本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物的
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種牡荊素在制備預(yù)防和/或治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：肺癌是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一?，F(xiàn)有技術(shù)中，肺癌治療過(guò)程常采用西醫(yī)化療藥物和中藥。常用的治療非小細(xì)胞肺癌療效好的中藥有參蓮膠囊、益肺清化顆粒、清肺散結(jié)丸等；常用的治療小細(xì)胞肺癌療效好的中藥有益肺清化膏、益肺清化顆粒、清肺散結(jié)丸等。山楂葉(Crataeguspinnatifida)屬薔薇科植物，味酸，性平，歸肝經(jīng)，主要功效為活血化瘀，理氣通脈，用于氣滯血瘀、胸悶憋氣、心悸健忘、眩暈耳鳴，是中藥活血化瘀藥中重要的藥物之一。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明山楂葉具有強(qiáng)心、降壓、抗心絞痛及降血脂等作用。目前對(duì)山楂葉研究最多、最廣泛和最深入的是在心血管效應(yīng)方面，在臨床上能用于治療冠心病、心絞痛、高脂血癥、心律失常等。山楂葉的化學(xué)研究表明，山楂葉中主要的活性成分為黃酮類物質(zhì)。山楂葉中的主要黃酮有牡荊素、山柰酚、槲皮素、牡荊素鼠李糖甙和牡荊素葡萄糖甙等近20種。公開號(hào)為CN1300164的中國(guó)專利公開了一種牡荊素的提取方法、用途及制劑，從山楂葉中分離出單一有效成分牡荊素，使其純度達(dá)到98％以上，用于心血管疾病領(lǐng)域，效果顯著。但現(xiàn)有技術(shù)中并未報(bào)道牡荊素在治療惡性腫瘤，尤其是在肺癌、肉瘤中的應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種牡荊素在制備預(yù)防和/或治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用，牡荊素對(duì)于惡性腫瘤的治療效果好，作用速度快，毒副作用低，提供了一種牡荊素的新用途。本發(fā)明提供了一種牡荊素制備預(yù)防和/或治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述牡荊素的結(jié)構(gòu)如式Ⅰ所示：優(yōu)選的是，所述惡性腫瘤為肺癌腫瘤、肉瘤。優(yōu)選的是，所述肺癌為小細(xì)胞肺癌腫瘤。優(yōu)選的是，所述藥物的劑型為注射劑。優(yōu)選的是，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括甘露醇、氫氧化鈉、鹽酸。優(yōu)選的是，所述藥物的劑量為3mg/次～60mg/次。本發(fā)明提供的牡荊素制備預(yù)防和/或治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用，能夠提供一種抗惡性腫瘤的有效藥物，對(duì)肺癌或肉瘤治療效果好，作用速度快，毒副作用低，實(shí)現(xiàn)了對(duì)牡荊素更好的應(yīng)用。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了一種牡荊素制備預(yù)防和/或治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述牡荊素的結(jié)構(gòu)如式Ⅰ所示：在本發(fā)明中，所述牡荊素優(yōu)選從山楂葉中提取、分離，得到單一有效成分牡荊素，使其純度達(dá)到98％以上。本發(fā)明對(duì)所述提取分離純化方法沒(méi)有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的牡荊素的提取分離純化方法即可，如優(yōu)選通過(guò)水解、結(jié)晶、重結(jié)晶對(duì)牡荊素進(jìn)行提取。在本發(fā)明中，所述惡性腫瘤優(yōu)選為肺癌腫瘤、肉瘤。在本發(fā)明中，所述肺癌優(yōu)選為小細(xì)胞肺癌。在本發(fā)明中，所述藥物的劑型優(yōu)選為注射劑。