol)、cs2co3(9.06g，27.8mmol)、binap(1.15g，1.85mmol)和pd(oac)2(0.44g，1.85mmol)在干燥二噁烷(115ml)中的混合物在n2氣氛下在85℃加熱過夜。過濾所得混合物，減壓濃縮并用制備hplc純化得到化合物11a(250mg，13％)，為黃色固體。步驟2：5-(3-氧代氮雜環(huán)丁烷-1-基)煙酸甲酯(11)在n2氣氛下在0℃向化合物11a(250mg，1.20mmol)在干燥dcm(15ml)中的溶液中加入戴斯-馬丁氧化劑(1.014g，2.40mmol)，并將該溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅所得溶液并用ea稀釋。有機(jī)部分用鹽水洗滌，用na2so4干燥，過濾，減壓濃縮，然后用cc(dcm/meoh＝150:1)純化得到化合物11(140mg，57％)，為黃色固體。制備實(shí)施例12使用與制備實(shí)施例11中描述的方法類似的程序，制備下列化合物：實(shí)施例13/1至13/9下表列出了根據(jù)上述制備實(shí)施例和實(shí)施例制備的更多實(shí)例。所有列出的化合物都制備為單一異構(gòu)體。實(shí)施例14/1和14/2使用在上述實(shí)施例1至13和反應(yīng)式中描述的程序相似的程序，通過使用適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)原料得到下列化合物。下列化合物可以以相同的方式使用與上述類似地程序制備：評(píng)價(jià)fret活性評(píng)價(jià)如下進(jìn)行配體介導(dǎo)的輔因子肽相互作用的測(cè)量以量化結(jié)合到核受體fxr上的配體：人fxrα配體結(jié)合區(qū)域的準(zhǔn)備：人fxrαlbd在大腸桿菌(e.coli)菌株bl21(de3)中表達(dá)為n-末端gst標(biāo)記的融合蛋白。將編碼fxr配體結(jié)合區(qū)域的dna克隆到載體pdest15(invitrogen)中。表達(dá)由iptg可誘導(dǎo)的t7啟動(dòng)子控制。配體結(jié)合區(qū)域的氨基酸邊界是數(shù)據(jù)庫登記項(xiàng)(databaseentry)nm_005123(refseq)的氨基酸187～472。fxr-lbd的表達(dá)和提純：將整夜預(yù)培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株在lb－氨芐青霉素培養(yǎng)基中稀釋1:20并在30℃生長(zhǎng)到od600＝0.4～0.6的光密度。然后通過加入0.5mm的iptg誘導(dǎo)基因表達(dá)。細(xì)胞在30℃、180rpm另外培養(yǎng)6h。通過離心(7000×g、7分鐘、室溫)收集細(xì)胞。將每升原始細(xì)胞培養(yǎng)液的細(xì)胞重新懸浮在10ml溶菌緩沖液(50mm葡萄糖，ph7.9的50mm三羥甲基氨基甲烷，1mmedta和4mg/ml溶菌酶)中并放置在冰上30分鐘。然后將細(xì)胞進(jìn)行超聲處理并用離心(22000×g，30分鐘，4℃)除去細(xì)胞殘骸。每10ml上清液加入0.5ml預(yù)洗過的谷胱苷肽4b瓊脂糖漿(qiagen)并將該懸浮液在4℃保持緩慢旋轉(zhuǎn)1小時(shí)。用離心(2000g，15秒，4℃)使谷胱苷肽4b瓊脂糖小珠成球并在洗滌緩沖液(25mm三羥甲基氨基甲烷，50mmkcl，4mmmgcl2和1mnacl)中洗滌兩次?；诿可寂囵B(yǎng)液，將該球重新懸浮在3ml洗脫緩沖液(洗脫緩沖液：20mm三羥甲基氨基甲烷，60mmkcl，5mmmgcl2和80mm谷胱苷肽，在使用前以粉末形式直接加入)。將該懸浮液在4℃保持旋轉(zhuǎn)15分鐘，使小珠成球并用與第一次相比一半體積的洗脫緩沖液再次洗脫。將洗脫物集中并在含有60mmkcl、5mmmgcl2以及1mm二硫蘇糖醇和10％(v/v)甘油的20mm羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液(ph7.5)透析整夜。蛋白用sds-page進(jìn)行分析。本方法測(cè)量假定配體對(duì)純化的細(xì)菌表達(dá)的fxr配體結(jié)合區(qū)域(lbd)和基于src-1(lcd2，676～700)的殘基676～700的合成生物素化的肽之間的相互作用的調(diào)節(jié)能力。所使用的肽序列是其中n-末端被生物素化的b-cpsshsslterhkilhrllqegsps-cooh。