專利名稱：具有抗炎活性的α－氨基酸衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗炎活性的α-氨基酸衍生物，尤其是含N-羥基酰胺官能團(tuán)的衍生物以及它們的藥物組合物。
背景技術(shù)：
在炎癥反應(yīng)的發(fā)展過程中由細(xì)胞因子，尤其是白細(xì)胞介素1β(IL-1β)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)發(fā)揮的作用已有較多記載(Dinarello C.A.和Wolff S.M.，New Eng.J.Med.328(2)106113，1993；Tracey K.J.和CeramiA.，Crit.Care Med.21S415，1993；Melli M.和Parente L.，Cytokines andlipocortines in inflammation and differentiation，Wiley-Liss.New York1990；Dawson M.M.Lymphokines and Interleukins.CRC Press.BocaRaton，F(xiàn)L 1991)。致力于找到能夠抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生的物質(zhì)的研究已導(dǎo)致細(xì)胞因子抑制抗炎藥(CSAID)的開發(fā)，在它們當(dāng)中包括所謂的非傳統(tǒng)非類固醇抗炎藥(Chiug.G.C.Y.和Liou S.X.L，Exp.Opin.Ther.Patents，6(1)41，1996)。在一部分這些化合物中，羥胺基團(tuán)的存在似乎在測(cè)定抗炎活性中發(fā)揮主要作用(Tanaka等人的Chem.Pharm.Bull.，31(8)2810-2819，1983)。
EP901465描述了含氨基苯甲酸結(jié)構(gòu)部分的異羥肟酸衍生物，其能夠抑制TNF-α的產(chǎn)生并具有抗炎和免疫抑制活性；所述化合物另外證實(shí)有抗腫瘤活性，如EP0208151所述。
本發(fā)明的描述現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，含α-氨?；Y(jié)構(gòu)部分的異羥肟酸衍生物對(duì)促炎細(xì)胞因子，尤其是TNFα的產(chǎn)生具有抑制作用。
本發(fā)明提供了通式(I)的化合物和它們的藥物上可接受的鹽，
其中，Z是線性或支化的C1-C4烷基、芳基、芳烷基或飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)碳環(huán)殘基，或包含一個(gè)或多個(gè)選自N、S或O的雜原子的飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)雜環(huán)殘基；所述C1-C4烷基、芳基、芳烷基、碳環(huán)或雜環(huán)殘基任選地被一個(gè)或多個(gè)相互相同或不同的殘基取代，這些相同或不同的殘基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)鹵代烷基、烷基磺?；?、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、烷酰基、任選被C1-C4烷基單或二取代的氨基、任選被C1-C4烷基單或二取代的(C1-C4)氨基烷基、羧基、C1-C4烷氧基羰基、巰基烷氧基、巰基苯氧基、硝基、氰基、氧代、全氟烷氧基、全氟烷基、苯基、苯氧基、苯基烷氧基、苯甲酰氧基、苯基烷基、苯甲?；?、苯磺?；土u基；Q是芳基、芳烷基或飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)碳環(huán)殘基，或包含一個(gè)或多個(gè)選自N、S或O的雜原子的飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)雜環(huán)殘基；所述芳基、芳烷基、碳環(huán)或雜環(huán)殘基任選地被一個(gè)或多個(gè)相互相同或不同的殘基取代，這些相同或不同的殘基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)鹵代烷基、烷基磺酰基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、烷?；?、任選被C1-C4烷基單或二取代的氨基、任選被C1-C4烷基單或二取代的(C1-C4)氨基烷基、羧基、C1-C4烷氧基羰基、巰基烷氧基、巰基苯氧基、硝基、氰基、氧代、全氟烷氧基、全氟烷基、苯基、苯氧基、苯基烷氧基、苯甲酰氧基、苯基烷基、苯甲酰基、苯磺?；土u基；m和n獨(dú)立地是0或1；X是C1-C4亞烷基或不存在；
L是亞苯基、亞環(huán)己基或含2-6個(gè)碳原子、任選地包含一個(gè)或多個(gè)雙鍵的線性或支化烷基鏈。
本發(fā)明的化合物包含一個(gè)或多個(gè)手性中心(不對(duì)稱碳原子)并因此可以以對(duì)映體和/或非對(duì)映異構(gòu)體形式存在；所有可能的光學(xué)異構(gòu)體，單獨(dú)的或彼此混合的，都在本發(fā)明范圍內(nèi)。
通式I化合物的藥物上可接受的鹽是與有機(jī)和無機(jī)酸，例如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、乙酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、天冬氨酸、甲烷磺酸的那些，或與無機(jī)堿，例如鈉或鉀鹽的那些，或與有機(jī)堿，例如賴氨酸、精氨酸或其它的氨基酸或胺的那些。
一類優(yōu)選的化合物包括通式I的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0且X是亞甲基或不存在。
另一類優(yōu)選的化合物包括通式I的化合物，其中Z選自甲基、苯基、萘基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基和吡啶基，它們?nèi)缟纤鋈芜x地被取代。