在本發(fā)明中，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括甘露醇、氫氧化鈉、鹽酸。在本發(fā)明中，所述藥物的劑量為3mg/次～60mg/次。本發(fā)明對(duì)所述注射劑藥物的制備沒(méi)有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的注射劑的制備方法即可。如所述注射劑的制備方法優(yōu)選為：稱取甘露醇、牡荊素混合，加注射用水，攪拌均勻，再加氫氧化鈉溶液進(jìn)行溶解，再用鹽酸調(diào)至pH值為8.0～9.0，加針用活性炭，攪拌10～15min，微孔鈦過(guò)濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格后，再經(jīng)微孔濾膜終端過(guò)濾后，分裝于西林瓶中，低溫冷凍干燥，進(jìn)行后續(xù)預(yù)凍、干燥和包裝，得到牡荊素注射劑成品。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的牡荊素制備預(yù)防和/或治療惡性腫瘤藥物中的應(yīng)用做進(jìn)一步詳細(xì)的介紹，本發(fā)明的技術(shù)方案包括但不限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1牡荊素注射劑的制備a、稱取牡荊素3g、甘露醇180g原料均勻混合，加600ml注射用水，攪拌均勻，再加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液1500ml，攪拌溶解，再用1mol/L的鹽酸溶液調(diào)至PH為8.5，加注射用水至3000ml，加0.05％的針用活性炭，攪拌10min，微孔鈦過(guò)濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格后，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端過(guò)濾后，分裝于10ml西林瓶中，每瓶裝3ml，低溫冷凍干燥。b、預(yù)凍：把分裝好的藥品放入凍干箱內(nèi)隔板上預(yù)凍開始至+25℃～-40℃，2小時(shí)；-40℃，3小時(shí)。c、升華干燥：將冷凝器溫度下降至-45℃以下，啟動(dòng)真空泵，待真空度達(dá)到一定數(shù)值后，緩緩打開蝶閥，當(dāng)干燥箱內(nèi)的真空度達(dá)13.33Pa(0.1mmHg)以下關(guān)閉冷凍機(jī)，通過(guò)隔板下的加熱系統(tǒng)緩緩加熱，使凍結(jié)產(chǎn)品的溫度逐漸升高至-20℃，再由-20℃逐漸升高至25℃。整個(gè)升華干燥過(guò)程約26小時(shí)。d、再干燥：在25℃下干燥5小時(shí)，干燥失重符合規(guī)定，在無(wú)菌條件下加蓋膠塞，軋蓋，包裝，檢驗(yàn)，入庫(kù)。實(shí)施例2牡荊素注射劑的制備a、稱取牡荊素30g、甘露醇180g原料均勻混合，加600ml注射用水，攪拌均勻，再加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液1500ml，攪拌溶解，再用1mol/L的鹽酸溶液調(diào)至PH為8.5，加注射用水至3000ml，加0.05％的針用活性炭，攪拌10min，微孔鈦過(guò)濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格后，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端過(guò)濾后，分裝于10ml西林瓶中，每瓶裝3ml，低溫冷凍干燥。b、預(yù)凍：把分裝好的藥品放入凍干箱內(nèi)隔板上預(yù)凍開始至+20℃～-40℃，3小時(shí)；-40℃，4小時(shí)。c、升華干燥：將冷凝器溫度下降至-45℃以下，啟動(dòng)真空泵，待真空度達(dá)到一定數(shù)值后，緩緩打開蝶閥，當(dāng)干燥箱內(nèi)的真空度達(dá)13.33Pa(0.1mmHg)以下關(guān)閉冷凍機(jī)，通過(guò)隔板下的加熱系統(tǒng)緩緩加熱，使凍結(jié)產(chǎn)品的溫度逐漸升高至-15℃，再由-15℃逐漸升高至30℃。整個(gè)升華干燥過(guò)程約30小時(shí)。