相關(guān)申請(qǐng)

本申請(qǐng)要求2014年6月11日提交的美國(guó)臨時(shí)序列號(hào)62/010,736的優(yōu)先權(quán)。該申請(qǐng)以引用方式全文并入本文。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及vista調(diào)節(jié)(抑制)b細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)現(xiàn)。基于該發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明涉及單獨(dú)使用vista激動(dòng)劑或與其他免疫抑制劑(immunesuppresser)諸如inos/no抑制劑相結(jié)合來(lái)抑制b細(xì)胞反應(yīng)以及治療其中降低的b細(xì)胞反應(yīng)在治療上是有益的病癥。另外，本發(fā)明涉及單獨(dú)使用或結(jié)合使用vista拮抗劑來(lái)促進(jìn)b細(xì)胞反應(yīng)以及治療其中增強(qiáng)的b細(xì)胞反應(yīng)在治療上是有益的病癥。

髓源性抑制細(xì)胞(mdsc)對(duì)t細(xì)胞反應(yīng)的抑制在腫瘤微環(huán)境中是明確的。本發(fā)明人證實(shí)了(2013,j.viral.87:2058-2071)在lp-bm5逆轉(zhuǎn)錄病毒感染易感b6小鼠的過(guò)程中對(duì)單核mdsc的誘導(dǎo)，這導(dǎo)致明顯的免疫缺陷。這些mdsc在離體抑制分析中不僅抑制了t細(xì)胞反應(yīng)還抑制了b細(xì)胞反應(yīng)。雖然mdsc對(duì)經(jīng)刺激的t細(xì)胞增殖和ifn-γ生成的抑制幾乎完全依賴于inos/no，但mdsc對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的抑制僅有大約50％依賴于inos/no，如通過(guò)使用inos抑制劑和inos敲除小鼠作為mdsc來(lái)源所顯示。

在這里，我們通過(guò)調(diào)查vista(一種新近描述的負(fù)向檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑)，進(jìn)一步研究了在b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制中的另外抑制機(jī)理。使用抗vista阻斷抗體和lp-bm5感染的vista-/-mdsc，b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制部分依賴于mdsc表達(dá)的vista。組合使用阻斷inos/no和vista兩者的試劑導(dǎo)致對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制的相加(如果不是協(xié)同)消除。這些結(jié)果與mdsc在lp-bm5誘導(dǎo)的免疫缺陷中的作用相符，并在對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制正在進(jìn)行研究的領(lǐng)域中強(qiáng)調(diào)了涉及多樣且獨(dú)特的抑制途徑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

如上所述，本發(fā)明涉及vista調(diào)節(jié)(抑制)b細(xì)胞反應(yīng)的發(fā)現(xiàn)?；谠摪l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明涉及使用vista激動(dòng)劑來(lái)抑制b細(xì)胞反應(yīng)以及治療其中降低的b細(xì)胞反應(yīng)在治療上是有益的病癥。另外，本發(fā)明涉及使用vista拮抗劑來(lái)促進(jìn)b細(xì)胞反應(yīng)以及治療其中增強(qiáng)的b細(xì)胞反應(yīng)在治療上是有益的病癥。

具體地講，將激動(dòng)性抗人vista抗體或抗體片段或vista多肽(例如vista融合蛋白)用于治療其中期望降低b細(xì)胞反應(yīng)的人病癥。具體地講，這在治療其中疾病病理學(xué)中涉及到b細(xì)胞反應(yīng)的自身免疫、過(guò)敏或炎性病癥時(shí)在治療上可能是期望的。

另外，拮抗性抗人vista抗體或抗體片段或vista多肽(例如vista片段和綴合物)可單獨(dú)使用或與抗原和可能另一種免疫激動(dòng)劑相結(jié)合，以便治療其中期望增加b細(xì)胞反應(yīng)的人病癥。具體地講，這在治療癌癥、感染性疾病以及在促進(jìn)疫苗(例如預(yù)防性疫苗和治療性疫苗)在引起對(duì)所需抗原(例如腫瘤抗原、自身抗原、或?qū)Ω腥疽蜃踊蛴筛腥疽蜃痈腥镜募?xì)胞特異性的抗原)的保護(hù)性b細(xì)胞免疫反應(yīng)的功效時(shí)在治療上可能是期望的。

vista是免疫球蛋白(ig)家族配體，命名為t細(xì)胞活化的v型結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白抑制劑(v-domainimmunoglobulinsuppressoroftcellactivation,vista)(genbank:jn602184)75。vista的關(guān)鍵特征包括以下這些。vista具有與pd-l1的有限同源性，但因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)而不屬于b7家族。vista僅在造血區(qū)室(hematopoieticcompartment)內(nèi)表達(dá)，其中在cd11b.sup.高骨髓細(xì)胞上的表達(dá)水平極高，而在cd4+和cd8+t細(xì)胞以及treg上的表達(dá)水平較低。在apc上表達(dá)的可溶性vista-ig融合蛋白或vista充當(dāng)通過(guò)與pd-1無(wú)關(guān)的尚未鑒定的受體來(lái)抑制cd4+和cd8+t細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生的配體?？箆istamab(13f3)通過(guò)增強(qiáng)抗腫瘤t細(xì)胞反應(yīng)在多種鼠腫瘤模型中體外逆轉(zhuǎn)vista介導(dǎo)的t細(xì)胞抑制并抑制腫瘤生長(zhǎng)。在腫瘤細(xì)胞上的vista過(guò)表達(dá)削弱了接種疫苗的宿主中的保護(hù)性抗腫瘤免疫。vistako小鼠產(chǎn)生導(dǎo)致外周耐受損失的炎癥表型。參見(jiàn)美國(guó)專利no.8,236,304和8,231,872，已公布的國(guó)際申請(qǐng)wo/2011/120013和wo/2006/116181，美國(guó)已公布的申請(qǐng)no.2008/0287358、2011/0027278和2012/0195894，以及美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列no.60/674,567(2005年4月25日提交)、61/663,431(2012年6月22日提交)、序列no.61/663,969(2012年6月25日提交)、61/390,434(2010年10月6日提交)、61/436,379(2011年1月26日提交)和61/449,882(2011年3月7日提交)，這些專利的每一者據(jù)此以引用方式全文并入。

因此，眾所周知的是，vista是一種關(guān)鍵性調(diào)節(jié)t細(xì)胞相關(guān)免疫反應(yīng)的免疫檢查點(diǎn)蛋白配體。然而，在本發(fā)明之前，尚不清楚vista還調(diào)節(jié)b細(xì)胞反應(yīng)。

髓源性抑制細(xì)胞(mdsc)對(duì)t細(xì)胞反應(yīng)的抑制在腫瘤微環(huán)境中是明確的。然而，它們對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的作用遠(yuǎn)不夠清楚。在這里，我們證實(shí)了在b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制中的另外抑制機(jī)理涉及vista，一種負(fù)向檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑。使用抗vista阻斷抗體和lp-bm5感染的vista-/-mdsc，b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制部分依賴于mdsc表達(dá)的vista。組合使用阻斷inos/no和vista兩者的試劑導(dǎo)致了對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制的相加(如果不是協(xié)同)消除。這些結(jié)果表明mdsc在lp-bm5誘導(dǎo)的免疫缺陷中發(fā)揮積極作用，并在對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制正在進(jìn)行研究的領(lǐng)域中強(qiáng)調(diào)了涉及多樣且獨(dú)特的抑制途徑。

本發(fā)明的示例性實(shí)施方案

本發(fā)明提供抑制或逆轉(zhuǎn)有需要的受試者中的vista介導(dǎo)的體液免疫抑制的方法，該方法包括例如在包括其中b細(xì)胞免疫受到抑制的癌癥或感染性疾病病癥的受試者中單獨(dú)或與另一種免疫激動(dòng)劑相結(jié)合施用vista拮抗劑。

本發(fā)明還提供促進(jìn)或增加有需要的受試者中的vista介導(dǎo)的體液免疫抑制的方法，該方法包括例如在包括其中疾病病理學(xué)中涉及到b細(xì)胞或抗體反應(yīng)的自身免疫、過(guò)敏、炎性或感染性病癥的受試者中單獨(dú)或與另一種免疫拮抗劑相結(jié)合施用vista激動(dòng)劑。

本發(fā)明還提供抑制有需要的受試者中的b細(xì)胞增殖或b細(xì)胞反應(yīng)(包括但不限于抗原特異性抗體反應(yīng))的方法，該方法包括施用vista激動(dòng)劑，例如包括其中疾病病理學(xué)中涉及到b細(xì)胞或抗體反應(yīng)的自身免疫、過(guò)敏、炎性或感染性病癥的受試者。

本發(fā)明還提供增加有需要的受試者中的b細(xì)胞增殖或b細(xì)胞反應(yīng)(包括但不限于抗原特異性抗體反應(yīng))的方法，該方法包括施用vista激動(dòng)劑，例如包括其中b細(xì)胞免疫受到抑制的癌癥或感染性疾病病癥的受試者

本發(fā)明還提供促進(jìn)針對(duì)抗原或治療性抗體引起的體液免疫反應(yīng)的方法，該方法包括在包括使用vista拮抗劑的治療性方案中施用此類抗原或抗體，例如，其中抗原是腫瘤抗原、自身抗原、過(guò)敏原或感染因子抗原，或抗體是腫瘤抗原、自身抗原、過(guò)敏原或感染因子抗原特異性的。

本發(fā)明還提供促進(jìn)由治療性或預(yù)防性疫苗引起的體液免疫反應(yīng)的方法，該方法包括在包括使用vista拮抗劑的治療性方案中施用此類疫苗，例如，其中疫苗含有腫瘤抗原、自身抗原、過(guò)敏原或感染因子抗原。

本發(fā)明還提供使用vista拮抗劑和inos/no抑制劑促進(jìn)體液免疫反應(yīng)的方法，該抑制劑例如為精氨酸衍生物，任選地ng-硝基-l-精氨酸甲酯、ng-乙基-l-精氨酸、n-亞氨乙基-l-精氨酸、l-ng-甲基精氨酸和ng-硝基-l-精氨酸或該抑制劑為ng-硝基-l-精氨酸甲酯或洛伐他汀(lovastatin)、苯乙酸鈉鹽(napa)、fpt抑制劑ii、n-乙酰半胱氨酸(nac)以及camp或us6,586,474、6,545,170、6,593,372、6,787,668、6,809,117、6,591,889、7,196,118、7,049,058中所公開(kāi)的任何inos/no抑制劑；所有這些專利均以引用方式全文并入本文。

本發(fā)明還提供使用vista激動(dòng)劑和inos/no促進(jìn)劑(例如一氧化氮或包含一氧化氮的化合物)抑制體液免疫反應(yīng)的方法。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista拮抗劑可包括拮抗性抗vista抗體、或vista的片段。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista激動(dòng)劑可包括激動(dòng)性抗人vista抗體或抗體片段或vista-ig綴合物或vista的多聚形式，例如，其中vista-ig包含igg1、igg2、igg3或igg4fc區(qū)或其片段，其可任選地進(jìn)行修飾以便削弱或增強(qiáng)至少一種效應(yīng)功能，或可包含人抗體或人源化抗體。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista拮抗劑或激動(dòng)劑可與pd-1或pd-l1激動(dòng)劑或pd-1或pd-l1拮抗劑(例如，抗pd-1抗體、或抗pd-l1抗體)或pd-1融合蛋白、或表達(dá)pd-1或pd-l1的細(xì)胞結(jié)合使用。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista拮抗劑和inos/no抑制劑一起施用。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista激動(dòng)劑和inos/no促進(jìn)劑一起施用。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista拮抗劑和inos/no抑制劑在促進(jìn)b細(xì)胞免疫的治療性方案中分開(kāi)施用。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista拮抗劑化合物和inos/no抑制劑化合物以相對(duì)于單獨(dú)施用的這些化合物中的任一種足以引起對(duì)體液免疫的協(xié)同作用的量施用。

在前述實(shí)施方案的任一個(gè)中，vista激動(dòng)劑化合物和inos/no促進(jìn)劑或一氧化氮以相對(duì)于單獨(dú)施用的這些化合物中的任一種足以引起對(duì)體液免疫的協(xié)同作用的量施用。

附圖簡(jiǎn)述

圖1a-b示出了脾細(xì)胞vista表達(dá)因體內(nèi)lp-bm5感染而增加。

圖2a-c示出了ly6c+cd11b+純化的脾細(xì)胞對(duì)于抑制體外b和t細(xì)胞增殖具有不同的機(jī)理要求。

圖3示出了將以3:1的反應(yīng)細(xì)胞與抑制細(xì)胞(r:s)比率與a-vista預(yù)處理的ly6c+cd11b+mdsc混合的初始vista-/-反應(yīng)脾細(xì)胞用α-cd40和il-4刺激三天。

圖4示出了得自指定品系的5周lp-bm5感染小鼠的純化單核mdsc(ly6c+cd11b+)顯示出不同的對(duì)初始vista-/-脾細(xì)胞增殖的抑制模式，如通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)所評(píng)估。

圖5a-b示出了b細(xì)胞增殖的單核細(xì)胞抑制取決于兩大機(jī)理inos/no和vista。

具體實(shí)施方式

在詳細(xì)描述本發(fā)明前，提供以下定義。

除非另外定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。雖然與本文所述的那些類似或等效的方法和材料均可用于本發(fā)明或本發(fā)明的測(cè)試，但是本文描述合適的方法和材料。材料、方法和實(shí)例僅為說(shuō)明性的，并且無(wú)意進(jìn)行限制。

如本文描述和隨附權(quán)利要求書(shū)通篇所用，除非上下文另外明確規(guī)定，否則“一個(gè)(種)(a,an)”和“該(所述)(the)”的含義包括多個(gè)指代物。

術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌性”是指或描述哺乳動(dòng)物中特征通常在于不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)的生理狀況。癌癥的實(shí)例包括但不限于癌(carcinoma)、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病。此類癌癥的更具體實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌和肺鱗癌)、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌(包括胃腸癌)、胰腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepaticcarcinoma)和各種類型的頭頸癌以及b細(xì)胞淋巴瘤(包括低級(jí)/濾泡非霍奇金氏淋巴瘤(non-hodgkin'slymphoma；nhl)；小淋巴細(xì)胞性(sl)nhl；中級(jí)/濾泡nhl；中級(jí)彌漫性nhl；高級(jí)成免疫細(xì)胞性nhl；高級(jí)成淋巴細(xì)胞性nhl；高級(jí)小無(wú)核裂細(xì)胞性nhl；腫塊性疾病nhl(bulkydiseasenhl)；套細(xì)胞淋巴瘤；aids相關(guān)淋巴瘤；和瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥(macroglobulinemia))；慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)；急性成淋巴細(xì)胞性白血病(all)；毛細(xì)胞白血??；慢性成髓細(xì)胞性白血病；多發(fā)性骨髓瘤和移植后淋巴細(xì)胞增生性障礙(ptld)。

依從本發(fā)明的治療的示例性癌癥包括但不限于癌、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性疾病。此類癌癥的更具體實(shí)例包括結(jié)直腸癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、鱗狀細(xì)胞癌、肺癌(包括小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌和肺鱗癌)、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌(包括胃腸癌)、胰腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、肝癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌瘤和各種類型的頭頸癌以及b細(xì)胞淋巴瘤(包括低級(jí)/濾泡非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)；小淋巴細(xì)胞性(sl)nhl；中級(jí)/濾泡nhl；中級(jí)彌漫性nhl；高級(jí)成免疫細(xì)胞性nhl；高級(jí)成淋巴細(xì)胞性nhl；高級(jí)小無(wú)核裂細(xì)胞性nhl；腫塊性疾病nhl；套細(xì)胞淋巴瘤；aids相關(guān)淋巴瘤；和瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥)；慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)；急性成淋巴細(xì)胞性白血病(all)；毛細(xì)胞白血??；慢性成髓細(xì)胞性白血??；和移植后淋巴細(xì)胞增生性障礙(ptld)，以及與瘢痣病相關(guān)的異常血管增殖、水腫(如與腦腫瘤相關(guān)的水腫)和梅格斯氏綜合征(meigs'syndrome)。優(yōu)選地，癌癥選自結(jié)直腸癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、腎細(xì)胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、軟組織肉瘤、卡波西氏肉瘤(kaposi'ssarcoma)、類癌瘤癌、頭頸癌、黑素瘤、卵巢癌、間皮瘤和多發(fā)性骨髓瘤。在一個(gè)示例性實(shí)施方案中，癌癥是早期或晚期(包括轉(zhuǎn)移性)膀胱癌、卵巢癌或黑素瘤。在另一個(gè)實(shí)施方案中，癌癥是結(jié)直腸癌。依從本發(fā)明的治療的癌性病癥包括轉(zhuǎn)移性癌癥，其中髓源性抑制細(xì)胞的vista表達(dá)會(huì)抑制抗腫瘤反應(yīng)和抗侵襲性免疫反應(yīng)。本發(fā)明的方法特別適于治療血管化腫瘤。

