專利名稱：Mas g-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑作為凋亡活性調(diào)節(jié)劑用于預防和治療疾病的用途的制作方法
MAS G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑作為凋亡活性調(diào)節(jié)劑 用于預防和治療疾病的用途本發(fā)明的特征在于Mas ， G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途， 作為凋亡活性調(diào)節(jié)劑，用于疾病的研究、預防和治療。本發(fā)明進一步的特征在于Mas, G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑 的用途，用于調(diào)節(jié)涉及B/Akt激酶蛋白活性改變的凋亡活性。本發(fā)明的另一個特征是Mas, G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑， 包括血管緊張素-(l-7)肽及其類似物、激動劑和拮抗劑，肽或非肽的， 作為凋亡活性調(diào)節(jié)劑用于疾病的研究、預防和治療的用途。本發(fā)明進一步要求保護Mas, G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑， 與藥物學或藥理學上可接受的載體一起配制，和Mas, G-蛋白偶聯(lián)受 體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(l-7)肽及其類似物、激動劑和 拮抗劑，肽或非肽的，作為凋亡活性調(diào)節(jié)劑的用途。另一個要求保護的特征是Mas, G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑 包括血管緊張素-(l-7)肽及其類似物、激動劑和拮抗劑(肽或非肽的) 的制劑的微粒和納米顆粒、可植入或可注射裝置，作為凋亡活性調(diào)節(jié) 劑的用途。本發(fā)明描述的給藥形式包含但不限于使用Mas， G-蛋白偶聯(lián)受體 激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(1-7)肽及其類似物、激動劑和拮 抗劑，肽或非肽的，及其制劑，通過口服，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮下，局 部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途徑或作為可植入或 注射的裝置來使用，用于疾病的研究、預防和治療。腎素-血管緊張素-系統(tǒng)(RAS )作為體液和血壓體內(nèi)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)劑的 作用是公知的。RAS負責生理和病理情況中的血壓、心血管體內(nèi)穩(wěn)態(tài) 和水電解質(zhì)平衡的調(diào)節(jié)(Santos, R. A. S. ; Ca,gnole-Santos, M. J.; Andrade, S. P. Angiotensin-(l-7): an update. We^T//戶e/^. 91:45-62, 2000 )。最近發(fā)現(xiàn)除了在血液循環(huán)中產(chǎn)生Ang II的系統(tǒng)以外， 不同的組織也可以在局部產(chǎn)生該系統(tǒng)的各種生物活性肽(組織RAS)。 在多種器官和組織包括心臟，血管，腎臟，雄性和雌性生殖系統(tǒng)，內(nèi) 分泌腺，骨髓和腦中，發(fā)現(xiàn)了組織RAS的成分。這些RAS在不同組織 中的功能仍然沒有得到完全闡明(Santos, RAS， Campagnole-Santos， MJ， Andrade， SP， Angiotensin-(l-7): an update. Regul Pept. 91: 45-62， 2000; Yoshimura， Y. The ovarian rennin-angiotensin system in reproductive physiology, 7Viei/_roe/7^cr2'/2oA ; 18:247-291， 1997)。經(jīng)典RAS的主要成分是腎素-催化血管緊張素原蛋白水解轉(zhuǎn)化成 血管緊張素I Ung I)的酶；血管緊張素原-腎素的主要底物和血管 緊張素II (AngII)的前體；血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE),其通過水解 兩個羧基末端氨基酸將Ang I轉(zhuǎn)化成Ang II;血管緊張素II-該系統(tǒng) 的主要生物活性肽；以及AL和AT2受體，負責AngII的細胞效應的啟 動。向該公知系統(tǒng)中，已經(jīng)加入了其它肽，如血管緊張素III( Ang III )， 血管緊張素IV (Ang IV)，和血管緊張素-(l-7) [(Ang-(l-7))]。 Ang-(l-7)可以通過組織內(nèi)肽酶從Ang I或Ang II產(chǎn)生(Santos, R. A. ， Brosnihan， K. B. ， Cappell, M. C. ， Pesquero， J. , Chernicky， C丄，Greene, L, J. ; Ferrario， C. M. Converting enzyme activity and angiotensin metabolism in the dog brainstem, Hypertension(11 (2-Pt2 ) : 1153-11537， 1988 )。已經(jīng)在血漿和多種人和動物器官和組織中鑒定出Ang-(1-7)(Santos, R. A. S. ; Campagnole-Santos， M.J; Andrade， SP. Angiotensin-(l-7): an update. 戶抓91 :45-62， 2000 )，包括雌性大鼠卵巢(Costa APR, Fagundes-Moura CR， Pereira VM， SilvaLF， VieiraMA， Santos RA， ReisAM) ， Angiotensin-(l-7): a novel peptide in the ovary. Endocrinology. 144:1942-1948， 2003 ) 。 Santos等1988已證明了其不依賴于ACE的產(chǎn)生(Santos, R. A. , Brosnihan， K. B. ， Cappell, M. C, Pesquero， J. , Chernicky，CL ， Greene， L J.; Ferrario， C. M. Converting enzyme activity and angiotensin metabolism in the dog brainstem. Hypertension. 11 (2-Pt2): I153-I153-I1537, 1988 )并且Santos等1994 ( Santos， RAS， Campagnole-Santos， M.J. ， Baracho， N. C， Fontes， M. A.， Silva， L. C， Neves， L A. ， Oliveira， D. R. , Caligiorne， S. M.， Rodrigues, A . R. ， Gropen Junior, C. Characterization of a new angiotensin antagonist selective for angiotensin-(l-7): evidence that the actions of angiotensin—(l-7) are mediated by specific angiotensin receptors. Arfl2'/ We"i/7A 35 (4): 293-298， 1994 )和Tallant等1997 (Tallant， E. A， Lu， X. ， Weiss, R. B.， Cappell， M. C; Ferrario， C. M. Bovine aortic endothelial cells contain an angiotensin-(1-7) receptor. Hypertension 29: 388-393， 1997 )提出其附著于特定受體。