本申請是申請日為2014年04月15日、中國申請?zhí)枮?01480024021.5、發(fā)明名稱為“使用白細胞介素-10治療疾病和病癥的方法”的發(fā)明申請的分案申請。相關(guān)申請的交叉引用本申請要求2013年4月18日提交的美國臨時申請系列第61/813,563號(該申請通過引用整體并入本文)的優(yōu)先權(quán)利益。發(fā)明領(lǐng)域本申請涉及使用il-10和相關(guān)試劑治療或預(yù)防多種疾病和病癥的方法。引言細胞因子白細胞介素-10(il-10)是通過作用于t細胞、b細胞、巨噬細胞和抗原呈遞細胞(apc)來調(diào)節(jié)多個免疫應(yīng)答的多效性細胞因子。il-10可通過抑制活化的單核細胞和活化的巨噬細胞的il-1α、il-1β、il-6、il-8、tnf-α、gm-csf和g-csf的表達來抑制免疫應(yīng)答，并且其還抑制nk細胞的ifn-γ產(chǎn)生。雖然il-10主要在巨噬細胞中表達，但也已在活化的t細胞、b細胞、肥大細胞和單核細胞中檢測到表達。除了抑制免疫應(yīng)答以外，il-10還展現(xiàn)免疫刺激性質(zhì)，包括刺激il-2和il-4處理的胸腺細胞的增殖，增強b細胞的活力，和刺激mhcii類的表達。人il-10是一種同型二聚體，其在兩個單體亞單位之間的非共價相互作用受到破壞后變得無生物活性。獲自il-10的公開晶體結(jié)構(gòu)的數(shù)據(jù)表明功能二聚體展現(xiàn)與ifn-γ的一定相似性(zdanov等，(1995)structure(lond)3:591-601)。作為其多效性活性的結(jié)果，il-10已與眾多種疾病、病癥和病狀，包括炎性病狀、免疫相關(guān)病癥、纖維化病癥和癌癥關(guān)聯(lián)。針對許多此類疾病、病癥和病狀用il-10進行臨床和臨床前評估已鞏固其治療潛能。此外，已顯示peg化的il-10在某些治療情境中比非peg化的il-10更有效。鑒于il-10相關(guān)疾病、病癥和病狀的流行性和嚴重性，使功效、患者耐受性等最優(yōu)化的新型給藥方案和參數(shù)在增進il-10和peg化的il-10以及與其相關(guān)的試劑的治療有用性方面將具有巨大價值。概述本公開涵蓋使用il-10、經(jīng)修飾的(例如，peg化的)il-10和本文中描述的相關(guān)試劑以及其組合物治療和/或預(yù)防各種疾病、病癥和病狀、和/或其癥狀的方法。更具體地，本公開涉及在受試者的各種疾病、病癥和病狀的治療和/或預(yù)防中獲得和維持功效，同時使與其相關(guān)的不利作用減小至最小的最優(yōu)化的給藥參數(shù)。如在下文中詳細所示的，此類給藥參數(shù)的最優(yōu)化包括例如在考慮施用途徑和其它因素的情況下與吸收、分布、代謝和排泄(“adme”)相關(guān)的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)的評估。應(yīng)理解，除非本文中另外指出，否則與adme和其它參數(shù)相關(guān)的術(shù)語意欲具有它們在相關(guān)科學(xué)領(lǐng)域中的普遍可接受的含義。例如，術(shù)語“血清半衰期”或是指消除半衰期(即，試劑的血清濃度已達到其初始或最大值一半時的時間)。根據(jù)本文中描述的方法，疾病、病癥或病狀和/或其癥狀可以是增殖性病癥，諸如癌癥或癌癥相關(guān)病癥，或纖維化病癥，諸如肝硬化、nash和nafld。雖然不限于特定癌癥，但癌癥可以是實體瘤，包括與結(jié)腸癌、黑色素瘤和磷狀細胞癌相關(guān)的腫瘤，或其可以是血液病癥。在其它實施方案中，疾病、病癥或病狀是病毒病癥，包括，但不限于人免疫缺陷病毒、乙型或丙型肝炎病毒或巨細胞病毒。在其它實施方案中，疾病、病癥或病狀是免疫病癥或炎性病癥，其可以是急性或慢性的。免疫病癥和炎性病癥的實例包括炎性腸病、銀屑病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和阿爾茨海默病(alzheimer'sdisease)。在特定實施方案中，疾病、病癥或病狀是心血管病癥，包括動脈粥樣硬化。具有心血管病癥的受試者可能具有升高的膽固醇。在其它實施方案中，疾病、病癥或病狀是血栓形成或血栓形成病狀。如下文中進一步論述的，人il-10是同型二聚體并且每一個單體包含178個氨基酸，其前18個氨基酸包含信號肽。本公開的特定實施方案包含缺乏信號肽的成熟人il-10多肽(參見，例如，美國專利第6,217,857號)，或成熟人peg-il-10。在其它具體實施方案中，il-10劑是成熟人il-10的變體。該變體可展示低于成熟人il-10的活性，與其相當(dāng)或比其大的活性；在某些實施方案中，活性與成熟人il-10的活性相當(dāng)或大于其活性。本公開的某些實施方案涵蓋修飾il-10以增強一個或多個性質(zhì)(例如，藥代動力學(xué)參數(shù)、功效等)。在特定實施方案中，通過例如peg化、糖基化、白蛋白(例如，人血清白蛋白(hsa))綴合和羥乙基淀粉化(hesylation)來修飾il-10。在進一步的實施方案中，il-10的修飾不導(dǎo)致對免疫原性的治療相關(guān)的有害作用，并且在更進一步的實施方案中，經(jīng)修飾的il-10的免疫原性比未修飾的il-10低。術(shù)語“il-10”、“il-10多肽”、“劑”等意欲被廣泛地解釋，并且包括例如，人和非人il-10相關(guān)多肽，包括其同源物、變體(包括突變蛋白)和片段，以及具有例如前導(dǎo)序列(例如，信號肽)的il-10多肽，以及前述多肽的經(jīng)修飾的形式。在其它特定實施方案中，術(shù)語“il-10”、“il-10多肽”、“劑”是激動劑。特定實施方案涉及peg化的il-10，其在本文中也被稱為“peg-il-10”。本公開還涵蓋編碼前述多肽的核酸分子。本公開的特定實施方案涉及治療或預(yù)防受試者的疾病、病癥或病狀的方法，其包括向受試者施用治療有效量的il-10劑，其中該量足以獲得至少0.1ng/ml的平均il-10血清谷濃度。治療或預(yù)防的方法可由cd8+t細胞介導(dǎo)。其它實施方案涉及治療或預(yù)防受試者(例如，人)的疾病、病癥或病狀的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的il-10劑，其中該量足以在一段時間內(nèi)維持平均il-10血清谷濃度，其中平均il-10血清谷濃度為至少0.1ng/ml，并且其中將平均il-10血清谷濃度維持至少90％的所述一段時間。在本公開的特定實施方案中，平均il-10血清谷濃度為至少0.2ng/ml、至少0.3ng/ml，和至少0.4ng/ml、至少0.5ng/ml、至少0.6ng/ml、至少0.7ng/ml、至少0.8ng/ml、至少0.9ng/ml、至少1ng/ml、至少1.2ng/ml、至少1.25ng/ml、至少1.3ng/ml、至少1.4ng/ml、至少1.5ng/ml、至少1.6ng/ml、至少1.7ng/ml、至少1.8ng/ml、至少1.85ng/ml、至少1.9ng/ml、至少1.95ng/ml、至少1.97ng/ml和至少1.98ng/ml、至少1.99ng/ml、至少2.0ng/ml或大于2ng/ml。在進一步的實施方案中，所述一段時間為至少12小時、至少24小時、至少48小時、至少72小時、至少1周、至少2周、至少3周、至少1個月、至少6周、至少2個月、至少3個月或大于3個月。在本公開的特定實施方案中，將平均il-10血清谷濃度維持所述一段時間或至少85％的所述一段時間、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的所述一段時間。預(yù)期足以維持所需穩(wěn)態(tài)血清谷濃度(例如，0.1ng/ml或2ng/ml)的給藥方案可導(dǎo)致大于所需穩(wěn)態(tài)血清谷濃度的初始血清谷濃度。由于il-10在哺乳動物受試者中的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)特征，初始谷濃度(例如，通過施用一個或多個負荷劑量，隨后施用一系列維持劑量獲得的)在一段時間內(nèi)逐漸地不斷降低，即使當(dāng)給藥參數(shù)(量和頻率)保持恒定時亦如此。在該段時間后，逐漸地不斷降低停止，且穩(wěn)態(tài)血清谷濃度得到維持。例如，～0.1mg/kg/日的il-10劑(例如，mil-10)至小鼠(例如，c57bl/6小鼠)的腸胃外施用(例如，sc和iv)是維持例如2.0ng/ml的穩(wěn)態(tài)血清谷濃度所需的。然而，直至在以0.1mg/kg/日的初始給藥后(以及也在任何初始劑量后)約30天才獲得該穩(wěn)態(tài)血清谷濃度。相反地，在已達到初始血清谷濃度(例如，2.5ng/ml)后，該濃度在例如約30天的一段時間中逐漸不斷地降低，在該時間后所需的穩(wěn)態(tài)血清谷濃度(例如，2.0ng/ml)得以維持。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將能夠確定使用例如adme和患者特異性參數(shù)維持所需穩(wěn)態(tài)谷濃度所需的劑量。本公開涵蓋其中il-10劑可包含至少一個修飾來形成經(jīng)修飾的il-10劑的方法，其中該修飾不改變il-10劑的氨基酸序列。在一些實施方案中，經(jīng)修飾的il-10劑為peg-il-10劑。peg-il-10劑可包含至少一個共價附接于il-10的至少一個亞單位的至少一個氨基酸殘基的peg分子，或在其它實施方案中包含單-peg化與二-peg化的il-10的混合物。peg-il-10劑的peg組分可具有大于約5kda、大于約10kda、大于約15kda、大于約20kda、大于約30kda、大于約40kda或大于約50kda的分子質(zhì)量。在一些實施方案中，分子質(zhì)量為約5kda至約10kda、約5kda至約15kda、約5kda至約20kda、約10kda至約15kda、約10kda至約20kda、約10kda至約25kda或約10kda至約30kda。在一些實施方案中，經(jīng)修飾的il-10劑包含至少一個fc融合分子、至少一個血清白蛋白(例如，hsa或bsa)、hsa融合分子或白蛋白綴合物。在另外的實施方案中，經(jīng)修飾的il-10劑被糖基化、羥乙基淀粉化或包含至少一個白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域。一些經(jīng)修飾的il-10劑可包含不止一種類型的修飾。在特定實施方案中，修飾是位點特異性的。一些實施方案包含接頭。經(jīng)修飾的il-10劑在下文中進行了詳細論述。本公開還涵蓋結(jié)合本文中的教導(dǎo)的基因療法的用途。關(guān)于基因療法的用途和方法，可用編碼本文中所示的il-10相關(guān)多肽的核酸體內(nèi)轉(zhuǎn)化受試者的細胞。或者，可用轉(zhuǎn)基因或多核苷酸體外轉(zhuǎn)化細胞，隨后將該細胞移植進受試者的組織以實現(xiàn)治療。另外，可用編碼il-10相關(guān)多肽的轉(zhuǎn)基因或多核苷酸轉(zhuǎn)化原代細胞分離物或已建立的細胞系，隨后任選地將其移植進受試者的組織。本公開涵蓋其中每天至少2次、每天至少1次、每48小時至少1次、每72小時至少1次、每周至少1次、每2周至少1次、每月至少1次、每2月至少1次或每3月至少1次向受試者施用il-10劑的方法。一些實施方案還包括將il-10劑與至少一種另外的預(yù)防劑或治療劑一起施用，預(yù)防劑或治療劑的實例示于下文中?？赏ㄟ^任何有效途徑施用il-10劑。在一些實施方案中，其通過腸胃外注射(包括皮下注射)施用。本公開的特定實施方案涉及藥物組合物，所述藥物組合物包含一定量的il-10劑(例如，治療有效量)(包括上文中所述的那些試劑)與一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑(例如，等滲注射液)。藥物組合物通常是適合用于人施用的藥物組合物。此外，在一些實施方案中，藥物組合物包含至少一種另外的預(yù)防劑或治療劑。本公開的某些實施方案涵蓋含有上述藥物組合物之一和任選地一種或多種另外的組分的無菌容器。例如，但不限于，無菌容器可以是注射器。在其它實施方案中，無菌容器是藥盒的一個組件；藥盒還可含有例如包含至少一種預(yù)防劑或治療劑的第二無菌容器。附圖簡述圖1描繪人和小鼠il-10的氨基酸序列。圖2a描繪在il-10的遞增濃度下pbmc中的mcp-1的濃度(pg/ml)。在1ng/ml及以上的濃度下，il-10增加mcp-1的分泌。圖2b描繪在il-10的遞增濃度下利用lps刺激的pbmc中的mcp-1的濃度(pg/ml)。il-10為lps介導(dǎo)的pbmc活化的抑制劑，并且以1ng/ml及以上的濃度添加il-10顯著抑制mcp-1的分泌。詳述在進一步描述本公開之前，應(yīng)理解，本公開不限于本文中所示的特定實施方案，并且還要理解，本文中使用的術(shù)語僅為了描述特定實施方案的目的，并且不旨在限制。當(dāng)提供值的范圍時，應(yīng)理解，該范圍的上限和下限之間的每個居間數(shù)值(至下限單位的十分之一，除非上下文另外清楚地規(guī)定)以及所述范圍內(nèi)的任意其它所述或居間的數(shù)值都包括在本發(fā)明中。這些較小范圍的上限和下限可獨立地包括在該較小的范圍內(nèi)，并且也包括在本發(fā)明中，服從于所述范圍內(nèi)的任何特別排除的限值。當(dāng)所述范圍包括上下限值之一或兩者時，排除那些所包括的界限之一或兩者的范圍也包括在本發(fā)明中。除非另外定義，否則本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域內(nèi)的普通技術(shù)人員通常理解的意義相同的意義。必須要指出的是，如本文中和所附權(quán)利要求中所用，單數(shù)形式“一個/種(a/an)”和“所述/該(the)”包括多個指代物，除非上下文另外清楚地指示。還應(yīng)指出的是，可撰寫權(quán)利要求來排除任何可選要素。因此，該陳述意圖用作與權(quán)利要求要素的描述聯(lián)合使用此類排他性術(shù)語諸如“單獨地”、“僅僅”等或使用“否定”限制的在先基礎(chǔ)。本文所論述的出版物僅針對它們在本申請?zhí)峤蝗罩暗墓_而提供。另外，所提供的公開日可能不同于實際的公開日，這可能需要獨立地進行確認。概述本公開涵蓋本文中描述的試劑及其組合物用于治療和/或預(yù)防各種疾病、病癥和病狀，和/或其癥狀的用途。在本公開的某些方面，此類治療或預(yù)防通過使用特定給藥參數(shù)來實現(xiàn)。在一些實施方案中，施用試劑以達到用于治療如炎性和免疫相關(guān)病癥、纖維化病癥、癌癥和癌癥相關(guān)病癥或心血管病癥(例如，動脈粥樣硬化)的被最優(yōu)化的血清谷濃度。在本公開的一些實施方案，以足以獲得大于約0.1ng/ml的血清谷濃度的量向具有可利用il-10劑(例如，il-10多肽)治療的疾病或病癥或處于發(fā)生該疾病或病癥的風(fēng)險中的受試者施用il-10劑，在某些實施方案中，血清谷濃度大于約1ng/ml，然而在其它實施方案中，血清谷濃度大于約2ng/ml。應(yīng)當(dāng)指出，對與“人”連用的本公開的多肽和核酸分子的任何提及無意對獲得多肽或核酸的方式或來源具限制性，而是這樣的提及順序可對應(yīng)于天然存在的人多肽或核酸分子的序列。除了人多肽和編碼它們的核酸分子以外，本公開還涵蓋il-10相關(guān)多肽和來自其它種類的對應(yīng)核酸分子。定義除非另外指出，否則下列術(shù)語旨在具有下文所示的含義。其它術(shù)語在整個說明書的其它地方進行了定義。術(shù)語“患者”或“受試者”可互換地用于指人或非人動物(例如，哺乳動物)。術(shù)語“施用(administration)”、“施用(administer)”等，當(dāng)它們用于例如受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指例如il-10或peg-il-10、核酸(例如，編碼天然人il-10的核酸)、包含前述物質(zhì)或診斷試劑的藥物組合物與受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。在細胞的背景中，施用包括將試劑與細胞接觸(例如，體外或離體)，以及試劑與流體的接觸，其中流體與細胞接觸。術(shù)語“治療/處理(treat/treating/treatment)”等是指在疾病、病癥或病狀或其癥狀已被診斷、觀察等后開始的作用(諸如施用il-10或包含il-10的藥物組合物)的過程，以暫時或永久性消除、減少、抑制、緩和或改善使受試者受累的疾病、病癥或病狀的潛在病因的至少一個，或與使受試者受累的疾病、病癥或病狀相關(guān)的癥狀的至少一個。因此，治療包括抑制(例如，阻止疾病、病癥或病狀或與其相關(guān)的臨床癥狀的發(fā)展或進一步發(fā)展)活動性疾病。術(shù)語還可用于其它背景中，諸如其中il-10或peg-il-10與例如流動相或膠體相中的il-10受體接觸的情形中。如本文中所用，術(shù)語“需要治療”是指由醫(yī)生或其它看護者作出的受試者需要治療或?qū)闹委煫@益的判斷。該判斷是基于多個因素作出的，所述因素在醫(yī)生或看護者的專業(yè)知識的領(lǐng)域內(nèi)。術(shù)語“阻止”、“防止”、“預(yù)防”等是指以一定的方式(例如，在疾病、病癥、病狀或其癥狀發(fā)作之前)起始以通常在易患特定疾病、病癥或病狀的受試者的背景中暫時性或永久性阻止、壓制、抑制或減少受試者發(fā)生疾病、病癥、病狀等的風(fēng)險(如通過例如臨床癥狀的不存在)或延遲其發(fā)作的作用(諸如施用il-10或包含il-10的藥物組合物)的過程。在某些情況下，術(shù)語還指減緩疾病、病癥或病狀的進展或抑制其進展至有害或另外地不期望的狀態(tài)。如本文中所述，術(shù)語“需要預(yù)防”是指由醫(yī)生或其它看護者作出的受試者需要預(yù)防性照料或?qū)念A(yù)防性照料受益的判斷。該判斷是基于多個存在于醫(yī)生或看護者的專業(yè)知識領(lǐng)域內(nèi)的因素作出的。短語“治療有效量”是指以當(dāng)向受試者施用時能夠?qū)膊?、病癥或病狀的任何癥狀、方面或特征具有任何可檢測的積極作用的量，單獨地或作為藥物組合物的部分以及以單次劑量或作為一系列劑量的部分向受試者施用試劑。治療有效量可通過測量相關(guān)生理效應(yīng)來確定，并且可結(jié)合給藥方案和受試者的病狀的診斷分析等來調(diào)整其。例如，施用后產(chǎn)生的炎性細胞因子的量的測量可表明是否已使用治療有效量。短語“以足以產(chǎn)生變化的量”意指，在施用特定療法之前(例如，基線水平)與之后測量的指示劑的水平之間存在可檢測的差異。指示劑包括任何客觀參數(shù)(例如，il-10的血清濃度)或主觀參數(shù)(例如，受試者的健康幸福感)。術(shù)語“小分子”是指具有小于約10kda、小于約2kda或小于約1kda的分子量的化合物。小分子包括，但不限于無機分子、有機分子、含有無機成分的有機分子、包含放射性原子的分子和合成分子。在治療上，小分子對細胞可更容易滲透，不易被降解，并且相較于大分子不太可能引發(fā)免疫應(yīng)答。術(shù)語“配體”是指例如可用作受體的激動劑或拮抗劑的肽、多肽、膜締合或膜結(jié)合的分子或其復(fù)合物?！芭潴w”包括天然和合成配體，例如細胞因子、細胞因子變體、類似物、突變蛋白和來源于抗體的結(jié)合組合物?！芭潴w”還包括小分子，例如細胞因子的肽模擬物和抗體的肽模擬物。術(shù)語還包括既不是激動劑也不是拮抗劑但可結(jié)合受體而不顯著影響其生物學(xué)性質(zhì)例如信號轉(zhuǎn)導(dǎo)或粘附的試劑。此外，術(shù)語包括已例如通過化學(xué)或重組方法改變成膜結(jié)合配體的可溶性形式的膜結(jié)合配體。配體或受體可以是完全細胞內(nèi)的，即，其可存在于胞質(zhì)溶膠、細胞核或某些其它細胞內(nèi)區(qū)室中。配體與受體的復(fù)合物稱為“配體-受體復(fù)合物”。術(shù)語“抑制劑”和“拮抗劑”或“激活劑”和“激動劑”分別指例如用于配體、受體、輔因子、基因、細胞、組織或器官的激活的抑制性分子或激活分子。抑制劑是減少、阻斷、阻止、延遲激活、滅活、脫敏或下調(diào)例如基因、蛋白質(zhì)、配體、受體或細胞的分子。激活劑是增加、激活、促進、增強激活、敏化或上調(diào)例如基因、蛋白質(zhì)、配體、受體或細胞的分子。抑制劑還可被定義為減小、阻斷或滅活組成型活性的分子?！凹觿笔桥c靶標相互作用以引起或促進靶標的激活增強的分子?！稗卓箘笔堑挚辜觿┑淖饔玫姆肿印＾卓箘┳柚?、減小、抑制或中和激動劑的活性，并且拮抗劑還可阻止、抑制或減小靶標例如靶標受體的組成型活性，即使當(dāng)不存在鑒定的激動劑時亦如此。術(shù)語“調(diào)節(jié)”、“調(diào)整”等是指分子(例如，激活劑或抑制劑)直接或間接增強或減小il-10劑(或編碼它們的核酸分子)的功能或活性的能力；或增強分子產(chǎn)生與il-10劑的作用相當(dāng)?shù)淖饔玫哪芰?。術(shù)語“調(diào)節(jié)劑”廣泛地意指可實現(xiàn)上述活性的分子。例如，例如基因、受體、配體或細胞的調(diào)節(jié)劑是改變基因、受體、配體或細胞的活性的分子，其中活性在其調(diào)節(jié)性質(zhì)上可被激活、抑制或改變。調(diào)節(jié)劑可單獨作用，或其可使用輔因子，例如蛋白質(zhì)、金屬離子或小分子。術(shù)語“調(diào)節(jié)劑”包括通過與il-10起相同作用機制作用的試劑(即，以與其類似的方式調(diào)節(jié)與il-10相同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的試劑)并且能夠引發(fā)與il-10引起的生物響應(yīng)相當(dāng)(或更大)的生物響應(yīng)。調(diào)節(jié)劑的實例包括小分子化合物和其它生物有機分子。許多小分子化合物的文庫(例如，組合文庫)是商購可得的并且可用作起始點來鑒定調(diào)節(jié)劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠開發(fā)一種或多種測定(例如，基于生物化學(xué)或細胞的測定)，其中可篩選此類化合物文庫以鑒定一種或多種具有所需性質(zhì)的化合物；隨后，熟練的藥物化學(xué)家能夠通過例如合成和評估其類似物和衍生物來使這樣的一種或多種化合物最優(yōu)化。合成和/或分子建模研究還可用于激活劑的鑒定。分子的“活性”可描述或是指分子對配體或受體的結(jié)合；催化活性；刺激基因表達或細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、分化或成熟的能力；抗原性活性；其它分子的活性的調(diào)節(jié)等。術(shù)語還可指調(diào)節(jié)或維持細胞間相互作用(例如，粘附)的活性，或維持細胞的結(jié)構(gòu)(例如，細胞膜)的活性?！盎钚浴边€可指比活性，例如，[催化活性]/[mg蛋白質(zhì)]，或[免疫活性]/[mg蛋白質(zhì)]、生物區(qū)室中的濃度等。術(shù)語“增殖活性”包括促進例如正常細胞分裂以及癌癥、腫瘤、發(fā)育不良、細胞轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)移和血管生成的或是進行所述生物過程所必需的，或與所述生物過程明確相關(guān)的活性。如本文中所用，“相當(dāng)?shù)摹?、“相?dāng)?shù)幕钚浴?、“與……相當(dāng)?shù)幕钚浴?、“相?dāng)?shù)淖饔谩薄ⅰ芭c……相當(dāng)?shù)淖饔谩钡仁强杀欢亢?或定性觀察的相關(guān)術(shù)語。術(shù)語的含義通常取決于其中使用它們的上下文。例如，都激活受體的兩種試劑從定性的角度來看可被視為具有相當(dāng)?shù)淖饔茫绻环N試劑僅能夠達到另一種試劑的活性的20％(如在本領(lǐng)域接受的測定(例如，劑量-反應(yīng)測定)中或在本領(lǐng)域接受的動物模型中測定的)時，則從定量的角度來看兩種試劑可被視為缺乏相當(dāng)?shù)淖饔?。?dāng)將一個結(jié)果與另一個結(jié)果比較(例如，一個結(jié)果對比參照標準)時，“相當(dāng)?shù)摹蓖ǔＲ庵敢粋€結(jié)果偏離參照標準少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于7％、少于5％、少于4％、少于3％、少于2％或少于1％。