另一類優(yōu)選的化合物包括通式I的化合物，其中Q選自萘基、茚滿基、苯基和聯(lián)苯基，它們?nèi)缟纤鋈芜x地被取代。
一類更優(yōu)選的化合物包括通式I的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0，X是亞甲基或不存在，且Q表示選自如上所述任選地被取代的萘基、茚滿基、苯基和聯(lián)苯基的碳環(huán)。
另一類更優(yōu)選的化合物包括通式I的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0，X是亞甲基或不存在，且Z選自C1-C3烷基、苯基、萘基、吡啶基和苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基。
一類更優(yōu)選的化合物包括通式I的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0，X是亞甲基或不存在，Q表示選自萘基、茚滿基和苯基的碳環(huán)且Z選自C1-C3烷基、苯基、萘基、吡啶基和苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基。
以下通式I的化合物是尤其優(yōu)選的a)4-(2(R)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺b)4-(2(R)-乙酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺
c)4-(2(S)-乙酰氨基-2-茚滿-2-基-乙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺d)4-(2(S)-乙酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺e)4-(2(S)-乙酰氨基-3-苯基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺f)4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-聯(lián)苯-4-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺g)4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺h)4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-苯基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺i)4-[2(S)-乙酰氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺j)4-[2(S)-乙酰氨基-3-(4-三氟甲基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺k)4-[2(S)-苯甲酰氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺l)4-氨基-N-[1(R)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-苯甲酰胺m)4-氨基-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-苯甲酰胺n)5-溴-N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-煙酰胺o)5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-煙酰胺p)5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-聯(lián)苯-4-基-乙基]-煙酰胺q)5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-煙酰胺r)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(R)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-酰胺s)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(4-羥基-苯基)-乙基]-酰胺t)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-酰胺u)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(3-氟苯基)-乙基]-酰胺v)萘-2-甲酸的N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-酰胺w)萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺x)萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-苯基-乙基]-酰胺y)萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(聯(lián)苯4-基)-乙基]-酰胺本發(fā)明的化合物可以使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法來制備；例如，可以使用用于N-羥基酰胺的專用商購(gòu)樹脂中的一種利用“固相”有機(jī)合成來制備它們。用二乙烯基苯交聯(lián)的并用來自對(duì)烷氧基芐基殘基(Wang樹脂)的鄰?fù)榛u基胺基團(tuán)官能化的聚苯乙烯樹脂可以用于這一目的[參見例如Richter，L.S.和Desai，M.C.Tetrahedron Letters 38(3)第321-322頁(yè)(1996)]。