本發(fā)明還適用于與化學(xué)療法或放射療法或其他生物制品組合治療癌癥并且適于增強(qiáng)其活性，即在其中髓源性抑制細(xì)胞的vista表達(dá)會(huì)抑制抗腫瘤反應(yīng)和化學(xué)療法或放射療法的功效或生物制品功效的個(gè)體中增強(qiáng)其活性?？筛鶕?jù)本發(fā)明使用表現(xiàn)出抗癌活性的任何化學(xué)治療劑。優(yōu)選地，化學(xué)治療劑選自烷化劑、抗代謝物、葉酸類似物、嘧啶類似物、嘌呤類似物及相關(guān)抑制劑、長(zhǎng)春花生物堿、表鬼臼毒素、抗生素、l-天冬酰胺酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、干擾素、鉑配位復(fù)合物、蒽二酮取代的脲、甲基肼衍生物、腎上腺皮質(zhì)抑制劑、腎上腺皮質(zhì)激素、孕酮、雌激素、抗雌激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素釋放激素類似物。更優(yōu)選地，化學(xué)治療劑選自5-氟尿嘧啶(5-fu)、亞葉酸(lv)、伊立替康(irinotecan)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、卡培他濱(capecitabine)、紫杉醇(paclitaxel)和多西他賽(docetaxel)。兩種或更多種化學(xué)治療劑可以按混合物的形式用于與抗vegf抗體的施用組合施用。一種優(yōu)選的組合化學(xué)療法基于氟尿嘧啶，其包含5-fu和一種或多種其他化學(xué)治療劑。組合化學(xué)療法的合適給藥方案在本領(lǐng)域中是已知的并且在例如saltz等(1999)proc.asco18:233a和douillard等(2000)lancet355:1041-7中有所描述。生物制品可以是另一免疫增效劑，諸如pd-l1、pd-l2、ctla-4的抗體和pd-l1、pd-l2、ctla-4融合蛋白以及細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子拮抗劑和激動(dòng)劑、激素和抗細(xì)胞因子抗體。

如本文所用的“活化受體”泛指結(jié)合抗原、復(fù)合抗原(例如在mhc分子的情形下)、ig-融合蛋白、配體或抗體的免疫細(xì)胞受體?；罨荏w但不限于t細(xì)胞受體(tcr)、b細(xì)胞受體(bcr)、細(xì)胞因子受體、lps受體、補(bǔ)體受體和fc受體。例如，t細(xì)胞受體存在于t細(xì)胞上并且與cd3分子相關(guān)聯(lián)。t細(xì)胞受體在mhc分子的情形下受抗原的刺激(以及受多克隆t細(xì)胞活化試劑的刺激)。通過(guò)tcr發(fā)生的t細(xì)胞活化導(dǎo)致許多變化，例如蛋白質(zhì)磷酸化、膜脂質(zhì)變化、離子流、環(huán)核苷酸改變、rna轉(zhuǎn)錄變化、蛋白質(zhì)合成變化以及細(xì)胞容積變化。例如，t細(xì)胞受體存在于t細(xì)胞上并且與cd3分子相關(guān)聯(lián)。t細(xì)胞受體在mhc分子的情形下受抗原的刺激(以及受多克隆t細(xì)胞活化試劑的刺激)。通過(guò)tcr發(fā)生的t細(xì)胞活化導(dǎo)致許多變化，例如蛋白質(zhì)磷酸化、膜脂質(zhì)變化、離子流、環(huán)核苷酸改變、rna轉(zhuǎn)錄變化、蛋白質(zhì)合成變化以及細(xì)胞容積變化。

如本文所用，“抗原呈遞細(xì)胞”泛指專職性抗原呈遞細(xì)胞(例如b淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和朗格漢斯細(xì)胞(langerhanscell))以及其他抗原呈遞細(xì)胞(例如角質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞)。

如本文所用，“氨基酸”泛指天然存在的氨基酸和合成的氨基酸，以及以類似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。天然存在的氨基酸是由遺傳密碼編碼的氨基酸，以及隨后被修飾的那些氨基酸(例如羥脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和o-磷酸絲氨酸)。氨基酸類似物是指基本化學(xué)結(jié)構(gòu)與天然存在的氨基酸相同(即，碳結(jié)合至氫、羧基、氨基)并且具有r基團(tuán)(例如高絲氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亞砜、蛋氨酸甲基锍)的化合物。類似物可以具有經(jīng)修飾的r基團(tuán)(例如正亮氨酸)或經(jīng)修飾的肽主鏈，但是保留與天然存在的氨基酸相同的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)。氨基酸模擬物是指結(jié)構(gòu)不同于氨基酸的一般化學(xué)結(jié)構(gòu)，但仍以類似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化合物。

如本文所用，“無(wú)變應(yīng)性”或“耐受性”泛指對(duì)活化受體介導(dǎo)的刺激的折射性。折射性通常為抗原特異性的，并在停止暴露于耐受抗原后仍然存在。例如，t細(xì)胞中的無(wú)變應(yīng)性(與無(wú)反應(yīng)性相對(duì))的特征在于缺乏細(xì)胞因子的產(chǎn)生，如il-2。在t細(xì)胞暴露于抗原并在不存在第二信號(hào)(共刺激信號(hào))下收到第一信號(hào)(t細(xì)胞受體或cd-3介導(dǎo)的信號(hào))時(shí)發(fā)生t細(xì)胞無(wú)變應(yīng)性。在這些條件下，再次將細(xì)胞暴露于相同的抗原(即便在存在共刺激分子的情況下發(fā)生再次暴露)將導(dǎo)致不能產(chǎn)生細(xì)胞因子，并因此不能增殖。然而，無(wú)變應(yīng)性t細(xì)胞可對(duì)不相關(guān)抗原發(fā)生反應(yīng)，并且可在用細(xì)胞因子(如il-2)培養(yǎng)時(shí)增殖。例如，t細(xì)胞無(wú)變應(yīng)性也可通過(guò)t淋巴細(xì)胞缺乏il-2的產(chǎn)生而觀測(cè)到，如通過(guò)elisa或通過(guò)使用指示細(xì)胞系進(jìn)行增殖分析來(lái)測(cè)量?；蛘撸墒褂脠?bào)告基因構(gòu)建體。例如，無(wú)變應(yīng)性t細(xì)胞不能引發(fā)由異源啟動(dòng)子在5'il-2基因增強(qiáng)子控制下誘導(dǎo)的或由可見(jiàn)于增強(qiáng)子內(nèi)的api序列的多聚體誘導(dǎo)的il-2基因轉(zhuǎn)錄(kang等(1992)science,257:1134)。共刺激信號(hào)的調(diào)節(jié)導(dǎo)致免疫細(xì)胞的效應(yīng)功能的調(diào)節(jié)。因此，術(shù)語(yǔ)“pd-l3或vista活性”包括pd-l3或vista多肽結(jié)合其天然結(jié)合伴侶的能力、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞共刺激或抑制信號(hào)的能力以及調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的能力。免疫細(xì)胞中抑制信號(hào)的調(diào)節(jié)導(dǎo)致免疫細(xì)胞增殖和/或免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子受到調(diào)節(jié)。

如本文所用，“抗體”泛指抗體的“抗原結(jié)合部分”(還可與“抗體部分”、“抗原結(jié)合片段”、“抗體片段”互換使用)以及整個(gè)抗體分子。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗原結(jié)合部分”是指保留特異性結(jié)合至抗原(例如vista(pd-l3)的能力的抗體的一個(gè)或多個(gè)片段?？贵w的抗原結(jié)合功能可通過(guò)全長(zhǎng)抗體的片段執(zhí)行。術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合部分”所涵蓋的抗原結(jié)合片段的實(shí)例包括：(a)fab片段，其為由vl、vh、cl和ch1結(jié)構(gòu)域組成的單價(jià)片段；(b)f(ab')2片段，其為包含由鉸鏈區(qū)的二硫橋連接的兩個(gè)fab片段的二價(jià)片段；(c)由vh和ch1結(jié)構(gòu)域組成的fd片段；(d)由抗體的單臂的vl和vh結(jié)構(gòu)域組成的fv片段；(e)dab片段(ward等(1989)nature,341:544-546)，其由vh結(jié)構(gòu)域組成；以及(f)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)。此外，雖然fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域vl和vh由單獨(dú)的基因編碼，但是它們可通過(guò)合成連接子使用重組方法而接合，所述合成連接子使得它們能夠被制備成單條蛋白質(zhì)鏈，其中vl和vh區(qū)配對(duì)形成單價(jià)分子(稱為單鏈fv(scfv))。參見(jiàn)例如bird等(1988)science242:423-426；huston等(1988)procnatl.acad.sci.usa85:5879-5883；和osbourn等(1998)nat.biotechnol.16:778。單鏈抗體也旨在被涵蓋在術(shù)語(yǔ)抗體的“抗原結(jié)合部分”的范圍內(nèi)。特定scfv的任何vh和vl序列都可連接至人免疫球蛋白恒定區(qū)cdna或基因組序列，以產(chǎn)生編碼完整igg分子或其他同種型的表達(dá)載體。vh和vl也可使用蛋白化學(xué)或重組dna技術(shù)用于產(chǎn)生fab、fv或免疫球蛋白的其他片段。其他形式的單鏈抗體諸如雙體抗體(diabody)也涵蓋在內(nèi)。雙體抗體是二價(jià)雙特異性抗體，其中vh和vl結(jié)構(gòu)域在單條多肽鏈上表達(dá)，但使用太短而不能在同一鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間配對(duì)的連接子，從而迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)并產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。參見(jiàn)例如holliger等(1993)procnatl.acad.sci.usa90:6444-6448；poljak等(1994)structure2:1121-1123。

更進(jìn)一步地，抗體或其抗原結(jié)合部分(抗原結(jié)合片段、抗體片段、抗體部分)可以是通過(guò)抗體或抗體部分與一種或多種其他蛋白質(zhì)或肽的共價(jià)或非共價(jià)締合而形成的較大免疫粘附分子的一部分。免疫粘附分子的實(shí)例包括使用鏈霉親和素核心區(qū)制備四聚scfv分子(kipriyanov等(1995)hum.antibodieshybridomas6:93-101)以及使用半胱氨酸殘基、標(biāo)記肽和c端多組氨酸標(biāo)簽制備二價(jià)和生物素化scfv分子。kipriyanov等(1994)molimmunol.31:1047-1058?？贵w部分諸如fab和f(ab')2片段可使用常規(guī)技術(shù)(諸如分別通過(guò)完整抗體的木瓜酶或胃蛋白酶消化)從整個(gè)抗體制備。此外，抗體、抗體部分和免疫粘附分子可使用標(biāo)準(zhǔn)重組dna技術(shù)獲得，如本文所述。

抗體可以是多克隆的、單克隆的、異種的、同種異體的、同基因的、或其修飾形式，例如人源化的、嵌合的。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗體特異性結(jié)合或基本上特異性結(jié)合至vista(pd-l3)分子。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”和“單克隆抗體組合物”是指這樣一群抗體分子，其僅含有一個(gè)種類的能夠與抗原的特定表位免疫反應(yīng)的抗原結(jié)合位點(diǎn)，而術(shù)語(yǔ)“多克隆抗體”和“多克隆抗體組合物”是指這樣一群抗體分子，其含有多個(gè)種類的能夠與特定抗原相互作用的抗原結(jié)合位點(diǎn)。單克隆抗體組合物通常顯示出對(duì)與其發(fā)生免疫反應(yīng)的特定抗原的單一結(jié)合親和力。

如本文所用，“抗原”泛指能夠由抗體結(jié)合的分子或分子的一部分，其另外能夠誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生能夠結(jié)合至所述抗原的表位的抗體。抗原可以具有一個(gè)表位或具有一個(gè)以上的表位。在本文中提及的特異性反應(yīng)表示抗原將以高度選擇性的方式與其相應(yīng)抗體而非與眾多可能由其他抗原激發(fā)的其他抗體反應(yīng)。在對(duì)所關(guān)注的特定抗原有所需增強(qiáng)的免疫反應(yīng)的情況下，抗原包括但不限于示例性的感染性疾病抗原，針對(duì)其可引發(fā)保護(hù)性免疫反應(yīng)。

如本文所用，“過(guò)敏性疾病”泛指涉及過(guò)敏反應(yīng)的疾病。更具體地講，將“過(guò)敏性疾病”定義為一種鑒定出過(guò)敏原的疾病，其中在暴露于該過(guò)敏原與病理變化發(fā)作之間有強(qiáng)相關(guān)性，并且其中已經(jīng)證明所述病理變化具有免疫學(xué)機(jī)理。在本文中，免疫學(xué)機(jī)理意指白細(xì)胞顯示對(duì)過(guò)敏原刺激的免疫反應(yīng)。

如本文所用，“反義核酸分子”泛指與編碼蛋白質(zhì)的“有義”核酸互補(bǔ)(例如與雙鏈cdna分子的編碼鏈互補(bǔ))、與mrna序列互補(bǔ)或與基因的編碼鏈互補(bǔ)的核苷酸序列。因此，反義核酸分子可通過(guò)氫鍵結(jié)合至有義核酸分子。

如本文所用，“哮喘”泛指特征在于炎癥、氣管變窄和氣管對(duì)吸入劑的反應(yīng)性提高的呼吸系統(tǒng)的病狀。哮喘經(jīng)常但不是僅僅與特應(yīng)性或過(guò)敏性癥狀相關(guān)。

如本文所用，“凋亡”泛指程序性細(xì)胞死亡，其可使用在本領(lǐng)域中已知的技術(shù)表征。凋亡性細(xì)胞死亡的特征可在于在細(xì)胞分裂中以細(xì)胞收縮、膜起泡和染色質(zhì)凝聚告終。正經(jīng)歷凋亡的細(xì)胞還顯示核小體間dna裂解的特征模式。

如本文所用，“自身免疫”或“自身免疫疾病或病癥”泛指由個(gè)體自身組織產(chǎn)生或針對(duì)個(gè)體自身組織而產(chǎn)生的疾病或病狀，或其共分離(co-segregate)或表現(xiàn)、或由其產(chǎn)生的病癥。

如本文所用，“b細(xì)胞受體(bcr)”泛指見(jiàn)于b細(xì)胞上的在膜ig(mig)與其他跨膜多肽(例如igα和igβ)之間的復(fù)合物。mig的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能由受體分子通過(guò)低聚抗原或多聚抗原交聯(lián)觸發(fā)。b細(xì)胞也可通過(guò)抗免疫球蛋白抗體活化。在bcr活化時(shí)，在b細(xì)胞中發(fā)生許多變化，包括酪氨酸磷酸化。

如本文所用，“癌癥”泛指特征在于細(xì)胞分裂異常且不受控制從而導(dǎo)致惡性生長(zhǎng)或腫瘤(例如細(xì)胞生長(zhǎng)不受調(diào)節(jié))的任何贅生性疾病(無(wú)論是侵襲性還是轉(zhuǎn)移性的)。

如本文所用，“嵌合抗體”泛指這樣一種抗體分子，其中恒定區(qū)或其部分被改變、置換或交換以使抗原結(jié)合位點(diǎn)(可變區(qū))連接至不同或改變類別、效應(yīng)功能和/或物種的恒定區(qū)，或賦予嵌合抗體以新的性質(zhì)的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生長(zhǎng)因子、藥物，其可變區(qū)或部分用具有不同或改變的抗原特異性的可變區(qū)改變、置換或交換。

如本文所用，“編碼區(qū)”泛指包含翻譯成氨基酸殘基的密碼子的核苷酸序列區(qū)，而術(shù)語(yǔ)“非編碼區(qū)”是指不翻譯成氨基酸的核苷酸序列區(qū)(例如，5'和3'非翻譯區(qū))。

如本文所用，“保守修飾的變體”適用于氨基酸和核酸序列兩者，并且對(duì)于特定的核酸序列，泛指保守修飾的變體，是指編碼相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或者其中核酸不編碼基本上相同的序列的氨基酸序列。因?yàn)檫z傳密碼的簡(jiǎn)并性，所以大量功能上相同的核酸編碼任何給定的蛋白?！俺聊儺悺笔且环N保守修飾的核酸變異。在本文中編碼多肽的每一核酸序列都還描述該核酸的每一種可能的沉默變異。技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，可以修飾核酸中的每個(gè)密碼子(除通常作為蛋氨酸的唯一密碼子的aug以及通常作為色氨酸的唯一密碼子的tgg以外)以得到功能上相同的分子。

如本文所用，“互補(bǔ)決定區(qū)”、“高變區(qū)”或“cdr”泛指見(jiàn)于抗體輕鏈或重鏈可變區(qū)中的高變或互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)中的一個(gè)或多個(gè)。參見(jiàn)kabat等(1987)"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest"nationalinstitutesofhealth,bethesda,md。這些表述包括如由kabat等(1983)"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest"u.s.dept.ofhealthandhumanservices定義的高變區(qū)，或抗體3維結(jié)構(gòu)中的高變環(huán)。chothia和lesk(1987)jmol.biol.196:901-917。每條鏈中的cdr都保持在框架區(qū)的鄰近處，并且在來(lái)自其他鏈的cdr的存在下，有助于形成抗原結(jié)合位點(diǎn)。在cdr內(nèi)，存在已被稱為選擇性決定區(qū)(sdr)的所選氨基酸，其表示在抗體-抗原相互作用中被cdr所用的關(guān)鍵性接觸殘基。kashmiri(2005)methods36:25-34。