在特定實施方案中，如果一個結(jié)果與參照標準偏離少于15％、少于10％或少于5％，則其與參照標準相當(dāng)。例如，但不限于，活性或作用可指功效、穩(wěn)定性、溶解度或免疫原性。例如細胞、組織、器官或生物體的術(shù)語“反應(yīng)”包括生物化學(xué)或生理行為，例如，濃度、密度、粘附或生物區(qū)室內(nèi)的遷移、基因表達速率或分化狀態(tài)的變化，其中所述變化與激活、刺激或處理或與內(nèi)在機制諸如遺傳編程相關(guān)。在某些上下文中，術(shù)語“激活”、“刺激”等是指如受內(nèi)部機制以及受外部或環(huán)境因素調(diào)控的細胞活化；然而術(shù)語“抑制”、“下調(diào)”等是指相反作用。術(shù)語“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”在本文中可互換地用于指具有任何長度的氨基酸的聚合物形式，其可包括遺傳編碼的和非遺傳編碼的氨基酸，化學(xué)或生物化學(xué)修飾的或衍生的氨基酸，和具有經(jīng)修飾的多肽主鏈的多肽。所述術(shù)語包括融合蛋白，包括，但不限于，具有異源氨基酸序列的融合蛋白；具有異源和同源前導(dǎo)序列的融合蛋白；具有或不具有n端甲硫氨酸殘基的融合蛋白；具有免疫標記的蛋白的融合蛋白等。應(yīng)理解，在整個本公開中，參考根據(jù)單字母或三字母代碼的氨基酸。為讀者方便起見，下面提供單字母和三字母氨基酸代碼：如本文中所用，術(shù)語“變體”包括天然存在的變體和非天然存在的變體。天然存在的變體包括同源物(在物種間分別在氨基酸或核苷酸序列上不同的多肽和核酸)和等位基因變體(在物種內(nèi)的個體間分別在氨基酸或核苷酸序列上不同的多肽和核酸)。非天然存在的變體包括分別包含氨基酸或核苷酸序列的變化的多肽和核酸，其中人工地引入序列的變化(例如，突變蛋白)；例如，通過人干預(yù)(“人手動”)在實驗室中產(chǎn)生變化。因此，在本文中“突變蛋白”廣泛地指通常具有單個或多個氨基酸取代并且通常來源于已經(jīng)歷定點或隨機誘變的克隆的基因或來自完全合成的基因的突變的重組蛋白。術(shù)語“dna”、“核酸”、“核酸分子”、“多核苷酸”等在本文中可互換地用于指具有任何長度的核苷酸的多聚體形式(脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其類似物)。多核苷酸的非限定性實例包括線性和環(huán)狀核酸、信使rna(mrna)、互補dna(cdna)、重組多核苷酸、載體、探針、引物等。如本文中所用，在多肽的結(jié)構(gòu)的上下文中，“n端”(或“氨基端”)和“c端”(或“羧基端”)分別指多肽的最末氨基和羧基末端，而術(shù)語“n端的”和“c端的”分別指多肽的朝向n端和c端的氨基酸序列中的相對位置，并且可分別包括n端和c端上的殘基?！熬o鄰n端的”或“緊鄰c端的”是指第一氨基酸殘基相對于第二氨基酸殘基的位置，其中第一和第二氨基酸殘基被共價結(jié)合以提供連續(xù)氨基酸序列?！皝碓从凇痹诎被嵝蛄谢蚨嗪塑账嵝蛄械纳舷挛闹?例如，“來源于”il-10多肽的氨基酸序列)意味著表明多肽或核酸具有基于參照多肽或核酸(例如，天然存在的il-10多肽或編碼il-10的核酸)的序列的序列，并且不意味著對于其中產(chǎn)生蛋白質(zhì)或核酸的來源或方法是限制性的。例如，術(shù)語“來源于”包括參照氨基酸或dna序列的同源物或變體。在多肽的上下文中，術(shù)語“分離的”是指如果天然存在，則存在于與其中其可天然存在的環(huán)境不同的環(huán)境中的目標多肽。“分離的”意在包括在針對目標多肽被充分富集的和/或其中目標多肽被部分或基本上純化的樣品內(nèi)的多肽。當(dāng)多肽非天然存在時，“分離的”表示多肽已與其中通過合成或重組方法產(chǎn)生其的環(huán)境分離?！案患摹币庵笜悠方?jīng)非天然地操作(例如，被科學(xué)家)，以使得目標多肽a)以比起始樣品諸如生物樣品(例如，其中多肽天然存在或其中其在施用后存在的樣品)中的多肽的濃度高的濃度(例如，至少為3倍多，至少為4倍多，至少為8倍多，至少為64倍多或更多)，或b)以比其中產(chǎn)生多肽的環(huán)境(例如，如在細菌細胞中)更高的濃度存在?！盎旧霞兊摹北硎窘M分(例如，多肽)組成大于約50％的總的組合物含量，通常大于約60％的總的多肽含量。更常見地，“基本上純的”是指其中至少75％、至少85％、至少90％或更多的總的組合物是目標組分的組合物。在一些情況下，多肽將組成大于約90％，或大于約95％的總的組合物含量。術(shù)語“特異性結(jié)合”或“選擇性結(jié)合”，當(dāng)指配體/受體、抗體/抗原或其它結(jié)合對時，表示決定蛋白質(zhì)在蛋白質(zhì)的異源群體和其它生物制品中的存在的結(jié)合反應(yīng)。因此，在指定的條件下，指定的配體結(jié)合特定受體并且不以顯著量結(jié)合存在于樣品中的其它蛋白質(zhì)。涵蓋的方法的抗體或來源于抗體的抗原結(jié)合位點的結(jié)合成分，以為針對任何其它抗體或來源于其的結(jié)合成分的親和力至少2倍多、至少10倍多、至少20倍多或至少100倍多的親和力結(jié)合其抗原或其變體或突變蛋白。在特定實施方案中，抗體將具有大于約109升/mol的親和力，如通過例如scatchard分析(munsen，等1980analyt.biochem.107:220-239)測定的。il-10和peg-il-10抗炎性細胞因子il-10，也稱為人細胞因子合成抑制因子(csif)，被分類為2型(類)細胞因子，一組包括il-19、il-20、il-22、il-24(mda-7)和il-26、干擾素(ifn-α、-β、-γ、-δ、-ε、-κ、-ω和-τ)以及干擾素樣分子(limitin、il-28a、il-28b和il-29)的細胞因子。il-10為在免疫調(diào)節(jié)和炎癥中具有多效性作用的細胞因子。其由肥大細胞產(chǎn)生，消解這些細胞在過敏反應(yīng)的部位的炎性效應(yīng)。雖然其能夠抑制促炎性細胞因子諸如ifn-γ、il-2、il-3、tnfα和gm-csf的合成，但il-10對某些t細胞和肥大細胞也具有刺激性并且刺激b細胞成熟、增殖和抗體產(chǎn)生。il-10可阻斷nf-κb活性并且參與jak-stat信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的調(diào)控。其還誘導(dǎo)cd8+t細胞的細胞毒性活性和b細胞的抗體產(chǎn)生，并且其抑制巨噬細胞活性和促腫瘤炎癥。cd8+t細胞的調(diào)節(jié)是劑量依賴性的，其中較高劑量誘導(dǎo)較強的細胞毒性反應(yīng)。人il-10是具有37kda的分子質(zhì)量的同型二聚體，其中每一個18.5kda的單體包含178個氨基酸(其前18個氨基酸包含信號肽)和形成分子內(nèi)二硫鍵的兩對半胱氨酸殘基。il-10二聚體在兩個單體亞單位之間的非共價相互作用被破壞后變得無生物活性。本公開涵蓋人il-10和鼠il-10(il-10展示80％同源性)及其用途。另外，本公開的范圍包括來自其它哺乳動物物種的il-10直系同源物及其修飾形式，所述哺乳動物物種包括大鼠(登錄np_036986.2；gi148747382)；牛(登錄np_776513.1；gi41386772)；綿羊(登錄np_001009327.1；gi57164347)；狗(登錄aby86619.1；gi166244598)；和兔(登錄aac23839.1；gi3242896)。正如上文所暗示，術(shù)語“il-10”、“il-10多肽”、“il-10劑”等旨在被廣泛解釋，并且包括例如人和非人il-10相關(guān)多肽，包括同源物、變體(包括突變蛋白)及其片段，以及具有例如前導(dǎo)序列(例如，信號肽)的il-10多肽和前述蛋白的經(jīng)修飾的形式。在其它特定實施方案中，il-10、il-10多肽和il-10劑是激動劑。il-10受體、ii型細胞因子受體由α和β亞單位組成，所述亞單位也分別稱為r1和r2。受體激活需要結(jié)合α和β二者。il-10多肽的一個同型二聚體結(jié)合α并且同一il-10多肽的另一個同型二聚體結(jié)合β。重組人il-10的效用通常受其相對短的血清半衰期限制，所述短的血清半衰期可歸因于例如腎清除、蛋白水解降解和血流中的單體化。因此，各種方法已被開發(fā)來改善il-10的藥代動力學(xué)特征而不破壞其二聚體結(jié)構(gòu)(從而不利地影響其活性)。il-10的peg化導(dǎo)致某些藥代動力學(xué)參數(shù)(例如，血清半衰期)的改善和/或活性的增強。例如，本公開的特定實施方案包括利用peg-il-10使增殖性病癥(例如，癌癥)的治療最優(yōu)化的方法。如先前指出的，本公開還涵蓋結(jié)合本文中的教導(dǎo)的基因療法的用途?；虔煼ㄍㄟ^將遺傳物質(zhì)(通常地包裝在載體中)遞送至受試者內(nèi)的內(nèi)源細胞以引入新型基因，引入另外拷貝的先前存在的基因，削弱現(xiàn)有基因的功能，或修復(fù)現(xiàn)有的但不起作用的基因來實現(xiàn)。一旦在細胞內(nèi)，核酸就被細胞機構(gòu)表達，導(dǎo)致目標蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。在本公開的上下文中，基因療法被用作遞送編碼il-10劑的核酸以用于治療或預(yù)防本文所述的疾病、病癥或病狀的治療劑。正如上文所暗示，對于基因療法的使用和方法，可用編碼本文所示的il-10相關(guān)多肽的核酸體內(nèi)轉(zhuǎn)化受試者的細胞。另外，用轉(zhuǎn)基因或多核苷酸體外轉(zhuǎn)化細胞，隨后將其移植進受試者的組織以實現(xiàn)治療。另外，可用編碼il-10相關(guān)多肽的轉(zhuǎn)基因或多核苷酸轉(zhuǎn)化原代細胞分離物或已建立的細胞系，隨后任選地將其移植進受試者的組織。如本文中所用，術(shù)語“peg化的il-10”和“peg-il-10”是指具有一個或多個共價附接于(通常通過接頭，以便附接是穩(wěn)定的)il-10蛋白的至少一個氨基酸殘基的聚乙二醇分子的il-10分子。術(shù)語“單-peg化的il-10”和“單peg-il-10”表示一個聚乙二醇分子共價附接于(通常通過接頭)il-10二聚體的一個亞單位上的單個氨基酸殘基。在某些實施方案中，本公開中使用的peg-il-10是其中1至9個peg分子通過接頭共價附接于il-10二聚體的一個亞單位的n端處的氨基酸殘基的α氨基的單peg-il-10。一個il-10亞單位上的單-peg化通常因亞單位改組而導(dǎo)致非peg化、單-peg化和二-peg化的il-10的非均一混合物。此外，允許peg化反應(yīng)進行至完成將通常導(dǎo)致非特異性的和多peg化的il-10，從而降低其生物活性。因此，本公開的特定實施方案包括施用通過本文所述的方法(例如，實驗部分)產(chǎn)生的單和二-peg化的il-10的混合物。在特定實施方案中，peg部分的平均分子量為約5kda至約50kda。雖然peg至il-10的附接方法或位點不是至關(guān)重要的，但在某些實施方案中，peg化不改變，或僅最小程度地改變il-10劑的活性。在某些實施方案中，半衰期的增加大于生物活性的任何減小。peg-il-10的生物活性通常通過評估利用細菌抗原(脂多糖(lps))攻毒并用peg-il-10治療的受試者的血清中的炎性細胞因子(例如，tnf-α或ifn-γ)的水平來測量，如美國專利第7,052,686號中描述的?？沙鲇诳紤]的各種目的來制備il-10變體，包括增加血清半衰期，減小針對il-10的免疫應(yīng)答，促進純化或制備，減少il-10至其單體亞單位的轉(zhuǎn)化，改善療效和減輕治療使用期間的副作用的嚴重性或發(fā)生。氨基酸序列變體通常是自然界未發(fā)現(xiàn)的預(yù)定變體，盡管一些變體可以是翻譯后的變體，例如糖基化變體?？墒褂胕l-10的任何變體，只要其保持適當(dāng)水平的il-10活性。在腫瘤背景中，適當(dāng)?shù)膇l-10活性包括例如cd8+t細胞至腫瘤部位的浸潤，炎性細胞因子諸如ifn-γ、il-4、il-6、il-10和rank-l從這些浸潤細胞的表達，以及生物樣品中ifn-γ的升高的水平。短語“保守氨基酸取代”是指通過用具有相似酸度、堿度、電荷、極性或側(cè)鏈尺寸的側(cè)鏈的氨基酸替代蛋白質(zhì)中的氨基酸來保持蛋白質(zhì)活性的取代。保守氨基酸取代通常需要下列組內(nèi)的氨基酸殘基的取代：1)l、i、m、v、f；2)r、k；3)f、y、h、w、r；4)g、a、t、s；5)q、n；和6)d、e。取代、插入或缺失的指導(dǎo)可基于不同變體蛋白質(zhì)或來自不同物種的蛋白質(zhì)的氨基酸序列的比對。因此，除了任何天然存在的il-10多肽以外，本公開涵蓋具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個，通常不超過20、10或5個氨基酸取代，其中所述取代通常是保守氨基酸取代。本公開還涵蓋含有來源于成熟il-10的連續(xù)氨基酸殘基的成熟il-10的活性片段(例如，子序列)。肽或多肽子序列的連續(xù)氨基酸殘基的長度取決于子序列所源自的特定天然存在的氨基酸序列而變化。一般地，肽和多肽可為約20個氨基酸至約40個氨基酸、約40個氨基酸至約60個氨基酸、約60個氨基酸至約80個氨基酸、約80個氨基酸至約100個氨基酸、約100個氨基酸至約120個氨基酸、約120個氨基酸至約140個氨基酸、約140個氨基酸至約150個氨基酸、約150個氨基酸至約155個氨基酸、約155個氨基酸直至全長肽或多肽。另外，il-10多肽可在確定長度的連續(xù)氨基酸(例如，“比較窗口”)上具有相較于參照序列的確定的序列同一性。用于比較的序列的比對方法在本領(lǐng)域中是公知的?？梢岳缤ㄟ^smith&waterman,adv.appl.math.2:482(1981)的局部同源性算法，通過needleman&wunsch,j.mol.biol.48:443(1970)的同源性比對算法，通過pearson&lipman,proc.nat'l.acad.sci.usa85:2444(1988)的相似性搜索法，通過這些算法的計算機化實現(xiàn)(wisconsingenetics軟件包中的gap、bestfit、fasta和tfasta,madison,wis.)或通過手工比對和目測檢查(參見，例如，currentprotocolsinmolecularbiology(ausubel等，編輯，1995增刊))來進行用于比較的序列的最佳比對。作為實例，適當(dāng)?shù)膇l-10多肽可包含與約20個氨基酸至約40個氨基酸、約40個氨基酸至約60個氨基酸、約60個氨基酸至約80個氨基酸、約80個氨基酸至約100個氨基酸、約100個氨基酸至約120個氨基酸、約120個氨基酸至約140個氨基酸、約140個氨基酸至約150個氨基酸、約150個氨基酸至約155個氨基酸、約155個氨基酸直至全長肽或多肽的連續(xù)區(qū)段具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約98％或至少約99％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。如下文中進一步論述的，il-10多肽可從天然來源(例如，除其天然存在的環(huán)境外的環(huán)境)分離，并且還可被重組產(chǎn)生(例如，在經(jīng)遺傳修飾的宿主細胞諸如細菌、酵母、畢赤酵母、昆蟲細胞等中)，其中用包含編碼多肽的核苷酸序列的核酸來修飾經(jīng)遺傳修飾的宿主細胞。il-10多肽也可通過合成產(chǎn)生(例如，通過無細胞化學(xué)合成)。本公開涵蓋編碼il-10劑的核酸分子，包括它們的天然存在和非天然存在的同種型、等位基因變體和剪接變體。本公開還包括在一個或多個堿基上與天然存在的dna序列不同但因遺傳密碼的簡并性而仍然翻譯成對應(yīng)于il-10多肽的氨基酸序列的核酸序列。il-10血清濃度可以以幾種方式表征本文所述的方法中的il-10的血漿水平，包括：(1)高于某一指定的水平或在一定水平的范圍內(nèi)的平均il-10血清谷濃度；(2)在一定量的時間內(nèi)高于某一指定的水平的平均il-10血清谷濃度；(3)高于或低于某一指定水平或在一定水平的范圍內(nèi)的穩(wěn)態(tài)il-10血清濃度水平；或(4)高于或低于某一指定水平或在一定的水平范圍內(nèi)的濃度曲線的cmax。如本文中所示，已發(fā)現(xiàn)平均血清谷il-10濃度在某些適應(yīng)癥中對于功效是特別重要的。在本公開的一些實施方案中，可產(chǎn)生的血漿水平濃度曲線包括大于約0.1ng/ml、大于約0.15ng/ml、大于約0.2ng/ml、大于約0.25ng/ml、大于約0.3ng/ml、大于約0.35ng/ml、大于約0.4ng/ml、大于約0.45ng/ml、大于約0.5ng/ml、大于約0.55ng/ml、大于約0.6ng/ml、大于約0.65ng/ml、大于約0.7ng/ml、大于約0.75ng/ml、大于約0.8ng/ml、大于約0.85ng/ml、大于約0.9ng/ml、大于約0.95ng/ml、大于約1.0ng/ml、大于約1.1ng/ml、大于約1.2ng/ml、大于約1.3ng/ml、大于約1.4ng/ml、大于約1.5ng/ml、大于約1.6ng/ml、大于約1.7ng/ml、大于約1.8ng/ml、大于約1.9ng/ml、大于約2.0ng/ml、大于約2.1ng/ml、大于約2.2ng/ml、大于約2.3ng/ml、大于約2.4ng/ml、大于約2.5ng/ml、大于約2.75ng/ml或大于約3.0ng/ml的平均il-10血清谷濃度。在涉及治療或預(yù)防癌癥相關(guān)疾病、病癥或病狀的特定實施方案中，通過獲得大于約0.5ng/ml、大于約0.55ng/ml、大于約0.6ng/ml、大于約0.65ng/ml、大于約0.7ng/ml、大于約0.75ng/ml、大于約0.8ng/ml、大于約0.85ng/ml、大于約0.9ng/ml、大于約0.95ng/ml、大于約1.0ng/ml、大于約1.1ng/ml、大于約1.2ng/ml、大于約1.3ng/ml、大于約1.4ng/ml、大于約1.5ng/ml、大于約1.6ng/ml、大于約1.7ng/ml、大于約1.8ng/ml、大于約1.9ng/ml、大于約2.0ng/ml、大于約2.1ng/ml、大于約2.2ng/ml、大于約2.3ng/ml、大于約2.4ng/ml、大于約2.5ng/ml、大于約2.75ng/ml或大于約3.0ng/ml的平均il-10血清谷濃度來使療法最優(yōu)化。本公開的特定實施方案包含在如下范圍內(nèi)的平均il-10血清谷濃度：約0.1ng/ml至約1.0ng/ml、約0.1ng/ml至約0.9ng/ml、約0.1ng/ml至約0.8ng/ml、約0.1ng/ml至約0.7ng/ml、約0.1ng/ml至約0.6ng/ml、約of0.1ng/ml至約0.5ng/ml、約0.2ng/ml至約1.0ng/ml、約0.2ng/ml至約0.9ng/ml、約0.2ng/ml至約0.8ng/ml、約0.2ng/ml至約0.7ng/ml、約0.2ng/ml至約0.6ng/ml、約0.2ng/ml至約0.5ng/ml、約0.3ng/ml至約1.0ng/ml、約0.3ng/ml至約0.9ng/ml、約0.3ng/ml至約0.8ng/ml、約0.3ng/ml至約0.7ng/ml、約0.3ng/ml至約0.6ng/ml、約0.3ng/ml至約0.5ng/ml、約0.3ng/ml至約0.4ng/ml、約0.4ng/ml至約1.0ng/ml、約0.4ng/ml至約0.9ng/ml、約0.4ng/ml至約0.8ng/ml、約0.4ng/ml至約0.7ng/ml、約0.4ng/ml至約0.6ng/ml、約0.4ng/ml至約0.5ng/ml、約0.5ng/ml至約1.0ng/ml、約0.5ng/ml至約0.9ng/ml、約0.5ng/ml至約0.8ng/ml、約0.5ng/ml至約0.7ng/ml、約0.5ng/ml至約0.6ng/ml、約0.7ng/ml至約2.3n/ml、約0.8ng/ml至約2.2ng/ml、約0.9ng/ml至約2.1ng/ml、約1.0ng/ml至約2.1ng/ml、約1.0ng/ml至約2.0ng/ml、約1.0ng/ml至約1.9ng/ml、約1.0ng/ml至約1.8ng/ml、約1.0ng/ml至約1.7ng/ml、約1.0ng/ml至約1.6ng/ml、約1.0ng/ml至約1.5ng/ml、約1.9ng/ml至大于約2.5ng/ml、約1.9ng/ml至約2.5ng/ml、約1.9ng/ml至約2.4ng/ml、約1.9ng/ml至約2.3ng/ml、約1.9ng/ml至約2.2ng/ml或約1.9ng/ml至約2.1ng/ml。在涉及治療或預(yù)防抗炎性疾病、病癥或病狀的特定實施方案中，通過獲得0.1ng/ml至1.0ng/ml、0.1ng/ml至0.9ng/ml、0.1ng/ml至0.8ng/ml、0.1ng/ml至0.7ng/ml、0.1ng/ml至0.6ng/ml、0.1ng/ml至0.5ng/ml、0.2ng/ml至1.0ng/ml、0.2ng/ml至0.9ng/ml、0.2ng/ml至0.8ng/ml、0.2ng/ml至0.7ng/ml、0.2ng/ml至0.6ng/ml、0.2ng/ml至0.5ng/ml、0.3ng/ml至1.0ng/ml、0.3ng/ml至0.9ng/ml、0.3ng/ml至0.8ng/ml、0.3ng/ml至0.7ng/ml、0.3ng/ml至0.6ng/ml、0.3ng/ml至0.5ng/ml、0.3ng/ml至0.4ng/ml、0.4ng/ml至1.0ng/ml、0.4ng/ml至0.9ng/ml、0.4ng/ml至0.8ng/ml、0.4ng/ml至0.7ng/ml、0.4ng/ml至0.6ng/ml、0.4ng/ml至0.5ng/ml、0.5ng/ml至1.0ng/ml、0.5ng/ml至0.9ng/ml、0.5ng/ml至0.8ng/ml、0.5ng/ml至0.7ng/ml或0.5ng/ml至0.6ng/ml的平均il-10血清谷濃度來使療法最優(yōu)化。實驗部分描述了mil-10和peg-mil-10在pdv6鱗狀細胞癌和ct-26結(jié)腸癌中的治療功效的評估，其中mil-10和mpeg-il-10給藥參數(shù)(施用的量和頻率)足以實現(xiàn)平均1-2ng/ml的il-10血清谷濃度。如在實驗部分中描述的，peg-il-10處理導(dǎo)致完全反應(yīng)，然而il-10處理顯示抗腫瘤功能但非完全反應(yīng)。還可評估丙型肝炎的il-10治療的效果。對丙型肝炎病毒易感的具有功能免疫系統(tǒng)的小鼠模型(參見dorner,m.(2011年6月09日)nature474：208–211)可用于評估m(xù)il-10和peg-mil-10的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)作用。使用本文中所示的教導(dǎo)和本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的知識基礎(chǔ)，可評估被施用來獲得約0.1ng/ml、約0.5ng/ml、約1.0ng/ml、約1.5ng/ml和約2ng/ml的平均il-10血清谷濃度的mil-10和peg-mil-10的作用。雖然在大多數(shù)患者群體中在治療劑量上不普遍，但較高劑量的il-10的施用已在有限數(shù)目的受試者中引起不利作用(例如，頭痛、貧血和對肝的作用)。幸運地，當(dāng)在治療持續(xù)過程中維持0.1-2ng/ml的平均il-10血清濃度時，此類不利作用不普遍。然而，本公開的另一個實施方案提供用于監(jiān)測接受il-10療法的受試者以預(yù)測不利作用，從而潛在地避免不利作用的方法，該方法包括：(1)測量受試者的il-10的峰濃度；(2)測量受試者的il-10的谷濃度；(3)計算峰-谷波動；和(4)使用計算的峰-谷波動來預(yù)測受試者的潛在不利作用。較小的峰-谷波動表明較低的受試者將經(jīng)歷il-10相關(guān)不利作用的可能性。在某些實施方案中，測定使用特定給藥參數(shù)的特定疾病、病癥和病狀的治療的特定峰-谷波動，并且將那些波動用作參照標準。除了上述il-10給藥相關(guān)參數(shù)以外，分布容積考慮也是相關(guān)的。