該樹脂上存在的氨基可以在合適的縮合劑的存在下用以下通式的受保護(hù)的中間體酰化G-HN-(CH2)m-L-(CH2)n-COOH (II)其中L、m和n具有與上述相同的意義且G是適合的保護(hù)基團(tuán)。
將獲得通式(III)的樹脂，G-HN-(CH2)m-L-(CH2)n-CONH-O-Resin (III)除去保護(hù)基團(tuán)G之后，該樹脂的氨基可以隨后用通式(IV)的α-氨基酸衍生物酰化， 其中Q、X和G具有上面規(guī)定的意義；在隨后除去保護(hù)基團(tuán)G之后，可以用通式(V)的酸，以活化形式(例如?；?、活性酯等)或在縮合劑存在下，將該釋放的氨基最后?；?，Z-C(O)OH(V)其中Z具有上面規(guī)定的意義。
可以通過用中強(qiáng)酸，例如三氟乙酸處理、過濾和任選的最后純化使本發(fā)明的產(chǎn)物最終從該樹脂中釋放出來。
通式I的化合物的鹽使用已知的方法制備。
根據(jù)R.de Waal Malefy等人(J.Exp.Med.，1991，1741209-1220)描述的試驗(yàn)，以1-1000nM，優(yōu)選1-200nM的濃度使用本發(fā)明的化合物使得由于用LPS激發(fā)外周血單核細(xì)胞而產(chǎn)生的TNFα得到50％抑制，并且可以因此用作醫(yī)藥，尤其是用作治療涉及TNFα或促炎細(xì)胞因子過度產(chǎn)生的疾病或病理情況的醫(yī)藥。
另外通式I的化合物在對(duì)人類肝癌細(xì)胞系Hep-G2的體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)中顯示顯著的活性，例如在實(shí)施例4中所描述，這一試驗(yàn)是活體抗腫瘤活性的預(yù)示。因此，這些化合物可以單獨(dú)地或與其它抗腫瘤藥物一起不僅用于治療腫瘤疾病，而且可以用于治療神經(jīng)變性或自身免疫疾病。
因此，本發(fā)明還提供藥物組合物，其包含治療有效量的通式(I)的化合物或治療有效量的其藥物上可接受的鹽連同至少一種藥物上可接受的賦形劑和/或載體，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences Handbook(Remington藥物科學(xué)手冊(cè))，XVII版，Mack Pub.，NY，USA中描述的那些。
此類組合物可以是適合于腸內(nèi)或腸胃外給藥的液體，或固體，例如為口服的膠囊、片劑、包衣片劑、粉末或顆粒形式，或者為適合于皮膚給藥的形式，例如乳膏或藥膏，或呈適合于吸入給藥的形式。
本發(fā)明提供的藥物組合物可以用已知的方法制備。
下面將參照一些實(shí)施例說明本發(fā)明，這些實(shí)施例無論如何不應(yīng)看作限制了本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例在以下實(shí)施例中使用下面的縮寫
ACN乙腈PVDF 聚偏二氟乙烯DCM二氯甲烷DIPEA 二異丙基乙基胺DMF二甲基甲酰胺HOAt 1-羥基-7-氮雜苯并三唑HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′N′-四甲基脲六氟磷酸酯TFA三氟乙酸通用純化方法除非另有說明，所有的最終純化利用Waters制備級(jí)HPLC/MS體系來進(jìn)行，該體系具有裝配到Waters ZQ質(zhì)譜儀上的Waters Symmetry C185mm 19×50mm柱。
操作條件質(zhì)心ES+電離，掃描時(shí)間15分鐘，m/z掃描120-1000，錐電壓15V，源溫120℃，溶解溫度250℃。
HPLC洗脫液A＝H2O，B＝ACN，C＝在H2O中的1％HCOOH梯度
將等份待純化的粗產(chǎn)物(30-50mg)溶于0.1ml MeOH中并用0.4mlACN/H2O混合物(1∶1；體積/體積)稀釋。將通過0.45mmPVDF膜過濾的溶液注入上述制備級(jí)體系中。對(duì)于每一輪次來說，將對(duì)應(yīng)于與預(yù)期的分子離子([M+H]+)關(guān)聯(lián)的峰的級(jí)分收集、合并且濃縮到干燥。
實(shí)施例14-(2(R)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺步驟A將HOAt(5.1g；37.5mmol)和HATU(14.3g；37.5mmol)在無水DMF(20ml)中的混合物添加到4-(9H-芴-9-基-甲氧基羰基氨基)-苯甲酸(13.5g；37.5mmol)在無水DMF(25ml)中的溶液中，然后添加二異丙基乙胺(13ml；75mmol)。在環(huán)境溫度下攪拌該反應(yīng)混合物30分鐘，然后轉(zhuǎn)移到含有用羥胺官能化的Wang型聚苯乙烯樹脂(9g；9.36mmol)的反應(yīng)器中，并在環(huán)境溫度下攪拌該懸浮液16小時(shí)。濾出該樹脂并連續(xù)地用DMF(5×50ml)、DCM(4×50ml)、MeOH(3×50ml)和DCM(5×50ml)洗滌，最后濾出并在真空下干燥。
步驟B將在A中所得等份樹脂(150mg)轉(zhuǎn)移到固相合成反應(yīng)器中并用在DMF(2ml)中的20％的哌啶溶液再溶脹。在環(huán)境溫度下攪拌一小時(shí)之后，濾出該樹脂并用DMF(5×2ml)洗滌。
步驟C將HATU(237mg，0.62mmol)、HOAt(85mg；0.62mmol)和DIPEA(0.217ml；1.24mmol)添加到(9H-芴-9-基)-甲氧基羰基-D-(2)萘基丙氨酸(Fmoc-D(2)Nal-OH；273mg，0.62mmol)在DMF(1.5ml)中的溶液中。將該溶液(～2ml)添加到含有在B中獲得的樹脂的反應(yīng)器里，并在環(huán)境溫度下攪拌過夜。濾出該樹脂并連續(xù)地用DMF(5×2ml)、DCM(2×2ml)、MeOH(2×2ml)和DCM(2×2ml)洗滌，并最后在真空下濾出。
步驟D如步驟B所述，用20％在DMF中的哌啶處理在C中獲得的樹脂。
步驟E