如本文所用，“對(duì)照量”泛指標(biāo)志物可以是任何量或一定范圍的量以與標(biāo)志物的測(cè)試量進(jìn)行比較。例如，標(biāo)志物的對(duì)照量可以是在患有特定疾病或病癥的患者或沒(méi)有這種疾病或病癥的人的體內(nèi)標(biāo)志物的量。對(duì)照量可為絕對(duì)量(例如微克/10或者相對(duì)量(例如相對(duì)信號(hào)強(qiáng)度)。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“共刺激受體”泛指將共刺激信號(hào)傳送給免疫細(xì)胞的受體，如cd28或icos。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抑制性受體”包括將負(fù)信號(hào)傳遞給免疫細(xì)胞的受體。

如本文所用，“共刺激”泛指共刺激分子提供第二、非活化性、受體介導(dǎo)的信號(hào)(“共刺激信號(hào)”)的能力，所述信號(hào)誘導(dǎo)增殖或效應(yīng)功能。例如，共刺激信號(hào)可引起細(xì)胞因子分泌(例如在收到了t細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號(hào)的t細(xì)胞中)。已經(jīng)收到細(xì)胞受體介導(dǎo)的信號(hào)(例如通過(guò)活化性受體)的免疫細(xì)胞在本文中可稱為“活化的免疫細(xì)胞”。

如本文所用，“胞漿結(jié)構(gòu)域”泛指延伸至細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)的部分。

如本文所用，“診斷”泛指鑒定病理狀況的存在或性質(zhì)。診斷方法的靈敏性和特異性存在差異。診斷分析法的“靈敏性”是測(cè)試陽(yáng)性的患病個(gè)體的百分比(“真陽(yáng)性”的百分比)。分析法未檢出的患病個(gè)體是“假陰性”。將沒(méi)有患病和在分析法中測(cè)試陰性的受試者稱為“真陰性”。診斷分析法的“特異性”是1減去假陽(yáng)性率，其中將“假陽(yáng)性”率定義為沒(méi)有疾病而測(cè)試為陽(yáng)性的受試者的比例。雖然特定的診斷方法可能不提供對(duì)病癥的明確診斷，但是如果所述方法提供有助于診斷的陽(yáng)性指示，那么也就夠了。

如本文所用，“診斷”泛指對(duì)疾病或癥狀分類、確定疾病嚴(yán)重性、監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展、預(yù)測(cè)疾病后果和/或痊愈希望。術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)”也可以任選地涵蓋任一前述內(nèi)容。在一些實(shí)施方案中，可如下實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明來(lái)診斷疾?。捍_定在得自受試者的生物樣品中本發(fā)明的多核苷酸或多肽的水平，其中可將所確定的水平與疾病傾向或存在或不存在所述疾病相關(guān)聯(lián)。應(yīng)當(dāng)注意，“得自受試者的生物樣品”也可以任選地包括還沒(méi)有從受試者身體上取出的樣品。

如本文所用，“有效量”泛指化合物、抗體、抗原或細(xì)胞當(dāng)施用于患者以治療疾病時(shí)足以實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病的這種治療的量。有效量可為有效用于預(yù)防的量和/或有效用于防止的量。有效量可為有效減輕體征/癥狀的量、有效防止體征/癥狀的出現(xiàn)、降低體征/癥狀出現(xiàn)的嚴(yán)重性、消除體征/癥狀出現(xiàn)、減緩體征/癥狀出現(xiàn)的發(fā)展、防止體征/癥狀出現(xiàn)的發(fā)展和/或?qū)崿F(xiàn)體征/癥狀出現(xiàn)的預(yù)防的量。“有效量”可根據(jù)待治療患者的疾病及其嚴(yán)重性以及年齡、體重、病史、易感性和預(yù)先存在的病癥而變化。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語(yǔ)“有效量”與“治療有效量”同義。

如本文所用，“胞外結(jié)構(gòu)域”泛指從細(xì)胞表面延伸出的蛋白質(zhì)的部分。

如本文所用，“表達(dá)載體”泛指用于在任何細(xì)胞(包括原核、酵母、真菌、植物、昆蟲(chóng)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中在體外或體內(nèi)組成型或誘導(dǎo)型表達(dá)本發(fā)明的核酸序列的目的的任何重組表達(dá)系統(tǒng)。該術(shù)語(yǔ)包括線性或環(huán)狀表達(dá)系統(tǒng)。該術(shù)語(yǔ)包括保持游離型或整合到宿主細(xì)胞基因組中的表達(dá)系統(tǒng)。表達(dá)系統(tǒng)可具有自我復(fù)制的能力或不具有該能力，即僅驅(qū)動(dòng)在細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)。該術(shù)語(yǔ)包括重組表達(dá)盒，該重組表達(dá)盒僅含有重組核酸的轉(zhuǎn)錄所需的最小元件。

如本文所用，“家族”泛指本發(fā)明的多肽和核酸分子，其旨在意指具有共同結(jié)構(gòu)域或基序并且具有足夠氨基酸或核苷酸序列同源性(如本文所定義)的兩個(gè)或更多個(gè)多肽或核酸分子。家族成員可以為天然或非天然存在的并且可來(lái)自相同或不同的物種。例如，家族可含有人來(lái)源以及其他來(lái)源的第一多肽、人來(lái)源的不同多肽，或者可含有非人來(lái)源的同系物(例如猴多肽)。家族成員也可以具有共同的功能特征。

如本文所用，“fc受體”(fcr)泛指免疫球蛋白分子(ig)的fc部分的細(xì)胞表面受體。fc受體見(jiàn)于許多參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞。在迄今為止已經(jīng)鑒定的人fcr之中，有識(shí)別igg(命名為fcγr)、ige(fcεr1)、iga(feαr)和聚合igm/a(fcμαr)的那些。fcr見(jiàn)于以下細(xì)胞類型中：fcεri(肥大細(xì)胞)、fcεrii(許多白細(xì)胞)、fcαr(嗜中性粒細(xì)胞)和fcμαr(腺上皮、肝細(xì)胞)。hogg(1988)immunoltoday9:185-86。廣泛研究的fcγr為細(xì)胞免疫防御中的核心，并且負(fù)責(zé)刺激自身免疫疾病的發(fā)病機(jī)理中涉及到的炎癥和水解酶的介體的釋放。unkeless(1988)annu.rev.immunol.6:251-87。fcγr在效應(yīng)細(xì)胞與分泌ig的淋巴細(xì)胞之間提供重要聯(lián)系，因?yàn)榫奘杉?xì)胞/單核細(xì)胞、多形核白細(xì)胞和自然殺傷(nk)細(xì)胞fcγr賦予由igg介導(dǎo)的特異性識(shí)別的元件。人白細(xì)胞具有igg的至少三個(gè)不同的受體：hfcγri(見(jiàn)于單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞上)、hfcγ.rii(見(jiàn)于單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、血小板、可能有β細(xì)胞和k562細(xì)胞系上)以及fcγiii(見(jiàn)于nk細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上)。

對(duì)于t細(xì)胞，共刺激信號(hào)向t細(xì)胞的傳送涉及不受環(huán)孢菌素a抑制的信號(hào)傳導(dǎo)途徑。另外，共刺激信號(hào)可在t細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌(例如il-2和/或il-10)和/或可在t細(xì)胞中防止誘導(dǎo)對(duì)抗原的無(wú)反應(yīng)性、誘導(dǎo)無(wú)變應(yīng)性或誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。

如本文所用，“框架區(qū)”或“fr”泛指在抗體輕鏈和重鏈的可變區(qū)內(nèi)的框架區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)。參見(jiàn)kabat等(1987)"sequencesofproteinsofimmunologicalinterest"nationalinstitutesofhealth,bethesda,md。這些表述包括插入抗體輕鏈和重鏈的可變區(qū)內(nèi)的cdr之間的那些氨基酸序列區(qū)。

如本文所用，“異源”泛指核酸的多個(gè)部分，其表明該核酸包含兩個(gè)或更多個(gè)在性質(zhì)上相互不以相同關(guān)系存在的子序列。例如，通常以重組方式產(chǎn)生核酸，使其具有兩個(gè)或更多個(gè)來(lái)自不相關(guān)基因、被布置成產(chǎn)生新的功能性核酸的序列(例如啟動(dòng)子來(lái)自一個(gè)來(lái)源而編碼區(qū)來(lái)自另一來(lái)源)。類似地，異源蛋白表明該蛋白質(zhì)包含兩個(gè)或更多個(gè)在性質(zhì)上相互不以相同關(guān)系存在的子序列(例如，融合蛋白)。

如本文所用，“高親和力”泛指抗體對(duì)靶抗原的kd為至少10^-8m、更優(yōu)選地至少10^-9m并且甚至更優(yōu)選地至少10^-10m。然而，“高親和力”結(jié)合可針對(duì)其他抗體同種型而變化。例如，對(duì)igm同種型的“高親和力”結(jié)合是指抗體的kd為至少10^-7m，更優(yōu)選地至少10^-8m。

如本文所用，“同源性”泛指在核酸序列與參考核酸序列之間或在多肽序列與參考多肽序列之間的相似性程度。同源性可以為部分的或完全的。完全同源性表示核酸或氨基酸序列是相同的。部分同源的核酸或氨基酸序列是與參考核酸或氨基酸序列不相同的核酸或氨基酸序列。同源性程度可通過(guò)序列比較來(lái)確定。術(shù)語(yǔ)“序列同一性”可與“同源性”互換使用。

如本文所用，“宿主細(xì)胞”泛指已引入了本發(fā)明的核酸分子諸如本發(fā)明的重組表達(dá)載體的細(xì)胞。宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞(例如大腸桿菌)，或真核細(xì)胞諸如酵母、昆蟲(chóng)(例如sf9)、兩棲動(dòng)物或哺乳動(dòng)物細(xì)胞諸如cho、hela、hek-293，例如培養(yǎng)的細(xì)胞、外植體和體內(nèi)細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“宿主細(xì)胞”和“重組宿主細(xì)胞”可在本文中互換使用。應(yīng)當(dāng)了解，這些術(shù)語(yǔ)不僅是指特定的受試者細(xì)胞，而且還指這種細(xì)胞的子代或可能的子代。因?yàn)楹蟠锌赡芤蛲蛔兓颦h(huán)境影響而出現(xiàn)某些改變，所以子代實(shí)際上可能不與親本細(xì)胞相同，但是仍包括在如本文所用的該術(shù)語(yǔ)的范圍內(nèi)。

如本文所用，“人源化抗體”泛指包括通過(guò)具有可變區(qū)和恒定區(qū)的非人細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，所述可變區(qū)和恒定區(qū)已發(fā)生改變從而與將通過(guò)人細(xì)胞產(chǎn)生的抗體更加密切相似。例如，通過(guò)改變非人抗體氨基酸序列以并入見(jiàn)于人種系免疫球蛋白序列中的氨基酸。本發(fā)明的人源化抗體可以包括不由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過(guò)體外隨機(jī)或位點(diǎn)特異性誘變或通過(guò)體內(nèi)體細(xì)胞突變所引入的突變)，例如在cdr中。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“人源化抗體”還包括這樣的抗體，其中已將來(lái)源于另一種哺乳動(dòng)物物種諸如小鼠的種系的cdr序列移植到人框架序列上。

如本文所用，“雜交”泛指互補(bǔ)的(包括部分互補(bǔ)的)多核苷酸鏈當(dāng)各鏈相互反平行布置時(shí)通過(guò)在互補(bǔ)核苷酸之間形成氫鍵而產(chǎn)生的物理相互作用。

如本文所用，“igv結(jié)構(gòu)域”和“igc結(jié)構(gòu)域”泛指ig超家族成員結(jié)構(gòu)域。這些結(jié)構(gòu)域?qū)?yīng)于具有不同折疊模式(稱為ig折疊)的結(jié)構(gòu)單元。ig折疊包含兩個(gè)β折疊的夾心結(jié)構(gòu)，每個(gè)β折疊由5-10個(gè)氨基酸的反平行β鏈與大多數(shù)但非全部結(jié)構(gòu)域中的兩個(gè)折疊之間的保守二硫鍵組成。ig、tcr和mhc分子的igc結(jié)構(gòu)域共有相同類型的序列模式并稱為ig超家族內(nèi)的c1組。其他igc結(jié)構(gòu)域落在其他組內(nèi)。igv結(jié)構(gòu)域也共有序列模式并稱為v組結(jié)構(gòu)域。igv結(jié)構(gòu)域長(zhǎng)于c結(jié)構(gòu)域并形成另外一對(duì)β鏈。

如本文所用，“免疫細(xì)胞”泛指具有造血來(lái)源并在免疫反應(yīng)中起作用的細(xì)胞。免疫細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞，諸如b細(xì)胞和t細(xì)胞；自然殺傷細(xì)胞；以及骨髓細(xì)胞，諸如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和粒細(xì)胞。

如本文所用，“免疫分析”泛指使用抗體來(lái)特異性結(jié)合抗原的分析法。免疫分析可通過(guò)使用特定抗體的特異性結(jié)合性質(zhì)以分離、靶向和/或定量抗原來(lái)表征。

如本文所用，“免疫反應(yīng)”泛指t細(xì)胞介導(dǎo)的和/或b細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，其受t細(xì)胞共刺激的調(diào)節(jié)的影響。示例性免疫反應(yīng)包括b細(xì)胞反應(yīng)(例如抗體產(chǎn)生)、t細(xì)胞反應(yīng)(例如細(xì)胞因子產(chǎn)生，以及細(xì)胞毒性)和細(xì)胞因子反應(yīng)性細(xì)胞例如巨噬細(xì)胞的活化。如本文所用，關(guān)于免疫反應(yīng)的術(shù)語(yǔ)“下調(diào)”包括任何一種或多種免疫反應(yīng)的降低，而關(guān)于免疫反應(yīng)的術(shù)語(yǔ)“上調(diào)”則包括任何一種或多種免疫反應(yīng)的提高。應(yīng)當(dāng)了解，一種類型的免疫反應(yīng)的上調(diào)可導(dǎo)致另一類型的免疫反應(yīng)的相應(yīng)下調(diào)。例如，某些細(xì)胞因子(例如il-10)的產(chǎn)生的上調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞免疫反應(yīng)的下調(diào)。

如本文所用，“炎性病癥或炎性疾病”泛指慢性或急性的炎性疾病。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抑制信號(hào)”泛指通過(guò)免疫細(xì)胞上的抑制性受體分子傳送的信號(hào)。信號(hào)通過(guò)活化受體(例如通過(guò)tcr、cd3、bcr或fc分子)拮抗信號(hào)并可導(dǎo)致例如以下方面的抑制：第二信使生成；增殖；或免疫細(xì)胞中的效應(yīng)功能，例如減少的吞噬作用、減少的抗體產(chǎn)生或降低的細(xì)胞毒性，或使免疫細(xì)胞無(wú)法產(chǎn)生介體(例如細(xì)胞因子(如il-2)和/或變應(yīng)性反應(yīng)介體)；或發(fā)生無(wú)變應(yīng)性。

如本文所用，“分離的”泛指物質(zhì)從其天然存在的原始環(huán)境移除，因此從其天然環(huán)境經(jīng)人手而改變。分離的物質(zhì)可以為例如載體系統(tǒng)中包括的外源性核酸、宿主細(xì)胞內(nèi)所含的外源性核酸，或已經(jīng)從其原始環(huán)境移除并因此經(jīng)人手而改變的任何物質(zhì)(例如“分離的抗體”)。例如，如本文所用，“分離的”或“純化的”泛指蛋白質(zhì)、dna、抗體、rna或其生物活性部分，它們基本上不含生物物質(zhì)所來(lái)源的細(xì)胞或組織源中的細(xì)胞物質(zhì)或其他污染性蛋白，或當(dāng)通過(guò)化學(xué)方法合成時(shí)基本上不含化學(xué)前體或其他化學(xué)物質(zhì)。用語(yǔ)“基本上不含細(xì)胞物質(zhì)”包括以下vista(pd-l3)蛋白制備物：其中該蛋白質(zhì)與其從中分離的細(xì)胞的細(xì)胞組分分離或重組產(chǎn)生。

如本文所用，“分離的抗體”意指基本上不含具有不同抗原特異性的其他抗體的抗體(例如，特異性結(jié)合pd-l3或vista的分離的抗體基本上不含特異性結(jié)合除pd-l3或vista以外的抗原的抗體)。此外，分離的抗體可以基本上不含其他細(xì)胞物質(zhì)和/或化學(xué)物質(zhì)。

如本文所用，“k-assoc”或“ka”泛指特定抗體-抗原相互作用的締合速率，而如本文所用，術(shù)語(yǔ)“kdiss”或“kd”是指特定抗體-抗原相互作用的解離速率。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“kd”意指解離常數(shù)，其得自kd與ka的比率(即kd/ka)并且表示為摩爾濃度(m)?？墒褂帽绢I(lǐng)域中公認(rèn)的方法測(cè)定抗體的kd值。

如本文所用，“標(biāo)記”或“可檢測(cè)部分”泛指可通過(guò)分光光度法、光化學(xué)、生化、免疫化學(xué)、化學(xué)或其他物理手段檢測(cè)的組合物。