對于大多數(shù)藥物，血漿藥物濃度以多指數(shù)方式下降。在靜脈內(nèi)施用后，藥物立即快速地分布在整個初始空間(最低限度地確定為血漿容積)，隨后發(fā)生較慢的至血管外空間(例如，某些組織)的平衡分布。將靜脈內(nèi)il-10施用與這樣的雙房室動力學(xué)模型結(jié)合(參見rachmawati,h.等(2004)pharm.res.21(11):2072-78)。還已研究了皮下重組hil-10的藥代動力學(xué)(radwanski,e.等(1998)pharm.res.15(12):1895-1901)。此外，已引入il-10修飾以試圖將細胞因子靶向特定細胞類型(參見rachmawati,h.(2007年5月)drugmet.dist.35(5):814-21)。如下文中進一步描述的，在小鼠中觀察到的il-10和peg-il-10抗腫瘤功效因在cd8+t細胞中誘導(dǎo)細胞毒性酶而產(chǎn)生，從而導(dǎo)致腫瘤細胞的殺傷。在周期中施用許多抗癌化合物(包括，但不限于，細胞凋亡誘導(dǎo)劑)。常見地，施用接近最大耐受劑量(mtd)的單次劑量或一系列劑量，包括接近最大耐受劑量(mtd)的單次應(yīng)用或系列高劑量，隨后停止給藥(“休藥期”)以允許患者的正常生理學(xué)恢復(fù)。例如，將該給藥策略用于細胞毒性化學(xué)治療性抗體療法，諸如抗vegf(avastin)，和用于短效生物試劑諸如proleukin(il-2)。進行鼠類研究以生成有助于理解il-10療法的藥代動力學(xué)參數(shù)和有助于使人的腫瘤治療方案最優(yōu)化的數(shù)據(jù)。如實驗部分中所述，雖然在一周過程中接受相同量的以單個劑量或多個劑量施用的藥物的小鼠確實具有相似的總暴露，但接受日劑量的小鼠顯示最大的腫瘤尺寸的減小(表15)。此外，導(dǎo)致大于約1ng/ml(例如，1.1-2.1ng/ml)的血清谷濃度的維持的治療方案展現(xiàn)最大的腫瘤尺寸和重量的減小(表16)。本公開涵蓋導(dǎo)致大于約0.1ng/ml(例如，0.1-2ng/ml、0.1-1ng/ml、0.5-1.5ng/ml或1.1-2.1ng/ml)的血清谷濃度的維持的任何劑量的施用。例如，當(dāng)受試者為人時，可以以大于15μg/kg/日、大于18μg/kg/日、大于20μg/kg/日、大于21μg/kg/日、大于22μg/kg/日、大于23μg/kg/日、大于24μg/kg/日或大于25μg/kg/日的劑量施用非peg化的hil-10。當(dāng)受試者為人時，可以以大于2.0μg/kg/日、大于2.3μg/kg/日、大于2.5μg/kg/日、大于2.6μg/kg/日、大于2.7μg/kg/日、大于2.8μg/kg/日、大于2.9μg/kg/日、大于3.0μg/kg/日、大于3.1μg/kg/日、大于3.2μg/kg/日、大于3.3μg/kg/日、大于3.4μg/kg/日或大于3.5μg/kg/日的劑量施用包含相對小的peg的peg-hil-10(例如，5kda單-二peg-hil10)。cd8+t細胞在il-10功能中的作用cd8(分化群8)是用作t細胞受體(tcr)的共受體的跨膜糖蛋白。cd8共受體主要在細胞毒性t淋巴細胞(ctl)的表面表達，但其也在其它細胞類型包括自然殺傷細胞(nk)上被發(fā)現(xiàn)。與tcr一樣，cd8結(jié)合主要組織相容性復(fù)合物(mhc)分子，但對于i類mhc蛋白是特異的。cd8功能需要包含一對cd8鏈的二聚體的形成。存在cd8的兩個同種型α和β，并且cd8的最常見的形式包含cd8-α和cd8-β鏈，免疫球蛋白超家族的兩個成員。cd8-α與i類mhc分子相互作用，并且該相互作用使細胞毒性t細胞的t細胞受體與靶細胞在抗原特異性激活過程中保持緊密結(jié)合。具有cd8表面蛋白的細胞毒性t細胞被稱為“cd8+t細胞”。cd8+t細胞(ctl和nk細胞)識別特定感染的靶細胞的抗原(通常地因細胞內(nèi)病原體的感染產(chǎn)生的細胞表面肽或蛋白質(zhì))，并且如果那些抗原與受試者的正常抗原譜(“自身免疫”)不同，則cd8+t細胞被激活并且誘導(dǎo)靶細胞的細胞凋亡。存在其中抗原譜不同的幾個情形。例如，當(dāng)病原體(例如，病毒)侵入細胞時，細胞產(chǎn)生“非自身”細胞表面抗原，并且cd8+t細胞起始免疫應(yīng)答以試圖根除受感染的細胞。另一個情景發(fā)生，其中一些細胞的蛋白質(zhì)因核酸和/或氨基酸水平上的突變而被修飾。癌細胞通常具有許多突變并且被cd8+t細胞識別為‘不同的’。cd8+t細胞在人癌癥中的存在與更長的存活相關(guān)。在兩個上述情景中，激活的cd8+t細胞產(chǎn)生ifnγ、穿孔蛋白和顆粒酶b。ifnγ對于進一步上調(diào)抗原在靶細胞上的“呈遞”是非常重要的，該抗原存在于i類mhc蛋白上。穿孔蛋白和顆粒酶b介導(dǎo)靶細胞(例如，病毒和癌癥)的殺傷。穿孔蛋白，一種在ctl和nk的顆粒中發(fā)現(xiàn)的溶胞蛋白，在脫粒后將其自身插入靶細胞的質(zhì)膜中。穿孔蛋白與補體成分9(c9)具有結(jié)構(gòu)和功能相似性，并且與c9一樣，穿孔蛋白產(chǎn)生跨膜小管，并且能夠非特異性裂解多種靶細胞。穿孔蛋白是用于t細胞和nk細胞介導(dǎo)的細胞裂解的至關(guān)重要的效應(yīng)分子。正如上文所暗示，顆粒酶b為由細胞毒性t淋巴細胞(ctl)和自然殺傷(nk)細胞表達的絲氨酸蛋白酶。ctl和nk細胞識別特定感染的靶細胞群體并且誘導(dǎo)在它們的表面上具有‘非自身’抗原(通常地因細胞內(nèi)病原體感染產(chǎn)生的肽或蛋白質(zhì))的細胞的細胞調(diào)亡。顆粒酶b對于在細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中由ctl產(chǎn)生的靶細胞凋亡的快速誘導(dǎo)是至關(guān)重要的。il-10在cd8+t細胞的活化中起著多個作用。例如，il-10在記憶cd8+t細胞(已在先前的感染或接種疫苗過程中產(chǎn)生)中誘導(dǎo)效應(yīng)分子(ifnγ、穿孔蛋白和顆粒酶b)。此類記憶cd8+t細胞是負責(zé)提供受試者的長期抗病毒保護作用的細胞。雖然當(dāng)il-10不存在時記憶cd8+t細胞的產(chǎn)生和擴增可發(fā)生(vicari,a.和trinchieri,g.(2004)immuno.rev.202:223–236)，但il-10直接活化此類細胞的事實提供獨特的和備選的治療方法。雖然已將慢性病毒感染與cd8+t細胞發(fā)生關(guān)聯(lián)(virgin,h.等(2009)cell138，第30頁)，但未曾描述過利用非peg化的il-10或peg化的il-10對受試者(例如，小鼠)的處理。鑒于上述，本公開的實施方案基于cd8+t細胞與癌癥和病毒感染之間的聯(lián)系。因此，治療和/或預(yù)防癌癥相關(guān)疾病、病癥和病狀的某些方法，諸如維持例如≥0.5ng/ml、≥1ng/ml或≥2ng/ml的平均il-10血清濃度應(yīng)當(dāng)也適用于病毒相關(guān)疾病、病癥和病狀的治療。與其它細胞因子相反，il-10可被認為是高效免疫調(diào)節(jié)因子和免疫抑制因子。cd8+t細胞在慢性炎癥中的作用還未被完全闡明。然而，因為ifnγ在癌癥和病毒相關(guān)病癥中的參與至少部分通過cd8+t細胞介導(dǎo)，并且因為參與炎癥相關(guān)病癥的控制(通過炎性細胞因子的下調(diào))的il-10-t細胞途徑也牽涉ifnγ，因此cd8+t細胞也在炎癥中起著關(guān)鍵作用。因此，il-10可被證明是當(dāng)前穩(wěn)定的抗炎劑中的重要治療劑。il-10的產(chǎn)生方法本公開的多肽可通過任何適當(dāng)?shù)姆椒?，包括非重組(例如，化學(xué)合成)和重組方法產(chǎn)生。a.化學(xué)合成當(dāng)化學(xué)合成多肽時，合成可通過液相或固相進行。固相肽合成(spps)允許摻入非天然氨基酸和/或肽/蛋白質(zhì)主鏈修飾。spps的各種形式，諸如9-芴甲氧基羰基(fmoc)和叔丁氧基羰基(boc)可用于合成本公開的多肽?；瘜W(xué)合成的詳細內(nèi)容在本領(lǐng)域中是已知的(例如，ganesana.(2006)minirev.med.chem.6:3-10；和camareroj.a.等，(2005)proteinpeptlett.12:723-8)。固相肽合成可如下文中所述進行。用酸不穩(wěn)定或堿不穩(wěn)定基團保護α官能團(nα)和任何反應(yīng)性側(cè)鏈。保護基團在用于連接酰胺鍵的條件下是穩(wěn)定的但可被容易地裂解而不損傷已形成的肽鏈。用于α-氨基官能團的適當(dāng)?shù)谋Ｗo基團包括，但不限于下列基團：boc、芐氧羰基(z)、o-氯芐氧羰基、二-苯基異丙基氧羰基、叔-戊氧基羰基(amoc)、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基-芐氧羰基、鄰-硝基硫基、2-氰基-叔丁氧-羰基、fmoc、1-(4,4-二甲基-2,6-二氧環(huán)己基-1-亞基)乙基(dde等。合適的側(cè)鏈保護基包括，但不限于：乙?；?、烯丙基(all)、烯丙基氧羰基(alloc)、芐基(bzl)、芐氧羰基(z)、叔-丁氧羰基(boc)、芐氧甲基(bom)、鄰-溴芐氧羰基、叔-丁基(tbu)、叔丁基二甲基甲硅烷基、2-氯芐基、2-氯芐氧羰基、2,6-二氯芐基、環(huán)己基、環(huán)戊基、1,1-(4,4-二甲基-2,6-二氧環(huán)己基-1-亞基)乙基(dde)、異丙基、4-甲氧基-2,3-6-三甲基芐基磺酰基(mtr)、2,3,5,7,8-五甲基色滿-6-磺?；?pmc)、新戊酸基、四氫吡喃-2-基、甲苯磺酰基(tos)、2,4,6-三甲氧基芐基、三甲基甲硅烷基和三苯甲基(trt)。在固相合成中，將c端氨基酸偶聯(lián)于適當(dāng)?shù)妮d體材料。適當(dāng)?shù)妮d體材料是對于用于合成法的逐步縮聚和裂解反應(yīng)的試劑和反應(yīng)條件為惰性并且不溶于待使用的反應(yīng)介質(zhì)的那些載體材料。商購可得的載體材料的實例包括已用反應(yīng)性基團和/或聚乙二醇修飾的苯乙烯/二乙烯基苯共聚物；氯甲基化的苯乙烯/二乙烯基苯共聚物；羥甲基化或氨甲基化的苯乙烯/二乙烯基苯共聚物等。當(dāng)期望制備肽酸時，可使用用4-芐基氧芐基-醇(wang-錨)或2-氯三苯甲基氯衍生的聚苯乙烯(1％)-二乙烯基苯或在肽酰胺的情況下，可使用用5-(4'-氨甲基)-3',5'-二甲氧基苯氧基)戊酸(pal-錨)或?qū)?(2,4-二甲氧基苯基-氨甲基)-苯氧基(rink酰胺錨)衍生的聚苯乙烯(1％)二乙烯基苯或可通過將c端fmoc保護的氨基酸與載體材料反應(yīng)(通過在室溫或升高的溫度(例如，40℃與60℃之間)下在乙醇、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺(dmf)、二氯甲烷、四氫呋喃、n-甲基吡咯烷酮或類似溶劑中添加活化劑和利用例如2至72小時的反應(yīng)時間)來實現(xiàn)對聚合物載體的鍵聯(lián)。nα-保護的氨基酸(例如，fmoc氨基酸)至pal、wang或rink錨的偶聯(lián)可以例如在1-羥基苯并三唑或1-羥基-7-氮雜苯并三唑存在或不存在的情況下，借助于偶聯(lián)試劑(諸如n,n'-二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、n,n'-二異丙基碳二亞胺(dic)或其它碳二亞胺、2-(1h-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(tbtu)或其它脲鎓鹽、o-?；?脲、苯并三唑-1-基-三-吡咯烷-鏻六氟磷酸鹽(pybop)或其它鏻鹽、n-羥基琥珀酰亞胺、其它n-羥基酰亞胺或肟類)來進行，例如在添加hobt，添加或不添加堿諸如，例如二異丙基乙胺(diea)、三乙胺或n-甲基嗎啉，例如二異丙基乙胺的情況下借助于tbtu，利用2至72小時的反應(yīng)時間(例如，在1.5至3倍過量(例如2倍過量)的氨基酸和偶聯(lián)試劑中，和在約10℃至50℃，例如25℃的溫度下，在溶劑諸如二甲基甲酰胺、n-甲基吡咯烷酮或二氯甲烷，例如二甲基甲酰胺中，3小時)來進行。還可能在上述條件下使用活性酯(例如，五氟苯基、對-硝基苯基等)、nα-fmoc-氨基酸的對稱酸酐、其?；然蝓；桥悸?lián)試劑?？赏ㄟ^添加diea和使用10至120分鐘，例如20分鐘的反應(yīng)時間(但不限于使用該溶劑和該堿)將nα-保護的氨基酸(例如，fmoc氨基酸)偶聯(lián)于二氯甲烷中的2-氯三苯甲基樹脂?？砂凑针暮铣芍械某Ｒ?guī)方法，通常地在自動化肽合成儀中進行受保護的氨基酸的連續(xù)偶聯(lián)。在通過用例如二甲基甲酰胺中的哌啶(10％至50％)處理5至20分鐘，例如利用50％的dmf中的哌啶處理2x2分鐘，和利用20％的dmf中的哌啶處理1x15分鐘裂解固相上的偶聯(lián)的氨基酸的nα-fmoc保護基團后，在惰性、不含水的極性溶劑諸如二氯甲烷、dmf或兩者的混合物中和在約10℃與50℃之間的溫度下，例如在25℃下，將3至10倍過量(例如，10倍過量)的下一個受保護的氨基酸偶聯(lián)至先前的氨基酸。先前提及的用于將第一nα-fmoc氨基酸偶聯(lián)于pal、wang或rink錨的試劑適合用作偶聯(lián)試劑。受保護的氨基酸的活性酯或其氯化物或氟化物或?qū)ΨQ酸酐還可用作替代。在固相合成結(jié)束時，從載體材料裂解肽，同時裂解側(cè)鏈保護基團?？捎萌宜峄蚱渌鼜娝嵝越橘|(zhì)在添加5％-20％v/v的清除劑諸如二甲硫醚、乙基甲硫醚、茴香硫醚、硫甲酚、間-甲酚、苯甲醚、乙二硫醇、苯酚或水，例如，15％v/v二甲硫醚/乙二硫醇/間-甲酚1:1:1的情況下在0.5至3小時(例如2小時)內(nèi)進行裂解。通過用冰醋酸/三氟乙醇/二氯甲烷2:2:6裂解2-氯三苯甲基錨來獲得具有完全受保護的側(cè)鏈的肽?？赏ㄟ^在硅膠上進行色譜來純化受保護的肽。如果肽通過wang錨連接于固相和如果旨在獲得具有c端烷?；碾模瑒t可利用烷基胺或氟代烷基胺通過氨解來進行裂解。在約-10℃至50℃(例如，約25℃)的溫度下和約12至24小時(例如，約18小時)的反應(yīng)時間進行氨解。另外，可通過再酯化例如利用甲醇從載體裂解肽?？蓪@得的酸性溶液與3至20倍量的冷乙醚或正-己烷，例如10倍過量的二乙醚混合，以沉淀肽，從而分離保留在醚中的清除劑和裂解的保護基團?？赏ㄟ^從冰醋酸再沉淀肽數(shù)次來進行進一步純化?？稍谒蚴宥〈蓟騼煞N溶劑的混合，例如叔丁醇/水的1:1混合物中處理獲得的沉淀，隨后冷凍干燥。可通過各種色譜法純化獲得的肽，色譜法包括在以醋酸鹽形式存在的弱堿性樹脂中進行的離子交換、在非衍生聚苯乙烯/二乙烯基苯共聚物(例如，xad)上進行的疏水吸附色譜、在硅膠上進行的吸附色譜、例如在羧甲基纖維素上進行的離子交換色譜、例如在g-25上進行的分配色譜、逆流分布色譜或高壓液相色譜(hplc)例如在辛基或十八烷基硅烷鍵合硅(ods)相上進行的反相hplc。b.重組體產(chǎn)生描述人和小鼠il-10的制備的方法可見于例如美國專利第5,231,012號中，該專利教導(dǎo)了用于產(chǎn)生具有il-10活性的蛋白質(zhì)的方法，包括重組和其它合成技術(shù)。il-10可具有病毒來源，并且來自eb病毒的病毒il-10(bcrf1蛋白)的克隆和表達公開于moore等，(1990)science248:1230中。使用本領(lǐng)域中已知的標準技術(shù)，諸如本文所述的那些技術(shù)以多種方式獲得il-10。重組人il-10也可例如從peprotech,inc.,rockyhill,n.j商購獲得。當(dāng)使用重組技術(shù)產(chǎn)生多肽時，使用任何適當(dāng)?shù)臉?gòu)建體和任何適當(dāng)?shù)乃拗骷毎麑⒍嚯漠a(chǎn)生為細胞內(nèi)蛋白質(zhì)或分泌性蛋白質(zhì)，宿主細胞可以是原核或真核細胞，諸如分別地細菌(例如，大腸桿菌(e.coli))或酵母宿主細胞。可用作宿主細胞的真核細胞的其它實例包括昆蟲細胞、哺乳動物細胞和/或植物細胞。當(dāng)使用哺乳動物宿主細胞時，它們可包括人細胞(例如，hela、293、h9和jurkat細胞)；小鼠細胞(例如，nih3t3、l細胞和c127細胞)；靈長類動物細胞(例如，cos1、cos7和cv1)；和倉鼠細胞(例如，中國倉鼠卵巢(cho)細胞)?？砂凑毡绢I(lǐng)域中已知的標準方法使用多種適合用于多肽表達的宿主-載體系統(tǒng)。參見，例如，sambrook等，1989currentprotocolsinmolecularbiologycoldspringharborpress,newyork；和ausubel等1995currentprotocolsinmolecularbiology，wiley和sons編。用于將遺傳物質(zhì)引入宿主細胞的方法包括，例如，轉(zhuǎn)化、電穿孔、綴合、磷酸鈣法等?？蛇x擇用于轉(zhuǎn)移的方法，以提供引入的編碼多肽的核酸的穩(wěn)定表達?？蓪⒕幋a多肽的核酸提供為可遺傳的附加型元件(例如，質(zhì)粒)或可將其整合進基因組中。多種用于目標多肽的產(chǎn)生的適當(dāng)?shù)妮d體是商購可得的。載體可在宿主細胞中提供染色體外維持或可提供至宿主細胞基因組內(nèi)的整合。表達載體提供轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控序列，并且可提供誘導(dǎo)型或組成型表達，其中在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)，以及轉(zhuǎn)錄和翻譯終止區(qū)的轉(zhuǎn)錄控制下編碼區(qū)被可操作地連接。一般地，轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控序列可包括，但不限于，啟動子序列、核糖體結(jié)合位點、轉(zhuǎn)錄起始和終止序列、翻譯起始和終止序列以及增強子或激活序列。啟動子可以是組成型的或誘導(dǎo)型的，并且可以是強組成型啟動子(例如，t7)。表達構(gòu)建體通常具有位于啟動子序列附近的方便的限制性位點，以提供編碼目標蛋白的核酸序列的插入。在表達宿主中有效的可選擇的標記可被提供來幫助選擇含有載體的細胞。此外，表達構(gòu)建體還可包括額外的元件。例如，表達載體可具有一個或兩個復(fù)制系統(tǒng)，從而允許其維持在生物體中，例如哺乳動物或昆蟲細胞中(以進行表達)和原核宿主中(以進行克隆和擴增)。另外，表達構(gòu)建體可含有可選擇的標記基因來允許選擇轉(zhuǎn)化的宿主細胞?？蛇x擇的基因在本領(lǐng)域中是公知的并且可根據(jù)所使用的宿主細胞而變化?？砂凑毡绢I(lǐng)域中已知的方法來實現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離和純化。例如，可通過免疫親和純化從經(jīng)遺傳修飾以組成型地和/或在誘導(dǎo)后表達蛋白質(zhì)的細胞的裂解物，或從合成反應(yīng)混合物中分離蛋白質(zhì)，免疫親和純化通常包括將樣品與抗-蛋白質(zhì)抗體接觸，洗滌以除去非特異性結(jié)合的材料，和洗脫特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。分離的蛋白質(zhì)還通過透析和通常用于蛋白質(zhì)純化的其它方法來進一步純化。在一個實施方案中，使用金屬螯合層析法分離蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)可含有修飾以促進分離?？梢砸曰旧霞兊幕蚍蛛x的形式(例如，不含其它多肽)來制備多肽。多肽可存在于相對于可存在的其它組分(例如，其它多肽或其它宿主細胞組分)針對多肽富集的組合物中。例如，可提供純化的多肽以便多肽存在于基本上不含(例如少于約90％、少于約60％、少于約50％、少于約40％、少于約30％、少于約20％、少于約10％、少于約5％、或少于約1％)其它表達的蛋白質(zhì)的組合物中。使用重組技術(shù)來操作本領(lǐng)域中已知的不同il-10相關(guān)核酸以提供能夠編碼il-10多肽的構(gòu)建體來產(chǎn)生il-10多肽。應(yīng)理解，當(dāng)提供特定氨基酸序列時，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員鑒于她在例如分子生物學(xué)的背景和經(jīng)驗將認識到多種不同的編碼此類氨基酸序列的核酸分子。酰胺鍵取代在一些情況下，il-10包括一個或多個除肽鍵外的鍵聯(lián)，例如至少2個相鄰氨基酸通過除酰胺鍵外的鍵聯(lián)聯(lián)接。例如，為了減少或消除不期望的蛋白質(zhì)水解或其它方式的降解，和/或增強血清穩(wěn)定性，和/或限制或增加構(gòu)象柔性，il-10的主鏈內(nèi)的一個或多個酰胺鍵可被取代。在另一個實例中，可用作為酰胺鍵聯(lián)的電子等排體的鍵聯(lián)諸如-ch2nh-、-ch2s-、-ch2ch2-、-ch＝ch-(順式和反式)、-coch2-、-ch(oh)ch2-或-ch2so-來替代il-10中的一個或多個酰胺鍵(-co-nh-)。還可用例如還原的電子等排體偽肽鍵替代il-10中的一個或多個酰胺鍵聯(lián)。參見couder等(1993)int.j.peptideproteinres.41:181-184。此類替代和如何實現(xiàn)它們對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是已知的。氨基酸取代可在il-10多肽中產(chǎn)生一個或多個氨基酸取代。以下是非限定性實例：a)烷基取代的疏水氨基酸，包括丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、正亮氨酸、(s)-2-氨基丁酸、(s)-環(huán)己基丙氨酸或被來自c1-c10碳的脂肪族側(cè)鏈取代(包括支鏈、環(huán)狀和直鏈烷基、烯基或炔基取代)的其它簡單α-氨基酸的取代；b)芳香族-取代的疏水氨基酸，包括苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、磺基酪氨酸、二苯丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-萘基丙氨酸、2-苯并噻吩基丙氨酸、3-苯并噻吩基丙氨酸、組氨酸的取代，包括上文所列的芳香族氨基酸的氨基、烷基氨基、二烷基氨基、氮雜、鹵代(氟、氯、溴或碘)或烷氧基(c1至c4)-取代的形式，其舉例說明性實例為2-,3-或4-氨基苯丙氨酸、2-,3-或4-氯苯丙氨酸、2-,3-或4-甲基苯丙氨酸、2-,3-或4-甲氧基苯丙氨酸、5-氨基-,5-氯-,5-甲基-或5-甲氧基色氨酸、2'-,3'-或4'-氨基-、2'-,3'-或4'-氯-、2,3或4-二苯丙氨酸、2'-,3'-,或4'-甲基-、2-,3-或4-二苯丙氨酸、和2-或3-吡啶基丙氨酸；c)含堿性側(cè)鏈的氨基酸，包括精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、2,3-二氨基丙酸、高精氨酸的取代，包括先前的氨基酸的烷基、烯基或芳基-取代的(來自c1-c10分枝、線性或環(huán)狀)衍生物，無論取代基在例如pro-r位置中的雜原子(諸如α氮，或遠端一個或多個氮)上還是在α碳上。用作舉例說明性實例的化合物包括：n-ε-異丙基-賴氨酸、3-(4-四氫吡啶基)-甘氨酸、3-(4-四氫吡啶基)-丙氨酸、n,n-γ,γ'-二乙基-高精氨酸。還包括化合物諸如其中烷基占據(jù)α-碳的pro-r位置的α-甲基-精氨酸、α-甲基-2,3-二氨基丙酸、α-甲基-組氨酸、α-甲基-鳥氨酸。還包括的是從烷基、芳香酸、雜芳香酸(其中雜芳基具有一個或多個單個或組合的氮、氧或硫原子)、羧酸或許多公知的活化衍生物諸如酰基氯、活化酯、活化環(huán)酰胺和相關(guān)衍生物以及賴氨酸、鳥氨酸或2,3-二氨基丙酸的任一種形成的酰胺；d)酸性氨基酸，包括天冬氨酸、谷氨酸、高谷氨酸、酪氨酸，2,4-二氨基丙酸、鳥氨酸或賴氨酸和四唑-取代的烷基氨基酸的烷基、芳基、芳烷基、雜芳基磺酰胺的取代；e)側(cè)鏈酰胺殘基，包括天冬酰胺、谷氨酰胺，和天冬酰胺或谷氨酰胺的烷基或芳香族取代的衍生物的取代；和f)含羥基氨基酸，包括絲氨酸、蘇氨酸、高絲氨酸、2,3-二氨基丙酸，和絲氨酸或蘇氨酸的烷基或芳香族取代的衍生物的取代。