將HATU(237mg，0.62mmol)、HOAt(85mg；0.62mmol)和DIPEA(0.217ml；1.24mmol)添加到苯甲酸(76mg；0.62mmol)在DMF(1.5ml)中的溶液中。將該溶液(～2ml)添加到含有在D中獲得的樹脂的反應(yīng)器中并在環(huán)境溫度下攪拌過夜。濾出該樹脂并連續(xù)地用DMF(5×2ml)、DCM(2×2ml)、MeOH(2×2ml)和DCM(2×2ml)洗滌，并最后在真空下濾出。
步驟F將如在前面步驟中所述獲得的樹脂在TFA在DCM(2ml)中的50％溶液中再溶脹并在環(huán)境溫度下攪拌一小時(shí)，然后濾出并將溶液蒸干。該殘余物用t-BuOMe再懸浮并再蒸發(fā)五次。根據(jù)先前描述的通用方法通過制備級(jí)HPLC/MS純化所得殘余物。
所得產(chǎn)品16.9mg；[M+H]+＝454.3(計(jì)算值454.2)實(shí)施例2使用實(shí)施例1描述的程序制備以下產(chǎn)物b)4-(2(R)-乙酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺c)4-(2(S)-乙酰氨基-2-茚滿-2-基-乙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺d)4-(2(S)-乙酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺e)4-(2(S)-乙酰氨基-3-苯基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺f)4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-聯(lián)苯-4-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺g)4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺h)4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-苯基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺i)4-[2(S)-乙酰氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺j)4-[2(S)-乙酰氨基-3-(4-三氟甲基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺k)4-[2(S)-苯甲酰氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺l)4-氨基-N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-苯甲酰胺m)4-氨基-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-苯甲酰胺n)5-溴-N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-煙酰胺o)5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-煙酰胺p)5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-聯(lián)苯-4-基-乙基]-煙酰胺q)5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-煙酰胺r)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-酰胺s)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-(4-羥基-苯基)-乙基]-酰胺t)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-酰胺u)苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(3-氟苯基)-乙基]-酰胺v)萘-2-甲酸的N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-酰胺w)萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺x)萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-苯基-乙基]-酰胺y)萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(聯(lián)苯-4-基)-乙基]-酰胺實(shí)施例3TNFα產(chǎn)生的抑制-體外測(cè)定以10mM的最終濃度將該化合物溶于DMSO中。
用于該試驗(yàn)的溶液通過在RPMI 1640中添加1％FCS和0.01％DMSO稀釋該母液來制備，并用0.2μm過濾器過濾。
通過按Ficoll-Hypaque梯度分離從健康供體的血液中獲取外周血單核細(xì)胞[C.G.Figdor等，Blood，1982，6046-53]。將該細(xì)胞散布在96孔板中，細(xì)胞的濃度為大約500,000個(gè)細(xì)胞/孔，懸浮在含1％FCS的RPMI 1640中，并在37℃下在不同濃度(10-6-10-11M)的待研究化合物的存在下進(jìn)行培養(yǎng)。
1小時(shí)之后，添加LPS(以10ng/ml的最終濃度；得自E.coli 055B5)并將該板在37℃下再培養(yǎng)24小時(shí)。在此階段的末期，收集上層清液并用于通過ELISA(DuoSet ELISA kit；R&D Systems，Minneapolis，MN，USA)測(cè)定TNFα含量。
使用校準(zhǔn)曲線計(jì)算TNFα的濃度，IC50值(使得細(xì)胞因子的產(chǎn)生得到50％抑制的濃度)根據(jù)對(duì)所研究的化合物的各個(gè)濃度繪制百分率抑制值獲得的曲線計(jì)算。