如本文所用，“低嚴(yán)格度”、“中等嚴(yán)格度”、“高嚴(yán)格度”或“極高嚴(yán)格度條件”泛指核酸雜交和洗滌的條件。進(jìn)行雜交反應(yīng)的指導(dǎo)可見(jiàn)于ausubel等(2002)shortprotocolsinmolecularbiology(第5版)johnwiley&sons,ny。示例性的特異性雜交條件包括但不限于：(1)低嚴(yán)格度雜交條件：在6×氯化鈉/檸檬酸鈉(ssc)中在約45℃下，接著在0.2×ssc、0.1％sds中至少在50℃下洗滌兩次(對(duì)于低嚴(yán)格度條件，洗滌溫度可提高至55℃)；(2)中等嚴(yán)格度雜交條件：在6×ssc中在約45℃下，接著在0.2×ssc、0.1％sds中在60℃下洗滌一次或多次；(3)高嚴(yán)格度雜交條件：在6×ssc中在約45℃下，接著在0.2×ssc、0.1％sds中在65℃下洗滌一次或多次；以及(4)極高嚴(yán)格度雜交條件：0.5m磷酸鈉、7％sds，在65℃下，接著在0.2×ssc、1％sds中在65℃下洗滌一次或多次。

如本文所用，“哺乳動(dòng)物”泛指哺乳綱的任何及所有溫血脊椎動(dòng)物(包括人)，其特征在于皮膚上覆有毛發(fā)，并且雌性有滋養(yǎng)幼兒的產(chǎn)乳乳腺。哺乳動(dòng)物的實(shí)例包括但不限于羊駝、犰狳、水豚、貓、駱駝、黑猩猩、灰鼠、牛、狗、山羊、大猩猩、倉(cāng)鼠、馬、人、狐猴、美洲駝、小鼠、非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物、豬、大鼠、綿羊、駒鼯、松鼠、貘和田鼠。哺乳動(dòng)物包括但不限于?？苿?dòng)物、犬科動(dòng)物、馬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、鼠科動(dòng)物、綿羊(ovine)、豬科動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物物種。哺乳動(dòng)物還包括任何及所有由華盛頓哥倫比亞特區(qū)國(guó)家自然歷史博物館史密森學(xué)會(huì)(nationalmuseumofnaturalhistory,smithsonianinstitutioninwashingtondc)列在世界哺乳動(dòng)物物種(mammalspeciesoftheworld)上的那些動(dòng)物。

如本文所用，“天然存在的核酸分子”泛指具有存在于自然界中的核苷酸序列的rna或dna分子(例如編碼天然蛋白)。

如本文所用，“核酸”或“核酸序列”泛指呈單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸寡核苷酸。該術(shù)語(yǔ)涵蓋核酸，即寡核苷酸，其含有天然核苷酸的已知類似物。該術(shù)語(yǔ)還涵蓋具有合成主鏈的核酸樣結(jié)構(gòu)。除非另外指明，否則特定核酸序列還含蓄地涵蓋其保守修飾的變體(例如簡(jiǎn)并密碼子取代)和互補(bǔ)序列，以及明確指示的序列。術(shù)語(yǔ)核酸為可與基因、cdna、mrna、寡核苷酸和多核苷酸互換使用。

如本文所用，“寡聚化結(jié)構(gòu)域”泛指當(dāng)連接于vista胞外結(jié)構(gòu)域或其片段時(shí)有助于寡聚化的結(jié)構(gòu)域。所述寡聚結(jié)構(gòu)化域包含自締合α-螺旋，例如亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)，其可通過(guò)另外的二硫鍵進(jìn)一步穩(wěn)定。將所述結(jié)構(gòu)域設(shè)計(jì)為與跨膜的矢量折疊(vectorialfolding)相容，這一過(guò)程被認(rèn)為有助于多肽體內(nèi)折疊成功能性結(jié)合蛋白。其實(shí)例在本領(lǐng)域中是已知的，并且包括例如卷曲gcn4和comp。

α-螺旋型卷曲螺旋可能是見(jiàn)于蛋白中的最廣泛的亞單位寡聚化基序。因此，卷曲螺旋發(fā)揮許多不同的功能。在轉(zhuǎn)錄激活物的多個(gè)家族中，例如，短亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)在dna上定位dna結(jié)合區(qū)中發(fā)揮著重要作用。ellenberger等(1992)cell71:1223-1237。卷曲螺旋還用于形成中間絲蛋白的寡聚物。卷曲螺旋蛋白此外似乎還在囊泡和病毒膜融合中都發(fā)揮著重要作用。skehel和wiley(1998)cell95:871-874。在兩種情況中，嵌入待融合的膜中的疏水序列位于由一束長(zhǎng)α螺旋組成的桿狀復(fù)合體的同一端。這種分子排列據(jù)信會(huì)在組裝復(fù)合體以進(jìn)行膜融合時(shí)導(dǎo)致親密的膜并置。經(jīng)常將卷曲螺旋用于控制寡聚化。其見(jiàn)于許多類型的蛋白質(zhì)中，包括轉(zhuǎn)錄因子，包括但不限于gcn4、病毒融合肽、snare復(fù)合體以及某些trna合成酶等等。極長(zhǎng)的卷曲螺旋見(jiàn)于蛋白質(zhì)諸如原肌球蛋白、中間絲蛋白和紡錘極體組分中。卷曲螺旋涉及許多α-螺旋，它們圍繞彼此以高度組織化的形式(以平行或反平行取向締合)形成超螺旋。但二聚體和三聚體是最常見(jiàn)的。螺旋可以來(lái)自相同的或來(lái)自不同的蛋白質(zhì)。卷曲螺旋由匯合在一起以埋藏它們的疏水縫的組分螺旋形成。由于疏水縫圍繞每個(gè)螺旋扭曲，因此螺旋也繞彼此扭曲成圈，從而埋藏疏水縫并形成超螺旋。它是相鄰螺旋之間側(cè)鏈的特征性交錯(cuò)接合，稱為結(jié)節(jié)入洞堆積(knobs-into-holespacking)，其將該結(jié)構(gòu)定義為卷曲螺旋。對(duì)于發(fā)生這種類型的相互作用，螺旋不必以相同的方向行進(jìn)，但平行構(gòu)象更常見(jiàn)反平行構(gòu)象在三聚體中非常罕見(jiàn)，并且在五聚體中未知，但在分子內(nèi)二聚體中較常見(jiàn)，其中兩個(gè)螺旋通常通過(guò)短環(huán)連接。在細(xì)胞外間隙中，異源三聚卷曲螺旋蛋白層粘蛋白在基底膜的形成中起著重要作用。其他實(shí)例為血小板反應(yīng)蛋白和軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(comp)，其中連接了三條(血小板反應(yīng)蛋白1和2)或五條(血小板反應(yīng)蛋白3、4和comp)鏈。所述分子具有花束樣外觀，并且其寡聚結(jié)構(gòu)的原因可能是c端結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞受體的多價(jià)相互作用。酵母轉(zhuǎn)錄激活物gcn4是超過(guò)30種已鑒定的含堿性區(qū)亮氨酸拉鏈(bzip)dna結(jié)合基序的真核蛋白中的1種。ellenberger等(1992)cell71:1223-1237。bzip二聚體是一對(duì)連續(xù)的α螺旋，該螺旋在其羧基末端的34個(gè)殘基上方形成平行的卷曲螺旋并朝其氨基末端逐漸分開(kāi)以通過(guò)dna結(jié)合位點(diǎn)的大溝。卷曲螺旋二聚化接口幾乎垂直于dna軸線取向，從而使復(fù)合體具有字母t的外觀。bzip含有疏水非極性殘基的4-3七肽重復(fù)區(qū)域(heptadrepeat)，這些殘基以平行的α螺旋型卷曲螺旋堆疊在一起。ellenberger等(1992)cell71:1223-1237。二聚體的穩(wěn)定性由以下方面產(chǎn)生：亮氨酸以及七肽重復(fù)區(qū)域a和d位的非極性殘基的并列堆積(side-by-sidepacking)以及有限數(shù)量的螺旋內(nèi)和螺旋間鹽橋，如在gcn4亮氨酸拉鏈肽的晶體結(jié)構(gòu)中所示。ellenberger等(1992)cell71:1223-1237。另一實(shí)例為從牛氣管軟骨中而分離的作為mr52,000亞單位的同源三聚體的cmp(母系蛋白-1)(paulsson&heinegard(1981)biochemj.197:367-375)，其中每個(gè)亞單位由vwfal模塊、單個(gè)egf結(jié)構(gòu)域、vwfa2模塊以及跨五個(gè)七肽的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域組成。kiss等(1989)j.biol.chem.264:8126-8134；hauser和paulsson(1994)j.biol.chem.269:25747-25753。經(jīng)過(guò)純化的cmp的電子顯微鏡分析顯示出花束樣三聚體結(jié)構(gòu)，其中每個(gè)亞單位形成從對(duì)應(yīng)于卷曲螺旋的公共點(diǎn)顯露出來(lái)的橢圓體。hauser和paulsson(1994)j.biol.chem.269:25747-25753。母系蛋白-1中的卷曲螺旋域已得到了廣泛的研究。三聚體結(jié)構(gòu)在非變性條件下完全還原鏈間二硫鍵后得以保留。hauser和paulsson(1994)j.biol.chem.269:25747-25753。又一個(gè)實(shí)例為軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(comp)。非膠原性糖蛋白comp最初在軟骨中鑒定出。hedbom等(1992)j.biol.chem.267:6132-6136。所述蛋白為524kda的五個(gè)亞單位的同源五聚體，其由n端七肽重復(fù)區(qū)(cc)接著四個(gè)表皮生長(zhǎng)因子(egf)樣結(jié)構(gòu)域(ef)、七個(gè)鈣結(jié)合結(jié)構(gòu)域(t3)和c端球狀結(jié)構(gòu)域(tc)組成。根據(jù)這種結(jié)構(gòu)域組織，comp屬于血小板反應(yīng)蛋白家族。在位置a和d具有優(yōu)先疏水性殘基的七肽重復(fù)區(qū)(abcdefg)n形成螺旋型卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域。cohen和parry(1994)science263:488-489。最近，將comp的重組五鏈卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域(compcc)結(jié)晶，并以0.2nm的分辨率對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了解析。malashkevich等(1996)science274:761-765。

如本文所用，“可操作地連接”泛指當(dāng)兩個(gè)dna片段接合時(shí)使由兩個(gè)dna片段編碼的氨基酸序列保持同框。

如本文所用，“互補(bǔ)位”(paratope)泛指識(shí)別抗原的抗體部分(例如抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn))?；パa(bǔ)位可為抗體fv區(qū)的小區(qū)域(例如15-22個(gè)氨基酸)并且可以含有抗體重鏈和輕鏈的部分。參見(jiàn)goldsby等antigens(第3章)immunology(第5版)newyork:w.h.freemanandcompany,第57-75頁(yè)。

如本文所用，“患者”泛指需要治療以減輕疾病狀態(tài)或防止疾病狀態(tài)出現(xiàn)或復(fù)發(fā)的任何動(dòng)物。另外，如本文所用，“患者”泛指具有風(fēng)險(xiǎn)因素、疾病史、易感性、癥狀、體征、先前已診斷、處于疾病風(fēng)險(xiǎn)中或是疾病患者群體的成員的任何動(dòng)物?；颊呖蔀榕R床患者，諸如人或獸醫(yī)學(xué)患者，諸如伴侶動(dòng)物、馴化動(dòng)物、家畜動(dòng)物、外來(lái)動(dòng)物或動(dòng)物園動(dòng)物。術(shù)語(yǔ)“受試者”可與術(shù)語(yǔ)“患者”互換使用。

“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”可互換使用并且泛指氨基酸殘基的聚合物。該術(shù)語(yǔ)適用于以下氨基酸聚合物：其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是相應(yīng)天然存在的氨基酸的類似物或模擬物；以及適用于天然存在的氨基酸聚合物。該術(shù)語(yǔ)適用于以下氨基酸聚合物：其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基是相應(yīng)天然存在的氨基酸的人工化學(xué)模擬物；以及適用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物?？衫缤ㄟ^(guò)添加碳水化合物殘基以形成糖蛋白來(lái)修飾多肽。術(shù)語(yǔ)“多肽”、“肽”和“蛋白質(zhì)”包括糖蛋白以及非糖蛋白。

如本文所用，“啟動(dòng)子”泛指引導(dǎo)核酸轉(zhuǎn)錄的一系列核酸序列。如本文所用，啟動(dòng)子包括在起始轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)附近的必要的核酸序列，諸如在聚合酶ii型啟動(dòng)子的情況下是tata元件。啟動(dòng)子還任選地包括遠(yuǎn)端增強(qiáng)子或阻遏子元件，其可位于距離轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)幾千個(gè)堿基對(duì)之處?！敖M成型”啟動(dòng)子是在大多數(shù)環(huán)境和發(fā)育條件下具有活性的啟動(dòng)子?！罢T導(dǎo)型”啟動(dòng)子是在環(huán)境或發(fā)育調(diào)節(jié)下具有活性的啟動(dòng)子。

如本文所用，“預(yù)防有效量”泛指化合物當(dāng)施用于患者以預(yù)防疾病或防止疾病復(fù)發(fā)時(shí)足以對(duì)疾病或復(fù)發(fā)實(shí)現(xiàn)這種預(yù)防的量。預(yù)防有效量可為有效防止體征和/或癥狀出現(xiàn)的量?！邦A(yù)防有效量”可根據(jù)待治療患者的疾病及其嚴(yán)重性以及年齡、體重、病史、病癥傾向性和先前存在的病癥而變化。

如本文所用，“預(yù)防”泛指這樣一個(gè)療程，其中體征和/或癥狀不存在于患者中、處于緩解中或先前存在于患者中。預(yù)防包括防止在治療患者的疾病之后出現(xiàn)疾病。此外，防止包括治療可能會(huì)發(fā)生疾病的患者，尤其是對(duì)疾病易感的患者(例如，患者群體的成員、具有風(fēng)險(xiǎn)因素的那些患者、或處于發(fā)生疾病的風(fēng)險(xiǎn)中的那些)。

如本文所用，“重組”關(guān)于產(chǎn)品時(shí)例如泛指細(xì)胞或核酸、蛋白質(zhì)或載體，其表示所述細(xì)胞、核酸、蛋白質(zhì)或載體已經(jīng)通過(guò)引入異源核酸或蛋白質(zhì)或改變初始核酸或蛋白質(zhì)而得到修飾，或所述細(xì)胞來(lái)源于如此修飾的細(xì)胞。因此，例如，重組細(xì)胞表達(dá)該細(xì)胞的初始(非重組)形式中未見(jiàn)的基因，或者表達(dá)原本異常表達(dá)、表達(dá)不足或根本不表達(dá)的初始基因。

如本文所用，“信號(hào)序列”或“信號(hào)肽”泛指如下肽：其含有約15個(gè)或更多個(gè)出現(xiàn)在分泌性和膜結(jié)合多肽的n端處并且含有大量的疏水性氨基酸殘基的氨基酸。例如，信號(hào)序列含有至少約10-30個(gè)氨基酸殘基、優(yōu)選地約15-25個(gè)氨基酸殘基、更優(yōu)選地約18-20個(gè)氨基酸殘基并且甚至更優(yōu)選地約19個(gè)氨基酸殘基，且具有至少約35-65％、優(yōu)選地約38-50％、更優(yōu)選地約40-45％的疏水性氨基酸殘基(如纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸或苯丙氨酸)。“信號(hào)序列”在本領(lǐng)域中也稱為“信號(hào)肽”，其用以將含有這種序列的多肽引導(dǎo)至脂質(zhì)雙層，并在分泌性和膜結(jié)合多肽中裂解。

如本文所用，“特異性(或選擇性)結(jié)合”至抗體或者“對(duì)...具有特異性(或選擇性)免疫活性”或“與...特異性相互作用或結(jié)合”泛指蛋白質(zhì)或肽(或其他表位)，在一些實(shí)施方案中是指決定蛋白質(zhì)和其他生物制品的異源群體中所述蛋白質(zhì)的存在的結(jié)合反應(yīng)。例如，在規(guī)定的免疫分析條件下，指定的抗體結(jié)合至特定蛋白質(zhì)，結(jié)合量要比背景(非特異性信號(hào))大至少兩倍，并且基本上不會(huì)與樣品中存在的其他蛋白質(zhì)大量結(jié)合。典型地，特異性或選擇性反應(yīng)將為背景信號(hào)或噪音的至少兩倍，并且更典型地，為背景的約10至100倍以上。