所述fxr的配體結(jié)合區(qū)域(lbd)在bl-21細(xì)胞中使用載體pdest15表達(dá)為帶有g(shù)st的融合蛋白。將細(xì)胞超聲裂解并將融合蛋白用谷胱苷肽瓊脂糖(pharmacia)根據(jù)制造商的使用說明進(jìn)行純化。為了根據(jù)他們對(duì)fxr-肽相互作用的影響篩選化合物，使用了perkinelmerlance技術(shù)。這種方法依賴于從給體到連接到目標(biāo)結(jié)合分子上的受體熒光體的結(jié)合依賴性能量轉(zhuǎn)移(bindingdependentenergytransfer)。為了便于處理和減少來自化合物熒光的背景，lance技術(shù)使用一般熒光標(biāo)記，并且在384孔板中，在基于三羥甲基氨基甲烷的緩沖液(ph7.5的20mm三羥甲基氨基甲烷-hcl、60mmkcl、5mmmgcl2、35ng/μlbsa)中以25μl的最終體積進(jìn)行時(shí)間分辨檢測(cè)分析，所述基于三羥甲基氨基甲烷的緩沖液含有20～60ng/孔融合到gst上的重組表達(dá)fxr-lbd、200～600nm表示src1氨基酸676～700的n-末端生物素化的肽、200ng/孔鏈霉抗生物素-xlapc結(jié)合物(prozyme)和6～10ng/孔euw1024–antigst(perkinelmer)。將樣品的dmso含量保持在1％。在產(chǎn)生分析混合物并稀釋假定fxr調(diào)節(jié)配體后，將被分析物在暗處在室溫下在黑色384孔fia-板(greiner)中平衡1小時(shí)。用perkinelmervictor2vtmmultilabelcounter檢測(cè)lance信號(hào)。通過將在665nm和615nm的發(fā)射光之間的比例作圖使結(jié)果可視化。在沒有加入配體的情況下觀察到fxr-肽形成的基線水平。促進(jìn)復(fù)合物形成的配體在時(shí)間分辨熒光信號(hào)中誘導(dǎo)一個(gè)濃度依賴性的增加。預(yù)期與單體fxr和fxr-肽復(fù)合物兩者的結(jié)合都同樣好的化合物為在信號(hào)上沒有變化，而對(duì)單體受體優(yōu)先結(jié)合的配體被預(yù)期為將在觀察到的信號(hào)中誘導(dǎo)一個(gè)濃度依賴性的降低。為評(píng)價(jià)所述化合物的抑制潛力，對(duì)于下表1中列出的實(shí)施例化合物測(cè)定了ec50-值(a＝ec50<25nm；b＝25≤ec50<100nm；c＝ec50≥100nm)。表1組別實(shí)施例#a4，8，10，13/8，13/9，14/1，14/2b1，2，5，6，8a，13/1，13/3，13/4，13/5，13/7c13/2，13/6哺乳動(dòng)物單一雜交(m1h)評(píng)價(jià)如下所述測(cè)定配體介導(dǎo)的gal4啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的反式活化以量化配體結(jié)合介導(dǎo)的fxr活化：將編碼fxr配體結(jié)合域的cdna部分克隆到載體pcmv-bd(斯特拉塔基因公司(stratagene))中，在cmv啟動(dòng)子的控制下融合至酵母gal4dna結(jié)合域。配體結(jié)合區(qū)域的氨基酸邊界是數(shù)據(jù)庫登記項(xiàng)(databaseentry)nm_005123(refseq)的氨基酸187～472。質(zhì)粒pfr-luc(斯特拉塔基因公司)用作報(bào)告質(zhì)粒，含有合成啟動(dòng)子和酵母gal4結(jié)合位點(diǎn)的5個(gè)串聯(lián)重復(fù)，驅(qū)動(dòng)螟娥螢火蟲(photinuspyralis)(美國(guó)螢火蟲)螢光素酶基因作為報(bào)告基因的表達(dá)。為提高試驗(yàn)準(zhǔn)確性，共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒prl-cmv(普羅邁格公司(promega))。prl-cmv包含組成型cmv啟動(dòng)子，控制海腎(renillareniformis)螢光素酶的表達(dá)。所有g(shù)al4報(bào)告基因試驗(yàn)在hek293細(xì)胞中進(jìn)行(獲自德國(guó)布倫施威克(braunschweig)的dsmz)，所述細(xì)胞在37℃、5％co2，補(bǔ)充有10％胎牛血清、0.1mm非必需氨基酸、1mm丙酮酸鈉和100單位青霉素/鏈霉素/毫升的含l-谷氨酰胺和厄爾(earle)bss的mem中生長(zhǎng)。培養(yǎng)基和補(bǔ)充添加劑都從invitrogen得到。