表1通過用LPS激發(fā)的人類單核細(xì)胞抑制TNFα產(chǎn)生
實(shí)施例4體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性通過商業(yè)比色法(Cell Titer 96Aque ous，一種溶液細(xì)胞增殖試驗(yàn)-Promega)評(píng)價(jià)了在上述實(shí)施例中描述的一些化合物在體外對(duì)人類肝癌細(xì)胞系Hep-G2的細(xì)胞毒性；該方法基于活細(xì)胞使四唑鹽新陳代謝產(chǎn)生甲簪的能力來測(cè)定活細(xì)胞的數(shù)目。所產(chǎn)生的甲簪的量與活細(xì)胞的數(shù)目成正比。
將該Hep-G2細(xì)胞以4×104細(xì)胞/孔(100μl)的密度分布在裝有含10％胎兒牛血清和補(bǔ)脈的M199培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)的96孔微板中。
在24小時(shí)的培育(37℃，5％CO2、90％濕度)之后，洗滌該細(xì)胞一次并將該培養(yǎng)基用200μl完全培養(yǎng)基再裝滿，該完全培養(yǎng)基以10-5，10-6和10-7M的最終濃度包含待試驗(yàn)的物質(zhì)。一式三份地進(jìn)行該試驗(yàn)。
將該板再培養(yǎng)48小時(shí)，在結(jié)束時(shí)，除去100μl培養(yǎng)基并根據(jù)供應(yīng)商的指導(dǎo)添加20μl/孔的染色溶液。在37℃下1小時(shí)的培養(yǎng)之后，使用讀板器(Victor2-Wallac Perkin Elmer)讀取光密度(λ＝490nm)。
證實(shí)該類通式I的化合物的抗腫瘤活性的結(jié)果作為相對(duì)于對(duì)照物對(duì)甲簪形成抑制的百分率給出。下表示出了在10-5M和10-6M的濃度下獲得的值。
表2對(duì)Hep-G2細(xì)胞的細(xì)胞毒性百分率
權(quán)利要求
1.通式(I)的化合物及其藥物上可接受的鹽 其中，Z是線性或支化C1-C4烷基、芳基、芳烷基或飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)碳環(huán)殘基，或包含一個(gè)或多個(gè)選自N、S或O的雜原子的飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)雜環(huán)殘基；所述C1-C4烷基、芳基、芳烷基、碳環(huán)或雜環(huán)殘基任選地被一個(gè)或多個(gè)相互相同或不同的殘基取代，這些相同或不同的殘基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)鹵代烷基、烷基磺酰基、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、烷?；⑷芜x被C1-C4烷基單或二取代的氨基、任選被C1-C4烷基單或二取代的(C1-C4)氨基烷基、羧基、C1-C4烷氧基羰基、巰基烷氧基、巰基苯氧基、硝基、氰基、氧代、全氟烷氧基、全氟烷基、苯基、苯氧基、苯基烷氧基、苯甲酰氧基、苯基烷基、苯甲?；⒈交酋；土u基；Q是芳基、芳烷基或飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)碳環(huán)殘基，或包含一個(gè)或多個(gè)選自N、S或O的雜原子的飽和、不飽和或部分不飽和的單、二或三環(huán)雜環(huán)殘基；所述芳基、芳烷基、碳環(huán)或雜環(huán)殘基任選地被一個(gè)或多個(gè)相互相同或不同的殘基取代，這些相同或不同的殘基選自鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)鹵代烷基、烷基磺?；?、環(huán)烷基、(環(huán)烷基)烷基、烷酰基、任選被C1-C4烷基單或二取代的氨基、任選被C1-C4烷基單或二取代的(C1-C4)氨基烷基、羧基、C1-C4烷氧基羰基、巰基烷氧基、巰基苯氧基、硝基、氰基、氧代、全氟烷氧基、全氟烷基、苯基、苯氧基、苯基烷氧基、苯甲酰氧基、苯基烷基、苯甲酰基、苯磺酰基和羥基；m和n獨(dú)立地是0或1；X是C1-C4亞烷基或不存在；L是亞苯基、亞環(huán)己基或含2-6個(gè)碳原子、任選地包含一個(gè)或多個(gè)雙鍵的線性或支化烷基鏈，。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0，且X是亞甲基或不存在。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Z選自甲基、苯基、萘基、苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基和吡啶基，它們?nèi)鐧?quán)利要求1所述任選地被取代。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Q選自萘基、茚滿基、苯基和聯(lián)苯基，它們?nèi)鐧?quán)利要求1所述任選地被取代。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0，X是亞甲基或不存在且Q表示選自萘基、茚滿基、苯基和聯(lián)苯基的碳環(huán)，它們?nèi)鐧?quán)利要求1所述任選地被取代。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0，X是亞甲基或不存在且Z選自C1-C3烷基、苯基、萘基、吡啶基和苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基，它們?nèi)鐧?quán)利要求1所述任選地被取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中L是1，4-亞苯基，n和m是0，X是亞甲基或不存在，Q表示選自萘基、茚滿基和苯基和聯(lián)苯基的碳環(huán)且Z選自C1-C3烷基、苯基、萘基、吡啶基和苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯基，它們?nèi)鐧?quán)利要求1所述任選地被取代。