d、再干燥：在25℃下干燥4小時(shí)，干燥失重符合規(guī)定,在無(wú)菌條件下加蓋膠塞，軋蓋，包裝，檢驗(yàn)，入庫(kù)。實(shí)施例3牡荊素注射劑的制備a、稱取牡荊素60g、甘露醇240g原料均勻混合，加600ml注射用水，攪拌均勻，再加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液1500ml，攪拌溶解，再用1mol/L的鹽酸溶液調(diào)至PH為8.5，加注射用水至3000ml，加0.05％的針用活性炭，攪拌10min，微孔鈦過(guò)濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格后，再經(jīng)0.22μm微孔濾膜終端過(guò)濾后，分裝于10ml西林瓶中，每瓶裝3ml，低溫冷凍干燥。b、預(yù)凍：把分裝好的藥品放入凍干箱內(nèi)隔板上預(yù)凍開始至+25℃～-40℃，2小時(shí)；-40℃，3小時(shí)。c、升華干燥：將冷凝器溫度下降至-45℃以下，啟動(dòng)真空泵，待真空度達(dá)到一定數(shù)值后，緩緩打開蝶閥，當(dāng)干燥箱內(nèi)的真空度達(dá)13.33Pa(0.1mmHg)以下關(guān)閉冷凍機(jī)，通過(guò)隔板下的加熱系統(tǒng)緩緩加熱，使凍結(jié)產(chǎn)品的溫度逐漸升高至-20℃，再由-20℃逐漸升高至25℃。整個(gè)升華干燥過(guò)程約26小時(shí)。d、再干燥：在25℃下干燥約5小時(shí)，干燥失重符合規(guī)定,在無(wú)菌條件下加蓋膠塞，軋蓋，包裝，檢驗(yàn)，入庫(kù)。實(shí)施例4牡荊素注射劑對(duì)小鼠肉瘤S180的抑瘤作用。方法：1、取腫瘤將腹腔接種小鼠肉瘤S180細(xì)胞后一周的昆明小鼠頸椎脫臼處死，用碘酒和75％(v/v)乙醇腹部局部消毒，在無(wú)菌條件下取出腹水，用生理鹽水稀釋3倍，得到瘤液。2、接種瘤液給每只小鼠腋窩皮下準(zhǔn)確接種瘤液0.2ml。注意接種位置各組應(yīng)當(dāng)一致，為防止瘤液接種后漏出皮下，一般是從胸部或背部皮膚進(jìn)針，到達(dá)腋下。3、分組給藥接種后次日，將動(dòng)物隨機(jī)分組、稱重，牡荊素注射劑設(shè)三個(gè)劑量組，分別為3、6、12mg/kg；同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照(環(huán)磷酰胺)及陰性對(duì)照(生理鹽水)，每組10只動(dòng)物。牡荊素注射劑按3、6、12mg/kg三個(gè)劑量組以等體積(0.2ml)不同濃度給動(dòng)物腹腔注射，每天一次，連續(xù)給藥7天，陽(yáng)性對(duì)照組于接種后次日以100mg/kg劑量給動(dòng)物腹腔注射環(huán)磷酰胺1次，每日一次，陰性對(duì)照組是每日1次，每次0.2ml。4、稱瘤重末次給藥后24小時(shí)，頸椎脫臼處死動(dòng)物，分別稱體重，計(jì)算腫瘤抑制率，進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，并將各組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)體瘤以每組動(dòng)物的評(píng)價(jià)腫瘤重量作為療效指標(biāo)。計(jì)算對(duì)照組的平均瘤重及治療組的平均瘤重之比值(T/C-％)，也可計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率(％)，計(jì)算公式如下：腫瘤生長(zhǎng)抑制率％＝(對(duì)照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×％結(jié)果：牡荊素注射劑對(duì)小鼠肉瘤S180有較強(qiáng)的抑制作用，12mg/kg的抑制率為55.7％(P＜0.05)，結(jié)果見表1:表1接種藥物對(duì)肉瘤S180小鼠體重及瘤重的影響(n＝10)與對(duì)照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01由表1可知，牡荊素對(duì)小鼠體重及瘤重的影響均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且在12mg/kg劑量達(dá)到很好的效果，不低于陽(yáng)性對(duì)照藥。