已經(jīng)獲得這些發(fā)現(xiàn)，尤其是作為可以 得到Ang (1-7)的選擇性拮抗劑A-779的結(jié)果，(Aspi-Arg2-Val3-Tir4-Lle5-His6-D-Ala7 ; Santos, R. A .， Ca邁pagnole- Santos， M. J. Barracho， N. C， Fontes， M. A， Silva， C， Neves， A， Oliveira, D. R. ， Caligione, S. M. ， Rodrigues, A. R. ， Groppen Junior, C, Characterization of a new angiotensin-antagonist selective for angiotensin- ( l-7 ): evidence that the actions of angiotensin-(1-7) are mediated by specif ic angiotensin receptors. Sw//. 35 (4): 293-298，1994; Ambuhl， P， Felix， D. Khosla, M. C.[7-D-ALA〗-Angiotensin-(l-7): selective antagonism of angiotensin-(l-7) in the rat paraventricular nucleus. 5ra//7i es 1994; 35 (4) :289-91 )。 多種酶參與RAS級聯(lián)的幾個步驟，在其中它們負責一些肽片段的 降解，以及負責其他肽片段的產(chǎn)生。ACE負責將Ang I轉(zhuǎn)化成Ang II; PEP (脯氨酰內(nèi)肽酶)從Ang I和Ang II產(chǎn)生Ang-(1-7)，而NEP (中 性內(nèi)肽酶)催化Ang I轉(zhuǎn)化成An-(l-7)。 ACE還水解Ang-(I-7)，產(chǎn)生Ang-(l-5) (Chappell MC， Pirro NT， Sykes， A， Ferrario CM. Metabolism of angiotensin-(l-7) by angiotensin-converting enzyme.物e"e/ ".肌31 :362-367， 1998 )。因此，ACE途徑對循 環(huán)和組織RAS生物活性肽的產(chǎn)生和降解都是重要的。最近，描述了另 一種酶ACE2，其對于Ang-(l-7)的形成是重要的(SR Tipnis， NM Hooper, R Hyde, E Karran和G Christie. The human homolog of angiotensin-converting enzyme. Cloning and functional expression as a captopril-insensitive carboxypeptidase. /.275 (43): 33238-33243， 200 )。這種酶形成Ang-(1-7)， 尤其是從Ang II。血管緊張素-(l-7)和血管緊張素II是主要的RAS效應物。兩個重 要的特征將Ang-(l-7)與Ang II區(qū)分開來首先，Ang-(l-7)具有高 度特異性的生物作用，并且根據(jù)Ang-(l-7)形成的途徑，可完全不依 賴于ACE ( Santos, R. A. S,; Campagnole-Santos， M. J,; Andrade， S. P. Angiotensin-(l-7): an update. We^;/"oiy 戶e;^油s. 91 :45-62， 2000 )。由于其在體內(nèi)的弱致瘤活性，最初將Mas調(diào)節(jié)基因描述為原癌基 因(Young D. Waitches G， Birchmeier C. Fasano 0. Wigler M. Isolation and characterization of a new cellular oncogene encoding a protein with multiple potential transmembrane domains. Ce//. 1986; 45:711-71)。在哺乳動物中，主要在睪丸和不同的腦區(qū)域包括海馬和扁桃體中 檢測到其基因的表達，在腎臟和心臟中不那么強烈但仍以顯著水平 (BunnemannB， Fuxe K， Metzger R， Mull ins J， Jackson TR， Hanley MR， Ganten D. Autoradiographic localization of Mas proto-oncogene mRNA in adult rat brain using in situ hybridization. Neurosci Lett. 114:147-153,1990; Alenina N， Bader M， Walther T. Imprinting of the murine MAS proto-oncogene is restricted to its antisense RNA. W/oc力e/z7 J/o; 力"290: 1072-1078， 2002 )。其基因修飾具有7個跨膜結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，所述蛋白質(zhì)具有I類 G-蛋白偶聯(lián)受體的特征。在最初的研究中，提出該基因作為八肽血管 緊張素II的受體的編碼者(codifier) (Jackson TR， Blair LA， Marshall J， Goedert M， Hanley MR. The Mas oncogene encodes an angiotensin receptor, ^"z/re 335: 437-440， 1988 )。 然而,Ambroz 和同事以及后來Ardaillou顯示了在Mas轉(zhuǎn)染的細胞中Ang II所致的 胞內(nèi)鈣升高，只發(fā)生在內(nèi)源表達Ang II的ATI受體的細胞中(Ambroz C， ClarkA， CattKJ. TheMasoncogene enhances angiotensin-induced [Ca2+] i responses incells with pre—existing angiotensin II receptors. 52'ocAe邊丑/o/7/ ys Jets. 1133: 107-111 ， 1991 ; Ardaillou R. Angiotensin II receptors. / j邊&c iVepAro/. 10:S30-S39， 1999 )。最近觀察到，事實上，Mas 是Ang-(l-7)的受體(Santos, R. A. ， Sim5es e Silva A C， Marie， C， Silva， D.M. ， Machado， R. P. ， de Buhr， I. ， Heringer-Walther， S. ， Pinheiro， S. V. ， Lopes, M, T. ， Bader， M. ， Mendes， E. P. ， Lemos: V. S. ， Campagnole-Santos， M. J. ， Schultheiss， H. P. ， Speth， R.; Walther， T. Angiotensin-(l-7) is an endogenous ligand for the G protein-coupled receptor Mas尸roc JVis〃. ^cacf 鵬，100 (14): 8258-8263， 2003 )。內(nèi)皮功能障礙是與靶器官(其中特別是，心臟，腎臟，腦，血管， 生殖器官)損傷相關(guān)的各種病理情況的建立和發(fā)展時更早發(fā)生的事件 (Goligorsky MS. Endothelial cell dysfunction: can,t live with it, how to live without it. 」/ /. 戶力7"'0/ to3fl/尸力，70. 288 (5):F871-80， 2005 )。 一氧化氮生物利用率的降低是內(nèi)皮功能障 礙開始的關(guān)鍵因素，因為該分子具有血管舒張，抗增殖，抗血栓形成， 抗動脈粥樣硬化的特性并中和活性氧產(chǎn)生(Ogita H， Liao J. Endothelial function and oxidative stress. Endothelium. 11 (2): 123-32， 2004 )。