為了所述評(píng)價(jià)，將5×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于96孔板中，每孔含100微升mem，其不含酚磺酞和l-谷氨酰胺，但含補(bǔ)充有10％木炭/葡聚糖處理的fbs(hyclone，southlogan，utah))、0.1mm非必需氨基酸、2mm谷氨酰胺、1mm丙酮酸鈉和100單位青霉素/鏈霉素/毫升的厄爾(earle)bss，37℃、5％co2下培養(yǎng)。第二天，細(xì)胞匯合＞90％。除去培養(yǎng)基，用20微升/孔包含三種上述質(zhì)粒的optimem-聚乙烯-亞胺-基轉(zhuǎn)染試劑(optimem，invitrogen；聚乙烯亞胺，aldrich目錄號(hào)40,827-7)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。加入轉(zhuǎn)染混合物之后2-4小時(shí)加入與接種細(xì)胞具有相同組成的mem。然后，加入預(yù)先用mem稀釋的化合物儲(chǔ)備液(最終的載體濃度不超過0.1％)。細(xì)胞再培養(yǎng)16小時(shí)，然后采用雙重光-螢光素酶-測(cè)試系統(tǒng)在相同的細(xì)胞萃取物中相繼測(cè)定螢火蟲和海腎螢光素酶活性(dyer等人，anal.biochem.2000，282，158-161)。所有實(shí)驗(yàn)均平行三次。為評(píng)價(jià)實(shí)施例化合物的fxr激動(dòng)劑效能，在m1h評(píng)價(jià)中測(cè)定了效能范圍，如下在表2中列出(a＝ec50<25nm；b＝25≤ec50<100nm；c＝ec50≥100nm)。表2組別實(shí)施例#a13/4，13/5，13/6b2，8，8a，10，13/1，13/3，13/7c1，4，5，6，13/2，13/8，13/9，14/1水溶性評(píng)價(jià)如下測(cè)定在pbs中ph7.4的水溶性。將在dmso中的10mm化合物儲(chǔ)備溶液加入到pbs(ph7.4)以達(dá)到200μm的理論最終濃度。將所得溶液/懸浮液在1250rpm震蕩1小時(shí)，然后在室溫下儲(chǔ)存在黑暗中23小時(shí)。此時(shí)，通過以3900rpm離心30分鐘從該溶液中分離任何沉淀。通過比較在有機(jī)溶劑(甲醇/水60:40，v/v)在校準(zhǔn)用基準(zhǔn)(200μm)中主峰的峰面積和在緩沖液樣品中相應(yīng)峰的峰面積來測(cè)定水溶性。使用在230nm的hplc-uv/vis作為檢測(cè)方法。平行人工膜滲透分析(pampa)對(duì)于pampa，在dmso中制備檢測(cè)物的5mm的儲(chǔ)備溶液。在etoh(卡巴咪嗪，胍那芐)或者在etoh:h2o1:1(v/v)(頭孢曲松)中分別制備對(duì)照物的5mm儲(chǔ)備溶液。將化合物在pbs(ph7.4)中稀釋分別得到包含5％的各個(gè)有機(jī)溶劑和250μm對(duì)照化合物或10μm檢測(cè)物的起始溶液。對(duì)于該評(píng)價(jià)，使用如kansy等人(j.med.chem.1998，41，1007)描述的pampa的改進(jìn)程序。包括用于低(頭孢曲松)、中(胍那芐)和高(卡巴咪嗪)滲透性的參考化合物作為內(nèi)部對(duì)照。在用96孔multiscreenimmobilon(受體)覆蓋的multiscreen96孔盤(給體)中進(jìn)行滲透實(shí)驗(yàn)。該immobilon板的疏水性過濾材料用70％乙醇預(yù)先潤(rùn)濕，并用脂質(zhì)溶液(溶解在十二烷中的卵磷脂)處理。用檢測(cè)化合物和對(duì)照化合物填充給體板，并將兩個(gè)板彼此插入并置于100rpm的定軌振蕩器上15分鐘。通過將150μl包含檢測(cè)和對(duì)照化合物的pbs緩沖液施加至給體板上開始傳輸研究。在室溫下擴(kuò)散15-16小時(shí)后，收集受體和給體板的內(nèi)容物，并使用lc/ms-檢測(cè)(檢測(cè)物)或者用uv光譜使用spectramaxplus384(分子器件)(對(duì)照物)定量。對(duì)照物頭孢曲松、胍那芐和卡巴咪嗪的最大吸收分別為240nm、270nm和286nm。和對(duì)滲透分析樣品所描述的一樣制備回收樣品，并在相同條件下，在滲透期間在代表性小玻璃瓶中培養(yǎng)。對(duì)檢測(cè)物的lc/ms分析，將100μl培養(yǎng)物從受體和給體室中取出，并如下所述對(duì)乙腈(acn)沉淀進(jìn)行處理。