如本文所用，“可特異性雜交的”和“互補(bǔ)的”泛指核酸可通過(guò)傳統(tǒng)的沃森-克里克(watson-crick)或其他非傳統(tǒng)類型與另一核酸序列形成氫鍵。核酸分子與其互補(bǔ)序列的結(jié)合自由能足以使核酸的有關(guān)功能得到發(fā)揮，例如rnai活性。本領(lǐng)域熟知核酸分子的結(jié)合自由能的測(cè)定。參見(jiàn)例如turner等(1987)cshsymp.quant.biol.lii:123-33；frier等(1986)pnas83:9373-77；turner等(1987)j.am.chem.soc.109:3783-85?；パa(bǔ)性百分比表示核酸分子中可與第二核酸序列形成氫鍵(例如沃森-克里克堿基配對(duì))的連續(xù)殘基的百分比(例如，10個(gè)中約至少5、6、7、8、9、10個(gè)，即有約至少50％、60％、70％、80％、90％和100％的互補(bǔ)性(包括所述數(shù)值))?！巴昝阑パa(bǔ)”或100％互補(bǔ)性泛指核酸序列的所有連續(xù)殘基都與第二核酸序列中相同數(shù)目的連續(xù)殘基氫鍵合。“基本互補(bǔ)性”(substantialcomplementarity)是指排除被選擇為具有非互補(bǔ)性的多核苷酸鏈區(qū)域，諸如突出(overhang)，多核苷酸鏈表現(xiàn)出約至少90％的互補(bǔ)性。特異性結(jié)合需要足夠程度的互補(bǔ)性以避免寡聚化合物與非目標(biāo)序列在需要特異性結(jié)合的條件下，即在體內(nèi)分析或治療性治療的情況下在生理?xiàng)l件下，或在體外分析的情況下在進(jìn)行分析的條件下發(fā)生非特異性結(jié)合。非目標(biāo)序列通常可相差至少5個(gè)核苷酸。

如本文所用，疾病的“體征”泛指指示疾病、在檢查患者后可發(fā)現(xiàn)的任何異常；與癥狀相反的客觀的疾病指示，而癥狀是主觀的疾病指示。

如本文所用，“固體支撐物”、“支撐物”和“襯底”泛指提供固體或半固體結(jié)構(gòu)的借此可連接另一材料的任何材料，其包括但不限于光滑支撐物(例如金屬、玻璃、塑料、硅和陶瓷表面)以及紋理化和多孔的材料。

如本文所用，“受試者”泛指適于根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療的任一個(gè)，包括但不限于鳥(niǎo)類和哺乳動(dòng)物受試者，并且優(yōu)選地為哺乳動(dòng)物。需要根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療的任何哺乳動(dòng)物受試者都是合適的。兩種性別和在任何發(fā)育階段(即新生兒、嬰兒、幼兒、青少年、成年)的人受試者都可根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療。也可以對(duì)動(dòng)物受試者，特別是哺乳動(dòng)物受試者如小鼠、大鼠、狗、貓、牛、山羊、綿羊和馬實(shí)施本發(fā)明以用于獸醫(yī)學(xué)目的，以及用于藥物篩選和藥物開(kāi)發(fā)目的?！笆茉囌摺笨膳c“患者”互換使用。

如本文所用，“基本上不含化學(xué)前體或其他化學(xué)物質(zhì)”泛指如下vista蛋白制備物：其中所述蛋白質(zhì)與合成所述蛋白質(zhì)中所涉及的化學(xué)前體或其他化學(xué)物質(zhì)分離。在一個(gè)實(shí)施方案中，用語(yǔ)“基本上不含化學(xué)前體或其他化學(xué)物質(zhì)”包括具有少于約30％(按干重計(jì))化學(xué)前體或非vista化學(xué)物質(zhì)、更優(yōu)選地少于約20％化學(xué)前體或非vista化學(xué)物質(zhì)、還更優(yōu)選地少于約10％化學(xué)前體或非vista化學(xué)物質(zhì)以及最優(yōu)選地少于約5％化學(xué)前體或非vista(pd-l3)化學(xué)物質(zhì)的vista蛋白制備物。

如本文所用，疾病的“癥狀”泛指患者所經(jīng)歷并且指示疾病的任何病態(tài)的現(xiàn)象或與結(jié)構(gòu)、功能或感覺(jué)的正常狀態(tài)相背離。

如本文所用，“t細(xì)胞”泛指cd4+t細(xì)胞和cd8+t細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)t細(xì)胞還包括t輔助1型t細(xì)胞和t輔助2型t細(xì)胞兩者。

如本文所用，“treg細(xì)胞”(有時(shí)還稱為抑制t細(xì)胞)是指t細(xì)胞亞群，其調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)并且維持對(duì)自身抗原的耐受性并且可消除自身免疫疾病。foxp3+cd4+cd25+調(diào)節(jié)t細(xì)胞(treg)在正常生理?xiàng)l件下維持外周耐受性方面是關(guān)鍵性的，并在癌癥中抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)。

如本文所用，“療法”、“治療性”或“治療”泛指治療疾病，停滯或減輕疾病或其臨床癥狀的發(fā)展，和/或緩解疾病、使疾病或其臨床癥狀消退。療法涵蓋預(yù)防、治療、補(bǔ)救、減少、減輕和/或使得疾病、疾病的體征和/或癥狀緩解。療法涵蓋減輕具有進(jìn)行中疾病體征和/或癥狀(例如炎癥、疼痛)的患者的體征和/或癥狀。療法還涵蓋“預(yù)防”。對(duì)于療法的目的，術(shù)語(yǔ)“減少”泛指體征和/或癥狀的臨床顯著的減少。療法包括治療復(fù)發(fā)或復(fù)發(fā)體征和/或癥狀(例如炎癥、疼痛)。療法涵蓋但不限于阻止任何時(shí)候出現(xiàn)體征和/或癥狀以及減輕現(xiàn)有體征和/或癥狀以及消除現(xiàn)有體征和/或癥狀。療法包括治療慢性疾病(“維持”)和急性疾病。例如，治療包括治療或預(yù)防體征和/或癥狀(例如炎癥、疼痛)的復(fù)發(fā)。

如本文所用，“跨膜結(jié)構(gòu)域”泛指長(zhǎng)度為約15個(gè)氨基酸殘基的跨越質(zhì)膜的氨基酸序列。更優(yōu)選地，跨膜結(jié)構(gòu)域包含約至少20、25、30、35、40或45個(gè)氨基酸殘基并跨越質(zhì)膜。跨膜結(jié)構(gòu)域富含疏水性殘基，并且通常具有α-螺旋結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，跨膜結(jié)構(gòu)域的氨基酸中的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多具有疏水性，例如亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸或色氨酸。跨膜結(jié)構(gòu)域描述于例如zagotta等(1996)annu.rev.neurosci.19:235-263。

如本文所用，“轉(zhuǎn)基因動(dòng)物”泛指非人動(dòng)物，優(yōu)選地為哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選地為小鼠，其中動(dòng)物細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)包括“轉(zhuǎn)基因”。術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)基因”是指整合到發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的細(xì)胞的基因組中并保留在成熟動(dòng)物基因組中，從而例如指導(dǎo)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的一種或多種細(xì)胞類型或組織中編碼基因產(chǎn)物的表達(dá)的外源性dna。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“腫瘤”泛指至少一個(gè)細(xì)胞或呈組織新生物(neoformation)形式的細(xì)胞團(tuán)塊，尤其是內(nèi)源性組織的自發(fā)、自主和不可逆的或多或少脫抑制的過(guò)度生長(zhǎng)形式，所述生長(zhǎng)通常與或多或少的特定細(xì)胞和組織功能的明顯喪失相關(guān)。這種細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊通過(guò)自身或通過(guò)宿主生物體(例如結(jié)直腸癌、黑素瘤或癌)的調(diào)節(jié)性機(jī)理在其生長(zhǎng)方面無(wú)有效抑制。腫瘤抗原不僅包括存在于惡性腫瘤細(xì)胞本身中或其上的抗原，而且還包括存在于腫瘤的基質(zhì)支持組織(包括內(nèi)皮細(xì)胞和其他血管組分)上的抗原。

如本文所用，術(shù)語(yǔ)“無(wú)響應(yīng)性”泛指免疫細(xì)胞對(duì)刺激(例如，通過(guò)活化性受體或細(xì)胞因子的刺激)的折射性。無(wú)響應(yīng)性可例如由于暴露于免疫抑制劑或高劑量的抗原而發(fā)生。

如本文所用，“可變區(qū)”或“vr”泛指在抗體結(jié)合至抗原中直接涉及的抗體中每對(duì)輕鏈和重鏈內(nèi)的結(jié)構(gòu)域。每條重鏈在一端都具有可變結(jié)構(gòu)域(vh)，隨后是許多恒定結(jié)構(gòu)域。每條輕鏈在一端都有可變結(jié)構(gòu)域(vl)并且在另一端有恒定結(jié)構(gòu)域；輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域與重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域?qū)?zhǔn)，并且輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與重鏈的可變結(jié)構(gòu)域?qū)?zhǔn)。

如本文所用，“載體”泛指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)其已經(jīng)連接的另一核酸分子的核酸分子。一種類型的載體為“質(zhì)?！?，它是指可向其中連接另外的dna片段的環(huán)狀雙鏈dna環(huán)。另一種類型的載體為病毒載體，其中可將另外的dna片段連接到病毒基因組中。某些載體能夠在它們所引入的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制(例如，具有細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的細(xì)菌載體和游離型哺乳動(dòng)物載體)。其他載體(例如非游離型哺乳動(dòng)物載體)在引入宿主細(xì)胞中時(shí)整合到宿主細(xì)胞的基因組，并因而隨宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些載體能夠引導(dǎo)其所可操作地連接的基因的表達(dá)。在本文將載體稱為“重組表達(dá)載體”或簡(jiǎn)稱為“表達(dá)載體”。一般來(lái)說(shuō)，在重組dna技術(shù)中有用的表達(dá)載體經(jīng)常為質(zhì)粒形式。在本說(shuō)明書(shū)中，“質(zhì)?！焙汀拜d體”可互換使用，因?yàn)橘|(zhì)粒是最常用的載體形式。然而，本發(fā)明旨在包括這些發(fā)揮等效功能的其他形式的表達(dá)載體，諸如病毒載體(例如復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒)。所述技術(shù)和程序通常根據(jù)本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法并且如本說(shuō)明書(shū)通篇所引用和討論的多個(gè)一般且較特定的參考文獻(xiàn)中所述來(lái)進(jìn)行。參見(jiàn)例如sambrook等(2001)molec.cloning:lab.manual[第3版]coldspringharborlaboratorypress?？梢詫?biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于重組dna、寡核苷酸合成和組織培養(yǎng)，以及轉(zhuǎn)化(例如電穿孔、脂轉(zhuǎn)染)。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)可以根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)或如本領(lǐng)域中通常所實(shí)現(xiàn)或如本文所述來(lái)進(jìn)行。

與本文所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)藥和藥物化學(xué)結(jié)合所用的命名，以及本文所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)藥和藥物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)程序和技術(shù)為熟知的并且常用于本領(lǐng)域中。可以將標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送以及患者治療。

“vista激動(dòng)劑”在本文包括直接或間接促進(jìn)vista的表達(dá)或活性尤其是其對(duì)b細(xì)胞增殖和b細(xì)胞反應(yīng)例如抗原性特異性抗體反應(yīng)的抑制作用的任何化合物。這包括激動(dòng)性抗vista抗體和抗體片段、抗體或其抗體片段、肽、糖苷生物堿(glycoalkoid)、反義核酸、核酶、類視黃素、高親和性多聚體(avemir)、小分子或其任意組合。優(yōu)選的vista激動(dòng)劑包括vista-ig多肽，例如，其中vista多肽或其片段連接至抗體的整個(gè)fc區(qū)或fc區(qū)的片段，例如，人igg1、igg2、igg3或igg4。其他示例性vista激動(dòng)劑包括vista的多聚形式，即，其包含多于一個(gè)vista多肽或其片段，例如，通常經(jīng)由低聚或多聚結(jié)構(gòu)域或序列連接的2、3、4、5或6個(gè)vista多肽。此類序列是已知的并且可以得到的。另外，vista激動(dòng)劑包括在其表面上表達(dá)vista的轉(zhuǎn)染細(xì)胞，和促進(jìn)vista表達(dá)的核酸。在大多數(shù)情況下，此類激動(dòng)劑將是對(duì)人vista特異的。

“vista拮抗劑”在本文包括直接或間接抑制或阻斷vista的表達(dá)或活性尤其是其對(duì)b細(xì)胞增殖和b細(xì)胞反應(yīng)例如抗原性特異性抗體反應(yīng)的抑制作用的任何化合物。這包括拮抗性抗vista抗體和抗體片段、抗體或其抗體片段、肽、糖苷生物堿(glycoalkoid)、反義核酸、核酶、類視黃素、高親和性多聚體(avemir)、小分子或其任意組合。優(yōu)選的vista拮抗劑包括阻斷或抑制msdc對(duì)b細(xì)胞增殖或b細(xì)胞反應(yīng)(例如，抗原特異性抗體反應(yīng))的抑制作用的抗人vista抗體和抗體片段。其他優(yōu)選的vista拮抗劑包括阻斷或抑制vista的表達(dá)的核酸，諸如反義核酸，以及干擾rna或sirna或肽核酸(“pna”)。其他示例性vista拮抗劑包括阻斷vista與細(xì)胞的結(jié)合的vista片段，所述細(xì)胞諸如為免疫細(xì)胞，和表達(dá)阻斷vista與免疫細(xì)胞結(jié)合的vista多肽的細(xì)胞。

發(fā)病的程度的宿主控制清楚地反映了免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)，包括例如在腫瘤微環(huán)境的情況下導(dǎo)致過(guò)度的負(fù)免疫調(diào)節(jié)的控制機(jī)理。在病毒感染中，雖然在大多數(shù)情況下，免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞和分子的病毒劫持僅通過(guò)降低宿主反應(yīng)而間接促進(jìn)發(fā)病的增加，但可能的是，被誤導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)可直接充當(dāng)近端病因的效應(yīng)細(xì)胞/分子。

在過(guò)去十年間得到充分研究的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞類型是髓源性抑制細(xì)胞(mdsc)(綜述見(jiàn)于ostrand-rosenberg,2010；youn和gabrilovich,2010)。就像cd4+foxp3+treg細(xì)胞，mdsc被視作關(guān)于保護(hù)性t細(xì)胞反應(yīng)主要以負(fù)作用方式發(fā)揮作用，尤其是在各種腫瘤系統(tǒng)中。此外，有少量但越來(lái)越多的文獻(xiàn)證實(shí)mdsc調(diào)節(jié)性控制可限制自身免疫疾病進(jìn)程(bowen和olson,2009)。雖然mdsc的最終定義基于其(未成熟的)骨髓來(lái)源及其抑制功能，但是mdsc在鼠系統(tǒng)中具有針對(duì)gr-1和cd11b的普遍接受的表面陽(yáng)性表型。雖然mdsc群體通常是異質(zhì)的，但是存在兩個(gè)可在表型上加以區(qū)分的細(xì)胞表面表型鼠mdsc亞組。使用mab來(lái)分離抗gr-1識(shí)別的特異性：粒細(xì)胞/pmn樣mdsc亞組是ly6g+/hily6c+/lo的，而單核細(xì)胞mdsc亞組是ly6g+/loly6c+/hi(綜述見(jiàn)于ostrand-rosenberg,2010；peranzoni等,2010；youn和gabrilovich,2010)。主要基于對(duì)廣泛的腫瘤微環(huán)境的研究，mdsc還通過(guò)它們導(dǎo)致反應(yīng)t細(xì)胞抑制所依賴的機(jī)理而差異化表征，這些機(jī)理包括：精氨酸酶、inos/no、其他氧和氮反應(yīng)性物質(zhì)、以及其他機(jī)理(綜述見(jiàn)于laface和talmadge)。雖然一些mdsc綜述表明b細(xì)胞反應(yīng)可能對(duì)mdsc調(diào)節(jié)敏感，并且mdsc可表現(xiàn)出對(duì)多克隆激活物和有絲分裂原寬泛的、非mhc限制性的反應(yīng)，但關(guān)于mdsc對(duì)b細(xì)胞的靶向作用的主要文獻(xiàn)顯然有限。

mdsc已在以下各種感染性疾病中進(jìn)行了不太充分的研究：細(xì)菌(gabrilovich和nagaraj,2009)、酵母/真菌(mencacci等,2002)、原生動(dòng)物寄生蟲(chóng)(voisin等,2004)、腸蟲(chóng)(brys等,2005)和病毒感染例如甲型流感病毒(jeisy-scott等,2011)、慢性鼠乙型肝炎病毒(chen等,2011)；以及水泡性口炎病毒(willmon等,2011)和單純皰疹病毒1型工程株(walker等,2011)。但是，僅有少量關(guān)于在逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的情況下mdsc群體的存在或功能及接著發(fā)生的疾病諸如獲得性免疫缺陷的最近報(bào)道(vollbrecht等,2012,commentmacantangay等2012；green等,2013；qin等,2013；garg和spector,2014)。

逆轉(zhuǎn)錄病毒善于收編各種免疫調(diào)節(jié)機(jī)理。hiv-1和siv已被證實(shí)可導(dǎo)致效應(yīng)t細(xì)胞上pd-1的過(guò)早表達(dá)，這可推動(dòng)抗病毒cd8+細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞(ctl)效應(yīng)細(xì)胞不當(dāng)?shù)卦缙谙抡{(diào)，類似于在病毒清除的后期階段發(fā)生的正常t細(xì)胞收縮階段(day等,2006；velu等,2009)。對(duì)于鼠friend逆轉(zhuǎn)錄病毒(fv)，已報(bào)道pd-1和tim-3的改變的表達(dá)對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒負(fù)載和發(fā)病具有不同的作用(takamura等,2010；zelinsky等,2011)，包括“耗竭”(exhaustion)，或在其他病毒系統(tǒng)中觀察到的“無(wú)功能”t細(xì)胞表型(day等,2006；velu等,2009)。病毒感染還可改變免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，諸如cd4+foxp3+t調(diào)節(jié)(treg)細(xì)胞，這是抗腫瘤免疫和自身免疫的主要控制點(diǎn)(綜述見(jiàn)于sakaguchi,2004；piccirillo和shevach,2004)。在這里研究的lp-bm5鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒系統(tǒng)中，早期報(bào)道提供證據(jù)支持cd25+cd4+t細(xì)胞(基于其他評(píng)估的標(biāo)志物但不包括foxp3，被視為treg)在介導(dǎo)lp-bm5發(fā)病中的直接作用(beilharz等,2004)。然而，后續(xù)報(bào)道支持真實(shí)的cd4+foxp3+treg細(xì)胞在lp-bm5感染/發(fā)病中的間接作用，從而限制了(與pd-1/pd-l1一起)保護(hù)性cd8+ctl反應(yīng)的發(fā)生(li和green,2006；li和green2011)。