在一些情況下，il-10包含一種或多種天然存在的非遺傳編碼的l-氨基酸、合成的l-氨基酸或氨基酸的d-對映異構(gòu)體。例如，il-10可只包含d-氨基酸。例如，il-10多肽可包含以下殘基的一種或多種：羥脯氨酸、β-丙氨酸、鄰-氨基苯甲酸、間-氨基苯甲酸、對-氨基苯甲酸、間-氨基甲基苯甲酸、2,3-二氨基丙酸、α-氨基異丁酸、n-甲基甘氨酸(肌氨酸)、鳥氨酸、瓜氨酸、叔-丁基丙氨酸、叔-丁基甘氨酸、n-甲基異亮氨酸、苯基甘氨酸、環(huán)己基丙氨酸、正亮氨酸、萘基丙氨酸、吡啶基丙氨酸3-苯并噻吩基丙氨酸、4-氯苯丙氨酸、2-氟苯丙氨酸、3-氟苯丙氨酸、4-氟苯丙氨酸、青霉胺、1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧酸、β-2-噻吩基丙氨酸、甲硫氨酸亞砜、高精氨酸、n-乙酰基賴氨酸、2,4-二氨基丁酸、rho-氨基苯丙氨酸、n-甲基纈氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸、ε-氨基己酸、ω-氨基己酸、ω-氨基庚酸、ω-氨基辛酸、ω-氨基癸酸、ω-氨基四癸酸、環(huán)己基丙氨酸、α,γ-二氨基丁酸、α,β-二氨基丙酸、δ-氨基戊酸和2,3-二氨基丁酸。另外的修飾可將半胱氨酸殘基或半胱氨酸類似物引入il-10多肽以提供通過二硫鍵聯(lián)的與另一個肽的鍵聯(lián)或提供il-10多肽的環(huán)化。引入半胱氨酸或半胱氨酸類似物的方法在本領(lǐng)域中是已知的；參見，例如，美國專利第8,067,532號。可環(huán)化il-10多肽?？蓪⒁粋€或多個半胱氨酸或半胱氨酸類似物引入il-10多肽，其中引入的半胱氨酸或半胱氨酸類似物可與又一個引入的半胱氨酸或半胱氨酸類似物形成二硫鍵。環(huán)化的其它方法包括肟接頭或羊毛硫氨酸接頭的引入；參見，例如，美國專利第8,044,175號。可使用和/或引入可形成環(huán)化鍵的任何氨基酸(或非氨基酸部分)的組合。環(huán)化鍵可利用氨基酸(或利用氨基酸和-(ch2)n-co-或-(ch2)n-c6h4-co-)與允許引入橋的官能團的任何組合來產(chǎn)生。一些實例為二硫化物、二硫化物部分諸如-(ch2)n-碳?；鶚?carbabridge)、硫縮醛、硫醚橋(胱硫醚或羊毛硫氨酸)以及含橋酯類和醚類。在這些實例中，n可以是任意整數(shù)，但通常小于10。其它修飾包括，例如，n-烷基(或芳基)取代(ψ[conr])，或構(gòu)建內(nèi)酰胺和其它環(huán)狀結(jié)構(gòu)的主鏈交聯(lián)。其它衍生物包括c端羥甲基衍生物、鄰-修飾的衍生物(例如，c-端羥甲基芐醚)、n端修飾的衍生物，包括取代的酰胺諸如烷基酰胺和酰肼類。在一些情況下，il-10多肽中的一個或多個l-氨基酸被一個或多個d-氨基酸替代。在一些情況下，il-10多肽是逆倒轉(zhuǎn)(retroinverso)類似物(參見，例如，sela和zisman(1997)fasebj.11:449)。逆倒轉(zhuǎn)肽類似物是線性多肽的異構(gòu)體，其中氨基酸序列的方向被反轉(zhuǎn)(逆轉(zhuǎn))并且其中的一個或多個氨基酸的手性d或l型被反轉(zhuǎn)(變型)，例如，使用d-氨基酸而非l-氨基酸。[參見，例如，jameson等(1994)nature368:744；和brady等(1994)nature368:692]。il-10多肽可包括“蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域”(ptd)，其是指促進穿過脂雙層、膠束、細胞膜、細胞器膜或小囊泡膜的多肽、多核苷酸、糖類或有機或無機分子。附接于另一個分子的ptd促進分子穿過膜，例如從細胞外空間進入細胞內(nèi)空間或從胞質(zhì)溶膠進入細胞器內(nèi)。在一些實施方案中，ptd共價連接于il-10多肽的氨基端，然而在其它實施方案中，ptd共價連接于il-10多肽的羧基端。示例性的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括，但不限于，最小十一肽蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(根據(jù)包含ygrkkrrqrrr的hiv-1tat的殘基47-57；seqidno://)；包含足以指導(dǎo)進入細胞的許多精氨酸殘基(例如，3、4、5、6、7、8、9、10或10-50個精氨酸)的多聚精氨酸序列；vp22結(jié)構(gòu)域(zender等(2002)cancergenether.9(6):489-96)；果蠅觸角蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(noguchi等(2003)diabetes52(7):1732-1737)；截短的人降鈣素肽(trehin等(2004)pharm.research21:1248-1256)；多聚賴氨酸(wender等(2000)proc.natl.acad.sci.usa97:13003-13008)；rrqrrtsklmkr(seqidno:/)；轉(zhuǎn)運肽(transportan)gwtlnsagyllgkinlkalaalakkil(seqidno:/)；kalaweaklakalakalakhlakalakalkcea(seqidno:/)；和rqikiwfqnrrmkwkk(seqidno:/)。示例性ptd包括，但不限于，ygrkkrrqrrr(seqidno:/)、rkkrrqrrr(seqidno:/)；3個精氨酸殘基至50個精氨酸殘基的精氨酸均聚物；示例性ptd結(jié)構(gòu)域氨基酸序列包括，但不限于，下列序列的任一個：ygrkkrrqrrr(seqidno://)；rkkrrqrr(seqidno://)；yaraaarqara(seqidno://)；thrlprrrrrr(seqidno://)和ggrrarrrrrr(seqidno://)。il-10多肽的c端上的氨基酸的羧基cor3可以以游離形式(r3＝oh)或以生理耐受的堿金屬鹽或堿土金屬鹽諸如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽的形式存在。羧基還可用伯醇、仲醇或叔醇諸如例如甲醇、分枝或未分枝的c1-c6-烷醇，例如乙醇或叔丁醇來酯化。羧基還可用伯胺或仲胺諸如氨、分枝的或未分枝的c1-c6-烷基胺或c1-c6二-烷基胺例如甲胺或二甲胺來酰胺化。il-10多肽的n端上的氨基酸nr1r2的氨基可以以游離形式(r1＝h和r2＝h)或以生理耐受的鹽諸如，例如，氯化物或醋酸鹽的形式存在。氨基還可用酸來乙?；?，以便r1＝h并且r2＝乙?；?、三氟乙?；蚪饎偼榛?。氨基可以以在肽化學(xué)中常規(guī)使用的氨基保護基團，諸如上述氨基保護基團(例如，fmoc、苯甲氧基-羰基(z)、boc和alloc)保護的形式存在。氨基可以是n-烷基化的，其中r1和/或r2＝c1-c6烷基或c2-c8烯基或c7-c9芳烷基。烷基殘基可以是直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的(例如，分別為乙基、異丙基和環(huán)己基)。增強和/或模擬il-10功能的特定修飾改善本文中公開的治療形式(例如，il-10)的多個物理性質(zhì)之一和/或它們的施用方式通常是有益的，并且有時是迫切需要的。物理性質(zhì)的改善包括，例如，調(diào)節(jié)免疫原性；增加水溶性、生物利用度、血清半衰期和/或治療半衰期的方法；和/或調(diào)節(jié)生物活性。某些修飾也可用于，例如，提高用于檢測測定的抗體(例如，表位標簽)和方便蛋白質(zhì)純化。一般必須賦予此類改善而非不利地影響治療方式的生物活性和/或增加其免疫原性。il-10的peg化是本公開涵蓋的一個具體修飾，然而其它修飾包括，但不限于，糖基化(n-和o-連接的)；多聚唾液酸化；包含血清白蛋白(例如，人血清白蛋白(hsa)、食蟹猴(cyno)血清白蛋白或牛血清白蛋白(bsa))的白蛋白融合分子；通過例如綴合的脂肪酸鏈(?；?的白蛋白結(jié)合；和fc融合蛋白。peg化：蛋白質(zhì)治療劑的臨床功效通常受到短的血漿半衰期和對蛋白酶降解的易感性限制。各種治療性蛋白(例如，非格司亭)的研究已顯示此類困難可通過各種修飾來克服，包括將多肽序列綴合或連接于多種非蛋白質(zhì)性質(zhì)的聚合物例如聚乙二醇(peg)、聚丙二醇或聚氧化烯的任一種。這通常通過連接部分共價結(jié)合于蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)性質(zhì)的多聚體例如peg來實現(xiàn)。已顯示此類peg綴合的生物分子具有臨床上有用的性質(zhì)，包括更好的物理和熱穩(wěn)定性、抗對酶促降解的易感性的保護作用、增加的溶解度、較長的體內(nèi)循環(huán)半衰期和減小的清除率、減弱的免疫原性和抗原性，以及減小的毒性。除了peg化對藥代動力學(xué)參數(shù)的有益作用以外，peg化本身可增強活性。例如，已顯示peg-il-10比未peg化的il-10更有效地抗某些癌癥(參見，例如，ep206636a2)。適合綴合于多肽序列的peg通常在室溫下可溶于水，并且具有通式r(o-ch2-ch2)no-r，其中r為氫或保護基團諸如烷基或烷醇基，并且n為1至1000的整數(shù)。當(dāng)r是保護基團時，其通常具有1至8個碳。綴合于多肽序列的peg可以是線性的或分枝的。本公開涵蓋分枝的peg衍生物、“星形-peg”和多臂peg。本公開中使用的peg的分子量不限于任何特定范圍，并且實例示于本文中其它地方；例如，某些實施方案具有5kda至20kda的分子量，然而其它實施方案具有4kda至10kda的分子量。本公開還涵蓋其中peg具有不同n值，從而各種不同的peg以特定比率存在的綴合物的組合物。例如，一些組合物包含綴合物的混合物，其中n＝1、2、3和4。在一些組合物中，其中n＝1的綴合物的百分比為18-25％，其中n＝2的綴合物的百分比為50-66％，其中n＝3的綴合物的百分比為12-16％，以及其中n＝4的綴合物的百分比達到5％。此類組合物可利用本領(lǐng)域中已知的反應(yīng)條件和純化方法來產(chǎn)生。示例性反應(yīng)條件描述于整個說明書。可將陽離子交換色譜用于分離綴合物，隨后鑒定含有純化的(不含未修飾的蛋白質(zhì)序列和具有其它數(shù)目的附接的peg的綴合物)具有例如所需數(shù)目的附接的peg的綴合物的級分。peg化最常見地在多肽的n端上的α氨基、賴氨酸殘基的側(cè)鏈上的ε氨基以及組氨酸殘基的側(cè)鏈上的咪唑基團上發(fā)生。由于大多數(shù)重組多肽具有單個α以及多個ε氨基和咪唑基團，因此取決于接頭化學(xué)可產(chǎn)生許多位置異構(gòu)體。本領(lǐng)域已知的一般peg化策略可用于本文中?？赏ㄟ^介導(dǎo)多肽序列的一個或多個的游離氨基或羧基與聚乙二醇之間的鍵的端反應(yīng)基團(“間隔子")將peg結(jié)合于本公開的多肽。具有可結(jié)合于游離氨基的間隔子的peg包括n-羥基琥珀酰亞胺聚乙二醇，其可通過用n-羥基琥珀酰亞胺活化聚乙二醇的琥珀酸酯來制備?？山Y(jié)合于游離氨基的另一種活化的聚乙二醇為2,4-雙(o-甲氧基聚乙二醇)-6-氯-s-三嗪，其可通過將聚乙二醇單甲醚與氰尿酰氯反應(yīng)來制備。結(jié)合于游離羧基的活化的聚乙二醇包括聚氧乙二胺。本公開的多肽序列的一個或多個對具有間隔子的peg的綴合可通過各種常規(guī)方法來進行。例如，可在4℃至室溫的溫度下，在5至10的ph下于溶液中，使用4:1至30:1的試劑對蛋白質(zhì)的摩爾比進行綴合反應(yīng)，持續(xù)30分鐘至20小時。可選擇反應(yīng)條件以指導(dǎo)朝向主要產(chǎn)生所需程度的取代的反應(yīng)。一般地，低溫、低ph(例如，ph＝5)和短的反應(yīng)時間傾向于減少附接的peg的數(shù)目，然而高溫、中性至高ph(例如，ph≥7)和更長的反應(yīng)時間傾向于增加附接的peg數(shù)目。本領(lǐng)域中已知的各種方法可用于終止反應(yīng)。在一些實施方案中，通過使反應(yīng)混合物酸化和在例如-20℃下冷凍來終止反應(yīng)。在例如美國專利第5,252,714、5,643,575、5,919,455、5,932,462和5,985,263號中論述了各種分子的peg化。在例如美國專利第7,052,686號中描述了peg-il-10。涵蓋用于本文中的特定反應(yīng)條件示于實驗部分。本公開還涵蓋peg模擬物的用途。已開發(fā)了保留peg的屬性(例如，延長的血清半衰期)同時賦予幾個另外的有利性質(zhì)的重組peg模擬物。例如，可重組地產(chǎn)生已融合于目標肽或蛋白質(zhì)藥物(例如，amunix的xten技術(shù)；mountainview,ca)的能夠形成與peg相似的延長的構(gòu)象的簡單多肽鏈(包含，例如，ala、glu、gly、pro、ser和thr)。這排除了在制造過程中對另外的綴合步驟的需要。此外，已建立的分子生物學(xué)技術(shù)使得能夠控制多肽鏈的側(cè)鏈組成，從而允許使免疫原性和制造性能最優(yōu)化。糖基化：出于本公開的目的，“糖基化”意在廣泛地指將聚糖附接于蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或其它有機分子的酶促過程。結(jié)合本公開的術(shù)語“糖基化”的使用通常旨在指添加或消除一個或多個糖部分(通過除去潛在的糖基化位點或通過利用化學(xué)和/或酶促方法刪除糖基化)，和/或添加可存在于或可不存在于天然序列中的一個或多個糖基化位點。另外，短語包括天然蛋白質(zhì)的糖基化的定性變化，包括存在的各種糖部分的性質(zhì)和比例的變化。糖基化可顯著影響多肽諸如il-10的物理性質(zhì)(例如，溶解度)并且在蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、分泌和亞細胞定位中也可以是重要的。糖基化多肽還可展現(xiàn)增強的穩(wěn)定性或可改善一個或多個藥代動力學(xué)性質(zhì)，諸如半衰期。另外，溶解度的改善可以例如使得能夠產(chǎn)生比包含非糖基化的多肽的制劑更適合藥物施用的制劑。適當(dāng)?shù)奶腔梢允巧锘钚运匦璧?。事實上，來自真核生物的一些基因，?dāng)在缺乏用于糖基化蛋白的細胞過程的細菌(例如大腸桿菌)中表達時，產(chǎn)生因它們?nèi)狈μ腔鴰缀鯚o活性或無活性的回收的蛋白質(zhì)。糖基化位點的添加可通過改變氨基酸序列來實現(xiàn)。對多肽的改變可以例如通過添加一個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基(對于o-連接的糖基化位點)或天冬酰胺殘基(對于n-連接的糖基化位點)或被所述一個或多個氨基酸殘基取代來產(chǎn)生。每一個類型中發(fā)現(xiàn)的n-連接或o-連接的寡糖和糖殘基的結(jié)構(gòu)可以是不同的。通常在兩者中發(fā)現(xiàn)的一種類型的糖是n-乙酰基神經(jīng)氨酸(在下文中稱為唾液酸)。唾液酸通常是n-連接的和o-連接的寡糖的端殘基，并且因其負電荷，可賦予糖蛋白酸性性質(zhì)。本公開的特定實施方案包括n-糖基化變體的產(chǎn)生和用途。本公開的多肽序列可任選地通過核酸水平上的改變，特別地通過在預(yù)先選定的堿基上使編碼多肽的核酸突變(以便產(chǎn)生將翻譯成所需氨基酸的密碼子)來改變。增加多肽上的糖部分的數(shù)目的另一種方法是通過將糖苷與多肽化學(xué)或酶促偶聯(lián)。糖類的除去可通過化學(xué)或酶促方式，或通過取代編碼被糖基化的氨基酸殘基的密碼子來實現(xiàn)?；瘜W(xué)去糖基化技術(shù)是已知的，并且多肽上的糖部分的酶促裂解可通過使用多種內(nèi)切或外切糖苷酶來實現(xiàn)。二氫葉酸還原酶(dhfr)缺陷型中國倉鼠卵巢(cho)細胞是用于產(chǎn)生重組糖蛋白的常用宿主細胞。這些細胞不表達酶β-半乳糖苷α-2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶，從而不將呈α-2,6鍵聯(lián)形式的唾液酸添加至在這些細胞中產(chǎn)生的糖蛋白的n-連接的寡糖。聚唾液酸化：本公開還涵蓋聚唾液酸化的用途，多肽至天然存在的可生物降解的α-(2→8)連接的聚唾液酸(“psa”)的綴合，以改善多肽的穩(wěn)定性和體內(nèi)藥代動力學(xué)。psa是可生物降解的，無毒的高度親水的天然聚合物，鑒于其在血液中的高表觀分子量，這延長其血清半衰期。另外，許多肽和蛋白質(zhì)治療劑的聚唾液酸化已導(dǎo)致顯著減少的蛋白水解，體內(nèi)活性的保留以及免疫原性和抗原性的減弱(參見，例如，g.gregoriadis等，int.j.pharmaceutics300(1-2):125-30)。與利用其它綴合物(例如，peg)的修飾一樣，用于位點特異性聚唾液酸化的各種技術(shù)是可獲得的(參見，例如，t.lindhout等，(2011)pnas108(18)7397-7402)。白蛋白融合：用于綴合的另外的適當(dāng)?shù)慕M分和分子包括白蛋白諸如人血清白蛋白(hsa)、食蟹猴血清白蛋白和牛血清白蛋白(bsa)。成熟hsa(具有～20天的血清半衰期的585個氨基酸的多肽(～67kda))主要負責(zé)膠體滲透血壓、血液ph以及許多內(nèi)源和外源配體的運輸和分布的維持。該蛋白具有3個結(jié)構(gòu)上的同源結(jié)構(gòu)域(結(jié)構(gòu)域i、ii和iii)，幾乎完全以α-螺旋構(gòu)象存在，并且借助17個二硫橋高度穩(wěn)定。白蛋白的3個主要藥物結(jié)合區(qū)位于子域內(nèi)的3個結(jié)構(gòu)域ib、iia和iiia的每一個上。白蛋白合成在肝中發(fā)生，肝產(chǎn)生短暫的初級產(chǎn)物前清蛋白原。因此，全長hsa具有18個氨基酸的信號肽(mkwvtfisllflfssays；seqidno://)，后接6個氨基酸的前結(jié)構(gòu)域(rgvfrr；seqidno://)；這24個氨基酸殘基的肽可被稱為前原結(jié)構(gòu)域?？墒褂闷鋬?nèi)源信號肽作為前原結(jié)構(gòu)域來表達和分泌hsa?；蛘撸墒褂萌诤嫌诔墒鞓?gòu)建體的igk信號肽來表達和分泌hsa。前清蛋白原在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中在其氨基端被迅速共翻譯地裂解，以產(chǎn)生穩(wěn)定的609個氨基酸的前體多肽，前清蛋白。前清蛋白隨后通過高爾基體，在高爾基體中其通過弗林蛋白酶依賴性的氨基端裂解被轉(zhuǎn)化成585個氨基酸的成熟白蛋白。白蛋白的一級氨基酸序列、結(jié)構(gòu)和功能在物種間是高度保守的，白蛋白合成和分泌的過程在物種間同樣是高度保守。與hsa相比較的白蛋白血清蛋白存在于例如食蟹猴、牛、狗、兔和大鼠中。在非人物種中，牛血清白蛋白(bsa)與hsa結(jié)構(gòu)最相似(參見，例如，kosa等，2007年11月jpharmsci.96(11):3117-24)。本公開涵蓋來自非人物種的白蛋白，包括，但不限于上文中所示的那些白蛋白在例如藥物開發(fā)過程的用途。根據(jù)本公開，可將白蛋白在羧基端、氨基端、羧基端和氨基端以及在內(nèi)部綴合于藥物分子(例如，本文所述的多肽)(參見，例如，usp5,876,969和usp7,056,701)。在由本公開涵蓋的hsa-藥物分子綴合物中，可使用白蛋白的各種形式，諸如白蛋白分泌前序列及其變體、其片段和變體以及hsa變體。此類形式通常具有一個或多個所需的白蛋白活性。在另外的實施方案中，本公開包括包含直接或間接地與白蛋白、白蛋白片段和白蛋白變體等融合的多肽藥物分子的融合蛋白，其中融合蛋白具有比未融合的藥物分子更高的血漿穩(wěn)定性和/或融合蛋白保留未融合的藥物分子的治療活性。在一些實施方案中，間接融合通過接頭，諸如肽接頭或其經(jīng)修飾的形式來實現(xiàn)。細胞內(nèi)裂解可通過例如弗林蛋白酶或胱天蛋白酶來酶促進行。細胞表達低水平的這些內(nèi)源酶，內(nèi)源酶能夠分子內(nèi)裂解融合分子的部分；因此，一些多肽從細胞分泌而未綴合于hsa，然而一些多肽以包含hsa的融合分子形式分泌。本公開的實施方案涵蓋各種弗林蛋白酶融合構(gòu)建體的用途。例如，可設(shè)計包含序列rgrr、rkrkkr、rkkr或rrrkkr的構(gòu)建體。本公開還涵蓋籍以將融合分子從細胞分泌，經(jīng)歷純化，隨后裂解的細胞外裂解(即，離體裂解)。應(yīng)理解，切除可將完整的hsa-接頭復(fù)合物或不太完整的hsa-接頭復(fù)合物與成熟il-10分離。正如上文所暗示，白蛋白與本公開的一種或多種多肽的融合可以例如通過基因操作(以便將編碼hsa或其片段的核酸聯(lián)接于編碼一個或多個多肽序列的核酸)來實現(xiàn)。隨后，用融合的核苷酸序列以例如適當(dāng)?shù)馁|(zhì)粒的形式轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)乃拗?，以表達融合多肽?？稍隗w外從例如原核或真核細胞，或在體內(nèi)從例如轉(zhuǎn)基因生物體實現(xiàn)表達。在本公開的一些實施方案中，在哺乳動物細胞系例如cho細胞系中進行融合蛋白的表達。轉(zhuǎn)化在本文中被廣泛地用于指因通過細胞膜的直接吸收、外源遺傳物質(zhì)(外源核酸)的整合和表達而產(chǎn)生的細胞的遺傳改變。轉(zhuǎn)化在細菌的一些種中天然發(fā)生，但其還可通過人工方法在其它細胞中實現(xiàn)。此外，白蛋白本身可被修飾來延長其循環(huán)半衰期。經(jīng)修飾的白蛋白與il-10的融合可通過上述基因操作技術(shù)或通過化學(xué)綴合來實現(xiàn)；所得的融合分子具有超過與未修飾的白蛋白的融合物的半衰期的半衰期(參見wo2011/051489)。替代的白蛋白結(jié)合策略：幾個白蛋白結(jié)合策略已被開發(fā)來作為對直接融合的替代方案，包括通過綴合的脂肪酸鏈(?；?的白蛋白結(jié)合。因為血清白蛋白是脂肪酸的運輸?shù)鞍?，因此這些具有白蛋白結(jié)合活性的天然配體已被用于小蛋白質(zhì)治療劑的半衰期延長。例如，地特胰島素(insulindetermir)(levemir)，一種用于糖尿病的批準產(chǎn)品，包含綴合于經(jīng)遺傳修飾的胰島素的肉豆蔻基鏈，從而產(chǎn)生長效胰島素類似物。本公開還涵蓋包含白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)多肽序列和本文中描述的多肽的一個或多個的序列的融合蛋白。文獻中描述的任何abd多肽序列可以是融合蛋白的組分?？扇芜x地通過接頭諸如本文所述的那些接頭共價鍵合融合蛋白的組分。在本公開的一些實施方案中，融合蛋白包含abd多肽序列作為n端部分以及本文所述的多肽作為c端部分。本公開還涵蓋包含白蛋白結(jié)合多肽的片段的融合蛋白，該片段基本上保留白蛋白結(jié)合；或包含至少兩個白蛋白結(jié)合多肽或它們的片段(作為單體單位)的白蛋白結(jié)合多肽或它們的片段的多聚體。關(guān)于abd及相關(guān)技術(shù)的一般論述，參見wo2012/050923、wo2012/050930、wo2012/004384和wo2009/016043。與其它分子的綴合：用于綴合的另外的適當(dāng)?shù)慕M分和分子包括，例如，甲狀腺球蛋白；破傷風(fēng)類毒素；白喉類毒素；聚氨基酸諸如聚(d-賴氨酸:d-谷氨酸)；輪狀病毒的vp6多肽；流感病毒血凝素、流感病毒核蛋白；匙孔血藍蛋白(klh)；和乙型肝炎病毒核心蛋白和表面抗原；或前述分子的任意組合。因此，本公開涵蓋一種或多種另外的組分或分子在多肽序列諸如另一種多肽(例如，具有與主題多肽異源的氨基酸序列的多肽)或載體分子的n和/或c端上的綴合。因此，可將示例性多肽序列提供為與另一種組分或分子的綴合物。綴合物修飾可導(dǎo)致保留活性，具有來源于又一個分子的另外的或互補的功能或活性的多肽序列。例如，可將多肽序列綴合于分子，例如以增加溶解度、貯藏、體內(nèi)或貨架半衰期或穩(wěn)定性、免疫原性的減弱、延緩或受控的體內(nèi)釋放等。其它功能或活性包括相對于未綴合的多肽序列減弱毒性的綴合物、比未綴合的多肽序列更高效地靶向一種類型的細胞或器官的綴合物，或進一步抵消與如本文中所示的疾病、病癥或病狀(例如，癌癥)相關(guān)的病因或作用的藥物。