最近證明了除了依賴于鈣的經(jīng)典途徑外，通過經(jīng)由B/Akt激酶蛋白直接磷酸化內(nèi)皮一氧化氮合酶(eN0S)的位點 如1177絲氨酸也可以形成一氧化氮，該機理大大促成內(nèi)皮完整性的維 持。Akt的激活，通過磷酸化eNOS，參與人內(nèi)皮中Ant-(l-7)刺激的 一氧化氮釋放，結(jié)果參與內(nèi)皮功能性改善，這是本發(fā)明的一個特征。 本發(fā)明的另一個特征是證明Ang-(1-7)負向調(diào)節(jié)Ang II在人內(nèi)皮中的 作用，通過抑制涉及活性氧產(chǎn)生的近端胞內(nèi)途徑如c-SRC。此外， Ang-(l-7)抑制NAD(P)H氧化酶的活性，后者是血管壁中產(chǎn)生活性氧的 最大來源(Touyz RM. Reactive oxygen species and angiotensin II signaling in vascular cells - implications in cardiovascular disease, /歸汐/o 37 (8): 1263-73， 2004 )。通過AngII激活MD(P)H (氧化酶)需要c-SRC的存在，以發(fā)生該酶的亞基 p47phox的磷酸化和遷移至膜。此外，以Ang II慢性刺激中，c-SRC 參與NAD(P)H氧化酶的亞基gp91phox， p22phox和p47phox的蛋白表 達的增加(Touyz RM， Yao G, Schiffrin EL c-Src induces phosphorylation and translocation of p47pho role in super oxide generation by angiotensin II in human vascular smooth muscles cells. Jr&r/osc7er T/lto/z^ Ksse 23 (6): 981-7， 2003 )。該事實是特別重要的，因為促氧化和抗氧化因素之間的失衡是內(nèi)皮功能 障礙開始的決定因素之一。因此，除了通過釋放一氧化氮直接促進維 持內(nèi)皮完整性外，Ang-(l-7)還中和氧化自由基的產(chǎn)生?；钚匝醯漠a(chǎn)生 又與凋亡活性具有密切關(guān)聯(lián)，因為其刺激信號轉(zhuǎn)導級聯(lián)，包括MAPK 類，胱天蛋白酶類和其他-細胞死亡的決定因素(Matuzawa, A. ， lchijo， H. Stress-responsive protein kinases in redox-regulated apoptosis signaling.Aedos 57g/ a/ 7 (3-4): 472-81 ; 2005 )。然而，在現(xiàn)有技術(shù)中不存在涉及以下內(nèi)容的發(fā)明，即Ang- (I-7) 或其肽或非肽的類似物的制劑的用途，所述Ang-(l-7)或其類似物通 過Mas受體激活級聯(lián)PI3K/Akt/eN0S以及滅活MD(P)H氧化酶和降低 參與活性氧產(chǎn)生和內(nèi)皮凋亡的機理，用于預防和治療涉及內(nèi)皮功能障 礙的病理情況，例如，但不限于，心血管疾病，腎病，多代謝綜合征，勃起功能障礙，中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等等。Ant-(1-7)提高探究行為并有助于記憶(Santos, RA， Campagnole-Santos， MJ. Central and Peripheral actions of Angiotensin-(l-7). Srsz / 》/o A", 27 (4): 1033-47， 1994; Hellner， K., Walther， T. ， Schubert, M., Albrecht， D， Angiotensin-(1-7) enhances UP in the hippocampus through the G-protein-coupled receptor Mas. Ce" A^i/rosc/. 29(3) :427-35， 2005 ) 。 Mas受體定位于涉及這些功能的大腦區(qū)域中， 包括海馬，扁書匕體和腦皮層(K. AMartin， S. G. Grant, S. Hockfield. The Mas proto-oncogene is developmentally regulated in the rat central nervous system, ^ra//7 Per》m'/68 (1) :75-82， 1992 )。 Mas受體與Ang-(1-7)的相互作用激活了具有抗凋亡特征的信 號轉(zhuǎn)導途徑，更具體的是PKI3/Akt的途徑。通過Ang-(l-7)提高的B (Akt)激酶蛋白的磷酸化，減少了細胞凋亡U.-Z. Yang， 0. Tschopp， A. Baudry， B. Diimmler， D. Hynx和B. A Hemmings. Physiological functions of protein kinase B Akt "/ocAezn Soc 7>a/2S. 32:350-354， 2004 )。
Akt的大腦亞型Akt y敲除小鼠，呈現(xiàn)出大腦重量的顯著減 輕(Z.-Z. Yang, 0. Tschopp, A Baudry， B. Diimmler, D. Hynx 和B. A Hemmings. Physiological functions of protein kinase B Akt A/oc力e/z Soc 7>a/^. 32:350-354， 2004 )。腦中Akt表達的一 些部位是海馬和大腦皮層，所述區(qū)域還富含RMM (對于Mas受體)。 然而，現(xiàn)有技術(shù)中不存在涉及血管緊張素-(I-7)制劑用于控制或預防 變性腦疾病或記憶或?qū)W習障礙的發(fā)明，所述發(fā)明基于通過Ang-(1-7) 與Mas受體的相互作用誘導的對Akt介導的抗凋亡活性的刺激。相似 地，不存在涉及Mas受體激動劑或拮抗劑用于研究、預防或治療變性 腦疾病或記憶或?qū)W習障礙的用途的發(fā)明，所述用途基于通過肽或非肽 Mas受體激動劑與該受體的相互作用誘導的對Akt介導的抗凋亡活性 的刺激。本發(fā)明的特征在于含有Ang-(1-7)、 Ang-(1-7)的類似物或衍生物的控釋系統(tǒng)的應用，其有助于接入以與Mas G蛋白偶聯(lián)受體相互作用。 G蛋白，Mas和Ang-(l-7)、類似物或衍生物之間的這種相互作用，使 得能夠控制或預防特征在于凋亡活性提高的變性腦疾病，包括變性腦 障礙，如阿爾茨海默氏病，帕金森病，亨廷頓病等。令人滿意的控釋 系統(tǒng)包括但不限于環(huán)糊精，生物相容性聚合物，生物可降解聚合物， 其他聚合基質(zhì)，膠囊，微膠嚢，微粒，推注(bolus)制劑，滲透泵， 擴散裝置，脂質(zhì)體，lipospheres和經(jīng)皮給藥系統(tǒng)。最近，多篇論文表明IP3k/AKT途徑對介導胰島素受體與其底物信 號轉(zhuǎn)導起關(guān)鍵作用(Zdychova J， Komers R. Emerging role of Akt kinase/protein kinase B signaling in pathophysiology of diabetes and its complications.戶力尸s/oi Aes; 54(1):1-16， 2005 )。改變該級聯(lián)的介質(zhì)，如生長因子，血管緊張素n，活性氧，皮質(zhì)類固 醇，雌激素，和血糖狀態(tài)的改變自身，將促進增殖性細胞改變，由于PI3K/Akt途徑實質(zhì)上是抗凋亡途徑，這將導致從糖尿病中固有的內(nèi)皮 功能障礙到糖尿病懷孕婦女中胚胎產(chǎn)生畸形改變(Reece EA， Ma XD， Zhao Z, Wu YK， Dhanasekaran D. Aberrant patterns of cellular communication in diabetes-induced embryopathy in rats: II， apoptotic pathways血/. M"e""eco/. 192 (3): 967-972， 2005 )。 Akt可受到指導該途徑介導的信號轉(zhuǎn)導的各種因素的調(diào)節(jié)。