在被lp-bm5逆轉(zhuǎn)錄病毒分離株感染后，小鼠的某些近交品系諸如高度敏感的c57bl/6(b6)品系產(chǎn)生了包括免疫缺陷的疾病綜合征。始于感染后大約5周，極大的免疫缺陷非常明顯，包括嚴(yán)重受到抑制的t細(xì)胞和b細(xì)胞反應(yīng)，從而導(dǎo)致全面的疾病特征(simard等,1997)。因此，當(dāng)暴露于通常導(dǎo)致有限感染的環(huán)境病原體時(shí)，更易于發(fā)生疾病進(jìn)展，有時(shí)死亡。在之后的時(shí)間點(diǎn)，lp-bm5感染的b6小鼠發(fā)生b細(xì)胞淋巴瘤。因?yàn)閘p-bm5誘導(dǎo)的疾病的這些特征與在hiv感染的個(gè)體中所見(jiàn)的那些特征中的許多相似，所以該綜合征被稱為鼠aids(maids)。

對(duì)lp-bm5逆轉(zhuǎn)錄病毒的發(fā)病機(jī)理尚未完全了解。將lp-bm5接種到cd4+t細(xì)胞或b細(xì)胞遺傳缺陷的或接受了cd4+t細(xì)胞或b細(xì)胞的在先體內(nèi)抗體耗盡的b6小鼠體內(nèi)導(dǎo)致了感染，但未導(dǎo)致病毒誘導(dǎo)的疾病(yetter等,1988)。相對(duì)于病原性cd4+t效應(yīng)細(xì)胞的這種需要，我們確定了cd154/cd40相互作用對(duì)于lp-bm5發(fā)病的誘導(dǎo)和進(jìn)展均是必需的。在b6小鼠感染開(kāi)始時(shí)或3-4周后，用□-cd154(cd40配體)單克隆抗體(mab)進(jìn)行體內(nèi)處理導(dǎo)致了標(biāo)準(zhǔn)maids參數(shù)的實(shí)質(zhì)性抑制，這些參數(shù)包括：脾腫大、高丙種球蛋白血癥、免疫細(xì)胞亞組表型變化以及b細(xì)胞和t細(xì)胞免疫缺陷(green等,1996；green等,1998)。lp-bm5誘導(dǎo)的疾病的程度還受pd-1/pd-l1和il-10控制，pd-1/pd-l1和il-10起到下調(diào)病原性cd4+t細(xì)胞的作用，從而導(dǎo)致疾病減弱(li和green,2006)。pd-1連接和cd4+treg細(xì)胞還組合抑制b6小鼠中保護(hù)性cd8+ctl反應(yīng)的產(chǎn)生(li和green,2011)。cd11b+fcrγiii/ii+骨髓細(xì)胞群的擴(kuò)增也是lp-bm5誘導(dǎo)的發(fā)病的主要特征。基于該細(xì)胞表面表型，我們最近在該系統(tǒng)中評(píng)估了逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)的mdsc的可能牽涉。事實(shí)上，我們鑒定了具有單核細(xì)胞表面表型(gr-1+,ly6c+,ly6g-,cd11b+)的lp-bm5誘導(dǎo)的mdsc群，針對(duì)對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)地用來(lái)測(cè)量lp-bm5誘導(dǎo)的免疫缺陷的刺激所產(chǎn)生的免疫反應(yīng)，該細(xì)胞群具有有效的強(qiáng)離體抑制活性。通過(guò)使用若干提供大量信息的我們?cè)谥耙炎C實(shí)表現(xiàn)出不同水平的對(duì)lp-bm5發(fā)病的敏感性的b6k.o.品系，我們確立了體內(nèi)lp-bm5誘導(dǎo)的疾病嚴(yán)重性與離體mdsc抑制活性之間的直接關(guān)系(green等,2013)。

也在最近，已經(jīng)確定了屬于關(guān)鍵免疫負(fù)調(diào)節(jié)配體亞組的新免疫球蛋白(ig)超家族成員vista(t細(xì)胞活化的v結(jié)構(gòu)域ig阻遏子)(wang等,2011；lemercier等,2014；lines等,2014)。vista具有與b7家族配體pd-l1的同源性，尤其是對(duì)于其胞外結(jié)構(gòu)域而言。因?yàn)関ista主要在造血細(xì)胞上表達(dá)，所以vista可在骨髓抗原呈遞細(xì)胞(apc)和t細(xì)胞上高度上調(diào)。多條證據(jù)表明vista在自身免疫和抗腫瘤免疫中起到抑制t細(xì)胞反應(yīng)的作用。第一，vista特異性mab在體外干擾vista誘導(dǎo)的vista表達(dá)apc對(duì)t細(xì)胞反應(yīng)的抑制。第二，抗vista處理加劇了小鼠中t細(xì)胞介導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的發(fā)生。第三，可溶性vista-ig融合蛋白或apc上的vista表達(dá)在體外抑制t細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生。第四，腫瘤細(xì)胞上的vista過(guò)表達(dá)在小鼠體內(nèi)直接干擾保護(hù)性抗腫瘤免疫。這些早期報(bào)道一起表明了vista充當(dāng)新的免疫調(diào)節(jié)分子，其具有與其他ig超家族成員諸如pd-l1不重復(fù)的功能活性，并因此在針對(duì)腫瘤細(xì)胞的自身免疫和t細(xì)胞免疫監(jiān)督的發(fā)生和調(diào)節(jié)中都發(fā)揮著可能關(guān)鍵性的作用，盡管對(duì)于疾病嚴(yán)重性而言具有基本上相反的結(jié)果。

在本申請(qǐng)中，我們相對(duì)于vista在這些mdsc的抑制機(jī)理中的可能牽涉，進(jìn)一步評(píng)估了剛才描述(green等,2013)的lp-bm5逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)的單核mdsc群。具體地講，鑒于mdsc對(duì)t細(xì)胞增殖和ifn-γ生成反應(yīng)的抑制幾乎完全依賴于inos/no(green等,2013)，我們針對(duì)mdsc的t細(xì)胞靶標(biāo)與b細(xì)胞靶標(biāo)比較了vista牽涉，其中我們之前僅能將大約50％的mdsc抑制機(jī)理解釋為是由于inos/no。我們的結(jié)果表明了mdsc表達(dá)的vista在抑制t細(xì)胞反應(yīng)與b細(xì)胞反應(yīng)中的差異作用，從而強(qiáng)調(diào)了mdsc功能的異質(zhì)性和不同mdsc亞群的可能性。

實(shí)驗(yàn)性實(shí)施例

實(shí)施例中所用的材料和方法

小鼠。七周齡的雄性c57bl/6(b6)小鼠購(gòu)自nationalinstitutesofhealth(bethesda,md)，關(guān)在達(dá)特茅斯醫(yī)學(xué)院動(dòng)物房(dartmouthmedicalschoolanimalfacility)，并在大約8-10周齡時(shí)使用。完全回交到b6的inosk.o.小鼠繁殖對(duì)得自jacksonlabs(barharbor,me)，并且最初來(lái)源如先前所述(laubach等,1995)。也回交到b6的vistak.o.繁殖對(duì)(來(lái)源如報(bào)道的那樣)得自

細(xì)胞純化。對(duì)于實(shí)驗(yàn)性抑制細(xì)胞群，合并來(lái)自三只或四只lp-bm5感染小鼠(5w.p.i.)的脾細(xì)胞懸液，用□-ly6g偶合的順磁性珠粒標(biāo)記，然后根據(jù)制造商方案進(jìn)行柱純化(macs,miltenyibiotec,auburn,ca)。將得自第一次分離的穿柱液(flow-through)用□-cd11b偶合的順磁性珠粒標(biāo)記，然后接受柱純化，得到陽(yáng)性選擇的>75％cd11b+ly6c+的細(xì)胞群。

lp-bm5病毒接種。如先前所述(klinken等,1988)在我們的實(shí)驗(yàn)室中制備了lp-bm5。為了產(chǎn)生lp-bm5病毒儲(chǔ)備液，最初由janethartley和herbertmorse博士(nih)慷概提供的g6細(xì)胞(作為得自用lp-bm5病毒制備物感染的sc-1細(xì)胞的克隆細(xì)胞系)用于與未感染的sc-1細(xì)胞共同培養(yǎng)。將小鼠經(jīng)腹膜內(nèi)用5×104個(gè)嗜親性噬斑形成單位感染，如通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)逆轉(zhuǎn)錄病毒xc噬斑分析所確定(rowe等,1970)。

3h胸苷摻入增殖分析。對(duì)于反應(yīng)細(xì)胞，將5×105個(gè)未感染的脾細(xì)胞(為未分級(jí)的或cd19+純化的)連同1.6×105個(gè)(除非另外指明)cd11b+ly6g+或cd11b+ly6c+富集的抑制細(xì)胞(得自指定w.t.b6或b6敲除品系的5-w.p.i.lp-bm5小鼠的脾)平鋪到96孔平底板中。將所有孔一式三分地平鋪上培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有5％fcs、l谷氨酰胺、抗生素和最終濃度為10.ig/ml的lps、50.ig/ml的ct-cd40加10ng/ml的il-4、或2.ig/ml的cona。對(duì)于對(duì)增殖抑制的抑制分析，將未分級(jí)的或cd11b+ly6c+富集的抑制細(xì)胞在開(kāi)始共同培養(yǎng)前用0.8mmnos抑制劑ng-單乙基-l-精氨酸(l-nmma)、陰性對(duì)照對(duì)映體ng-單乙基-d-精氨酸(d-nmma)(a.g.scientific,sandiego,ca)、或80ug/ml純化的ct-vista(13f3)或?qū)φ説ig預(yù)處理一小時(shí)。在66小時(shí)后，將所有孔用1mci3h胸苷(perkinelmer,waltham,ma)脈沖處理，并6小時(shí)后收獲，以用于通過(guò)閃爍計(jì)數(shù)法(perkinelmer,waltham,ma)評(píng)估胸苷摻入。將b細(xì)胞和t細(xì)胞反應(yīng)細(xì)胞刺激的數(shù)據(jù)表示為抑制百分比。對(duì)于抑制百分比的計(jì)算，首先，如下計(jì)算殘余反應(yīng)百分比：r＝(共同培養(yǎng)的反應(yīng)細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)性抑制細(xì)胞的cpm)÷(共同培養(yǎng)的反應(yīng)細(xì)胞和對(duì)照、未感染的抑制細(xì)胞的cpm)×100％。確定一式三份孔的平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差，并通過(guò)雙尾、雙樣本等方差學(xué)生t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。

cfse稀釋增殖分析。將初始反應(yīng)脾細(xì)胞用5.im于pbs/0.5％bsa中的cfse(celltrace，cfse增殖試劑盒，molecularprobes,eugene,or)在37℃下標(biāo)記10分鐘，然后添加冷的10％于rpmi中的fbs，在冰上保持5分鐘。在三次冷10％fcs/rpmi洗滌后，以與上文所述的3h胸苷摻入增殖分析相同的方式建立細(xì)胞培養(yǎng)。在培養(yǎng)的第4天，將孔用單克隆抗體(mab):ct-cd19-percp(biolegend,sandiego,ca)染色，然后在facscalibur流式細(xì)胞儀(bdbioscience,sanjose,ca)上分析。

流式細(xì)胞術(shù)。將5×10⁵個(gè)脾細(xì)胞與未標(biāo)記的針對(duì)fcγiii/ii受體的mab(2.4g2,biolegend,sanjose,ca)在冰上溫育10分鐘，然后在冰上用fitc-、pe-、apc-或percp-偶聯(lián)的抗體進(jìn)行表面染色持續(xù)25分鐘。將染色后的細(xì)胞在facscalibur流式細(xì)胞儀上使用cellquest軟件(bdbioscience,sanjose,ca)進(jìn)行分析，如通過(guò)對(duì)數(shù)擴(kuò)增所定量。為了檢測(cè)以下鼠抗原的表達(dá)，采用了指定的mab：vista(13f4)純化的/pe鏈霉親和素、cd4(rm4-5)、cd19(6d5)、cd11b(m1/70)、ly6g(1a8)、ly6c(hk1.4)。將適當(dāng)?shù)木哂胁幌嚓P(guān)特異性的fitc-、pe-、percp-或apc-偶聯(lián)的ig同種型用于每個(gè)實(shí)驗(yàn)性mab的對(duì)照。

實(shí)施例1：脾細(xì)胞的vista表達(dá)

該實(shí)施例涉及圖1中的實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，顯示了脾細(xì)胞的vista表達(dá)因體內(nèi)lp-bm5感染而增加。圖1(a)包括流式細(xì)胞分析，該分析顯示了得自未感染的或5或8.5周被感染的w.t.b6小鼠的脾細(xì)胞的vista表達(dá)模式。百分比表示vista表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞；斜體的值表示vista陽(yáng)性細(xì)胞的mfi。圖1(b)顯示了以下組的cd11b+細(xì)胞的脾細(xì)胞表面vista表達(dá)vista：得自指示的未感染或感染小鼠品系的細(xì)胞(無(wú)后續(xù)純化)；和得自5wpi-lp-bm5小鼠的純化的ly6c+cd11b+脾細(xì)胞。所展示的結(jié)果模式代表兩項(xiàng)另外的實(shí)驗(yàn)。

實(shí)施例2：ly6c+cd11b+純化的脾細(xì)胞對(duì)于抑制體外b和t細(xì)胞增殖具有不同的機(jī)理要求

該實(shí)施例涉及圖2中的實(shí)驗(yàn)。這些實(shí)驗(yàn)證明了ly6c+cd11b+純化的脾細(xì)胞對(duì)于抑制體外b和t細(xì)胞增殖具有不同的機(jī)理要求。圖2(a和b)顯示了實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，其中將初始b6反應(yīng)脾細(xì)胞與a-vista和lnmma預(yù)處理的ly6c+cd11b+mdsc以3:1的反應(yīng)細(xì)胞與抑制細(xì)胞(r:s)比率混合，并用(a)a-cd40和il-4或(b)cona刺激三天。

在圖中，將^3h胸苷摻入轉(zhuǎn)化成抑制％(參見(jiàn)材料和方法)。所展示的結(jié)果模式代表每個(gè)刺激的三項(xiàng)另外的實(shí)驗(yàn)。圖2c顯示了4項(xiàng)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值+標(biāo)準(zhǔn)偏差，這些值顯示了在與初始w.t.b6反應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)三天前，通過(guò)對(duì)ly6c+cd11b+mdsc進(jìn)行a-vista預(yù)處理，而對(duì)抑制產(chǎn)生的阻斷％。顯著性水平：*,p<0.05；**,p<0.01,***,p<0.001。

實(shí)施例3：vista拮抗劑對(duì)mdsc介導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖抑制的作用

該實(shí)施例涉及圖3中的實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，將初始vista-/-反應(yīng)脾細(xì)胞與a-vista預(yù)處理的ly6c+cd11b+mdsc以3:1的反應(yīng)細(xì)胞與抑制細(xì)胞(r:s)比率混合，并用a-cd40和il-4刺激三天。所展示的結(jié)果模式代表三項(xiàng)另外的實(shí)驗(yàn)。*,p<0.05；**,p<0.01；***,p<0.001；ns.,p>0.05。

實(shí)施例4：脾細(xì)胞增殖的mdsc抑制

該實(shí)施例涉及圖4中的實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，得自指定品系的5周lp-bm5感染小鼠的純化的單核mdsc(ly6c+cd11b+)顯示了初始vista-/-脾細(xì)胞增殖的差異抑制模式，如通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)所評(píng)估。將cfse標(biāo)記的vista-/-反應(yīng)細(xì)胞在存在(+)或不存在(-)ct-cd40+il-4并且具有或不具有mdsc(a)(-)；(b)(+)(灰色陰影曲線)；(c)(+)，w.t.mdsc(黑色開(kāi)放曲線)；(d)(+)，dnmma處理的w.t.mdsc(黑色開(kāi)放曲線)；(e)(+)，lnmma處理的w.t.mdsc；(f)(+)，inos-/-mdsc(虛線曲線)；(g)(+)，(h)(+)，vista-/-mdsc與w.t.mdsc的情況下培養(yǎng)三天；將得自所有培養(yǎng)的細(xì)胞在四天溫育結(jié)束時(shí)用ct-cd19熒光染料偶聯(lián)的mab染色，并且還通過(guò)facs評(píng)估了cfse稀釋。cfse標(biāo)記的vista-/-反應(yīng)細(xì)胞：％＝在第一個(gè)增殖峰中的細(xì)胞百分比；斜體的數(shù)值＝cfse+細(xì)胞的mfi。所展示的結(jié)果模式代表一項(xiàng)另外的實(shí)驗(yàn)。