還可將il-10多肽綴合于大的緩慢代謝的大分子，諸如蛋白質(zhì)；多糖諸如瓊脂糖凝膠、瓊脂糖、纖維素或纖維素珠；聚合氨基酸諸如聚谷氨酸，或多聚賴氨酸；氨基酸共聚物；滅活的病毒顆粒；滅活的細菌毒素諸如來自白喉、破傷風(fēng)、霍亂的類毒素或白細胞毒素分子；滅活的細菌；和樹突細胞。如果需要，此類綴合形式可用于產(chǎn)生針對本公開的多肽的抗體。用于綴合的另外的候選組分和分子包括適合用于分離或純化的那些組分和分子。特定非限定性實例包括結(jié)合分子，諸如生物素(生物素-親和素蛋白特異性結(jié)合對)、抗體、受體、配體、外源凝集素或包含固體載體的分子，包括，例如，塑料或聚苯乙烯珠粒、平板或珠粒、磁珠、測試條和膜。純化方法諸如陽離子交換色譜可用于通過電荷差異分離綴合物，該方法有效地將綴合物分離成它們的各種分子量。例如，可加載陽離子交換柱，隨后用可～20mm醋酸鈉ph～4洗滌，隨后用在ph約3至5.5，例如在ph～4.5緩沖的線性(0m至0.5m)nacl梯度洗脫。通過陽離子交換色譜獲得的級分的含量可使用常規(guī)方法(例如，質(zhì)譜、sds-page或用于根據(jù)分子量分離分子實體的其它已知方法)通過分子量來鑒定。fc-融合分子：在某些實施方案中，可將本公開的多肽序列的氨基或羧基端與免疫球蛋白fc區(qū)(例如，人fc)融合以形成融合綴合物(或融合分子)。已顯示fc融合綴合物增加生物藥劑的全身性半衰期，因此生物藥劑產(chǎn)品可以需要較低頻率的施用。fc在沿血管排列的內(nèi)皮細胞中結(jié)合新生fc受體(fcrn)，并且在結(jié)合后，fc融合分子被保護而免受降解，并被再釋放至循環(huán)中，從而使分子在循環(huán)中保持更長時間。該fc結(jié)合據(jù)信是內(nèi)源igg籍以保持其長血漿半衰期的機制。最近，fc-融合技術(shù)將單拷貝的生物藥劑與抗體的fc區(qū)連接，以相較于傳統(tǒng)fc-融合綴合物使生物藥劑的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)性質(zhì)最優(yōu)化。適合與本文中公開的多肽一起使用的其它fc相關(guān)技術(shù)的實例描述于wo2013/113008中。其它修飾：本公開涵蓋對il-10使用目前已知的或?qū)黹_發(fā)的其它修飾，以改善一個或多個性質(zhì)。用于延長本公開的多肽的循環(huán)半衰期、增強其穩(wěn)定性、減小其清除率或改變其免疫原性或變應(yīng)原性的一個這樣的方法包括通過羥乙基淀粉化修飾多肽序列，該修飾使用連接于其它分子的羥乙基淀粉衍生物以修飾多肽序列的特征。羥乙基淀粉化的各個方面描述于例如美國專利申請第2007/0134197和2006/0258607號。本公開還涵蓋包含sumo(作為融合標簽)(lifesensors,inc.；malvern,pa)的融合分子。本文所述的多肽與sumo的融合可表現(xiàn)出幾個有益效應(yīng)，包括表達的增加、溶解度的改善和/或純化法的開發(fā)的輔助作用。sumo蛋白酶識別sumo的三級結(jié)構(gòu)，并在sumo的c端裂解融合蛋白，從而釋放本文所述的具有所需n端氨基酸的多肽。接頭：已在上文中描述了接頭和它們的用途。用于修飾本公開的多肽序列的任何前述組分和分子可任選地通過接頭綴合。適當(dāng)?shù)慕宇^包括“柔性接頭”，其通常具有足夠的長度來允許經(jīng)修飾的多肽序列與連接的組分和分子之間存在一定的活動。接頭分子的長度通常為約6-50個原子。接頭分子還可以是例如芳基乙炔、含有2-10個單體單位的乙二醇寡聚物、二胺、二酸、氨基酸或其組合。適當(dāng)?shù)慕宇^可被容易地選擇，并且可具有任何適當(dāng)?shù)拈L度，諸如1個氨基酸(例如，gly)、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-20、20-30、30-50或超過50個氨基酸。示例性柔性接頭包括甘氨酸聚合物(g)n、甘氨酸-絲氨酸聚合物(例如，(gs)n、gsggsn、gggsn、(gmso)n、(gmsogm)n、(gmsogmsogm)n、(gsggsm)n、(gsgsmg)n和(gggsm)n及其組合，其中m以及以及o各自獨立地選自至少為1的整數(shù))、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-絲氨酸聚合物以及其它柔性接頭。甘氨酸和甘氨酸-絲氨酸聚合物相對地是無結(jié)構(gòu)的，從而可用作組分之間的中性系鏈。示例性柔性接頭包括，但不限于ggsg、ggsgg、gsgsg、gsggg、gggsg和gsssg。治療性和預(yù)防性用途本公開涵蓋本文所述的il-10多肽(例如，peg-il-10)在治療或預(yù)防廣泛的疾病、病癥或病狀和/或其癥狀中的用途。事實上，本公開的教導(dǎo)意欲用于對于其獲得或維持上述il-10平均血清谷濃度參數(shù)可以是有益的任何疾病、病癥或病狀。雖然在下文中詳細地描述了特定用途，但應(yīng)理解，本公開不受這樣的限制。此外，雖然在下文中顯示了特定疾病、病癥和病狀的一般分類，但一些疾病、病癥和病狀可以是不止一個分類(例如，癌癥相關(guān)病癥和纖維化相關(guān)病癥)的成員，并且其它疾病可以不是任何公開的分類的成員。纖維化病癥和癌癥。根據(jù)本公開，可將il-10(例如，peg-il-10)用于治療或預(yù)防增殖性病狀或病癥，包括癌癥(例如，子宮、宮頸、乳腺、前列腺、睪丸、胃腸道(例如，食道、口咽、胃、小腸或大腸、結(jié)腸或直腸的癌癥)、腎、腎細胞、膀胱、骨、骨髓、皮膚、頭或頸、皮膚、肝臟、膽囊、心臟、肺、胰腺、唾液腺、腎上腺、甲狀腺、腦(例如，神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、神經(jīng)節(jié)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)(pns)的癌癥，以及造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)(例如，脾或胸腺)的癌癥)。本公開還提供了治療或預(yù)防其它癌癥相關(guān)疾病、病癥或病狀的方法，所述疾病包括，例如，免疫原性腫瘤、非免疫原性腫瘤、休眠腫瘤、病毒誘導(dǎo)的癌癥(例如，上皮細胞癌、內(nèi)皮細胞癌、鱗狀細胞癌和乳頭瘤病毒)、腺癌、淋巴瘤、癌、黑色素瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤、畸胎瘤、化學(xué)誘導(dǎo)的癌癥、轉(zhuǎn)移和血管生成。本公開涵蓋例如，通過調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)性t細胞和/或cd8+t細胞的活性來降低對腫瘤細胞或癌細胞抗原的耐受性(參見，例如，ramirez-montagut，等(2003)oncogene22:3180-3187；和sawaya，等(2003)newengl.j.med.349:1501-1509)。在特定實施方案中，腫瘤或癌癥是結(jié)腸癌、卵巢癌、乳腺癌、黑色素瘤、肺癌、膠質(zhì)母細胞瘤或白血病。術(shù)語癌癥相關(guān)的疾病、病癥和病狀的使用旨在廣義地指與癌癥直接或間接相關(guān)的病狀，并包括例如血管生成和癌前病狀諸如發(fā)育不良。在一些實施方案中，本公開提供了利用il-10多肽(例如，peg-il-10)和至少一種另外的治療劑或診斷劑(其實例示于本文中的其它地方)治療增殖性病狀、癌癥、腫瘤或癌變前病狀的方法。本公開還提供了治療或預(yù)防纖維化疾病、病癥和病狀的方法。如本文中所用，短語“纖維化疾病、病癥和病狀”和類似術(shù)語(例如，“纖維化病癥”)和短語，將被廣泛解釋，以便其包括可導(dǎo)致纖維化組織或瘢痕組織的形成(例如，一個或多個組織中的纖維化)的任何病狀。例如，可產(chǎn)生瘢痕組織的損傷(例如，創(chuàng)傷)包括對皮膚、眼、肺、腎、肝、中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的創(chuàng)傷。短語還包括因中風(fēng)而導(dǎo)致的瘢痕組織形成和例如作為損傷或手術(shù)的結(jié)果的組織粘連。如本文中所用，術(shù)語“纖維化”是指作為修復(fù)或反應(yīng)過程而非作為器官或組織的正常成分的纖維組織的形成。纖維化的特征在于任何特定組織中的成纖維細胞的積累和超過正常沉積的膠原沉積。纖維化病癥包括，但不限于，從傷口愈合產(chǎn)生的纖維化、全身性和局部硬皮病、動脈粥樣硬化、再狹窄、肺的炎癥和纖維變性、特發(fā)性肺纖維化、間質(zhì)性肺病、肝硬化、因慢性乙型或丙型肝炎病毒感染、腎病(例如，腎小球腎炎)而導(dǎo)致的纖維化、因瘢痕組織而導(dǎo)致的心臟疾病、瘢痕疙瘩和肥大性疤痕和眼病諸如黃斑變性以及視網(wǎng)膜和玻璃體視網(wǎng)膜病變。其它纖維化疾病包括化療藥物引起的纖維化、輻射誘發(fā)的纖維化以及損傷和燒傷。纖維化病癥通常是肝相關(guān)的，且在此類病癥與肝細胞內(nèi)的肝臟膽固醇和甘油三酯的不恰當(dāng)積累之間頻繁地存在聯(lián)系。這種積累似乎造成導(dǎo)致肝纖維化和肝硬化的促炎性反應(yīng)。具有纖維化成分的肝病癥包括非酒精性脂肪肝病(nafld)和非酒精性脂肪性肝炎(nash)。心血管疾病。本公開還涵蓋本文所述的il-10多肽(例如，peg-il-10)用于治療和/或預(yù)防某些心血管相關(guān)疾病和或相關(guān)的代謝相關(guān)疾病、病癥和病狀以及與其相關(guān)的病癥的用途。如本文中所用，術(shù)語“心血管疾病”、“心臟病”等是指影響心血管系統(tǒng)的任何疾病，主要地心臟病、腦和腎的血管疾病和外周動脈病。心血管疾病是包括冠心病(即，缺血性心臟病或冠狀動脈疾病)、動脈粥樣硬化、心肌病、高血壓、高血壓性心臟疾病、肺心病、心臟節(jié)律紊亂、心內(nèi)膜炎，腦血管疾病和外周動脈疾病的一系列疾病。心血管疾病是世界上死亡的主要原因，雖然其通常影響老年人，但心血管疾病的前因，尤其是動脈粥樣硬化，始于生命早期。本公開的特定實施方案涉及il-10多肽用于治療和/或預(yù)防動脈粥樣硬化(其中作為脂肪物質(zhì)諸如膽固醇和甘油三酯的積累的結(jié)果，動脈壁變厚以形成斑塊的一種慢性病狀)的用途。動脈粥樣硬化通常包括動脈壁中的慢性炎性反應(yīng)，該炎性反應(yīng)主要由巨噬細胞的積累引起和由低密度脂蛋白(ldl)促進(未能通過功能性高密度脂蛋白從巨噬細胞充分除去脂肪和膽固醇)。慢性擴大的動脈粥樣硬化病變可引起管腔的完全封閉，這可僅當(dāng)管腔狹窄如此嚴重以至于對下游組織的血液供應(yīng)不足，從而導(dǎo)致局部缺血時表現(xiàn)出來。il-10多肽在膽固醇相關(guān)病癥的治療和/或預(yù)防中可以是特別有利的，該多肽可與例如心血管疾病(例如動脈粥樣硬化)、腦血管疾病(例如，中風(fēng))和外周血管疾病相關(guān)聯(lián)。例如，但不限于，il-10多肽可用于降低受試者的血液膽固醇水平。在確定受試者是否具有高膽固醇血癥中，正常與異常膽固醇水平之間不存在明確界限，并且需要作出與其它健康狀況和風(fēng)險因子相關(guān)的值的解釋。雖然如此，但在美國通常使用下列指導(dǎo)方針：總膽固醇<200mg/dl是期望的，200-239mg/dl是臨界高的，且≥240mg/dl是高的。較高的總膽固醇水平增加患心血管疾病的風(fēng)險，并且ldl或非-hdl膽固醇的水平都預(yù)示將來的冠心病。當(dāng)評估高膽固醇血癥時，通常有用地測量所有脂蛋白亞級分(vldl、idl、ldl和hdl)。具體治療目標是減少ldl同時維持或增加hdl。血栓形成和血栓形成病狀。血栓形成，導(dǎo)致血液通過循環(huán)系統(tǒng)的流動的阻塞的血栓(血塊)在血管內(nèi)的形成，可因下列方面(菲爾紹三要素(virchow'striad))的一個或多個方面的異常造成：高凝性或增加的血液凝固、血管內(nèi)皮細胞損傷或擾亂的血流(淤滯、湍流)。血栓形成通常被分類為靜脈或動脈血栓形成，其每一種可呈現(xiàn)幾個亞型。靜脈血栓形成包括深靜脈血栓形成(dvt)、門靜脈血栓形成、腎靜脈血栓形成、頸內(nèi)靜脈血栓形成、布加綜合征(budd-chiarisyndrome)，佩吉特施羅特疾病(paget-schroetterdisease)和腦靜脈竇血栓形成。動脈血栓形成包括中風(fēng)和心肌梗死。本公開涵蓋其它疾病、病癥和病狀，包括心房血栓形成和真性紅細胞增多癥(也稱為紅斑、原發(fā)性紅細胞增多癥和真性紅細胞增多癥)，其中骨髓產(chǎn)生太多rbc、wbc和/或血小板的骨髓增殖性血液病癥。免疫病癥和炎性病狀。如本文中所用，術(shù)語諸如“免疫疾病”、“免疫病狀”、“免疫病癥”、“炎性疾病”、“炎性病狀”、“炎性病癥”等意在廣義地包括任何免疫或炎性相關(guān)病狀(例如，病理性炎癥和自身免疫性疾病)。此類病狀通常不可避免地與其它疾病，病癥和病狀交織在一起。例如，“免疫病狀”可指增殖性病狀，諸如癌癥、腫瘤和血管生成，包括感染(急性和慢性)、腫瘤和抵抗被免疫系統(tǒng)根除的癌癥。可以例如由炎性細胞因子引起的免疫和炎性相關(guān)疾病、病癥和病狀的非限制性列表包括關(guān)節(jié)炎、腎功能衰竭、狼瘡、哮喘、銀屑病、結(jié)腸炎、胰腺炎、過敏、纖維化、手術(shù)并發(fā)癥(例如，其中炎性細胞因子阻止愈合)、貧血和纖維肌痛?？膳c慢性炎癥相關(guān)的其它疾病和病癥包括阿爾茨海默病、充血性心臟衰竭、中風(fēng)、主動脈瓣狹窄、動脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松癥、帕金森氏病(parkinson'sdisease)、感染、炎性腸病(例如，克羅恩病(crohn'sdisease)和潰瘍性結(jié)腸炎)，過敏性接觸性皮炎和其它濕疹、系統(tǒng)性硬化、移植和多發(fā)性硬化。il-10(例如，peg-il-10)對于其可以是特別有效(歸因于例如目前的療法的限制)的上述疾病、病癥和病狀的一些在下文中進行了更詳細描述。本公開的il-10多肽在治療和預(yù)防炎性腸病(ibd)中可以是特別有效的。ibd包括克羅恩病(cd)和潰瘍性結(jié)腸炎(uc)，這兩者都是可影響胃腸道的任何部分，并與許多不良反應(yīng)相關(guān)聯(lián)的慢性特發(fā)性疾病，并且具有長期uc的患者處于增加的發(fā)展結(jié)腸癌的風(fēng)險中。當(dāng)前的ibd治療旨在控制炎性癥狀，雖然某些藥劑(例如，皮質(zhì)類固醇、氨基水楊酸鹽和標準免疫抑制劑(例如，環(huán)孢菌素、硫唑嘌呤和甲氨蝶呤))已獲得了有限的成功，但長期治療可能引起肝損害(例如，纖維化或肝硬化)和骨髓抑制，而且患者常常變得不順從此類治療。銀屑病(一系列常見的免疫介導(dǎo)的慢性皮膚病)在美國影響超過450萬人，其中150萬人被認為具有該疾病的中度至嚴重形式。此外，超過10％的銀屑病患者發(fā)展銀屑病關(guān)節(jié)炎，該疾病損害骨和關(guān)節(jié)周圍的結(jié)締組織。銀屑病的潛在生理學(xué)的改善的理解已導(dǎo)致藥劑的引入，所述藥劑例如靶向負責(zé)該疾病的炎性性質(zhì)的t淋巴細胞和細胞因子的活性。此類藥劑包括tnf-α抑制劑(也用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(ra)的治療中)，包括enbrel(依那西普)、remicade(英夫利昔單抗)和humira(阿達木單抗))，和t-細胞抑制劑諸如amevive(阿法賽特(alefacept))和raptiva(依法利珠單抗)。雖然這些藥劑中的幾種在某些患者人群中在一定程度上是有效的，但未顯示有效地治療所有患者。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(ra)，其特征通常在于關(guān)節(jié)的膜襯里(滑膜)的慢性炎癥，影響約1％的美國人口，或美國的210萬人口。對細胞因子包括tnf-α和il-1在炎性過程中的作用的進一步認識已使得能夠開發(fā)和引入一類新的改變病情的抗風(fēng)濕藥(dmard)。藥劑(其中一些與ra的治療方式重疊)包括enbrel(依那西普)、remicade(英夫利昔單抗)、humira(阿達木單抗)和kineret(阿那白滯素)。盡管這些藥劑中的一些緩解癥狀，抑制結(jié)構(gòu)損傷的進展，和改善特定患者群的身體功能，仍然需要具有改善的功效、互補作用機制和更少/較少嚴重不利作用的替代藥劑。患有多發(fā)性硬化(ms)(在腦和脊髓中包含多個區(qū)域的炎癥和髓鞘瘢痕的嚴重衰弱性自身免疫性疾病)的受試者可特別地借助本文所述的il-10多肽來幫助，因為目前的治療僅緩解癥狀或延遲失能的進展。類似地，il-10多肽對于患有神經(jīng)變性病癥的受試者是特別有利的，神經(jīng)變性病癥是諸如阿爾茨海默病(ad)、嚴重地損害了患者的思想、記憶和語言處理的大腦病癥和帕金森氏病(pd)(一種特征在于例如，異常運動、僵硬和震顫的cns的進行性病癥)。這些病癥是進行性的和使人虛弱的，并且沒有治療藥物可用。病毒性疾病。人們?nèi)找鎸l-10在病毒性疾病中的作用感興趣。已假定il-10，取決其受體結(jié)合活性，產(chǎn)生刺激和抑制作用。例如，已考慮抑制il-10功能以增強抗病毒免疫和疫苗功效的效果(見wilson,e.,(2011)currtopmicrobiolimmunol.350:39–65)。此外，已對il-10在人免疫缺陷病毒(hiv)功能中的作用進行了研究。除了人免疫缺陷病毒1型(hiv-1)復(fù)制的抑制以外，il-10還可通過效應(yīng)子免疫機制的失活來促進病毒保持(naicker,d.,等，(2009)jinfectdis.200(3):448-452)。另一研究已鑒定了一個亞組的能夠在慢性乙型肝炎病毒(hbv)感染中調(diào)節(jié)t細胞免疫的il-10生成性b細胞。雖然上述的研究表明，il-10抑制可以是有益的，包含cd8+t細胞組分的特定病毒感染可以是通過施用il-10來治療和/或預(yù)防的候選者。這受到il-10通過調(diào)節(jié)性t細胞和/或cd8+t細胞的調(diào)節(jié)在某些癌癥中起的積極作用的支持。本公開涵蓋il-10多肽在治療和/或預(yù)防對于其利用il-10的治療可以是有益的任何病毒性疾病、病癥或病狀中的用途。所涵蓋的病毒性疾病、病癥和病狀的實例包括乙型肝炎、丙型肝炎、hiv、皰疹病毒和巨細胞病毒(cmv)。藥物組合物本公開的il-10多肽可呈適于向受試者施用的組合物的形式。一般地，此類組合物是包含il-10和一種或多種藥學(xué)上可接受的或生理學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑的“藥物組合物”。在某些實施方案中，il-10多肽以治療可接受的量存在。藥物組合物可用于本公開的方法中；因此，例如，可向受試者離體或體內(nèi)施用藥物組合物以實踐本文所述的治療性和預(yù)防性方法以及用途。本公開的藥物組合物可被配制以與期望的施用方法或途徑相容；本文中顯示了示例性施用途徑。此外，可將該藥物組合物與本文所述的其它治療活性劑或化合物組合使用，以治療或預(yù)防如本公開涵蓋的疾病、病癥和病狀。藥物組合物通常包含治療有效量的本公開所涵蓋的il-10多肽和一種或多種藥學(xué)上和生理學(xué)上可接受的配制劑。合適的藥學(xué)上可接受的或生理學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑包括，但不限于，抗氧化劑(例如，抗壞血酸和硫酸氫鈉)、防腐劑(例如，芐醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯)、乳化劑、助懸劑、分散劑、溶劑、填料、增量劑、去垢劑、緩沖劑、媒介物、稀釋劑和/或佐劑。例如，合適的媒介物可以是生理鹽水溶液或檸檬酸鹽緩沖鹽水，可能補充有在用于腸胃外施用的藥物組合物中常見的其它材料。中性緩沖鹽水或與血清白蛋白混合的鹽水是另外的示例性媒介物。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將容易認識可用于本文中所涵蓋的藥物組合物和劑型的多種緩沖劑。典型的緩沖劑包括，但不限于，藥學(xué)上可接受的弱酸、弱堿或其混合物。作為實例，緩沖組分可以是水溶性物質(zhì)，諸如磷酸、酒石酸、乳酸、琥珀酸、檸檬酸、乙酸、抗壞血酸、天冬氨酸、谷氨酸及其鹽。可接受的緩沖劑包括，例如，tris緩沖劑、n-(2-羥乙基)哌嗪-n'-(2-乙磺酸)(hepes)、2-(n-嗎啉代)乙磺酸(mes)、2-(n-嗎啉代)乙磺酸鈉鹽(mes)、3-(n-嗎啉代)丙磺酸(mops)和n-三[羥甲基]甲基-3-氨基丙磺酸(taps)。在藥物組合物已被配制后，可將其作為溶液劑、混懸劑、凝膠、乳劑、固體或脫水或凍干的粉末貯存在無菌小瓶中。可將此類制劑以隨時可用的形式、需要在使用前復(fù)溶的凍干形式、需要在使用前稀釋的液體形式或其它可接受的形式貯存。在一些實施方案中，在一次性使用的容器(例如，一次性使用的小瓶、安瓿、注射器或自動注射器(類似地，例如，))中提供藥物組合物，而在其它實施方案中提供多次使用的容器(例如，多次使用的小瓶)。任何藥物遞送裝置可用于遞送il-10，包括植入物(例如，可植入的泵)和導(dǎo)管系統(tǒng)、緩慢注射泵和設(shè)備，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言所有這些裝置都是公知的。通常被皮下或肌內(nèi)施用的儲庫注射劑也可用于在一段確定的時間釋放本文中公開的多肽。儲庫注射劑通常是固基或油基的，并且通常包含本文中所示的制劑組分中的至少一種組分。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是熟悉儲庫注射劑的可能制劑和使用。藥物組合物可呈無菌注射水性或油性混懸劑形式。可使用那些適當(dāng)?shù)姆稚⒒驖駶檮┮约氨疚闹刑峒暗闹鷳覄┌凑找阎募夹g(shù)配制該混懸劑。無菌可注射制劑還可以是無毒性腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或混懸劑，如作為在1,3-丁二醇中的溶液?？墒褂玫目山邮艿南♂寗?、溶劑和分散介質(zhì)包括水、林格氏溶液(ringer'ssolution)、等滲氯化鈉溶液、聚氧乙稀蓖麻油(cremophoreltm)(basf,parsippany,nj)或磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液體聚乙二醇)及其合適的混合物。另外，無菌不揮發(fā)性油通常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為此，可使用任何溫和的不揮發(fā)性油，包括合成的單甘油酯或二甘油酯。此外，脂肪酸諸如油酸可用于可注射制劑。特定的可注射制劑的延長吸收可通過包含延緩吸收的試劑(例如，單硬脂酸鋁或明膠)來實現(xiàn)。含有活性成分的藥物組合物可呈適合于口服使用的形式，例如作為片劑、膠囊、糖錠、錠劑、水性或油性混懸劑、可分散粉末或粒劑、乳劑、硬或軟膠囊或糖漿劑、溶液劑、微珠或酏劑。意欲用于口服使用的藥物組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的用于藥物組合物的制備的任何方法來制備，并且此類組合物可含有一種或多種試劑，諸如，例如，甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑以提供藥學(xué)上美觀和可口的制劑。片劑、膠囊等含有與適于片劑生產(chǎn)的無毒的藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的活性成分。這些賦形劑可以是，例如，稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化劑和崩解劑，例如，玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如淀粉，明膠或阿拉伯膠，和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。可以通過已知技術(shù)對適合于口服施用的片劑、膠囊等進行不包衣或包衣以在胃腸道中延遲崩解和吸收，從而提供持續(xù)作用。例如，延時物質(zhì)諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯均可被采用。