例如，D-葡萄糖調(diào)節(jié)Akt的磷酸化，并且高血糖已與糖尿病中的內(nèi)皮功能障礙 相關(guān)(Varma S， Lai BK， Zhen R， Breslin JW， Saito S， Pappas PJ， Hobson Ii RW， Duran WN. Hyperglycemia Alters PI3k and Akt Signaling and Leads to Endothelial Cell Proliferative Dysfunction. J/zz /腳"o7 〃ea" "re戶力，'o厶2005印刷中)。 此外，絲氨酸的磷酸化與e-N0S的激活相關(guān)(Kobayashi T， Taguchi K， Yasuhiro T， Matsumoto T， Kamata K. Impairment of PI3-K/Akt pathway underlies attenuated endothelial function in aorta of type 2 diabetic mouse model. Hypertension. 44 (6): 956-962， 2004 ),并可以通過提高脂質(zhì)水平來抑制，表明除了內(nèi)皮保存和活化循環(huán)內(nèi)皮祖細胞(EPC)外，Akt可能還與動脈粥樣硬化保護效果相關(guān)。 在骨骼肌中，Akt磷酸化的改變與2型糖尿病中通過GLUt4的運輸中 的改變相關(guān)(Karlsson HK， Zierath JR， Kane S， Krook A， Lienhard GE， Wallberg-Henriksson H. Insulin-Stimulated Phosphorylation of the Akt Substrate AS160 Is Impaired in Skeletal Muscle of Type 2 Diabetic Subjects, "/a6"es. 54 (6): 1692-7， 2005 )。 另 一個令人感興趣的方面是該級聯(lián)似乎涉及P細胞自身的增殖和存 活，并且其被神經(jīng)酰胺激活的磷酸酶(CAPP)滅活可能引起I型糖尿 病中胰島素分泌的改變(Kowluru A. Novel regulatory roles for protein phosphatase-2A in the islet beta cell, "/oc力e邊 69 (12): 1681-1691 ， 2005 )。指出通過PI3K/Akt/T0R(Manning BD, Balancing Akt with S6K: implications for both metabolic diseasesandtumorigenesis，/.CW/ 》/o/， 167 (3): 399-403， 2004 )。因此，Akt途徑在成因因素和由糖尿病引起的并發(fā)癥如血管病變中的參與是明顯的。在腎素-血管緊張素系統(tǒng)和胰島素受體信號轉(zhuǎn)導之間似乎存在著密切的關(guān)聯(lián)。已經(jīng)證明了 Ang II抑制胰島素受體介導的Akt的磷酸化。 此外，通過Ang II刺激的氧化應激也改變胰島素激活的胞內(nèi)級聯(lián)的多 個步驟(Taniyama Y， Hitomi H, Shah A， Alexander RW， Griendling KL Mechanisms of reactive oxygen species-dependent downregulation of insulin receptor substrate - 1 by angiotensin II. J"er/osc/er T7 環(huán)6 F"跳25 (6): 1142—1147， 2005 )。 這部分解釋了為什么Ang II抑制劑的應用可改善胰島素抵抗，并因此 改善與糖尿病相關(guān)的共發(fā)病，如微血管損傷。Ang-(1-7)是有效的生物 學Ang II拮抗劑并具有各種與內(nèi)皮功能改善相關(guān)的作用。其水平在該 系統(tǒng)藥理性阻斷過程中升高，表明Ang-(l-7)是ACE抑制劑和ATI受 體拮抗劑的有益效果的重要介質(zhì)。如以上已經(jīng)提及的，Ang-(l-"附著 于Mas受體導致Akt的強磷酸化。然而，在現(xiàn)有技術(shù)中不存在涉及血管緊張素-(1_7)或其肽或非肽的類似物的制劑用于研究、預防或治療 胰島素抵抗或該激素產(chǎn)生不足的結(jié)果的用途的發(fā)明。血管緊張素-(l-7)存在于心臟中并具有重要的心臟作用，如提高 收縮性和減輕心律不齊(Ferreira， AJ 和 Santos， RAS. Cardiovascular actions of Angiotensin-(l-7). Araz.丄S/o/ 及es. 38 (4) : 499-507， 2005 ) 。 Mas受體也在心臟中表達并且其缺乏 《吏得心功能顯著降j氐(Ferreira， AJ Santos, RAS. Cardiovascular actions of Angiotensin-(l-7).Srsz./. vf/eif.S/o/ Wes. 38 (4) : 499-507， 2005 )。激酶Akt蛋白也在心臟中表達，尤其是在心 肌細胞中。在這些細胞中，Akt也通過PIK3磷酸化，提高心肌收縮性 和減輕再灌注心律不齊。心臟中Akt表達提高的小鼠呈現(xiàn)出糖酵解途 徑中涉及的蛋白的合成的改變，如"胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5" 的增加，其最終升高該途徑的活性(Latronico， MGV， Costinean， S.， Lavitrano， M. L. Peschle， C， Condorelli, G. Regulation of Cell Size and Contractile Function by AKT in Cardiomyocytes， J肌 義f. JcacT. Sc/. 1015: 250 —260， 2004; Cook, S. A. Matsui， T.， LiL ， Rosenzweig， A Transcriptional Effects of Chronic Akt Activation in the Heart. / A/o/ 277(25): 22528-22533，2002 )。 Ang- (1-7)的給藥保護了心臟對抗心肌梗塞的結(jié)果(Loot A. E,， Roks AJ.， HEN證G， R. H. ， Tio， R, A. ， Su訓eijer， A. J,， Boomsma， F， van Gilst， W. H. Angiotensin-(1-7) attenuates the development of heart failure after myocardial infarction in rats. C7rcW"/o/L 2002: 105 (13): 1548-50 )。表達產(chǎn)生Ang-(l-7)的融合蛋白的轉(zhuǎn)基因大鼠應答異丙腎上腺素處理具有較低的心臟肥 大，且再灌注心律不齊的持續(xù)時間和發(fā)生較短(Santos, R. A.， Ferreira, A. J. ， Nadu, A. P. ， Braga， A. N. ， deA.meida， A. P.， Campagnole-Santos, M. J.， Baltatu. 0. ， Iliescu， R. ， Reudelhuber T. L， Bader， M, Expression of an angiotensin-(1-7)-producing fusion protein produces cardioprotective effects in rats.戶/ /s/0/ Ce/20邁2'". 2004; 19 (7) :292—9 )。另一方面，通過腺病毒 冠狀動脈內(nèi)給藥Akt基因，產(chǎn)生了大鼠中梗塞面積大小的減少(W. Miao, Z.Luo，R.N.Kitsis和 K.Walsh. Intracoronary， Adenovirus-mediated Akt Gene Transfer in Heart Limits Infarct Sice Following Ischemia-reperfusion Injury in vivo. /. Cai7//0/. 32:2397-2402， 2000 )。在大鼠中用Akt修飾的干細胞防 止梗塞心臟的重塑并恢復梗塞心臟的心功能(Mangi， A. A， Noiseux， N. ， Kong, D. ， He， H. ， rezvani， M. ， Ingwall， J. S. , Dzau， V， J. Mesenchymal stem cells modified with Akt prevent remodeling and restore performance of infarcted hearts 9:1195-1201 ， 2003 )。