另外，通過用150μlea沖洗各個(gè)孔兩次來提取來自脂質(zhì)層的檢測(cè)物樣品。將該溶液收集在1.5ml的反應(yīng)試管中，并蒸發(fā)溶劑。經(jīng)干燥的殘余物沖洗懸浮在反映受體和給體樣品組成的pbs/dmso/acn混合物(即，100μl緩沖液補(bǔ)充有5％dmso、200μlacn+istd)中。各個(gè)樣品的最終溶劑含量為66％acn。通過分別加入200μlacn/istd或400μlacn/istd將從給體和受體室和校準(zhǔn)用基準(zhǔn)得到的樣品沉淀。在劇烈震蕩(10秒)和離心(以4800×g，5分鐘，室溫)后，將無顆粒物的上清液進(jìn)行l(wèi)c-ms/ms。如上所述萃取薄膜室。在重建后，將樣品劇烈震蕩(10秒)并減慢旋轉(zhuǎn)(以4800×g，5分鐘，室溫)。將無顆粒物的上清液進(jìn)行l(wèi)c-ms/ms。為了分析本發(fā)明的化合物，所述hplc系統(tǒng)由accelau-hplc泵和accela自動(dòng)取樣器(thermofisherscientific，usa)組成。在裝備有連接至運(yùn)轉(zhuǎn)標(biāo)準(zhǔn)軟件xcalibur2.1的pc的加熱的電噴霧(h-esi2)接口(thermofisherscientific，usa)的exactive質(zhì)譜儀(具有準(zhǔn)確質(zhì)量的軌道阱(orbitrap)技術(shù))上進(jìn)行質(zhì)譜光譜。使用acn/0.1％蟻酸作為有機(jī)相(a)和10mm甲酸銨/0.1％蟻酸作為水相(b)在梯度模式(表3)下進(jìn)行l(wèi)c，并且將泵流速設(shè)定至500微升/分鐘。在geminic6-phenyl，3μm，50×2.0mm(phenomenex，德國(guó))分析柱和前置柱(geminic6-phenyl，3μm，4×2.0mm)上進(jìn)行分離。表3：hplc梯度流動(dòng)相0分鐘0.1分鐘1.2分鐘2.6分鐘2.7分鐘3.5分鐘a(％)55979755b(％)9595339595對(duì)應(yīng)用正或負(fù)離子模式的所有分析物都使用通用調(diào)諧文件(tunefile)作為ms調(diào)諧文件。作為用于內(nèi)部質(zhì)量校正的鎖定質(zhì)量(lockmass)，使用普遍存在于溶劑系統(tǒng)中的鄰苯二甲酸二異辛酯的[m+h]+離子(m/z391.28429)。通過在單一同位素[m+h]+或[m-h]-離子的預(yù)期質(zhì)量周圍掃描±1thomson獲得分析物。軌道肼的質(zhì)量分辨率設(shè)定為50,000。每種分析物的準(zhǔn)確質(zhì)量用于峰積分。其他儀器設(shè)置如下：hcd-氣體關(guān)閉，agc高動(dòng)態(tài)范圍，最大肼注射時(shí)間(max.trapinjectiontime)100ms，鞘氣(sheathgas)30，輔助氣(auxgas)8，吹掃氣(sweepgas)2，噴霧電壓4kv，毛細(xì)管溫度250℃，esi2加熱器溫度250℃。本發(fā)明的目的是產(chǎn)生與wo2011/020615要求保護(hù)的化合物相比具有改進(jìn)的物化性能的fxr激動(dòng)劑。通過在代替前者的1,2-環(huán)亞丙基的1,3-環(huán)亞丁基或1,3-亞氮雜環(huán)丁烷基上引入極性羥基實(shí)現(xiàn)了這個(gè)目的。令人驚奇地，所得化合物保持了在fxr受體上的活性，而且顯現(xiàn)出改進(jìn)的物化性能，例如較高的水溶性和/或膜滲透性。表4中給出了這兩個(gè)系列的相應(yīng)化合物的直接比較。表4*flux(％)＝(c受體孔)/sum(c給體孔+c受體孔)×100×2**n.d.＝未測(cè)定在每種情況下，通過引入羥基-環(huán)丁基或羥基-氮雜環(huán)丁烷基顯著改善了水溶解性或pampa薄膜滲透性或二者同時(shí)得到了改善。和大多數(shù)核受體活性分子一樣，fxr激動(dòng)劑通常為非常親油性的(m.l.crawley，expertopin.ther.patents2010，20，1047)。因此，有人提出更好的水溶解度和薄膜滲透性導(dǎo)致更高的口服生物利用度，以及通常而言，對(duì)作為藥物的那些化合物的臨床開發(fā)有更好的適應(yīng)性(l.huang，j.dong，s.karki在evaluationofdrugcandidatesforpreclinicaldevelopment(eds.c.han，c.b.davis，b.wang)，wiley&sons，hoboken2010，187-217)。當(dāng)前第1頁12