還可通過本領(lǐng)域中已知的技術(shù)對它們進行包衣以形成用于控釋的滲透性治療片劑。另外的試劑包括可生物降解的或生物相容性顆?；蚓酆衔镂镔|(zhì)，諸如聚酯、聚胺酸、水凝膠、聚乙烯吡咯烷酮、聚酐、聚乙醇酸、乙烯-乙酸乙烯酯、甲基纖維素、羧甲基纖維素、硫酸魚精蛋白或丙交酯/乙交酯共聚物、聚丙交酯/乙交酯共聚物或乙烯乙酸乙烯酯共聚物，以控制所施用的組合物的遞送。例如，可通過分別使用羥甲基纖維素或明膠-微膠囊或聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊，將口服劑封裝在通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊中，或封裝在膠體藥物遞送系統(tǒng)中。膠體分散系統(tǒng)包括大分子復(fù)合物、納米膠囊、微球體、微珠和基于脂質(zhì)的系統(tǒng)，包括水包油乳劑、膠束、混合膠束和脂質(zhì)體。用于制備上述制劑的方法對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是顯而易見的。口服使用的制劑還可呈現(xiàn)為硬明膠膠囊，其中將活性成分與惰性固體稀釋劑例如，碳酸鈣、磷酸鈣、高嶺土或微晶纖維素混合，或呈現(xiàn)為軟明膠膠囊，其中將活性成分與水或油介質(zhì)(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。水性混懸劑含有與適于其制造的賦形劑混合的活性物質(zhì)。此類賦形劑可以是助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙烯吡咯烷酮，黃蓍樹膠和阿拉伯樹膠；分散或潤濕劑，例如天然存在的磷脂(例如，卵磷脂)，或烯烴氧化物與脂肪酸(例如，聚氧-乙烯硬脂酸酯)的縮合產(chǎn)物，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇(例如，對于十七亞乙基氧基鯨蠟醇)的縮合產(chǎn)物，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯(例如，聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯)的縮合產(chǎn)物，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯(例如，聚山梨糖醇單油酸酯)的縮合產(chǎn)物。水性混懸劑還可含有一種或多種防腐劑油性混懸劑可通過將活性成分懸浮在植物油例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油中來配制，或礦物油諸如液體石蠟中來配制。油性混懸劑可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？商砑犹鹞秳?諸如上文所示的那些甜味劑)和調(diào)味劑以提供可口的口服制劑。適合于通過添加水來制備水性混懸劑的分散粉末和顆粒提供與分散劑或潤濕劑、助懸劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。本文中舉例說明了適當(dāng)?shù)姆稚┗驖櫇駝┖椭鷳覄?。公開的藥物組合物還可呈水包油乳劑的形式。油相可以是植物油，例如橄欖油或花生油，或礦物油，例如液體石蠟，或這些油類的混合物。合適的乳化劑可以是天然存在的樹膠，例如，阿拉伯樹膠或黃蓍膠；天然存在的磷脂，例如，大豆，卵磷脂和酯或衍生自脂肪酸的偏酯；己糖醇酐，例如，山梨醇單油酸酯；和偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯。制劑還可包括載體以保護組合物免于快速降解或從體內(nèi)消除，諸如控釋制劑，包括植入物、脂質(zhì)體、水凝膠、前藥和微膠囊遞送系統(tǒng)。例如，可使用單獨的或與蠟組合的延時物質(zhì)諸如單硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。本公開涵蓋以栓劑形式用于直腸施用的il-10多肽的施用。栓劑可通過將藥物與合適的非刺激性賦形劑混合來制備，賦形劑在常溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，并因此將在直腸中融化以釋放藥物。此類物質(zhì)包括，但不限于，可可脂和聚乙二醇。本公開涵蓋的il-10多肽呈目前已知的或?qū)黹_發(fā)的任何其它合適的藥物組合物的形式(例如，用于經(jīng)鼻或吸入使用的噴霧劑)。多肽或其片段在制劑中的濃度可廣泛變化(例如，按重量計從小于約0.1％，通常為約2％或至少約2％至高達20％至50％或更多)，并且通常按照例如選定的具體施用模式，主要基于流體體積、粘度和基于主題的因素來選擇。施用途徑本公開涵蓋il-10及其組合物以任何適當(dāng)?shù)姆绞竭M行的施用。適當(dāng)?shù)氖┯猛緩桨c胃外(例如，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮下(例如，注射或植入)，腹膜內(nèi)，腦池內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)，腹膜內(nèi)，腦內(nèi)(實質(zhì)內(nèi))和腦室內(nèi))，口服，鼻，陰道，舌下，眼，直腸，局部(例如，經(jīng)皮)，舌下和吸入。通常皮下或肌內(nèi)施用的儲庫注射劑也可用于在一段確定的時間內(nèi)釋放本文中公開的il-10多肽。本公開的特定實施方案涵蓋腸胃外施用，并且在其它特定實施方案中，腸胃外施用是皮下施用。聯(lián)合治療本公開涵蓋與一種或多種活性治療劑(例如，細胞因子)或其它預(yù)防或治療方式(例如，輻照)組合的il-10(例如，peg-il-10)的用途。在此類聯(lián)合治療中，各種活性劑通常具有不同作用機制。此類聯(lián)合治療可以是特別有利的，因為其允許一種或多種藥劑的劑量減少，從而減少或消除了與一種或多種藥劑相關(guān)的不利影響；此外，此類聯(lián)合治療可對潛在疾病、病癥或病狀具有協(xié)同治療或預(yù)防效果。如本文中所用，“組合”意在包括可被單獨施用的，例如，被分別配制用于單獨施用的(例如，如可在藥盒中提供的)的療法，以及可在單一制劑(即，“共制劑”)中被一起施用的療法。在某些實施方案中，相繼施用或應(yīng)用il-10多肽，例如，其中在一種或多種其它藥劑之前施用一種藥劑。在其它實施方案中，同時施用il-10多肽，例如，其中在相同時間或大致相同時間施用兩種或更多種藥劑；兩種或更多種藥劑可以存在于兩個或更多個單獨的制劑中或被組合成單一制劑(即，共制劑)。無論兩種或更多種藥劑被相繼施用還是被同時施用，出于本公開的目的，它們都被認為是組合施用。可在環(huán)境下以任何適當(dāng)?shù)姆绞綄⒈竟_的il-10多肽與一種或多種其它(活性)劑組合使用。在一個實施方案中，將利用本公開的至少一種活性劑和至少一種il-10多肽的治療維持一段時間。在另一個實施方案中，減少或中斷利用至少一種活性劑的治療(例如，當(dāng)受試者穩(wěn)定時)，同時以恒定給藥方案維持利用本公開的il-10多肽的治療。在進一步的實施方案中，減少或中斷利用至少一種活性劑的治療(例如，當(dāng)受試者穩(wěn)定時)，同時減少利用本公開的il-10多肽的治療(例如，較低劑量、較低頻率的給藥或較短的治療方案)。在另一個實施方案中，減少或中斷利用至少一種活性劑的治療(例如，當(dāng)受試者穩(wěn)定時)中，并增加利用本公開的il-10多肽的治療(例如，更高劑量，更頻繁的給藥或更長的治療方案)。在另一個實施方案中，維持利用至少一種活性劑的治療并且減少或中斷利用本公開的il-10多肽的治療(例如，較低劑量，較低頻率的給藥或較短的治療方案)。在另一個實施方案中，減少或中斷利用至少一種活性劑的治療和利用本公開的il-10多肽的治療(例如，較低劑量，較低頻率的給藥或更短的治療方案)。纖維化病癥和癌癥。本公開提供了利用il-10多肽(例如，peg-il-10)和至少一種另外的治療劑或診斷劑治療和/或預(yù)防增殖性病狀、癌癥、腫瘤或癌變前疾病、病癥或病狀的方法?；瘜W(xué)治療劑的實例包括，但不限于，烷化劑諸如塞替派和環(huán)磷酰胺；烷基磺酸鹽諸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶諸如苯佐替派、卡波醌、美妥替派和烏瑞替派；乙烯亞胺和甲基密胺，包括六甲蜜胺、三亞乙基密胺、三亞乙基磷酰胺、三亞乙基硫代磷酰胺和三甲基密胺；氮芥，諸如丁酸氮芥、萘氮芥、氯代環(huán)磷酰胺、雌莫司汀、異環(huán)磷酰胺、氮芥、氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖、新氮芥、膽甾醇對苯乙酸氮芥、潑尼氮芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，諸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司??；抗生素，諸如阿克法拉霉素、放線菌素、安曲霉素、氮雜絲氨酸、博萊霉素、放線菌素c、加利車霉素、卡柔比星、洋紅霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔紅霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-l-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅霉素、絲裂霉素、霉酚酸、諾拉霉素、橄欖霉素、培洛霉素、紫菜霉素、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑菌素、鏈佐星、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、凈司他丁、佐柔比星；抗代謝物，諸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如安西他濱、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷、5-fu；雄激素，諸如卡普睪酮、屈他雄酮丙酸、環(huán)硫雄醇、美雄烷、睪內(nèi)酯；抗腎上腺類，諸如魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑，諸如亞葉酸；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；百托布(bestrabucil)；比山群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)、得福安(defofamine)；脫碳秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌；艾福敏(elformithine)；依利醋銨；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；硝氨丙吖(nitracrine)；噴司他?。坏鞍钡?；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基酰肼；甲基芐肼；雷佐生；西佐喃；螺環(huán)鍺；細交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶(gacytosine)；阿糖胞苷(ara-c)；環(huán)磷酰胺；塞替派；紫杉烷類、例如紫杉醇和多西紫杉醇；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；鉑和鉑配合物諸如順鉑和卡鉑；長春堿；依托泊苷(vp-16)；異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素c；米托蒽醌；長春新堿；長春瑞濱；諾維本；諾肖林(novantrone)；替尼泊苷；柔紅霉素；氨基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鈉；cpt11；拓撲異構(gòu)酶抑制劑；二氟甲基鳥氨酸(dmfo)；維甲酸；埃斯波霉素(esperamicins)；卡培他濱；和上述任何藥物的藥學(xué)上可接受的鹽，酸或衍生物。化學(xué)治療劑還包括用于調(diào)節(jié)或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素劑，如抗雌激素劑，包括例如，三苯氧胺、雷洛昔芬、芳香化酶抑制性4(5)-咪唑、4-羥基三苯氧胺、曲沃昔芬、雷洛西芬、奧那司酮和托瑞米芬；以及抗雄激素劑，如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；和上述任何一種的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。在某些實施方案中，聯(lián)合治療包括激素或相關(guān)的激素劑的施用?？膳cil-10多肽組合使用的另外的治療方式包括細胞因子或細胞因子拮抗劑諸如il-12、infα或抗-表皮生長因子受體、放射療法、針對另一種腫瘤抗原的單克隆抗體、單克隆抗體與毒素的復(fù)合物、t細胞佐劑、骨髓移植或抗原呈遞細胞(例如，樹突細胞療法)。本文中還提供了疫苗(例如，以可溶性蛋白的形式或以編碼蛋白的核酸的形式)。心血管疾病。本公開提供了利用il-10多肽(例如，peg-il-10)和至少一種另外的治療劑或診斷劑治療和/或預(yù)防某些心血管和/或代謝相關(guān)疾病、病癥和病狀以及與其相關(guān)的病癥的方法。在用于高膽固醇血癥(和從而常見地動脈粥樣硬化)的治療的聯(lián)合治療中有用的治療劑的實例包括抑制酶促合成膽固醇的他汀類(例如，crestor、lescol、lipitor、mevacor、pravacol和zocor)；隔離膽固醇并阻止其吸收的膽汁酸樹脂(例如，colestid、lo-cholest、prevalite、questran和welchol)；阻斷膽固醇吸收的依澤替米貝(zetia)；降低甘油三酯并且可稍微增加hdl的纖維酸(例如，tricor)；適度降低ldl膽固醇和甘油三酯的煙酸(例如，niacor)；和/或上述的組合(例如，vytorin(依澤替米貝與辛伐他汀)?？梢允怯糜谂c本文所述的il-10多肽組合使用的候選者的替代膽固醇治療包括各種補充劑和草藥(例如，大蒜、甘蔗原素(policosanol)和穆庫爾沒藥(guggul))。本公開包括上述任何藥劑的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。免疫病癥和炎性病癥。本公開提供了用于利用il-10多肽(例如，peg-il-10)和至少一種另外的治療劑或診斷劑治療和/或預(yù)防免疫和/或炎性相關(guān)疾病、病癥和病狀以及與其相關(guān)的病癥的方法。用于聯(lián)合治療的治療劑的實例包括，但不限于下列藥劑：非類固醇抗炎藥(nsaid)諸如阿司匹林，布洛芬和其它丙酸衍生物(阿明洛芬、苯惡洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、奧沙普秦、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫惡洛芬(tioxaprofen))、乙酸衍生物(吲哚美辛、阿西美辛、阿氯芬酸、環(huán)氯茚酸、雙氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替、呋洛芬酸、異丁苯乙酸、伊索克酸、歐比那酸(oxpinac)、舒林酸、硫平酸、托美丁、齊多美辛、和佐美酸)、芬那酸衍生物(氟芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、聯(lián)苯羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯)、昔康類(伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和替諾昔康)、水楊酸類(乙酰水楊酸、柳氮磺吡啶)和吡唑啉酮類(阿扎丙宗、貝比派瑞(bezpiperylon)、非普拉宗、莫非布宗、羥布宗、保泰松)。其它組合包括環(huán)氧合酶-2(cox-2)抑制劑。用于組合的其它活性劑包括類固醇諸如潑尼松龍、潑尼松、甲潑尼龍、倍他米松、地塞米松或氫化可的松。此類組合可以是特別有利的，因為當(dāng)與本發(fā)明的il-10多肽組合治療患者時，類固醇的一個或多個副作用可通過逐漸減少所需的類固醇劑量而得以減小或甚至消除。用于聯(lián)合治療例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的活性劑的另外的實例包括細胞因子抑制性抗炎藥(csaid)；針對其它人細胞因子或生長因子例如tnf、lt、il-1β.、il-2、il-6、il-7、il-8、il-15、il-16、il-18、emap-ii、gm-csf、fgf或pdgf的抗體或拮抗劑。活性劑的特定組合可在自身免疫和后續(xù)炎性級聯(lián)中的不同點進行干擾，并且包括tnf拮抗劑如嵌合、人源化或人tnf抗體、remicade、抗tnf抗體片段(例如，cdp870)和可溶性p55或p75tnf受體、其衍生物、p75tnfrigg(enbrel)或p55tnfr1gg(lenercept)、可溶性il-13受體(sil-13)，以及還有tnfα轉(zhuǎn)化酶(tace)抑制劑；類似地，il-1抑制劑(例如，白細胞介素-1轉(zhuǎn)換酶抑制劑)可以是有效的。其它組合包括白細胞介素11，抗p7和p-選擇素糖蛋白配體(psgl)。用于與本文所述的il-10多肽組合的藥劑的其它實例包括干擾素β1a(avonex)；干擾素β1b(betaseron)；克帕松；高壓氧；靜脈內(nèi)注射免疫球蛋白；克拉屈濱(clabribine)；和針對其它人細胞因子或生長因子的抗體或拮抗劑(例如，針對cd40配體和cd80的抗體)。本公開包括任何上述藥劑的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。病毒性疾病。本公開提供用于利用il-10多肽(例如，peg-il-10)與至少一種另外的治療劑或診斷劑(例如，一種或多種其它抗病毒劑和/或一種或多種其它非病毒藥劑)治療和/或預(yù)防病毒性疾病、病癥和病狀以及與其相關(guān)的病癥的方法。此類聯(lián)合治療包括靶向各種病毒生命周期階段并且具有不同作用機制的抗病毒劑，包括，但不限于下列藥劑：病毒脫殼的抑制劑(例如，金剛烷胺和金剛乙胺)；逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(例如，阿昔洛韋、齊多夫定和拉米夫定)；靶向整合酶的藥劑；阻止轉(zhuǎn)錄因子至病毒dna的附著的藥劑；影響翻譯的藥劑(例如，反義分子)(例如，福米韋生)；調(diào)節(jié)翻譯/核酶功能的藥劑；蛋白酶抑制劑；病毒組裝調(diào)節(jié)劑(例如，利福平)；和阻止病毒顆粒釋放的藥劑(例如，扎那米韋和奧司他韋)。某些病毒感染(例如，hiv)的治療和/或預(yù)防通常需要一組(“混合物(cocktail)”)抗病毒劑。設(shè)想與il-10多肽組合使用的其它抗病毒劑包括，但不限于，下列藥劑：阿巴卡韋、阿德福韋、金剛胺、安普那韋、安普利近、阿比朵爾、阿扎那韋、立普妥(atripla)、boceprevirertet、西多福韋、可比韋(combivir)、達蘆那韋、地拉韋啶、去羥肌苷、二十二醇、依度尿苷、依非韋倫、恩曲他濱、恩夫韋地、恩替卡韋、泛昔洛韋、福沙那韋、膦甲酸鈉、膦乙酸鈉(fosfonet)、更昔洛韋、伊巴他濱、異丙肌苷(imunovir)、碘苷、咪喹莫特、茚地那韋、肌苷、各種干擾素(例如、聚乙二醇干擾素α-2a)、洛匹那韋、洛韋胺、馬拉韋羅、嗎啉胍、美替沙腙、奈非那韋、奈韋拉平、蕾莎瓦(nexavir)、噴昔洛韋、帕拉米韋、普來康那利、鬼臼毒素、雷特格韋、利巴韋林、利托那韋、嘧啶、沙奎那韋、司他夫定、特拉匹韋、替諾福韋、替拉那韋、三氟尿苷(trifluridine)、三協(xié)唯(trizivir)、醋胺金剛烷、特魯瓦達、伐昔洛韋、纈更昔洛韋、維克韋羅(vicriviroc)、阿糖腺苷、塔利韋林(viramidine)和扎西他濱。本公開包括上述藥劑的藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。給藥可以以一定量向受試者施用本公開的il-10多肽，施用量取決于例如施用目的(例如，所需的消退的程度)；將對其施用制劑的受試者的年齡、體重、性別和健康及身體狀況；施用途徑；和疾病、病癥、病狀或其癥狀的性質(zhì)。給藥方案可能還要考慮與待施用的藥劑相關(guān)的任何不利作用的存在、性質(zhì)和程度。有效劑量的量和劑量方案可從例如安全性和劑量-遞增試驗、體內(nèi)研究(例如，動物模型)以及本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的其它方法來容易地確定。本公開涵蓋施用il-10以獲得一定血清谷濃度和/或維持一定平均血清谷濃度。對于il-10特異的方法描述于本文中的其它地方和下文的該部分中。一般地，給藥參數(shù)規(guī)定劑量的量少于可對受試者具有不可逆的毒性的量(即，最大耐受劑量，“mtd”)并且不少于對受試者產(chǎn)生可測量的作用所需的量。此類量由例如與adme相關(guān)的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)參數(shù)，通過考慮施用途徑和其它因素來決定。有效劑量(ed)是在一部分服用其的受試者中產(chǎn)生治療反應(yīng)或所需療效的藥劑的劑量或量。藥劑的“半數(shù)有效劑量”或ed50是在50％的向其施用了該藥劑的群體中產(chǎn)生治療反應(yīng)或所需療效的藥劑的劑量或量。雖然ed50通常用作藥劑療效的合理期望的量度，但其不一定是臨床醫(yī)生在考慮所有相關(guān)因素的情況下可能認為是適當(dāng)?shù)膭┝俊Ｒ虼?，在一些情況下，有效量高于計算的ed50，在其它情況下有效量低于計算的ed50，并且在其它情況下有效量與計算的ed50相同。另外，本公開的il-10多肽的有效劑量可以是當(dāng)以一個或多個劑量向受試者施用時，產(chǎn)生相對于健康受試者的所需結(jié)果的量。例如，對于正在經(jīng)歷特定病癥的受試者，有效劑量可以是使該病癥的診斷參數(shù)、量度標準、標志物等改善至少約5％、至少約10％、至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％或超過90％的劑量，其中100％被定義為由正常受試者展現(xiàn)的診斷參數(shù)、量度標準、標志物等。治療本文中描述的疾病、病癥或病狀所必需的peg-il-10的量基于綴合的蛋白的il-10活性，其可通過本領(lǐng)域已知的il-10活性測定來測定。例如，在腫瘤背景中，適當(dāng)?shù)膇l-10活性包括例如cd8+t細胞至腫瘤部位的浸潤、炎性細胞因子諸如ifn-γ、il-4、il-6、il-10和rank-l從這些浸潤細胞的表達，以及生物樣品中升高的ifn-γ的水平。il-10劑的治療有效量可在約0.01至約100μg蛋白質(zhì)/kg體重/日、約0.1至20μg蛋白質(zhì)/kg體重/日、約0.5至10μg蛋白質(zhì)/kg體重/日或約1至4μg蛋白質(zhì)/kg體重/日的范圍內(nèi)。在一些實施方案中，通過連續(xù)輸注施用il-10劑以遞送約50至800μg蛋白質(zhì)/kg體重/日(例如，約1至16μg蛋白質(zhì)/kg體重/日的il-10劑)。輸注速率可根據(jù)例如不利作用和血細胞計數(shù)的評估而變化。對于口服劑的施用，可以以含有1.0至1000毫克的活性成分，具體地1.0、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克的活性成分的片劑、膠囊等形式提供組合物。il-10多肽的具體給藥方案(例如，給藥頻率)描述于本文中的其它地方。在某些實施方案中，將公開的il-10多肽的劑量包含于“單位劑型”中。短語“單位劑型”是指物理離散單位，每一個單位含有足以產(chǎn)生所需療效的預(yù)定量的單獨的或與一種或多種另外的藥劑組合的本公開的il-10多肽。應(yīng)理解，單位劑型的參數(shù)將取決于特定藥劑和待實現(xiàn)的療效。