實(shí)施例5：b細(xì)胞增殖的mdsc抑制

該實(shí)施例涉及圖5中的實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，顯示了b細(xì)胞增殖的單核細(xì)胞抑制取決于兩大機(jī)理inos/no和vista。在5a的實(shí)驗(yàn)中，將得自5w.p.lp-bm5感染的w.t.或vista-/-小鼠的純化ly6c+cd11b+mdsc用ct-vista阻斷抗體或?qū)φ説ig、lnmma或?qū)φ誨nmma預(yù)處理，并用vista-/-反應(yīng)細(xì)胞以及ct-cd40和il-4培養(yǎng)三天。在5(b)的實(shí)驗(yàn)中將w.t.ly6c+cd11b+mdsc用如圖(a)所示的相同處理方案預(yù)處理，包括既含ct-vista也含lnmma的組合方案。通過(guò)cpm反應(yīng)3h胸苷摻入，計(jì)算(a)和(b)的抑制％。所展示的結(jié)果模式代表兩項(xiàng)另外的實(shí)驗(yàn)(a)和一項(xiàng)另外的實(shí)驗(yàn)(b)。*,p<0.05；**,p<0.01；ns.,p>0.05。

結(jié)果與結(jié)論

因?yàn)閙dsc在lp-bm5逆轉(zhuǎn)錄病毒感染后擴(kuò)增，所以首先p.i.評(píng)估了vista細(xì)胞表面表達(dá)。雖然在5w.p.i.下，未擴(kuò)大vista+脾細(xì)胞的百分比，但是vistamfi增加，并且陽(yáng)性峰的形狀發(fā)生變化(圖1a)。這種變化既與所報(bào)道的未感染b6小鼠中vista的cd4t細(xì)胞表達(dá)的優(yōu)勢(shì)地位一致(wang等,2011)，也與在體內(nèi)刺激后擴(kuò)增的另外的細(xì)胞類型諸如cd11b+vista+細(xì)胞一致，所述體內(nèi)刺激在這里是我們已報(bào)道的擴(kuò)增mdsc的lp-bm5感染(我們的參考文獻(xiàn))。在8.5w.p.i.下，增加的vista表達(dá)更加明顯(圖1a)。對(duì)得自未感染的小鼠相比5w.p.i.、w.t.、vista-/-和inos-/-b6小鼠的細(xì)胞的vista和cd11b共表達(dá)進(jìn)行的進(jìn)一步染色確認(rèn)了抗vistamab的特異性，并證實(shí)了在高度富集的單核mdsc群中擴(kuò)增的vista表達(dá)(圖1b)(之前已表明還表達(dá)ly6c(我們的參考文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)未在這里示出)。同樣，如由wang等(2011)開(kāi)展的研究所預(yù)測(cè)，其他主要的vista+群為cd4t細(xì)胞區(qū)室(數(shù)據(jù)未示出)。

接下來(lái)在阻斷實(shí)驗(yàn)中評(píng)估了單核mdsc的vista表達(dá)的功能。首先，將可能的vista機(jī)理參與和已知的inos/no在mdsc抑制中的差異作用進(jìn)行了比較(圖2a/b)。然而，t細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制基本上完全依賴于inos/no，如通過(guò)inos抑制劑lnmma(相比對(duì)照dnmma)所揭露；對(duì)于b細(xì)胞反應(yīng)，lnmma將mdsc抑制阻斷了大約50％(如之前所示，green等,2013)。形成鮮明的對(duì)比，抗vistamab將b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制也阻斷了大約50％，而t細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制基本上不受影響。事實(shí)上，在多項(xiàng)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)中，抗vista的阻斷范圍集中于約65％，但是如果考慮到對(duì)照倉(cāng)鼠免疫球蛋白(hig)的小非特異性作用，則更靠近大約55％的δ。因此，對(duì)于b細(xì)胞反應(yīng)的抑制而言，vista似乎以相對(duì)于inos/no可區(qū)分的方式發(fā)揮作用。

為了明確地證明抗vista的阻斷作用具體針對(duì)mdsc，通過(guò)使用vista-/-反應(yīng)細(xì)胞重復(fù)了抗vista阻斷實(shí)驗(yàn)(圖3)。同樣，觀察到了非常顯著的(p＝0.0001)但部分的被vista(但非hig)產(chǎn)生的阻斷。這些結(jié)果確認(rèn)了對(duì)于阻斷而言對(duì)mdscvista的依賴性，并且為了簡(jiǎn)單和清楚起見(jiàn)，所有以下實(shí)驗(yàn)均采用了vista-/-反應(yīng)細(xì)胞。

為了獨(dú)立地證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)并對(duì)這兩種分子機(jī)理進(jìn)行比較，將預(yù)負(fù)載cfse的反應(yīng)細(xì)胞在存在各種野生型與k.o.b6起源的單核mdsc的情況下進(jìn)行刺激，并通過(guò)鑒定cd19+b細(xì)胞執(zhí)行流式細(xì)胞分析(圖4)。在圖4a中，清楚地觀察到了經(jīng)刺激的b細(xì)胞的mdsc抑制(圖a、b相比c)，并且通過(guò)包括lnmma(不是dnmma)，將增殖曲線向不存在mdsc的情況下刺激的對(duì)照b細(xì)胞的曲線部分地恢復(fù)(圖d、e)。同樣，通過(guò)在第一個(gè)增殖峰中顯示的細(xì)胞百分比以及由第一個(gè)和所有后續(xù)增殖峰一起得到的cfsemfi值，揭露了這種對(duì)inos/no的部分依賴性。替代性使用inos-/-mdsc(在不存在抑制劑的情況下)通過(guò)圖4b中inos-/-mdsc對(duì)比w.t.mdsc+lnmma曲線(圖e對(duì)比f(wàn))的疊合強(qiáng)調(diào)了這種cfse增殖特征。然而，重要的是，當(dāng)采用vista-/-mdsc時(shí)，得到兩個(gè)突出的結(jié)果：1)由于mdscvista表達(dá)的喪失而對(duì)mdsc抑制的部分阻斷(圖4的圖g)；和2)通過(guò)移除mdscvista產(chǎn)生的增殖曲線相比inos/no的lnmma阻斷大不相同的阻斷特征，每一者與不存在抑制劑的w.t.mdsc抑制進(jìn)行比較(圖4的圖h)。這些發(fā)現(xiàn)確認(rèn)了vista相比inos/no可區(qū)別的性質(zhì)b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制的依賴性組分，并且暗示了這兩種機(jī)理的獨(dú)立性。

還進(jìn)行了另外的組合“處理”實(shí)驗(yàn)，以評(píng)估這兩種途徑在b細(xì)胞的mdsc抑制中的作用。首先，我們?cè)诖嬖趇nos/no抑制劑lnmma的情況下采用了w.t.相比vista-/-起源的mdsc。對(duì)于w.t.mdsc(作為對(duì)照)，它們的b細(xì)胞反應(yīng)抑制部分地被抗vistamab或lnmma阻斷(圖5a)，與我們上文的結(jié)果相符。相比之下，在使用相同的反應(yīng)細(xì)胞和試劑的相同實(shí)驗(yàn)中，vista-/-起源的mdsc以僅能被lnmma阻斷的方式抑制了b細(xì)胞反應(yīng)(圖5a)。并且阻斷程度現(xiàn)在基本上為100％，從而表明了僅inos/no途徑的保留。這些數(shù)據(jù)還與mdsc抑制的僅兩大機(jī)理途徑一致。在第二種方法中，將w.t.mdsc用抗vista、lnmma或這兩種阻斷試劑的組合處理(圖5b)。僅組合處理(其中vista和inos/no牽涉均被干擾)實(shí)現(xiàn)了基本上完全的對(duì)抑制的阻斷?？偟膩?lái)說(shuō)(圖5a/b)，對(duì)mdsc抑制的這種相加(如果不是協(xié)同的話)阻斷重申了inos/no和vista依賴性是得自lp-bm5感染小鼠的單核mdsc對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的抑制的兩大明確的機(jī)理。

總之，我們?cè)谶@里就我們所知首次描述了新型負(fù)檢查點(diǎn)調(diào)節(jié)劑vista在尤其是對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制中的牽涉。我們對(duì)這種vista依賴性抑制機(jī)理僅在b細(xì)胞而非t細(xì)胞反應(yīng)的mdsc抑制中發(fā)揮作用的觀察有助于我們的發(fā)現(xiàn)的新穎性。因此，b細(xì)胞反應(yīng)性的mdsc抑制已經(jīng)是正大力研究的領(lǐng)域。我們之前已公布了(green等,2013)lp-bm5逆轉(zhuǎn)錄病毒誘導(dǎo)的mdsc抑制既不依賴于pd-l1也不依賴于pd-1(也不依賴于il-10)。因此，當(dāng)前關(guān)于vista依賴性途徑的參與的結(jié)果連同inos/no機(jī)理強(qiáng)調(diào)了vista相關(guān)功能相比其序列同源性上的近親pd-l1(wang等,2011)的獨(dú)特性。與vista在得自lp-bm5逆轉(zhuǎn)錄病毒感染小鼠的相同單核mdsc群體對(duì)b細(xì)胞相比t細(xì)胞的抑制中的差異牽涉合在一起，這些結(jié)果提出了進(jìn)一步的重要問(wèn)題，這些問(wèn)題的范圍從具有不同機(jī)理和抑制靶標(biāo)的功能性/表型mdsc亞群的存在可能性，到mdsc亞組在lp-bm5誘導(dǎo)的maids所特有的t細(xì)胞和b細(xì)胞反應(yīng)的極大且廣泛的免疫缺陷中的作用。

本發(fā)明的治療性應(yīng)用

基于vista對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的作用，尤其是其對(duì)msdc介導(dǎo)的b細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用，vista拮抗劑可單獨(dú)地或與其他免疫激活劑或激動(dòng)劑尤其是增強(qiáng)體液免疫的那些(諸如cd40激動(dòng)劑，諸如激動(dòng)性抗cd40抗體或cd40l多肽)相結(jié)合使用，以便治療或預(yù)防其中在治療上期望增加b細(xì)胞反應(yīng)的病癥。此類病癥尤其包括其中疾病病理學(xué)中或引發(fā)預(yù)防性或治療性免疫時(shí)涉及到b細(xì)胞反應(yīng)(例如，抗體反應(yīng))的癌癥。此類癌癥病癥的實(shí)例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤(包括脂肪肉瘤)、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、間皮瘤、神經(jīng)鞘瘤、腦膜瘤、腺癌、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、腦癌、消化器官癌癥和白血病或淋巴樣惡性腫瘤。

此類癌癥的更具體實(shí)例包括惡性血液病，諸如非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)。nhl癌癥包括但不限于：伯基特淋巴瘤(burkitt'slymphoma,bl)、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤/慢性淋巴細(xì)胞性白血病(sll/cll)、套細(xì)胞淋巴瘤(mcl)、濾泡性淋巴瘤(fl)、彌漫性大b細(xì)胞淋巴瘤(dlcl)、邊緣區(qū)淋巴瘤(mzl)、毛細(xì)胞白血病(hcl)和淋巴漿細(xì)胞樣白血病(lpl)、粘膜相關(guān)淋巴組織(malt)結(jié)外邊緣區(qū)b細(xì)胞淋巴瘤、結(jié)外邊緣區(qū)b細(xì)胞淋巴瘤、縱隔大細(xì)胞淋巴瘤、血管內(nèi)大細(xì)胞淋巴瘤、原發(fā)性滲出性淋巴瘤、前體b成淋巴細(xì)胞性白血病/淋巴瘤、前體t和nk細(xì)胞淋巴瘤(前體t成淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、母細(xì)胞性nk細(xì)胞淋巴瘤)、成熟t和nk細(xì)胞腫瘤(包括外周t細(xì)胞淋巴瘤和白血病(ptl))、成人t細(xì)胞白血病/t細(xì)胞淋巴瘤和大顆粒淋巴細(xì)胞性白血病、t-細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病/幼淋巴細(xì)胞性白血病、t細(xì)胞大顆粒淋巴細(xì)胞性白血病、侵襲性nk細(xì)胞白血病、結(jié)外t-/nk細(xì)胞淋巴瘤、腸病型t細(xì)胞淋巴瘤、肝脾型t細(xì)胞淋巴瘤、間變性大細(xì)胞淋巴瘤(alcl)、血管中心性和血管成免疫細(xì)胞性t細(xì)胞淋巴瘤、蕈樣真菌病/塞扎里綜合征(sézarysyndrome)和皮膚t細(xì)胞淋巴瘤(ctcl)?？赏ㄟ^(guò)vista拮抗劑治療的其他癌癥包括但不限于：霍奇金氏淋巴瘤、淋巴細(xì)胞前體細(xì)胞的腫瘤(包括b細(xì)胞急性成淋巴細(xì)胞性白血病/淋巴瘤(b-all)和t細(xì)胞急性成淋巴細(xì)胞性白血病/淋巴瘤(t-all))，胸腺瘤、朗格漢斯(langerhans)細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥、多發(fā)性骨髓瘤(mm)，骨髓瘤形成(諸如急性骨髓性白血病(aml)，包括伴有成熟的aml、沒(méi)有分化的aml、急性前髓細(xì)胞性白血病、急性骨髓單核細(xì)胞性白血病和急性單核細(xì)胞性白血病)、脊髓發(fā)育不良綜合征、和慢性骨髓增生障礙(mds)(包括慢性髓細(xì)胞性白血病(cml))?？赏ㄟ^(guò)vista拮抗劑治療的其他癌癥包括但不限于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，諸如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)管細(xì)胞瘤、室管膜瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；以下器官的實(shí)體瘤：頭和頸(如鼻咽癌、唾液腺癌和食管癌)、肺(如小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌和肺鱗狀細(xì)胞癌)、消化系統(tǒng)(如胃癌，包括胃腸癌、膽管或膽道癌、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)直腸癌和肛門(mén)癌)、生殖系統(tǒng)(如睪丸癌、陰莖或前列腺癌、子宮癌、陰道癌、外陰癌、宮頸癌、卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌)、皮膚(如黑素瘤、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、光線性角化病)、肝(如肝癌、肝腫瘤、肝細(xì)胞癌和肝細(xì)胞瘤)、骨骼(如破骨細(xì)胞瘤和溶骨性骨癌)、其他組織或器官(如胰腺癌、膀胱癌、腎癌、甲狀腺癌、乳腺癌、腹膜癌和卡波濟(jì)氏肉瘤(kaposi'ssarcoma))；以及血管系統(tǒng)的腫瘤(如血管肉瘤和血管外皮細(xì)胞瘤)。

可以治療的其他具體的癌癥適應(yīng)癥包括但不限于所有非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)，特別是難治性/耐藥性nhl、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)、急性b細(xì)胞淋巴細(xì)胞性白血病/淋巴瘤(b-all)、套細(xì)胞淋巴瘤(mcl)和多發(fā)性骨髓瘤(mm)。

還基于vista對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的作用，尤其是其對(duì)msdc介導(dǎo)的b細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用，vista拮抗劑可用于治療或預(yù)防其中在治療上期望增加b細(xì)胞反應(yīng)的感染性病癥。此類病癥尤其包括由諸如病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物和寄生蟲(chóng)的病原體引起的疾病。感染性疾病可由病毒引起，包括腺病毒、巨細(xì)胞病毒、登革熱病毒、eb病毒、漢坦病毒(hanta)、甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、i型單純皰疹病毒、ii型單純皰疹病毒、人免疫缺陷病毒(hiv)、人乳頭瘤病毒(hpv)、流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、乳多泡病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、呼吸道合胞病毒(rsv)、牛瘟病毒、鼻病毒、輪狀病毒、風(fēng)疹病毒、sars病毒、天花病毒、病毒性腦膜炎病毒等。感染性疾病也可由細(xì)菌引起，包括炭疽桿菌(bacillusantracis)、布氏疏螺旋體(borreliaburgdorferi)、空腸彎曲桿菌(campylobacterjejuni)、砂眼衣原體(chlamydiatrachomatis)、肉毒梭菌(clostridiumbotulinum)、破傷風(fēng)梭菌(clostridiumtetani)、白喉(diphtheria)、大腸桿菌(e.coli)、軍團(tuán)菌(legionella)、幽門(mén)螺桿菌(helicobacterpylori)、分枝桿菌(mycobacterium)立克次氏體(rickettsia)、支原體(mycoplasma)奈瑟氏菌(nesisseria)、百日咳(pertussis)、銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa)、肺炎鏈球菌(s.pneumonia)、鏈球菌(streptococcus)、葡萄球菌(staphylococcus)、霍亂弧菌(vibriocholerae)、鼠疫耶爾森氏菌(yersiniapestis)等。感染性疾病還可由真菌引起，諸如煙曲霉(aspergillusfumigatus)、皮炎芽生酵母(blastomycesdermatitidis)、白色假絲酵母(candidaalbicans)、粗球孢子菌(coccidioidesimmitis)、新型隱球酵母(cryptococcusneoformans)、夾膜組織胞漿菌(histoplasmacapsulatum)、馬尼弗氏青霉(penicilliummarneffei)等。感染性疾病還可由原生動(dòng)物和寄生蟲(chóng)引起，諸如衣原體、kokzidioa、利什曼原蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)、立克次氏體、錐蟲(chóng)等。