然而，在現(xiàn)有技術(shù)中不存在涉及血管緊張素 -(1-7)或其肽或非肽的類似物的制劑的以下用途的發(fā)明，用于提高心 臟性能或控制或預防心肌變性疾病，提高心臟內(nèi)給藥后干細胞的生存 力，或降低心臟重塑或心臟的電生理障礙，這是基于通過Ang-(1-7) 與Mas受體的相互作用，對胞內(nèi)轉(zhuǎn)導途徑的刺激，如通過刺激PIK3/Akt 途徑產(chǎn)生的抗凋亡活性。肌萎縮是由多種病癥如惡病質(zhì)，癌癥，AIDS,由于多種因素引起 的長期臥床(restriction to bed)，糖尿病，類皮質(zhì)激素的長期應 用和各種神經(jīng)綜合征和創(chuàng)傷病引起的嚴重病態(tài)(Lai KM, Gonzalez M. Poueymirou WT， Kline W0， Na E， Zlotchenko E， Stitt tN, Ecomonides An, Yancopoulos GD, Glass DJ. Conditional activation of act in adult skeletal muscle induces rapid hypertrophy. Ce// (21): 9295-304， 2004 )。最近，已經(jīng)研究了可激活骨骼肌中能夠恢復肌肉向性的信號轉(zhuǎn)導途徑的策略。在這些途徑中，Akt 值得強調(diào)，因為它能夠激活合成代謝途徑且同時和主要地能夠抑制分 解代謝途徑(Stitt TN， Duran D. ， Clarke BA， Planar F， Timofeyva Y， Kline W0， Gonzalez M， Yancopoulos GD， Glass DJ. M / 14 (3): 395-403， 2004 ) The IGF-1/PI3K/Akt pathway prevents expression of muscle atrophy induced ubiquitin ligases byinhibiting F0X0 transcription factors. #0/Ce//; 14 (3): 395-403， 2004 ) 。 Ang-(1-7)在外周肌肉組織中的作用包括增加骨骼肌中的血流(SampaioW0， Nascimento AAS， Santos RAS， Systemic and regional hemodynamic effects of angiotensin-(1-7) in rats. J邁/戶力"/oZ 〃eflrr O'rc， 284 (6): H1985-94， 2003 )和突觸易化(Bevilaqua ER， Kushmerick C， Beirao PS， Naves LA. Angiotensin 1-7 increases quantal content and facilitation at the frog neuromuscular junction, to/"es.; 927 (2) 208-11 ， 2002 )。 此外，Ang-(1-7)激活Akt。然而，在現(xiàn)有技術(shù)中不存在涉及Ang-(l-7) 或其肽或非肽的類似物的制劑的以下用途的發(fā)明，其激活 Ang-(l-7)/Mas/Akt軸，用于預防和治療涉及肌肉分化、成熟和再生 中的改變的病狀，以及用作生力(ergogenic)源?；谕ㄟ^Ang-(1-7)或其他激動劑與Mas受體的相互作用介導的 Akt激活的抗凋亡活性的激活也可以發(fā)生在其他組織和器官中，包括， 皮膚，內(nèi)分泌腺，肝臟，腎臟，胃腸道和泌尿生殖道等等。借助以下非限制性的實施例和詳述可以更好地理解本發(fā)明。實施例1該實施例描述了涉及生理功能中樞控制的大腦區(qū)域中MAS受體的 鑒定。用三溴乙醇(0. 25g/Kg )將動物麻醉，然后用PBS ( 0. 02M pH7, 4 ) 經(jīng)心臟(transcardially)灌注2分鐘，然后用PBS中10%低聚甲醛 溶液灌注15分鐘。取出腦并置入相同固定溶液中2h。然后將組織在 PBS溶液中洗滌3次，此后置入蔗糖溶液(PBS中30°/。)中過夜。在-18 匸溫度的冷凍切片機中以額面制備30jim腦切片。通過"自由飄浮" 方法將延髓(bulb)和海馬的切片在PBS， 0. 5%吐溫和5°/。BSA中各溫 育15分鐘，然后將切片與Mas—抗(l:500 )在4。C溫育48小時。在 與由Mas蛋白預吸收的一抗溫育的鄰近切片中進行陰性對照。48小時 后，將切片在PBS溶液中洗滌3次5分鐘，然后與綴合熒光化合物的二抗在室溫溫育60分鐘。在該階段后，將切片在PBS中洗滌3次5 分鐘并保持在干凝膠化的載玻片上并分別在含有1: 3甘油和PBS的封 固溶液中覆蓋載玻片。在共焦顯微鏡下分析切片，使用對于每種使用 的熒光化合物特定的激發(fā)和發(fā)射濾光器。通過中性紅方法將含有接受 免疫熒光測定的鄰近切片的載玻片染色，用于組織的結(jié)構(gòu)分析和不同 區(qū)域的鑒定。使用了 Atlas deG. Paxinos， C. Watson, The rat brain in stereotaxic coordinates,第二版，Academic Press, New York, 1986，用于定義腦中觀察到的區(qū)域。圖l顯示了，在海馬的額切片中， 在多個區(qū)域中(

圖1A)和用于不同區(qū)域的組織學鑒定的中性紅染色的 鄰近切片中(圖IB)，通過免疫反應性顯示的Mas Ang-(l-7)受體的 存在。圖2顯示了在室旁核(PVN，圖2A)和外側(cè)視前區(qū)(LP0，圖2C) 和對照的鄰近切片(圖2B和2D)中，通過免疫反應性顯示的Mas Ang(l-7)受體的存在，進行用合成Mas蛋白預吸收抗體時，顯示出標 記的消失。在圖3中，箭頭顯示在視上核(CS0，圖3A)中通過免疫 反應性顯示的Mas， Ang-(l-7)受體的存在。進行用合成Mas蛋白預吸 收抗體時，鄰近切片(圖3B和3D)顯示出標記的消失。圖4顯示了 在扁桃體(圖4A)和丘腦的前背側(cè)核中(圖4C)和鄰近切片對照中(圖 4B和4D)通過免疫反應性顯示的Mas Ang-(l-7)受體的存在，當進行 用Mas合成蛋白預吸收抗體時顯示出標記的消失。圖5顯示了在皮層 (HL,圖5A)和海馬(HC，圖5C)及其鄰近切片對照中(圖5B和5D ) 通過免疫反應性顯示的Mas Ang-(l-7)受體的存在，進行用Mas合成 蛋白預吸收抗體時顯示出標記的消失。圖6顯示了 (A中)延髄的額 切片，圖示了多個區(qū)域中Mas Ang-(l-7)受體的免疫反應性。在B和 鄰近切片中，使用中性紅染色，用于不同區(qū)域的組織學鑒定。圖7顯 示了延髓的尾腹外側(cè)區(qū)(CVLM，圖7A)和頭腹外側(cè)區(qū)(RVLM,圖7C ) 及其對照鄰近切片(圖7B和7D)中Mas Ang-(1-7)受體的免疫反應性， 顯示出進行用Mas合成蛋白預吸收抗體時標記的消失。圖8通過免疫 反應性顯示出在孤束中(NTS,圖8A)和下橄欖核(10，圖8C)和對 照鄰近切片中(圖8B和8D) Mas Ang-(l- )受體的存在，顯示出進行用Mas合成蛋白預吸收抗體時標記的消失。圖9通過免疫反應性顯示 出在舌下神經(jīng)(12，圖9A)和對照鄰近切片(圖9B)中Mas Ang-(l-7) 受體的存在，顯示出進行用Mas合成蛋白預吸收抗體時標記的消失。 圖9C顯示了延髓的頭腹外側(cè)區(qū)中Mas受體和AKT的免疫共定位，表明 在該區(qū)域的神經(jīng)調(diào)節(jié)中受體Mas和AKT之間可能的相互作用。實施例2該實施例描述了 Ang-(l-7)與其Mas受體的相互作用激活 PIK3/Akt途徑的鑒定。培養(yǎng)用Mas受體轉(zhuǎn)染的CH0細胞(CHO-Mas)和人胸主動脈內(nèi)皮 細胞(HAEC)直至大約80%匯合并用裂解緩沖液處理，用于蛋白質(zhì)印 跡。處理后，測定蛋白質(zhì)濃度并將裂解產(chǎn)物接受聚丙烯酰胺/SDS凝膠 電泳，然后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。用特異性抗體(抗-磷酸-Akt ，抗-Akt ， 抗-磷酸-eN0S和抗-P -肌動蛋白)溫育膜。通過化學發(fā)光顯現(xiàn)后觀察 條帶。