藥盒本公開還涵蓋包含il-10及其藥物組合物的藥盒。藥盒通常呈如下文中所述的裝有各種組分的物理結(jié)構(gòu)的形式，并且可用于例如實踐上述方法(例如，il-10多肽至需要恢復(fù)膽固醇動態(tài)平衡的受試者的施用)。藥盒可包括本文中公開的il-10多肽的一種或多種(在例如無菌容器中提供)，所述多肽可呈適合向受試者施用的藥物組合物的形式。il-10多肽可以以隨時可用的形式或以需要例如在施用之前復(fù)溶或稀釋的形式提供。當(dāng)il-10多肽呈需要由用戶復(fù)溶的形式時，藥盒還可包括與il-10多肽包裝在一起或與其分開包裝的緩沖劑、藥學(xué)上可接受的賦形劑等。當(dāng)涵蓋聯(lián)合治療時，藥盒可以單獨地包含幾種藥劑或可以已將它們組合在藥盒中?？蓪⑺幒械拿恳环N組分封裝在單個容器內(nèi)，并且所有的各種容器可以在單個包裝內(nèi)。本公開的藥盒可被設(shè)計用于正確維持其中裝有的組分所必需的條件(例如，冷藏或冷凍)。藥盒可含有標簽或包裝插頁，包括關(guān)于其中的組分的辨識信息和它們的使用說明書(例如，活性成分的劑量參數(shù)、臨床藥理學(xué)，包括作用機制、藥代動力學(xué)和藥效學(xué)、不利作用、禁忌癥等)。標簽或插頁可包括制造商信息諸如批號和失效期?？蓪撕灮虬b插頁例如整合在裝有組分的物理結(jié)構(gòu)內(nèi)，分別包含在物理結(jié)構(gòu)內(nèi)，或貼在藥盒的組件(例如，安瓿，管或小瓶)上。標簽或插頁可還包括或被整合在計算機可讀介質(zhì)諸如磁盤(例如，硬盤、卡、內(nèi)存盤)、光盤諸如cd-或dvd-rom/ram、dvd、mp3、磁帶或電存儲介質(zhì)諸如ram和rom，或這些介質(zhì)的混雜物諸如磁/光存儲介質(zhì)、flash介質(zhì)或內(nèi)存類型卡中。在一些實施方案中，實際的說明書不存在于藥盒中，但提供用于例如通過互聯(lián)網(wǎng)從遠程來源獲得說明書的工具。實施例提出以下實施例是為了向本領(lǐng)域一般技術(shù)人員提供如何制備和使用本發(fā)明的完整公開和描述，而非意圖限制本發(fā)明人視為其發(fā)明的范圍，也非意圖表示以下實驗是可被進行的全部或僅有的實驗。應(yīng)理解，不一定進行以現(xiàn)在時書寫的示例性描述，相反地可進行該描述以產(chǎn)生本文所述的數(shù)據(jù)等。已經(jīng)做出努力以確保關(guān)于使用的數(shù)字(例如量、溫度等)的準確性，但是應(yīng)該解釋一些實驗錯誤和偏差。除非另外指出，否則份數(shù)是按重量計的份數(shù)，分子量是重均分子量，溫度以攝氏度(℃)表示，并且壓力為大氣壓或接近大氣壓。使用標準縮寫，包括下列縮寫：bp＝堿基對；kb＝千堿基；pl＝皮升；s或sec＝秒；min＝分鐘；h或hr＝小時；aa＝氨基酸；kb＝千堿基；nt＝核苷酸；ng＝納克；μg＝微克；mg＝毫克；g＝克；kg＝千克；dl或dl＝分升；μl或μl＝微升；ml或ml＝毫升；l或l＝升；μm＝微摩爾；mm＝毫摩爾；m＝摩爾；kda＝千道爾頓；i.m.＝肌內(nèi)(地)；i.p.＝腹膜內(nèi)(地)；i.v.或iv＝靜脈內(nèi)(地)；s.c或sc＝皮下(地)；qd＝每日一次；bid＝每日兩次；qw＝每周一次；qm＝每月一次；hplc＝高效液相色譜；bw＝體重；u＝單位；ns＝無統(tǒng)計學(xué)顯著性；pbs＝磷酸鹽緩沖鹽水；pcr＝聚合酶鏈式反應(yīng)；nhs＝n-羥基琥珀酰亞胺；dmem＝達爾伯克氏改良伊格爾培養(yǎng)基(dulbeco'smodificationofeagle'smedium)；gc＝基因組拷貝；edta＝乙二胺四乙酸。材料和方法下面一般材料和方法可用于下文中的實施例：描述了分子生物學(xué)中的標準方法(參見，例如，sambrook和russell(2001)molecularcloning，第3版，coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,n.y.；和ausubel，等(2001)currentprotocolsinmolecularbiology，第1-4卷，johnwiley和sons,inc.newyork,n.y.，其描述了在細菌細胞中進行的克隆和dna誘變(第1卷)，在哺乳動物細胞和酵母中進行的克隆(第2卷)，糖綴合物和蛋白質(zhì)表達(第3卷)以及生物信息學(xué)(第4卷))?？茖W(xué)文獻描述了用于蛋白質(zhì)純化的方法，包括免疫沉淀、色譜、電泳、離心和結(jié)晶、以及化學(xué)分析、化學(xué)修飾、翻譯后修飾、融合蛋白的產(chǎn)生和蛋白質(zhì)的糖基化(參見，例如，coligan，等(2000)currentprotocolsinproteinscience，第1-2卷，johnwiley和sons,inc.,ny)。描述了多克隆和單克隆抗體的產(chǎn)生、純化和片段化(例如，harlow和lane(1999)usingantibodies,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor,ny)；用于表征配體/受體相互作用的標準技術(shù)是可獲得的(參見，例如，coligan等(2001)currentprotocolsinimmunology，第4卷，johnwiley,inc.,ny)；用于流式細胞術(shù)的方法，包括熒光激活細胞分選術(shù)(facs)是可獲得的(參見，例如，shapiro(2003)practicalflowcytometry,johnwiley和sons,hoboken,nj)；以及適合用于修飾核酸(包括核酸引物和探針)、多肽和抗體(以用作例如診斷試劑)的熒光試劑是可獲得的(molecularprobes(2003)catalogue,molecularprobes,inc.,eugene,or.；sigma-aldrich(2003)catalogue,st.louis,mo.)。描述了免疫系統(tǒng)的組織學(xué)的標準方法(參見，例如，louis等(2002)basichistology:textandatlas,mcgraw-hill,newyork,ny)。免疫細胞(cd4+和cd8+t細胞)的耗竭可受到抗體介導(dǎo)的消除的影響。例如，每周注射250μg的cd4-或cd8-特異性抗體，并使用facs和ihc分析驗證細胞的耗竭。用于測定例如抗原性片段、前導(dǎo)序列、蛋白質(zhì)折疊、功能結(jié)構(gòu)域、糖基化位點和序列比對的軟件包和數(shù)據(jù)庫是可獲得的(參見，例如，gcgwisconsin軟件包(accelrys,inc.,sandiego,ca)；和decyphertm(timelogiccorp.,crystalbay,nv)。免疫活性balb/c或b細胞缺乏的balb/c小鼠獲自thejacksonlab.,barharbor,me，并且按照標準方法(參見，例如，martin等(2001)infect.immun.,69(11):7067-73和compton等(2004)comp.med.54(6):681-89)來使用。適合用于本公開涵蓋的實驗工作的其它小鼠品系對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是已知的并通?？色@自thejacksonlab。除非另外指出，否則在本文所述的實驗中使用皮膚的pdv6鱗狀細胞癌(參見，例如，langowski等(2006)nature442:461-465)?？墒褂闷渌[瘤學(xué)相關(guān)模型和細胞系，諸如ep2乳房癌、ct26結(jié)腸癌和4t1乳腺癌模型(參見，例如，langowski等(2006)nature442:461-465)，并且所述模型和細胞系對于領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是已知的。還可使用非腫瘤學(xué)相關(guān)模型和細胞系(例如，炎癥的模型)，并且所述模型和細胞系對于領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是已知的。血清il-10濃度水平和暴露水平可通過本領(lǐng)域中使用的標準方法來測定。例如，可通過將來自小鼠尾剪斷物的全血(～50μl/小鼠)收集至扁平毛細管中，通過離心分離血清與血細胞，并通過標準elisa藥盒和技術(shù)來測定il-10暴露水平。下文中描述了測定il-10血清濃度的另外方法。peg化的il-10的產(chǎn)生本公開涵蓋通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何方法合成peg化的il-10。用于產(chǎn)生單peg-il-10和單/二peg-il-10的混合物的幾個替代合成方案的隨后描述意在僅是說明性的。雖然單peg-il-10和單/二peg-il-10的混合物都具有許多相當(dāng)?shù)男再|(zhì)，但選擇性peg化的單和二-peg-il-10的混合物提高最終peg化的產(chǎn)物的產(chǎn)率(參見，例如，美國專利美國專利第7,052,686號和美國專利公布第2011/0250163號)。除了利用她自已的技能生產(chǎn)和使用適合用于實踐本公開的peg(和其它藥物遞送技術(shù))以外，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還熟悉peg相關(guān)技術(shù)(和其它藥物遞送技術(shù))的許多商業(yè)供應(yīng)商。例如，nofamericacorp(irvine,ca)提供單功能線性peg、雙功能peg、多臂pes、分枝peg、異功能peg、分叉peg和可釋放的peg；并且parchem(newrochelle,ny)是peg產(chǎn)品和其它專業(yè)原材料的全球經(jīng)銷商。示例性peg-il-10合成方案第1號?？蓪l-10在ph7.0,100mmnacl下針對10mm磷酸鈉進行透析。隨后可使用透析緩沖液將透析的il-10稀釋3.2倍至4mg/ml的濃度。在添加接頭sc-peg-12k(delmarscientificlabs；maywood,il)之前，可將1倍體積的ph9.1的100mm四硼酸鈉添加至9倍體積的稀釋的il-10中，以將il-10溶液的ph升至8.6?？蓪c-peg-12k接頭溶解在透析緩沖液中，并可將適當(dāng)體積的接頭溶液(1.8至3.6摩爾的接頭/摩爾的il-10)添加至稀釋的il-10溶液，以起始peg化反應(yīng)?？稍?℃進行反應(yīng)以控制反應(yīng)速率。可在peg化反應(yīng)過程中溫和地攪拌反應(yīng)溶液。當(dāng)單peg-il-10產(chǎn)率(如通過尺寸排阻hplc(se-hplc)測定的)接近40％時，通過添加1m甘氨酸溶液至30mm的終濃度來終止反應(yīng)。使用hcl溶液將反應(yīng)溶液的ph緩慢地調(diào)整至7.0，隨后使用0.2微米過濾器過濾反應(yīng)溶液，并將其于-80℃貯存。示例性peg-il-10合成方案第2號。使用甲氧基-peg-醛(pald-peg)作為接頭(inhaletherapeuticsystemsinc.,huntsville,al；也可從nofamericacorp(irvine,ca)獲得))制備單peg-il-10。pald-peg可具有5kda、12kda或20kda的分子量。將il-10進行透析，并且除反應(yīng)緩沖液的ph為6.3至7.5外，如上所述進行稀釋。將活化的pald-peg接頭以1:1的摩爾比添加至反應(yīng)緩沖液。將含水氰基硼氫化物添加至反應(yīng)混合物中以達到0.5至0.75mm的終濃度。在室溫(18-25℃)下通過溫和攪拌進行反應(yīng)，持續(xù)15-20小時。利用1m甘氨酸淬滅反應(yīng)。利用se-hplc分析產(chǎn)率。通過凝膠過濾層析將單peg-il-10與未反應(yīng)的il-10、peg接頭和二peg-il-10分離，并通過rp-hplc和生物測定(例如，il-10-反應(yīng)性細胞或細胞系的刺激)進行表征。示例性peg-il-10合成方案第3號。將il-10(例如，嚙齒類動物或靈長類動物)針對50mm磷酸鈉，100mm氯化鈉(ph在5-7.4的范圍內(nèi))進行透析。在0.75-30mm氰基硼氫化鈉存在下，將1:1-1:7摩爾比的5kpeg-丙醛與濃度為1-12mg/ml的il-10反應(yīng)?；蛘撸梢砸灶愃频姆绞接眉谆拎づ鹜榛罨磻?yīng)。將反應(yīng)在5-30℃孵育3-24小時。將peg化反應(yīng)的ph調(diào)整至6.3，將7.5mg/ml的hil-10與peg反應(yīng)以使得il-10與peg接頭的比率為1:3.5。氰基硼氫化物的終濃度為～25mm，并將反應(yīng)在15℃進行12-15小時。單和二-pegil-10是最多的反應(yīng)產(chǎn)物，結(jié)束時每一種的濃度為～45-50％?？墒褂冒被嶂T如甘氨酸或賴氨酸或可選地tris緩沖液來淬滅反應(yīng)。可使用多種純化方法，諸如凝膠過濾、陰離子和陽離子交換色譜和尺寸排阻hplc(se-hplc)來分離所需的peg化的il-10分子。示例性peg-il-10合成方案第4號。將il-10針對10mm磷酸鈉ph7.0、100mmnacl進行透析。使用透析緩沖液將經(jīng)透析的il-10稀釋3.2倍至約0.5至12mg/ml的濃度。在添加接頭sc-peg-12k(delmarscientificlaboratories,maywood,ill.)之前，將1倍體積的ph9.1的100mm四硼酸鈉添加至9倍體積的稀釋的il-10中，以使il-10溶液的ph升至8.6。將sc-peg-12k接頭溶解在透析緩沖液中，并將適當(dāng)體積的接頭溶液(1.8至3.6摩爾的接頭/摩爾的il-10)添加至稀釋的il-10溶液，以起始peg化反應(yīng)。在5℃進行反應(yīng)以控制反應(yīng)速率，并且溫和地攪拌反應(yīng)溶液。當(dāng)單peg-il-10產(chǎn)率(如通過尺寸排阻hplc(se-hplc)測定的)接近40％時，通過添加1m甘氨酸溶液至30mm的終濃度來終止反應(yīng)。使用hcl溶液將反應(yīng)溶液的ph緩慢地調(diào)整至7.0，并使用0.2微米過濾器過濾反應(yīng)物，并將其于-80℃貯存。下文中所示的材料，包括表15和其描述在內(nèi)，基本上是從美國專利公布第2011/00911419號(美國專利公布第2011/00911419號的共同發(fā)明人也是本申請的發(fā)明人)摘取的，并且其中的教導(dǎo)及其變化具有廣泛的適用性，并且可用于多個不同的背景和/或在所述背景中被修改。類似地，相關(guān)領(lǐng)域和/或
技術(shù)領(lǐng)域：
中的其它出版物的教導(dǎo)(參見，例如，usp第6,387,364和7,052,684號，和pct公布第wo2006/075138號)以及本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的一般知識一起可形成另外的實驗工作的基礎(chǔ)。腫瘤模型和腫瘤分析任何領(lǐng)域接受的腫瘤模型、測定等可用于評估il-10和peg-il-10對各種腫瘤的作用。下文描述的腫瘤模型和腫瘤分析代表那些可以被利用的模型和分析，并且將它們用于生成和評估表1-15中所示的數(shù)據(jù)。以104、105或106個細胞/腫瘤接種皮下或皮內(nèi)注射同系小鼠的腫瘤細胞?？墒褂胑p2乳房癌、ct26結(jié)腸癌、皮膚的pdv6鱗狀細胞癌和4t1乳腺癌模型(參見，例如，langowski等(2006)nature442:461-465)?？墒褂妹庖呋钚詁alb/c或b細胞缺陷型balb/c小鼠?？上蛎庖呋钚孕∈笫┯胮eg-mil-10，然而peg-hil-10處理可用于b細胞缺陷型小鼠。使腫瘤達到100-250mm3的尺寸，隨后開始處理。在遠離腫瘤植入的部位皮下施用il-10、peg-mil-10、peg-hil-10或緩沖液對照。通常使用電子卡尺每周2次監(jiān)測腫瘤生長。在不同終點收獲腫瘤組織和淋巴器官以測量許多炎性標志物的mrna表達，并進行幾個炎性細胞標記物的免疫組織化學(xué)。將組織在液氮中快速冷凍并于-80℃下貯存。通常使用電子卡尺每周2次監(jiān)測原發(fā)性腫瘤生長?？墒褂霉?寬2x長/2)計算腫瘤體積，其中長度是較長的維度。使腫瘤達到90-250mm3的尺寸，隨后開始處理。il-10和/或peg-il-10的施用上述腫瘤模型和腫瘤分析方法用來生成下文中所示的數(shù)據(jù)。然而，如上文所暗示，這些相同的模型和方法學(xué)可用于其它實驗設(shè)置中。向免疫活性小鼠施用鼠il-10(mil-10)或peg-mil-10，然而將peg-hil-10處理用于b細胞缺陷型小鼠。在遠離腫瘤植入的部位皮下施用鼠il-10、peg-mil-10、peg-hil-10或媒介物對照。用sc-peg-12k接頭制備這些研究中使用的peg-mil-10。通過應(yīng)用利用mc/9(一個表達內(nèi)源mil-10受體(r1和r2)的小鼠肥大細胞系)的短期增殖生物測定來評估m(xù)il-10和peg-mil-10的生物活性。mc/9細胞響應(yīng)于利用mil-4及mil-10的共同刺激而增殖(僅使用mil-4或mil-10，mc/9細胞不增殖)。使用阿爾瑪藍(alamarblue)，通過比色法來測量增殖，阿爾瑪藍是一種基于代謝活性檢測的生長指示劑染料。重組體或peg-mil-10的生物活性通過ec50值，或在劑量-反應(yīng)曲線中觀察到半數(shù)最大刺激時的蛋白質(zhì)的濃度來評估(表1)。表1如表1中指示，基于mc/9生物測定，用于實驗的peg-mil-10的比活性約為mil-10的活性的1/7。還可隔日向ep2乳腺癌荷瘤小鼠施用peg-mil-10。處理在減小腫瘤尺寸和誘導(dǎo)腫瘤排斥中是有效的。表2用peg-mil-10處理在減小pdv6、ct-26和4t1同系免疫活性小鼠腫瘤模型的腫瘤尺寸中也是有效的(參見表3、4和5)。表3表4表5劑量滴定研究在劑量滴定研究中，在對應(yīng)于預(yù)期的峰和谷劑量水平的時間上從每一個組的代表性小鼠收集尾靜脈取血。使用基于多陣列技術(shù)的mesoscalediscovery平臺(電化學(xué)發(fā)光檢測和圖案化陣列的組合)測定收獲的血清的mil-10濃度。將雙尾未配對學(xué)生t檢驗用于比較按照血清mil-10濃度分組的mil-10或peg-mil-10處理的小鼠的平均腫瘤體積與它們的對應(yīng)媒介物對照組的平均腫瘤體積。當(dāng)兩個組具有不等方差時使用welch校正(p<0.05的t檢驗)。具有4t1乳腺癌的小鼠中的peg-mil-10和mil-10的劑量滴定顯示，原發(fā)性腫瘤和肺轉(zhuǎn)移灶的控制是可用mil-10和peg-mil-10二者進行劑量滴定的。如表6中所示，在任何給定的劑量上，peg-mil-10比mil-10更有效。在植入后第17天開始每日兩次的處理，此時平均腫瘤體積為84-90mm3。處理組由每組14只小鼠組成，而對照組每組具有8只小鼠。tris和hepes緩沖液分別是針對mil-10和pegmil-10的對照。表6具有pdv6鱗狀細胞癌的小鼠的peg-mil-10和mil-10的劑量滴定表明，原發(fā)性腫瘤的控制是可用mil-10和peg-mil-10二者進行劑量滴定的，雖然在任何給定的劑量上，peg-mil-10比mil-10更有效(表7)。高劑量的peg-mil-10處理導(dǎo)致接近100％的腫瘤消退和隨后對再攻毒的抗性(表8)。在植入后第23天開始每日2次的處理，此時平均腫瘤體積為107-109mm3并且對于所有mil10處理組和0.01mg/kgpegmil-10處理組持續(xù)至第55天。在第48天終止0.1mg/kgpeg-mil-10處理，此時看到100％的腫瘤消退，然而處理剩余組直至第51天。處理組由每組10只小鼠組成，而每一個媒介物對照含有6只小鼠。tris緩沖液和hepes緩沖液分別為針對mil-10和pegmil-10的媒介物對照。在初始植入后85天和最后一次peg-mil10處理后4周進行重新植入。每組10只小鼠。表7表8肺轉(zhuǎn)移研究在肺切除術(shù)后(表9)通過肉眼檢查或在如currentprotocolsinimmunology(第20.2.4節(jié))johnwiley和sons,inc.,newyork；harlow和lane(1999)中所述在培養(yǎng)后(表10)通過計數(shù)肺轉(zhuǎn)移性集落來定量4t1乳腺癌模型中的肺轉(zhuǎn)移灶。簡言之，將從4t1荷瘤小鼠收獲的肺切碎并用膠原酶/彈性蛋白酶消化，隨后在有限稀釋測定中培養(yǎng)在含有6-硫鳥嘌呤的培養(yǎng)基中。僅4t1細胞具有6-硫鳥嘌呤抗性，并且可通過在10-14天的培養(yǎng)后計數(shù)集落數(shù)來定量。在植入后第17天開始每日兩次的處理，此時平均腫瘤體積為84-90mm3。tris和hepes緩沖液分別為針對mil-10和pegmil-10的對照。肺轉(zhuǎn)移灶被測量為每個肺培養(yǎng)的轉(zhuǎn)移性集落數(shù)。表9表10向具有4t1乳腺癌的小鼠施用peg-mil-10或il-10減少轉(zhuǎn)移的比率，并增加cd8+t細胞浸潤以及免疫刺激性細胞因子的表達，如通過定量rt-pcr測量的(表11和12)。從通過免疫組織化學(xué)針對cd8表面標志物染色的并通過用抗-cd3和抗-tcrαβ抗體染色驗證的幾個腫瘤的代表性切片計數(shù)浸潤cd8+t細胞的數(shù)目。表11peg-mil-10在炎性細胞因子的誘導(dǎo)中比il-10更有效。從均漿的腫瘤樣品提取總rna，并如先前所述(參見，例如，homey,等(2000)j.immunol.164:3465-3470)進行逆轉(zhuǎn)錄。通過熒光生成5'-核酸酶pcr測定(參見，例如，holland，等(1991)proc.natl.acad.sci.88:7276-7280)就細胞因子的表達定量分析互補dna。通過abiprism7700序列檢測系統(tǒng)(appliedbiosystems)在40個循環(huán)中連續(xù)測量特定pcr產(chǎn)物。將值針對泛素蛋白標準化。將對數(shù)轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)經(jīng)歷kruskal-wallis統(tǒng)計分析(中值法)。表達水平(對數(shù)轉(zhuǎn)換的)對應(yīng)于腫瘤樣品中表達的炎性細胞因子的量，以便表達水平(對數(shù)轉(zhuǎn)換的)越高，腫瘤樣品中表達的炎性細胞因子的量越大。表12免疫細胞的耗竭通過抗體介導(dǎo)的消除來耗竭cd4+和cd8+t細胞。出于該目的每周注射250μgcd4-或cd8-特異性抗體。使用facs和ihc分析驗證細胞耗竭。利用cd4抗體來耗竭b細胞缺陷型balb/c小鼠(c.129-igh-6tmlcgn)中的cd4+t細胞抑制peg-hil-10對腫瘤的功能(表13)。表13cd8+t細胞的耗竭完全抑制pegmil-10對同系腫瘤生長的作用(表14)。表14il-10的給藥頻率和血清谷濃度設(shè)計和進行鼠研究，以增進對il-10療法的藥代動力學(xué)參數(shù)的理解，和在小鼠中生成用于使人受試者的重組人il-10(rhil-10)的腫瘤治療方案最優(yōu)化的數(shù)據(jù)。利用pdv6腫瘤細胞接種小鼠，并使腫瘤生長2.5周以達到100mm3。隨后用相同的周劑量(0.7mg/kg/周)處理成組的荷瘤小鼠(n＝10/組)，以a)每周一次一個大劑量(bolus)sc注射，或b)在整個一周中以分份劑量數(shù)次sc注射(包括每周2次(0.35mg/kg)，隔日(～0.25mg/kg，以便總的周劑量＝0.7mg/kg)和每日(0.1mg/kg/日))的方式施用5kda單-二pegmil-10。當(dāng)所有小鼠在一周的過程中接受相同量的藥物時，觀察到相似的總暴露(曲線下面積，auc)。峰暴露在每周一次給藥的小鼠中是最高的，然而最小藥物暴露(谷)在接受較小日劑量的小鼠中是最高的。令人驚訝地，如表15中所指示的，每日給藥的小鼠展現(xiàn)最高抗腫瘤功效，這表明血清谷暴露對于抗腫瘤功能是非常重要的，然而峰暴露對抗腫瘤功能的影響不是決定性的。表15給藥方案腫瘤尺寸(mm3)對照813.9522每日43.196隔日170.186每2周347.315每周425.572在兩個腫瘤模型：c57bl/6小鼠中的pdv6腫瘤和balb/c小鼠中的ct26結(jié)腸癌細胞中進一步探測所需的血清谷濃度。