還基于vista對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的作用，尤其是其對(duì)msdc介導(dǎo)的b細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用，vista拮抗劑可用于“增強(qiáng)”治療性疫苗的效果。在本發(fā)明的該應(yīng)用中，受試者將通過(guò)施用一種或多種抗原或一種或多種抗體(通常為抗原特異性的人抗體或人源化抗體)連同至少一種vista拮抗劑(例如，抗vista抗體、或拮抗性vista多肽、或包含此類肽的綴合物、或拮抗vista活性或表達(dá)的核酸諸如反義核酸)而針對(duì)特定的抗原主動(dòng)或被動(dòng)免疫。

vista拮抗劑可在施用包含所需抗原或抗體的疫苗之前、同時(shí)或之后施用。此類抗原或抗體以及vista拮抗劑可以在相同或不同的制劑中。最通常的是，它們包含在不同的制劑中。vista拮抗劑按一定的量并在一定的給藥條件下施用，以使得其促進(jìn)將針對(duì)所需抗原或由治療性抗體引起的b細(xì)胞免疫反應(yīng)。該抗原可包括腫瘤抗原、感染因子抗原(例如，細(xì)菌、病毒、酵母、真菌或寄生蟲(chóng)抗原)或可包括過(guò)敏原或自身抗原。類似地，所施用的抗體可以為腫瘤抗原、感染因子抗原(例如，細(xì)菌、病毒、酵母、真菌或寄生蟲(chóng)抗原)、過(guò)敏原或自身抗原特異性的。

還基于vista對(duì)b細(xì)胞反應(yīng)的作用，尤其是其對(duì)msdc介導(dǎo)的b細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用，vista激動(dòng)劑可用于治療或預(yù)防其中在治療上期望降低b細(xì)胞反應(yīng)的病癥。此類病癥尤其包括其中疾病病理學(xué)中涉及到b細(xì)胞反應(yīng)的病癥、其中疾病病理學(xué)中涉及到b細(xì)胞反應(yīng)的炎性病癥以及其中疾病病理學(xué)中涉及到b細(xì)胞反應(yīng)的過(guò)敏性病癥。

可用vista激動(dòng)劑治療的此類自身免疫疾病的實(shí)例包括以下：同種異體胰島移植排斥、斑禿、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂綜合征、自身免疫性愛(ài)迪生氏病(autoimmuneaddison'sdisease)、抗中性白細(xì)胞胞質(zhì)自身抗體(anca)、腎上腺自身免疫病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性心肌炎、自身免疫性嗜中性白細(xì)胞減少癥、自身免疫性卵巢炎和睪丸炎、自身免疫性血小板減少癥、自身免疫性蕁麻疹、貝切特氏病(disease)、大皰性類天皰瘡、心肌病、卡斯?fàn)柭暇C合征(castleman'ssyndrome)、口炎性腹瀉-皮炎、慢性疲勞免疫機(jī)能異常綜合征、慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病、丘-施二氏(churg-strauss)綜合征、疤痕性類天皰瘡、crest綜合征、冷凝集素病、克羅恩氏病(crohn'sdisease)、皮肌炎、盤(pán)狀狼瘡、特發(fā)性混合型冷球蛋白血癥、因子viii缺乏癥、纖維肌痛-纖維肌炎、腎小球腎炎、格雷夫斯氏病(grave'sdisease)、格-巴二氏(guillain-barre)病、古德帕斯丘綜合征(goodpasture'ssyndrome)、移植物抗宿主病(gvhd)、橋本氏甲狀腺炎(hashimoto'sthyroiditis)、血友病a、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性血小板減少性紫瘢(itp)、iga神經(jīng)病、igm多神經(jīng)病、免疫介導(dǎo)的血小板減少癥、幼年型關(guān)節(jié)炎、川崎氏病(kawasaki'sdisease)、扁平苔蘚(iichenplantus)、紅斑狼瘡、美尼爾氏病(meniere'sdisease)、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥、1型糖尿病、重癥肌無(wú)力、尋常天皰瘡、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、多軟骨炎、多腺性綜合征、風(fēng)濕性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、銀屑病、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、雷諾氏現(xiàn)象(reynaud’sphenomenon)、萊特爾氏綜合征(reiter'ssyndrome)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病、斯耶格倫氏綜合征(syndrome)、實(shí)體器官移植排斥、僵人綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、大動(dòng)脈炎、顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、血栓性血小板減少性紫瘢、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎諸如皰疹樣皮炎血管炎、白癜風(fēng)和韋格納氏肉芽腫病(wegner'sgranulomatosis)。

可用vista激動(dòng)劑治療的此類自身免疫病癥的實(shí)例包括以下：急性呼吸窘迫綜合征(ards)、急性膿毒性關(guān)節(jié)炎、佐劑性關(guān)節(jié)炎、幼年型特發(fā)性關(guān)節(jié)炎、變應(yīng)性腦脊髓炎、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性脈管炎、過(guò)敏癥、哮喘、動(dòng)脈粥樣硬化、由于慢性細(xì)菌或病毒感染引起的慢性炎癥、慢性阻塞性肺病(copd)、冠狀動(dòng)脈疾病、腦炎、炎性腸病、炎性骨質(zhì)溶解、與急性和遲發(fā)性超敏反應(yīng)有關(guān)的炎癥、與腫瘤有關(guān)的炎癥、外周神經(jīng)損傷或脫髓鞘性疾病、與組織創(chuàng)傷諸如燒傷和局部缺血有關(guān)的炎癥、由腦膜炎引起的炎癥、多器官損傷綜合征、肺纖維化、膿毒癥和敗血性休克、斯-約二氏(stevens-johnson)綜合征、未分化的關(guān)節(jié)化膿以及未分化的脊椎關(guān)節(jié)病。

可用vista激動(dòng)劑治療的此類過(guò)敏性病癥的實(shí)例包括例如可用vista激動(dòng)劑治療的優(yōu)選的過(guò)敏性病癥包括：過(guò)敏性接觸性皮炎、普禿、哮喘、過(guò)敏性紫癜性哮喘、特應(yīng)性皮炎、皰疹樣皮炎、持久隆起性紅斑、邊緣性紅斑、多形性紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、過(guò)敏性肉芽腫、環(huán)狀肉芽腫、粒細(xì)胞減少癥、過(guò)敏性肺炎、角膜炎、腎病綜合征、重疊綜合征(overlapsyndrome)、養(yǎng)鴿人疾病(pigeon-breeder’sdisease)、特發(fā)性多神經(jīng)炎、蕁麻疹、葡萄膜炎、青少年皮肌炎和白癜風(fēng)。

其中可能期望降低b細(xì)胞反應(yīng)的病癥的其他實(shí)例包括：變應(yīng)性支氣管肺曲霉病；自身免疫性溶血性貧血；黑棘皮病；變應(yīng)性接觸性皮炎；愛(ài)迪生氏病(addison'sdisease)；特應(yīng)性皮炎；斑禿；普禿；淀粉樣變性；過(guò)敏性樣紫癜；過(guò)敏性樣反應(yīng)；再生障礙性貧血；遺傳性血管性水腫；特發(fā)性血管性水腫；強(qiáng)直性脊柱炎；顱動(dòng)脈炎；巨細(xì)胞動(dòng)脈炎；高安動(dòng)脈炎(arteritis,takayasu's)；顳動(dòng)脈炎；哮喘；共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥；自身免疫性卵巢炎；自身免疫性睪丸炎；自身免疫性多內(nèi)分泌腺衰竭；貝切特氏病(disease)；伯杰氏病(berger'sdisease)；伯格病(buerger'sdisease)；大皰性天皰瘡；慢性粘膜皮膚型念珠菌病；卡普蘭綜合征(caplan'ssyndrome)；心肌梗死后綜合征；心包切開(kāi)后綜合征；心炎；乳糜瀉(celiacsprue)；查加斯病(chagas'sdisease)；謝-希綜合征(chediak-higashisyndrome)；丘-斯病(churg-straussdisease)；科根綜合征(cogan'ssyndrome)；冷凝集素病；肢端硬皮綜合征；克羅恩氏病(crohn'sdisease)；冷球蛋白血癥；原因不明的纖維化肺泡炎；皰疹樣皮炎；皮肌炎；糖尿?。淮?布綜合征(diamond-blackfansyndrome)；迪喬治綜合征(digeorgesyndrome)；盤(pán)形紅斑狼瘡；嗜酸性粒細(xì)胞增多性肌膜炎；鞏膜外層炎；持久隆起性紅斑；邊緣性紅斑；多形性紅斑；結(jié)節(jié)性紅斑；家族性地中海熱；費(fèi)爾蒂綜合征(felty'ssyndrome)；肺纖維化；過(guò)敏性樣腎小球腎炎；自身免疫性腎小球腎炎；鏈球菌感染后腎小球腎炎；移植后腎小球腎炎；膜性腎小球病；古德帕斯丘綜合征(goodpasture'ssyndrome)；移植物抗宿主病；免疫介導(dǎo)型粒細(xì)胞減少；環(huán)形肉芽腫；變應(yīng)性肉芽腫病；肉芽腫肌炎；格雷夫斯病(grave'sdisease)；橋本氏甲狀腺炎(hashimoto'sthyroiditis)；新生兒溶血??；特發(fā)性血色素沉著病；亨-舍紫癜(purpura)；慢性活動(dòng)型和慢性進(jìn)行性肝炎；組織細(xì)胞增多癥x；嗜酸性粒細(xì)胞增多綜合征；特發(fā)性血小板減少性紫癜；喬布綜合征(job'ssyndrome)；幼年型皮肌炎；幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(幼年型慢性關(guān)節(jié)炎)；川畸病(kawasaki'sdisease)；角膜炎；干燥性角結(jié)膜炎；蘭-格-巴-斯四氏綜合征(landry-guillain-barre-strohlsyndrome)；瘤型麻風(fēng)；勒夫勒綜合征(loeffler'ssyndrome)；萊爾綜合征(lyell'ssyndrome)；萊姆病(lymedisease)；淋巴瘤樣肉芽腫??；全身性肥大細(xì)胞病；混合性結(jié)締組織病；多發(fā)性單神經(jīng)炎；穆-韋綜合征(muckle-wellssyndrome)；粘膜皮膚淋巴結(jié)綜合征；多中心性網(wǎng)狀組織細(xì)胞增多癥；多發(fā)性硬化；重癥肌無(wú)力；蕈樣肉芽腫病；系統(tǒng)性壞死性血管炎；腎病綜合征；重疊綜合征；脂膜炎；陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿；陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿；類天皰瘡；天皰瘡；紅斑性天皰瘡；落葉性天皰瘡；尋常性天皰瘡；養(yǎng)鴿人疾病(pigeonbreeder'sdisease)；過(guò)敏性肺炎；結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎；風(fēng)濕性多肌痛；多肌炎；特發(fā)性多神經(jīng)炎；葡萄牙家族性多發(fā)性神經(jīng)??；先兆子癇/子癇；原發(fā)性膽汁性肝硬化；進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥(硬皮病)；銀屑?。汇y屑病關(guān)節(jié)炎；肺泡蛋白沉著癥；肺纖維化；雷諾氏現(xiàn)象/綜合征(raynaud'sphenomenon/syndrome)；里德?tīng)柤谞钕傺?reidel'sthyroiditis)；賴特爾綜合征(reiter'ssyndrome)；復(fù)發(fā)性多軟骨炎；風(fēng)濕熱；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；結(jié)節(jié)??；鞏膜炎；硬化性膽管炎；血清?。蝗麧衫锞C合征(sézarysyndrome)；干燥綜合征(syndrome)；斯-約綜合征(stevens-johnsonsyndrome)；斯蒂爾病(still'sdisease)；亞急性硬化性全腦炎；交感性眼炎；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；移植物排斥反應(yīng)；潰瘍性結(jié)腸炎；未分化型結(jié)締組織??；慢性蕁麻疹；寒冷性蕁麻疹；眼色素層炎；白癜風(fēng)；韋-克病(weber-christiandisease)；韋格納氏肉芽腫病(wegener'sgranulomatosis)；維-奧綜合征(wiskott-aldrichsyndrome)?？捎胿ista激動(dòng)劑或拮抗劑治療的其他b細(xì)胞相關(guān)病癥包括b細(xì)胞相關(guān)病癥，包括特征在于具有過(guò)多的b細(xì)胞、過(guò)少的b細(xì)胞、過(guò)度活躍的b細(xì)胞、不活躍的b細(xì)胞(或活動(dòng)實(shí)質(zhì)性降低的b細(xì)胞)或功能障礙的b細(xì)胞的病狀。已知涉及b細(xì)胞的示例性人疾病包括但不限于：自身免疫疾病(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征(syndrome)、anca相關(guān)血管炎、抗磷脂綜合征\特發(fā)性血小板減少性紫癜(itp)、自身免疫性溶血性貧血、吉蘭巴雷綜合征(guillain-barrésyndrome)、慢性免疫多發(fā)性神經(jīng)病、自身免疫性甲狀腺炎、i型(自身免疫性)糖尿病、膜性腎小球腎炎、古德帕斯徹病(goodpasture'sdisease)、自身免疫性胃炎、惡性貧血、尋常性天皰瘡(pemphigusvulgarus)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、皮肌炎-多發(fā)性肌炎、重癥肌無(wú)力、系統(tǒng)性硬化癥(硬皮病)、多發(fā)性硬化、間質(zhì)性肺病、慢性疲勞綜合征、由于孕期抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(anca)導(dǎo)致的自身免疫性甲狀腺炎和乳糜瀉)；炎性疾病(例如，免疫球蛋白a神經(jīng)病、亨-舍恩萊因紫癜(purpura)、慢性移植物排斥、特應(yīng)性皮炎、橋本甲狀腺炎(hashimoto'sthyroiditis)、格雷夫斯病(grave'sdisease)、萎縮性甲狀腺炎、立得氏甲狀腺炎(riedel'sthyroiditis)、哮喘、神經(jīng)萊姆病(lymeneuroborreliosis)、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病(crohn’sdisease)和過(guò)敏癥)；以及癌癥(例如，淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(nhl)、侵襲性nhl、復(fù)發(fā)侵襲性nhl、復(fù)發(fā)惰性nhl、難治性nhl、難治性惰性nhl、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(cll)包括免疫球蛋白突變cll和免疫球蛋白非突變cll、小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、白血病、毛細(xì)胞白血病(hcl)、急性淋巴細(xì)胞性白血病(all)、套細(xì)胞淋巴瘤、中級(jí)/濾泡性nhl、中級(jí)彌散性nhl、高級(jí)成免疫細(xì)胞性nhl、高級(jí)成淋巴細(xì)胞性nhl、高級(jí)小無(wú)核裂細(xì)胞性nh、腫塊性疾病nhl(bulkydiseasenhl)、伯基特淋巴瘤(burkitt'slymphoma)、多發(fā)性骨髓瘤、前體b細(xì)胞成淋巴細(xì)胞性白血病和其他源自早期b細(xì)胞前體的惡性腫瘤、毛細(xì)胞白血病、裸細(xì)胞型急性成淋巴細(xì)胞性白血病、瓦爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥(macroglobulinemia)、彌散性大b細(xì)胞淋巴瘤(dlbcl)包括生發(fā)中心b細(xì)胞樣(gcb)dlbcl、活化的b細(xì)胞樣(abc)dlbcl和3型dlbcl、幼淋巴細(xì)胞性白血病、輕鏈疾病、漿細(xì)胞瘤、骨硬化性骨髓瘤、漿細(xì)胞白血病、意義未明的單克隆丙種球蛋白病(mgus)、郁積型多發(fā)性骨髓瘤(smm)、無(wú)痛性多發(fā)性骨髓瘤(imm)、霍奇金氏淋巴瘤包括經(jīng)典和結(jié)節(jié)狀淋巴細(xì)胞優(yōu)勢(shì)型、淋巴漿細(xì)胞增多型淋巴瘤(lpl)、以及邊緣區(qū)淋巴瘤包括胃粘膜相關(guān)淋巴組織(malt)淋巴瘤。

硬皮病涵蓋一組異質(zhì)性疾病，包括但不限于：限制性皮膚病、彌散性皮膚病、無(wú)皮膚硬化的硬皮病、未分化的結(jié)締組織病、重疊綜合征、局限性硬皮病、硬斑病、線形硬皮病、類軍刀傷(encoupdesaber)、布施克成人硬化病(scleredemaadultorumofbuschke)、硬化性粘液水腫、慢性移植物抗宿主病(gvhd)、嗜酸細(xì)胞性筋膜炎、糖尿病的指狀硬化以及原發(fā)性淀粉樣變性和與多發(fā)性骨髓瘤相關(guān)的淀粉樣變性。(綜述見(jiàn)于：harrison'sprinciplesofinternalmedicine,第16版/編輯dennisl.kasper等themcgraw-hillcompanies,inc.2005newyork,n.y.)。

序列

鼠vistaseqidno:1

鼠vistaseqidno:2

鼠vistaseqidno:3

人vistaseqidno:4

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