8.選自以下物質(zhì)的化合物4-(2(R)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-(2(R)-乙酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-(2(S)-乙酰氨基-2-茚滿-2-基-乙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-(2(S)-乙酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-(2(S)-乙酰氨基-3-苯基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-聯(lián)苯-4-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-萘-2-基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-(2(S)-苯甲酰氨基-3-苯基-丙酰氨基)-N-羥基-苯甲酰胺4-[2(S)-乙酰氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺4-[2(S)-乙酰氨基-3-(4-三氟甲基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺4-[2(S)-苯甲酰氨基-3-(4-羥基-苯基)-丙酰氨基]-N-羥基-苯甲酰胺4-氨基-N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-苯甲酰胺4-氨基-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-苯甲酰胺5-溴-N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-煙酰胺5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-煙酰胺5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-聯(lián)苯-4-基-乙基]-煙酰胺5-溴-N-[1(S)-(4-羥基氨基甲酰基-苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-煙酰胺苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-酰胺苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(4-羥基-苯基)-乙基]-酰胺苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-萘-2-基-乙基]-酰胺苯并[1，3]間二氧雜環(huán)戊烯-5-羧酸的N-[1(S)-(3羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(3-氟苯基)-乙基]-酰胺萘-2-甲酸的N-[1(R)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-萘-2-基-乙基]-酰胺萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-(4-三氟甲基-苯基)-乙基]-酰胺萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲?；?-2-苯基-乙基]-酰胺萘-2-甲酸的N-[1(S)-(4-羥基氨基甲?；?苯基氨基甲酰基)-2-(聯(lián)苯-4-基)-乙基]-酰胺
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的化合物作為醫(yī)藥的用途。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的化合物用于制備具有抗炎活性的醫(yī)藥的用途。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的化合物用于制備在特征在于TNFα或其它促炎細(xì)胞因子過度產(chǎn)生的疾病中有用的醫(yī)藥的用途。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-8的化合物用于制備具有抗腫瘤活性的醫(yī)藥的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-8的化合物用于制備治療和/或預(yù)防神經(jīng)變性或自身免疫疾病的醫(yī)藥的用途。
14.包含治療有效量的至少一種通式(I)的化合物或其藥物上可接受的鹽連同至少一種藥物上可接受的賦形劑和/或載體的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明描述了以下通式的化合物，其中Z、Q、X、L、m和n具有說明書中給出的意義?；衔?I)抑制TNFα的產(chǎn)生并因此可以用于治療涉及所述細(xì)胞因子過度產(chǎn)生的炎癥和病理情況。它們另外對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖顯示顯著的抑制活性并因此可以用于治療和/或預(yù)防腫瘤、神經(jīng)變性或自身免疫疾病。
文檔編號(hào)C07C259/10GK1980886SQ200580022774
公開日2007年6月13日 申請(qǐng)日期2005年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月5日
發(fā)明者M·皮諾里, R·馬扎法羅, P·馬斯卡尼 申請(qǐng)人:意大利法爾馬科有限公司