使用標準方法，使小鼠生長至100mm3，隨后通過施用5kda單-二pegmil-10開始處理，進行4周。隨后，測量接受不同處理方案的荷瘤小鼠的il-10的血清谷濃度。隨后使il-10血清谷濃度與所得的腫瘤尺寸相關(guān)聯(lián)。如表16中指示的，具有高于1ng/ml的血清谷il-10的小鼠具有持續(xù)小的腫瘤并且排斥它們的腫瘤。表16為了確認人細胞中的至關(guān)重要的谷濃度，以遞增濃度將hil-10添加至人外周血單核細胞(pbmc)的培養(yǎng)物。不處理pbmc培養(yǎng)物或用脂多糖(lps)刺激培養(yǎng)物。已知il-10抑制lps介導(dǎo)的pbmc活化。將活性測量為趨化因子mcp-1的分泌。lps和il-10都誘導(dǎo)mcp-1的分泌，但抑制彼此的誘導(dǎo)趨化因子的活性。在1ng/ml和以上的濃度下，il-10在lps不存在的情況下增加mcp-1的分泌(圖2a)。相反地，在用lps刺激的pbmc中，以1ng/ml的濃度添加il-10顯著抑制mcp-1的分泌(圖2b)。這確認了il-10的誘導(dǎo)和抑制各自生物過程的生物活性。il-10在人受試者中對細胞因子和膽固醇的作用人受試者中的血清il-10濃度的測定。向人志愿者施用所需量的rhil-10sc或iv，在期望的施用后時間上將全血樣品抽入含肝素抗凝劑的管中。使用標準夾心酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)藥盒測定血清rhil-10或peg-rhil-10濃度。通常地，elisa測定在0.1至10ng/ml的濃度范圍內(nèi)被測定為是選擇性的、線性的并且是可重現(xiàn)的，并且定量界限(loo)為0.1ng/ml。還通過elisa分析血清樣品的結(jié)合hil-10的抗體的存在。另外，使用驗證的生物測定(包含小鼠肥大細胞系mc9)來分析選定的血清樣品；該細胞系響應(yīng)于il-10而增殖。該生物測定用于測定gmp生產(chǎn)的rhuil-10和peg-rhuil-10的生物活性和測定患者血清中的il-10的生物活性。通常地，il-10濃度和活性的elisa和生物測定法測定顯示對應(yīng)的值。人受試者中的tnfα和il-1β濃度的測定。il-10在患有慢性炎性疾病的患者中具有抗炎功能，并且tnfα和il-1β代表在此類疾病中釋放的關(guān)鍵性的炎性細胞因子。測定獲自人受試者的血液樣品中的tnfα和il-1β濃度。通常地，在即將sc或iv施用rhil-10(0小時)時和在給藥后0.5、2、3、4、6、8、12、16、24、48、72和96小時無菌收集3ml的靜脈血。在lps和抗凝劑存在下，將樣品經(jīng)歷全血細胞因子釋放測定，并且利用elisa測定來測量tnfα和il-1β濃度。lps刺激tnfα和il-1β從血細胞的釋放。在于用rhuil-10對個體iv給藥后0.5-12小時收集的樣品中，抑制tnfα和il-1β的釋放。在從用rhuil-10sc給藥的個體收集的樣品中，從0.5小時至24小時抑制tnfα和il-1β的釋放。通過elisa測定這些人受試者中的rhuil-10的血清濃度。tnfα和il-1β的抑制與rhuil-10的血清濃度相關(guān)。rhuil-10的血清濃度在給藥后增加并且保持升高48小時。然而，tnfα和il-1β的釋放只有在rhuil-10的濃度為0.2ng/ml或高于0.2ng/ml時才被抑制；當(dāng)濃度低于0.1ng/ml時，tnfα和il-1β的釋放不被抑制。在rhuil-10的iv給藥后12小時和sc給藥后24小時后，血清濃度下降至低于0.2ng/ml，并且觀察到tnfα和il-1β的釋放。這些數(shù)據(jù)表明，為了在患有慢性炎性疾病的患者中觀察到抗炎功能，必須達到0.2ng/ml或高于0.2ng/ml的il-10血清谷濃度。人癌癥患者中peg-il-10對infγ和膽固醇的調(diào)節(jié)的測定。il-10在cd8+t細胞中誘導(dǎo)ifnγ，并且ifnγ誘導(dǎo)對于小鼠中的il-10介導(dǎo)的腫瘤排斥是必需的。當(dāng)以誘導(dǎo)對照小鼠的腫瘤消退的濃度用peg-rmil-10處理時，ifnγ缺陷型小鼠不能排斥它們的腫瘤(數(shù)據(jù)未顯示)。從而測量用peg-rhil-10處理的患者血清中的ifnγ。在關(guān)于適當(dāng)?shù)氖┯眉夹g(shù)的教育后，癌癥患者每天自已sc注射不同劑量的peg-rhil-10。如先前所述，使用夾心elisa測定血清il-10濃度。使用luminex珠粒測定(luminexcorp.；austin,tx)測量在第一次給藥前或28天的給藥后獲取的血清樣品的ifnγ。如表17中所指示的，接受1μg/kgpeg-il-10的患者具有～0.4至～1.1ng/mlil-10的血清谷水平，然而接受2.5μg/kgpeg-il-10劑量的患者具有～0.4至～2.6ng/ml的il-10的血清谷水平。ifnγ主要通過jak-stat途徑發(fā)出信號。jak-stat信號轉(zhuǎn)導(dǎo)包括一連串受體招募以及janus激酶家族(jak：jak1–3和tyk2)和stat激酶家族(stat1-6，包括stat5a和stat5b)的成員的活化來通過特定應(yīng)答元件控制靶標基因的轉(zhuǎn)錄。因為該信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制是細胞因子受體超家族的許多成員的特征，所以ifnγ誘導(dǎo)的jak-stat信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是當(dāng)前的ii類細胞因子受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的范例。如表17中所指示的，具有1ng/ml或更大的血清谷水平的患者顯示血清中的ifnγ的誘導(dǎo)，然而具有低于1ng/ml的血清谷水平的患者未能顯示ifnγ的誘導(dǎo)。參考表17，ifnγ誘導(dǎo)被定義為大于1的值。表17這些數(shù)據(jù)表明為了在癌癥/腫瘤環(huán)境中觀察到療效，必須獲得1ng/ml或高于1ng/ml的il-10血清谷濃度。重要地，血清谷濃度而非劑量水平是ifnγ誘導(dǎo)的決定因素。在施用peg-rhil-10之前或在1周的每日sc給藥(1μg/kg；2.5μg/kg；或5μg/kg；n＝3-4個患者/劑量)后測量從癌癥患者抽取的血清樣品中的膽固醇。參考表18，接受1μg/kg的患者獲得0.4ng/ml的平均日血清膽固醇濃度并且具有7.8％的膽固醇的減少；接受2.5μg/kg的患者獲得1ng/ml的平均日血清膽固醇濃度并且具有19％的膽固醇的減少；以及接受5μg/kg的患者獲得2ng/ml的平均血清膽固醇谷濃度并且具有38％的膽固醇的減少。因此，每一個給藥方案導(dǎo)致血清膽固醇的治療相關(guān)減少，這表明約0.2ng/ml至0.4ng/ml的平均il-10血清谷濃度是有效的。表18劑量1ug/kg2.55n443平均血清谷(第15天)0.41.83.6平均膽固醇減少(1周)7.8％20％37％在本文中描述了本發(fā)明的特定實施方案，包括本發(fā)明人已知的用于進行本發(fā)明的最好模式。在閱讀前述內(nèi)容、描述后，公開的實施方案的變型對于本領(lǐng)域工作個體將變得顯而易見，并且預(yù)期本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可酌情利用此類改變。因此，期望另外地實施本發(fā)明而不是按照本文中明確描述的，以及本發(fā)明包括如適用法律所許可的所附權(quán)利要求所列舉的對象的所有修改和等效物。此外，在其所有可能的改變中上述組分的任何組合涵蓋于本發(fā)明中，除非本文另外說明或上下文中明顯矛盾。本說明書中引用的所有出版物、專利申請、登錄號和其它參考資料通過引用并入本文，就如同特定地及個別地表明每個出版物或?qū)＠暾埻ㄟ^引用并入一樣。本申請涉及下述實施方案。1.一種治療或預(yù)防受試者的疾病、病癥或病狀的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的il-10劑，其中所述量足以獲得至少0.1ng/ml的平均il-10血清谷濃度。2.一種治療或預(yù)防受試者的疾病、病癥或病狀的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的il-10劑，其中所述量足以在一段時間內(nèi)維持平均il-10血清谷濃度；其中所述平均il-10血清谷濃度為至少0.1ng/ml，并且其中將所述平均il-10血清谷濃度維持至少90％的所述一段時間。3.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少1.5ng/ml。4.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少1.85ng/ml。5.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少2.0ng/ml。6.根據(jù)實施方案2-5或69-75中任一項所述的方法，其中所述一段時間為至少12小時。7.根據(jù)實施方案6所述的方法，其中所述一段時間為至少24小時。8.根據(jù)實施方案7所述的方法，其中所述一段時間為至少48小時。9.根據(jù)實施方案8所述的方法，其中所述一段時間為至少72小時。10.根據(jù)實施方案9所述的方法，其中所述一段時間為至少1周。11.根據(jù)實施方案10所述的方法，其中所述一段時間為至少2周。12.根據(jù)實施方案11所述的方法，其中所述一段時間為至少1個月。13.根據(jù)實施方案2-12或69-75中任一項所述的方法，其中將所述平均il-10血清谷濃度維持至少95％的所述一段時間。14.根據(jù)實施方案13所述的方法，其中將所述平均il-10血清谷濃度維持至少98％的所述一段時間。15.根據(jù)實施方案14所述的方法，其中將所述平均il-10血清谷濃度維持100％的所述一段時間。16.根據(jù)實施方案1-15中任一項所述的方法，其中所述il-10劑為成熟人il-10。17.根據(jù)實施方案1-15中任一項所述的方法，其中所述il-10劑為成熟人il-10的變體，并且其中所述變體展現(xiàn)與成熟人il-10的活性相當(dāng)?shù)幕钚浴?8.根據(jù)實施方案1-17中任一項所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀為增殖性病癥。19.根據(jù)實施方案18所述的方法，其中所述增殖性病癥是癌癥。20.根據(jù)實施方案19所述的方法，其中所述癌癥是實體瘤或血液病癥。21.根據(jù)實施方案1-17中任一項所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀是免疫病癥或炎性病癥。22.根據(jù)實施方案21所述的方法，其中免疫病癥或炎性病癥選自由以下組成的組：炎性腸病、銀屑病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化和阿爾茨海默病。23.根據(jù)實施方案1-17中任一項所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀為血栓形成或血栓形成病狀。24.根據(jù)實施方案1-17中任一項所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀是纖維化病癥。25.根據(jù)實施方案1-17中任一項所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀是病毒性病癥。26.根據(jù)實施方案25所述的方法，其中所述病毒性病癥選自由以下組成的組：人免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒和巨細胞病毒。27.根據(jù)實施方案1-17中任一項所述的方法，其中所述疾病、病癥或病狀是心血管病癥。28.根據(jù)實施方案27所述的方法，其中所述心血管病癥是動脈粥樣硬化。29.根據(jù)實施方案27或28所述的方法，其中所述受試者具有升高的膽固醇。30.根據(jù)實施方案1-29中任一項所述的方法，其中所述il-10劑包含至少一個修飾以形成經(jīng)修飾的il-10劑，其中所述修飾不改變所述il-10劑的氨基酸序列。31.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的il-10劑為peg-il-10劑。32.根據(jù)實施方案31所述的方法，其中所述peg-il-10劑包含至少一個共價連接于il-10的至少一個亞單位的至少一個氨基酸殘基的peg分子。33.根據(jù)實施方案31或32所述的方法，其中所述peg-il-10劑包含單-peg化和二-peg化的il-10的混合物。34.根據(jù)實施方案31-33中任一項所述的方法，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有約5kda至約20kda的分子質(zhì)量。35.根據(jù)實施方案31-33中任一項所述的方法，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有大于約20kda的分子質(zhì)量。36.根據(jù)實施方案31-33中任一項所述的方法，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有至少約30kd的分子質(zhì)量。37.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的il-10劑為fc融合分子。38.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的il-10劑包含血清白蛋白。39.根據(jù)實施方案38所述的方法，其中所述血清白蛋白為人血清白蛋白(hsa)。40.根據(jù)實施方案39所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的il-10劑為hsa融合分子或白蛋白綴合物。41.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中將所述經(jīng)修飾的il-10劑糖基化。42.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中將所述經(jīng)修飾的il-10劑羥乙基淀粉化。43.根據(jù)實施方案30所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的il-10劑包含白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域(abd)。44.根據(jù)實施方案30-43中任一項所述的方法，其中所述修飾是位點特異性的。45.根據(jù)實施方案30-36、38和39中任一項所述的方法，其中所述修飾包含接頭。46.根據(jù)實施方案1-45中任一項所述的方法，其中至少每天兩次向所述受試者施用所述il-10劑。47.根據(jù)實施方案1-45中任一項所述的方法，其中至少每天一次向所述受試者施用所述il-10劑。48.根據(jù)實施方案1-45中任一項所述的方法，其中至少每72小時一次向所述受試者施用所述il-10劑。49.根據(jù)實施方案1-45中任一項所述的方法，其中至少每周一次向所述受試者施用所述il-10劑。50.根據(jù)實施方案1-45中任一項所述的方法，其中至少每2周一次向所述受試者施用所述il-10劑。51.根據(jù)實施方案1-45中任一項所述的方法，其中至少每月一次向所述受試者施用所述il-10劑。52.根據(jù)實施方案1-51中任一項所述的方法，其還包括施用至少一種另外的預(yù)防劑或治療劑。53.根據(jù)實施方案1-52中任一項所述的方法，其中所述受試者是人。54.根據(jù)實施方案1-53中任一項所述的方法，其中所述施用是通過腸胃外注射。55.根據(jù)實施方案54所述的方法，其中所述腸胃外注射是皮下注射。56.根據(jù)實施方案1-55中任一項所述的方法，其中所述治療或預(yù)防由cd8+t細胞介導(dǎo)。57.一種藥物組合物，其包含一定量的實施方案1-56中任一項的il-10劑以及藥學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑。58.根據(jù)實施方案57所述的藥物組合物，其中所述賦形劑是等滲注射液。59.根據(jù)實施方案57所述的藥物組合物，其中所述組合物適合用于人施用。60.根據(jù)實施方案57-59中任一項所述的藥物組合物，其還包含至少一種另外的預(yù)防劑或治療劑。61.一種無菌容器，其包含實施方案57-60中任一項的藥物組合物。62.根據(jù)實施方案61所述的無菌容器，其中所述無菌容器是注射器。63.一種藥盒，其包括實施方案61或?qū)嵤┓桨?2的無菌容器。64.根據(jù)實施方案63所述的藥盒，其還包括包含至少一種另外的預(yù)防劑或治療劑的第二無菌容器。65.根據(jù)實施方案1所述的方法，其中所述量足以獲得至少0.5ng/ml的平均il-10血清谷濃度。66.根據(jù)實施方案1所述的方法，其中所述量足以獲得至少1.0ng/ml的平均il-10血清谷濃度。67.根據(jù)實施方案1所述的方法，其中所述量足以獲得至少1.5ng/ml的平均il-10血清谷濃度。68.根據(jù)實施方案1所述的方法，其中所述量足以獲得至少2.0ng/ml的平均il-10血清谷濃度。69.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少0.2ng/ml。70.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少0.4ng/ml。71.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少0.6ng/ml。72.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少0.8ng/ml。73.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少1.0ng/ml。74.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少1.25ng/ml。75.根據(jù)實施方案2所述的方法，其中所述平均il-10血清谷濃度為至少1.75ng/ml。本申請還涉及下述實施方案。1.一種供治療人受試者中的癌癥的方法使用的組合物，其中所述方法包括通過注射向所述人受試者施用治療有效量的peg-il-10劑，其中所述量足以在至少24小時的一段時間內(nèi)維持所述人受試者中的il-10血清谷濃度處于或高于0.2ng/ml，其中還用至少一種治療劑治療所述人受試者。2.根據(jù)實施方案1所述使用的組合物，其中所述至少一種治療劑包含5-氟尿嘧啶(5-fu)。3.根據(jù)實施方案1所述使用的組合物，其中所述至少一種治療劑包含鉑配合物。4.根據(jù)實施方案1所述使用的組合物，其中所述至少一種治療劑包含葉酸類似物。5.根據(jù)實施方案4所述使用的組合物，其中所述至少一種治療劑進一步包含鉑配合物。6.根據(jù)實施方案5所述使用的組合物，其中所述至少一種治療劑進一步包含5-氟尿嘧啶(5-fu)。7.根據(jù)實施方案1-6任一項所述使用的組合物，其中施用所述peg-il-10劑以在至少2周的一段時間內(nèi)維持il-10血清谷濃度處于或高于0.2ng/ml。8.根據(jù)實施方案1-6任一項所述使用的組合物，其中施用所述peg-il-10劑以在至少1個月的一段時間內(nèi)維持il-10血清谷濃度處于或高于0.2ng/ml。9.根據(jù)實施方案1-6任一項所述使用的組合物，其中所述peg-il-10劑包含成熟人il-10。10.根據(jù)實施方案1-6任一項所述使用的組合物，其中所述peg-il-10劑包含成熟人il-10的變體，并且其中所述變體展現(xiàn)與成熟人il-10的活性相當(dāng)?shù)幕钚浴?1.根據(jù)實施方案1-6中任一項所述使用的組合物，其中所述peg-il-10劑包含至少一個共價連接于成熟人il-10的至少一個亞單位的至少一個氨基酸殘基的peg分子。12.根據(jù)實施方案11所述使用的組合物，其中所述peg-il-10劑包含單-peg化和二-peg化的il-10的混合物。13.根據(jù)實施方案12所述使用的組合物，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有約5kda至約20kda的分子質(zhì)量。14.根據(jù)實施方案13所述使用的組合物，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有約5kda至約10kda的分子質(zhì)量。15.根據(jù)實施方案13所述使用的組合物，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有約5kda的分子質(zhì)量。16.根據(jù)實施方案1-6任一項所述使用的組合物，其中每天一次向所述受試者施用所述peg-il-10劑。17.根據(jù)實施方案16所述使用的組合物，其中所述施用是通過皮下注射的。18.根據(jù)實施方案1-17任一項所述使用的組合物，其中所述癌癥是胰腺、腎細胞、或結(jié)腸的癌癥。19.peg-il-10劑在制備供治療人受試者中的癌癥的方法使用的藥物中的用途，其中所述方法包括向所述人受試者施用治療有效量的peg-il-10劑，其中所述量足以在至少24小時的一段時間內(nèi)維持所述人受試者中的il-10血清谷濃度處于或高于0.2ng/ml，其中還用至少一種治療劑治療所述人受試者。20.根據(jù)實施方案19所述的用途，其中所述至少一種治療劑包含5-氟尿嘧啶(5-fu)。21.根據(jù)實施方案19所述的用途，其中所述至少一種治療劑包含鉑配合物。22.根據(jù)實施方案19所述的用途，其中所述至少一種治療劑包含葉酸類似物。23.根據(jù)實施方案22所述的用途，其中所述至少一種治療劑進一步包含5-氟尿嘧啶(5-fu)。24.根據(jù)實施方案23所述的用途，其中所述至少一種治療劑進一步包含鉑配合物。25.根據(jù)實施方案19所述的用途，其中施用所述peg-il-10劑以在至少2周的一段時間內(nèi)維持il-10血清谷濃度處于或高于0.2ng/ml。26.根據(jù)實施方案19所述的用途，其中施用所述peg-il-10劑以在至少1個月的一段時間內(nèi)維持il-10血清谷濃度處于或高于0.2ng/ml。27.根據(jù)實施方案19所述的用途，其中所述peg-il-10劑包含成熟人il-10。28.根據(jù)實施方案19所述的用途，其中所述peg-il-10劑包含成熟人il-10的變體，并且其中所述變體展現(xiàn)與成熟人il-10的活性相當(dāng)?shù)幕钚浴?9.根據(jù)實施方案19-28中任一項所述的用途，其中所述peg-il-10劑包含至少一個共價連接于成熟人il-10的至少一個亞單位的至少一個氨基酸殘基的peg分子。30.根據(jù)實施方案29所述的用途，其中所述peg-il-10劑包含單-peg化和二-peg化的il-10的混合物。31.根據(jù)實施方案30所述的用途，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有約5kda至約20kda的分子質(zhì)量。32.根據(jù)實施方案30所述的用途，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有約5kda至約10kda的分子質(zhì)量。33.根據(jù)實施方案30所述的用途，其中所述peg-il-10劑的peg組分具有約5kda的分子質(zhì)量。34.根據(jù)實施方案30所述的用途，其中每天一次向所述受試者施用所述peg-il-10劑。35.根據(jù)實施方案34所述的用途，其中所述施用是通過皮下注射的。36.根據(jù)實施方案19-35任一項所述的用途，其中所述癌癥是胰腺、腎細胞、或結(jié)腸的癌癥。當(dāng)前第1頁12