實(shí)施例5牡荊素注射劑對(duì)小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)的抑制作用原理：同種動(dòng)物移植性腫瘤模型系選擇三種或三種以上的小鼠、大鼠移植性腫瘤，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)治療。實(shí)體觀察瘤重抑制率或T/C％，給藥途徑應(yīng)與臨床一致，并設(shè)三個(gè)或三個(gè)以上劑量組。對(duì)每一種瘤株的實(shí)驗(yàn)治療應(yīng)獲得可重復(fù)性的結(jié)果，牡荊素注射劑對(duì)同種動(dòng)物移植性腫瘤具有一定的生長(zhǎng)抑制作用。材料：動(dòng)物：C57BL/6小鼠。瘤株：小鼠Lewis肺癌。器材：手術(shù)刀、剪、鑷子，注射器，玻璃勻漿器或套管針，超凈工作臺(tái)。藥品及試劑：牡荊素注射劑實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水將藥物配成所需濃度的溶液，氟尿嘧啶(5-Fu)試驗(yàn)前用生理鹽水稀釋成所需濃度的溶液。方法：1.取瘤種用小鼠移植性腫瘤Lewis肺癌生長(zhǎng)良好的瘤源，無(wú)菌條件下取荷瘤動(dòng)物的實(shí)體瘤組織，用剪刀減成小碎塊，用套管針移植或玻璃勻漿器加無(wú)菌生理鹽水磨成勻漿，計(jì)數(shù)每1ml勻漿液中的瘤細(xì)胞數(shù)。2.接種瘤液給每只動(dòng)物皮下接種2×106細(xì)胞。3.分組給藥接種后24小時(shí)分組給藥，每組10只動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)共分5組，①陰性對(duì)照組，②氟尿嘧啶陽(yáng)性藥對(duì)照組，③牡荊素注射劑小劑量組3mg/kg，④牡荊素注射劑中劑量組6mg/kg，⑤牡荊素注射劑高劑量組12mg/kg。氟尿嘧啶25mg/kg隔日灌胃給藥，共給3次。牡荊素注射劑每天灌胃給藥1次，連續(xù)10天。4.稱瘤重末次給藥后24小時(shí)處死動(dòng)物、稱體重及剝瘤稱重，計(jì)算抑制率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)。計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率(％)，計(jì)算公式如下：腫瘤生長(zhǎng)抑制率％＝(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100％結(jié)果：牡荊素注射劑在3mg/kg、6mg/kg、12mg/kg的劑量時(shí)，對(duì)小鼠Lewis肺癌均有一定的抑制作用，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系。說(shuō)明牡荊素注射劑具有一定的抗腫瘤作用，結(jié)果如表2所示。表2小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)抑制情況(x±s，n＝10)組別劑量(mg/kg)體重(g)始/末瘤重(g)抑制率(％)對(duì)照--20.2/+2.13.00±0.68--5-Fu2520.0/+5.71.50±0.6250.0**牡荊素注射劑321.2+4.32.11±0.8730**牡荊素注射劑620.4+7.31.62±0.9446**牡荊素注射劑1220.5+6.51.51±0.8650**與對(duì)照組比：**P＜0.01由表2可知，牡荊素注射劑對(duì)小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)抑制有明顯作用，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且在12mg/kg劑量達(dá)到很好的效果，不低于陽(yáng)性對(duì)照藥。實(shí)施例6牡荊素注射劑對(duì)人小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用原料：裸鼠又稱無(wú)胸腺小鼠，具有四個(gè)特點(diǎn)：①先天性胸腺缺失，②胸腺依賴性免疫功能缺乏，其T細(xì)胞功能接近于零，但B細(xì)胞功能大致正常；③人體腫瘤異種移植時(shí)無(wú)排斥反應(yīng)，故可供人體腫瘤移植。異種移植后的人體腫瘤在裸鼠仍保持其原有的組織形態(tài)及免疫學(xué)特點(diǎn)以及特有的染色體組型和對(duì)抗腫瘤藥的原有敏感型。移植后的人腫瘤細(xì)胞仍保持其原有的性能。④裸鼠因皮膚無(wú)毛、操作方便，易于動(dòng)態(tài)觀察腫瘤的生長(zhǎng)狀態(tài)，牡荊素注射劑可抑制人小細(xì)胞肺癌在裸鼠的生長(zhǎng)。材料：動(dòng)物：裸鼠BALB/C/nu。瘤株：人小細(xì)胞肺癌。器材：手術(shù)用刀、剪、鑷子，注射器，玻璃勻漿器或套管針、游標(biāo)卡尺、超凈工作臺(tái)。藥品及試劑：牡荊素注射劑實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配成所需濃度的溶液，環(huán)磷酰胺實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配成所需濃度的溶液。方法：1.取瘤種并接種選擇腫瘤生長(zhǎng)旺盛的人小細(xì)胞肺癌荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死。在超凈臺(tái)用碘酒和酒精消毒動(dòng)物皮膚，剪開皮膚剝離腫瘤，用勻漿器將瘤組織加無(wú)菌生理鹽水制成細(xì)胞懸液，接種于動(dòng)物右上肢腋窩皮下，接種腫瘤細(xì)胞數(shù)約為5×104/只。2.分組給藥接種后第6天分組給藥并測(cè)量腫瘤體積。試驗(yàn)共設(shè)5組：①陰性對(duì)照組，②環(huán)磷酰胺陽(yáng)性藥對(duì)照組，③牡荊素注射劑低劑量組3mg/kg，④牡荊素注射劑中劑量組6mg/kg，⑤牡荊素注射劑高劑量組12mg/kg。環(huán)磷酰胺60mg/kg腹腔注射1次。牡荊素注射劑灌胃給藥每天一次，連續(xù)11天，停藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，剝瘤稱重，并用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法處理數(shù)據(jù)，進(jìn)行療效評(píng)分。相對(duì)瘤體積(mm3)＝1/2a2b(a為寬，b為長(zhǎng))；腫瘤生長(zhǎng)抑制率％＝(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100％結(jié)果：見表3和表4表3人小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制情況(雄性裸鼠)(x±s，n＝7)組別劑量(mg/kg)體重(g)始/末瘤重(g)抑制率(％)對(duì)照--20.8/+4.03.22±1.598--5-Fu6020.0/+3.00.12±0.06896.3**牡荊素注射劑321.1+4.02.44±1.51724.2牡荊素注射劑621.0+2.41.80±0.49244.1**牡荊素注射劑1220.0+1.81.45±0.57954.9**注：**P＜0.01表4人小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)抑制情況(雄性裸鼠)(x±s，n＝7)組別劑量(mg/kg)體重(g)始/末瘤重(g)抑制率(％)對(duì)照--19.9/+1.32.89±1.312--5-Fu6019.4/+1.20.17±0.05194.1**牡荊素注射劑319.6/+0.92.02±0.49830.1**牡荊素注射劑619.9/-0.71.26±0.65856.4**牡荊素注射劑1220.4/-0.41.08±0.77162.6**注：**P＜0.01由表3、表4可以看出，牡荊素注射劑在6mg/kg、12mg/kg劑量時(shí)，對(duì)荷瘤裸鼠人小細(xì)胞肺癌有較好的抑瘤作用，6mg/kg劑量時(shí)，雄鼠抑瘤率為44.1％(P＜0.01)，雌鼠抑瘤率為56.4％(P＜0.01)；12mg/kg劑量時(shí)，雄鼠抑瘤率為54.9％(P＜0.01，雌鼠抑瘤率為62.6％(P＜0.01)。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3