圖IO顯示出CH0-Mas細胞中激酶B(Akt)磷酸化中Ang-(1-7) 產(chǎn)生的刺激。Ang-(l-7)拮抗劑A-779阻斷了該作用。圖ll顯示出Akt 參與CH0-Mas細胞中Ang-(l-7)刺激的內(nèi)皮一氧化氮合酶刺激位點 (S1177 )的磷酸化。磷脂酰肌醇3激酶拮抗劑(PI3K )阻斷了該作用。 圖12顯示出Ant-(l-7)對人內(nèi)皮細胞(HAEC)在激酶B(Akt)磷酸化 中的刺激作用。Ang-(l-7)拮抗劑A-779阻斷了該作用。圖13顯示Akt 參與人內(nèi)皮細胞(HAEC)中Ang(l-7)刺激的eN0S刺激位點(S1177) 的磷酸化。PI3K拮抗劑涯曼青霉素阻斷了該作用。實施例3該實施例描述了清醒大鼠中PIK3/Akt途徑參與An-(1-7)刺激的 內(nèi)皮功能改善(經(jīng)由Mas受體)的鑒定。在實驗前24小時，將Wistar大鼠接受手術(shù)植入導管至股動脈(用 于分析血壓和心率)，股靜脈(用于注射和輸注藥物)和左頸動脈(用 于注射藥物)。通過連接微型計算機的數(shù)據(jù)獲取系統(tǒng)(BI0PAC System,INc.)獲得血壓和心率的記錄。圖14A顯示了在清醒的Wistar大鼠 (n=7)中，乙酰膽堿(ACh)的血管舒張作用不受到靜脈內(nèi)輸注鹽水 (NaCl 0.9%, 0.4mL/h)改變。然而，靜脈內(nèi)輸注Ang-(l-7) (7. Opmol/min)增強了清醒Wistar大鼠(n-9 )中乙酰膽堿(Ach )的血管舒張作用(圖14B)。圖14C顯示了靜脈內(nèi)推注渥曼青霉素(10—6M) (PI3k抑制劑),接著靜脈內(nèi)輸注渥曼青霉素(10_6M)伴隨Ang- (1-7) (7. Opmol/min)，阻斷了清醒Wister大鼠(n=7 )中Ang-(l-7)對乙酰膽堿(Ach)的血管舒張作用的增強。我們觀察到?jīng)]有一個組的壓力反射有任何改變。實施例4該實施例描述了在MDPH氧化酶的活性中通過Ang-(l-7)與Mas 受體的相互作用而激活PIK3/Akt途徑的鑒定。為了定量NAD(P)H氧化酶的活性，用血管緊張素II (l(TM)刺激 人主動脈內(nèi)皮細胞(HAEC) IO分鐘。在一些實驗中，將細胞預先暴露 于AL受體拮抗劑Ibesartan ( 1(T5M) 30分鐘或Ang-(l-7) (l(TM) 15 分鐘。將源自光澤精(lucigenin)的化學發(fā)光用來測定細胞勻漿中的 NAD (P) H氧化酶的活性。為了定量Ang- (1-7)在c-SRC磷酸化中的調(diào)節(jié) 作用，培養(yǎng)HAEC直至達到約80%匯合并用裂解緩沖液處理，用于蛋白 質(zhì)印跡。處理后，測定蛋白質(zhì)濃度并將裂解產(chǎn)物接受聚丙烯酰胺/SDS 凝膠電泳，然后轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。用特異性抗體(抗-磷酸-c-SRC， 抗-c-SRC)溫育膜。通過化學發(fā)光顯現(xiàn)后觀察條帶。圖U顯示了人內(nèi) 皮細胞(HAEC)中Ang II刺激的c-SRC磷酸化中Ang-(l-7)的調(diào)節(jié)作 用。柱狀圖顯示了 4個實驗的平均值土EPM。 *P<0. 05和"P〈0. 001相 對于對照。圖16顯示出Ang-(l-7) (1(T7M，預溫育15分鐘)對Ang II (10—7M, lOmin)刺激的HAEC中NAD(P)H氧化酶活性的作用。在一些 實驗中，用Ibesartan ( l(TM, 30min)預溫育細胞。用4個實驗的平 均值土EPM來呈現(xiàn)數(shù)據(jù)。*p<0. 05相對于對照。+p<0. 05相對于Ang II+Ang(l-7)。實施例5該實施例描述了 Mas, G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑在精子發(fā)生中的作用。在用三溴乙醇(2.5%， lml/100g體重)麻醉下，將含有Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑A-779( 2. 5 in g/h， 14天，n=5 )或載體(NaCl 0. 9%， l|al/h， 14天，n=6)的滲透迷你泵(ALZET，模型2002 )皮下植入 C57小鼠的背部區(qū)域中。該階段之后，將動物稱重，然后通過腹膜內(nèi) 途徑注射125 Ul/kg體重濃度的肝素。十五分鐘后，用硫噴妥鈉使這 些動物鎮(zhèn)靜(50mg/kg體重)并通過左心室灌注。在第一個步驟中， 在大約80mmHg壓力下，在室溫用0. 9%生理鹽水進行血管床清洗大約5 分鐘。在該操作后立即給動物灌注在磷酸鹽緩沖液(0. 05M， pH 7.2-7.4)中的4。/。戊二醛固定溶液約25分鐘。該步驟后，取出睪丸并 與各自的附睪分離并稱重。從睪丸重量和體重，估算每只動物的性腺 軀體指數(shù)(睪丸重量和體重之間的百分比關(guān)系)。為了顯微鏡分析， 收集至多約3mm厚的睪丸碎片，將其浸入4%緩沖的戊二醛中二至四小 時(4。C)。然后，將碎片儲存于4X:的磷酸鹽緩沖液中，直至將它們 處理用于組織學分析(凋亡的存在)。將這些睪丸碎片在遞增濃度的 乙醇(70。 ， 80。 ， 90。 ， 100。，每三十分鐘更換)中脫水。脫水 后，將碎片包括于乙二醇曱基丙烯酸酯(metacrylate glycol)中 (Leica Historesin Embedding Kit, Leica Instrumnts)， 隨后在 切片機中用玻璃保險刀片切成4Mm厚。用1°/。甲苯胺硼酸鈉藍將獲得 的切片染色，用Entellan (Merck)封固，并在Olympus顯微鏡下分 析。圖17顯示了用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑A-779處理的動物， 相對于對照組，每個橫切片呈現(xiàn)出更大數(shù)目的凋亡，但是性腺軀體指 數(shù)不存在差異。實施例6該實施例描述了 Mas-K0小鼠卵巢中的形態(tài)學改變。通過去頭將未成熟雌性小鼠(30天，ll-14g) WT (野生型；n-4) 和Mas-K0(n-3)處死。取出卵巢，固定于PBSO. lm中的4%戊二醛中， 并包括于乙二醇甲基丙烯酸酯(glycolmetacrylate)中。將每第5 個切片(5pm)收集在組織學栽玻片上并用甲苯胺藍染色。將形態(tài)學 分析用于建立生長、竇性和閉鎖初級卵泡的數(shù)量。KO的卵巢呈現(xiàn)出顯 著低于WT的卵泡總數(shù)(1494相對于3332 )，尤其是原始卵泡(418 相對于1930 )。此外，與WT小鼠相比較時，KO雌性小鼠閉鎖卵泡的 百分比約50%更高。這些數(shù)據(jù)表明作為Mas受體缺失的結(jié)果，卵巢凋 亡活性的提高。實施例7該實施例通過RT-PCR證明了， Mas受體在多種組織中的表達，在 其中這些受體的存在可有助于凋亡活性的調(diào)節(jié)(圖l8)。
權(quán)利要求
1.Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于對涉及蛋白激酶B/Akt活性改變的凋亡活性的調(diào)節(jié)。
2. MasG-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于對活 性氧產(chǎn)生的調(diào)節(jié)。
3. MasG-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于血管 緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，作為凋亡 活性的調(diào)節(jié)劑在預防和治療疾病中的用途。
4. MasG-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于血管 緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，作為凋亡 活性的調(diào)節(jié)劑，用于預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變的用途。
5. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑包括肽血管緊張素-(1-7)及其肽或非 肽的類似物、激動劑和拮抗劑與藥物學上和藥理學上可接受的賦形劑 或載體的制劑，作為凋亡活性的調(diào)節(jié)劑的用途。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1， 2， 3， 4， 5的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于使用至少一種其它藥理學活性化合物和/ 或藥物學上可接受的載體和/或賦形劑，包括水，鹽水溶液，緩沖溶液， Ringer溶液，葡萄糖溶液，Hank溶液，生物相容鹽水溶液，含有或不 含有聚乙二醇；非水性載體，非揮發(fā)油如芝麻油，油酸乙酯或甘油三 酸酯，羧甲基纖維素鈉，山梨糖醇或葡聚糖，硫柳汞，間曱酚或鄰甲 酴，福爾馬林和苯甲醇，人血清白蛋白，環(huán)糊精，脂質(zhì)體，環(huán)狀或非 環(huán)狀寡糖。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l， 2， 3， 4, 5， 6的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗 劑和激動劑的用途，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑 包括血管緊張素-(1-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑的 制劑的可植入或可注射微?；蚣{米顆粒裝置，作為凋亡活性的調(diào)節(jié)劑 的用途。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用 途，其特征在于使用生物可降解聚合物，如PLGA, PLA， PGA，己內(nèi)酯， 這些聚合物的組合和脂質(zhì)體。
9. 根據(jù)權(quán)利要求l， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8的MasG-蛋白偶聯(lián)受 體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和 激動劑包括血管緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮 抗劑的用途，作為疾病預防和治療中凋亡活性的調(diào)節(jié)劑，這些疾病涉 及肌萎縮中肌肉分化、成熟和再生的改變，如惡病質(zhì)，癌癥，AIDS, 由于多種因素引起的長期臥床，糖尿病，類皮質(zhì)激素的長期應用和各 種神經(jīng)綜合征，創(chuàng)傷病和導致肌萎縮的變性疾病，以及用于預防或治 療由老化產(chǎn)生的器官改變和作為生力輔助(ergogenic aid)。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8的Mas G-蛋白偶聯(lián) 受體拮抗劑和激動劑的用途，其特征在于編碼對應于血管緊張素-(l-7) 及其類似物、激動劑和拮抗劑的肽序列的cDNA作為凋亡活性調(diào)節(jié)劑， 用于疾病以及老化產(chǎn)生的器官改變的基因治療中的用途。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1， 2， 3， 4， 5， 6， 7， 8的Mas G-蛋白偶聯(lián) 受體拮抗劑和激動劑的用途，用于疾病以及由老化產(chǎn)生的器官改變的 基因治療中，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑，包括 血管緊張素-(1-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，作為 凋亡活性的調(diào)節(jié)劑的用途。
12. 根據(jù)權(quán)利要求1至6的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑 的用途，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑，包括血管 緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，作為凋亡 活性的調(diào)節(jié)劑，用于疾病以及由老化產(chǎn)生的器官改變的基因治療中的 用途。
13. 根據(jù)權(quán)利要求8的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑的用 途，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑和激動劑，包括血管緊張 素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，作為凋亡活性 調(diào)節(jié)劑在研究、預防和治療以下疾病中的用途心血管疾病及其并發(fā)癥，自身免疫疾病，遺傳多態(tài)性引起的疾病，如DD型血管緊張素轉(zhuǎn)化 酶，與Mas受體表達降低以及Mas受體激動劑的血漿和組織水平降低 有關(guān)，與器官和組織中的缺血事件如心肌梗塞相關(guān)的并發(fā)癥，創(chuàng)傷， 燒傷，紅斑，腫瘤，I-型和II-型糖尿病及其并發(fā)癥，雄性生殖系統(tǒng) 障礙(精子發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)和雌性生殖系統(tǒng)障礙和 胚胎發(fā)生障礙，呼吸系統(tǒng)疾病，腎病，胃腸道疾病，婦科疾病，血管 生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù)(腔內(nèi)假體和血管成形術(shù)后再狹 窄)，血液體質(zhì)障礙例如放療后，記憶和學習障礙以及中樞和外周變 性神經(jīng)病變，以及用于研究、預防或治療溫血動物中由老化產(chǎn)生的器 官改變。
14. 根據(jù)權(quán)利要求2至6的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑 的用途，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管 緊張素-(1-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，在研究、 預防和治療疾病中的用途，這些疾病涉及活性氧降低和所引起的內(nèi)皮 功能障礙，例如，但不限于，心血管疾病(高血壓，動脈粥樣硬化， 血栓形成，心肌梗塞，心力衰竭等等)，腎病，多代謝綜合征，勃起 功能障礙和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等等。
15. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑在預防和治療疾病中的 用途，這些疾病涉及活性氧降低和所引起的內(nèi)皮功能障礙，例如，但 不限于，心血管疾病<(高血壓，動脈粥樣硬化，血栓形成，心肌梗塞， 心力衰竭)，腎病，多代謝綜合征，勃起功能障礙和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾 病等等，其特征在于使用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括 血管緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其 制劑。
16. 根據(jù)權(quán)利要求l， 2， 3， 4, 5的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑 和拮抗劑的用途，包括血管緊張素-(1-7)肽及其類似物、激動劑和拮 抗劑，其特征在于使用編碼對應于血管緊張素-(1-7)及其類似物、激 動劑和拮抗劑的肽序列的cDNA用于疾病的基因治療中，其中涉及活性 氧降低和所引起的內(nèi)皮功能障礙改善，其中疾病有心血管疾病(全身性和肺部高血壓，妊娠期高血壓疾病，動脈粥樣硬化，血栓形成，心 肌梗塞，心力衰竭等等)，腎病，多代謝綜合征，勃起功能障礙，中 樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，血管炎。
17. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，用于預防和治 療心血管疾病及其并發(fā)癥，自身免疫疾病，遺傳多態(tài)性引起的疾病， 如DD型血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，與Mas受體表達降低以及Mas受體激動劑 的血漿和組織水平降低有關(guān)，與器官和組織中缺血事件如心肌梗塞相 關(guān)的并發(fā)癥，創(chuàng)傷，燒傷，紅斑，腫瘤，I-型和II-型糖尿病及其并 發(fā)癥，雄性生殖系統(tǒng)障礙(精子發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)和 雌性生殖系統(tǒng)障礙和胚胎發(fā)生障礙，呼吸系統(tǒng)疾病，腎病，胃腸道疾 病，婦科疾病，血管生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù)(腔內(nèi)假體 和血管成形術(shù)后再狹窄)，血液體質(zhì)障礙例如放療后，記憶和學習障 礙以及中樞和外周變性神經(jīng)病變，以及用于研究、預防或治療溫血動 物中由老化產(chǎn)生的器官改變，其特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑 和拮抗劑，包括血管緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑 和拮抗劑，與藥物學上或藥理學上可接受的賦形劑或載體配制，作為 凋亡活性的調(diào)節(jié)劑的用途。
18. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，其特征在于使 用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗刑，包括血管緊張素-(l-7)肽及 其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其制劑，通過口服，肌內(nèi)， 靜脈內(nèi)，皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途 徑或作為可植入或注射的裝置來使用，用于研究、預防和治療心血管 疾病及其并發(fā)癥，自身免疫疾病，遺傳多態(tài)性引起的疾病，如DD型血 管緊張素轉(zhuǎn)化酶，與Mas受體表達降低以及Mas受體激動劑的血漿和 組織水平降低有關(guān)，與器官和組織中缺血事件相關(guān)的并發(fā)癥，創(chuàng)傷， 燒傷，紅斑，腫瘤，I-型和II-型糖尿病及其并發(fā)癥，雄性生殖系統(tǒng) 障礙(精子發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)和雌性生殖系統(tǒng)障礙和 胚胎發(fā)生障礙，呼吸系統(tǒng)疾病，腎病，胃腸道疾病，婦科疾病，血管 生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù)(腔內(nèi)假體和血管成形術(shù)后再狹窄)，血液體質(zhì)障礙例如放療后，記憶和學習障礙以及中樞和外周變 性神經(jīng)病變，以及用于研究、預防或治療溫血動物中由老化產(chǎn)生的器 官改變。
19. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，用于預防和治 療心血管疾病及其并發(fā)癥，自身免疫疾病，遺傳多態(tài)性引起的疾病， 如DD型引起的疾病，與Mas受體表達降低以及Mas受體激動劑的血漿 和組織水平降低有關(guān)，與器官和創(chuàng)傷組織中缺血事件相關(guān)的并發(fā)癥， 燒傷，紅斑，腫瘤，I-型和II-型糖尿病及其并發(fā)癥，雄性生殖系統(tǒng) 障礙(精子發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)和雌性生殖系統(tǒng)障礙和 胚胎發(fā)生障礙，呼吸系統(tǒng)疾病，腎病，胃腸道疾病，婦科疾病，血管 生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù)(腔內(nèi)假體和血管成形術(shù)后再狹 窄)，血液體質(zhì)障礙例如放療后，記憶和學習障礙以及中樞和外周變 性神經(jīng)病變，以及用于研究、預防或治療溫血動物中由老化產(chǎn)生的器 官改變，其特征在于使用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括 血管緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其 制劑，通過口服，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺， 鼻內(nèi)，頰內(nèi))應用途徑或作為可植入或注射的裝置來使用。
20. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，包括血管緊張 素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其制劑，通 過口服，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)， 頰內(nèi))給藥途徑或作為可植入或注射的裝置來使用，在溫血動物中， 用于研究、預防和治療皮膚損傷，創(chuàng)傷，燒傷，紅斑，腫瘤，作為輔 助措施，用于器官移植，用胚胎干細胞、非胚胎千細胞的治療，器官 和其他組織的再植和需要暫時或長期降低凋亡活性的其他治療，生殖 系統(tǒng)的障礙(精子發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)，支氣管疾病， 腎病，胃腸道和婦科疾病，血管生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù) (腔內(nèi)假體和血管成形術(shù)后再狹窄)，放療后血液體質(zhì)障礙，記憶和學習障礙，以及預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變，其特征在于使用 Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(1-17)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，與藥物學上或藥理學上可接受 的賦形劑或載體一起配制，作為凋亡活性的調(diào)節(jié)劑。
21. 根據(jù)權(quán)利要求l， 2， 3， 4， 5的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑 和拮抗劑的用途，其特征在于用于在溫血動物中治療皮膚損傷，創(chuàng)傷， 紅斑，腫瘤和其他需要暫時或長期降低凋亡活性的治療，生殖系統(tǒng)的 障礙(精子發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)，支氣管疾病，腎病， 胃腸道和婦科疾病，血管生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù)(腔內(nèi) 假體和血管成形術(shù)后再狹窄)，放療后的血液體質(zhì)障礙，記憶和學習 障礙，以及預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變。
22. 根據(jù)權(quán)利要求1， 2， 3， 4， 5， 6的Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激 動劑和拮抗劑的用途，其特征在于在溫血動物中用作輔助措施，用于 器官移植，用胚胎或非胚胎干細胞的治療，器官和其他組織的再植， 和其他需要暫時或長期降低凋亡活性的治療，以及用于預防或治療由 老化產(chǎn)生的器官改變。
23. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，在溫血動物中， 用作輔助措施，用于器官移植，用胚胎或非胚胎干細胞的治療，器官 和其他組織的再植，和其他需要暫時或長期降低凋亡活性的治療，以 及用于預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變，其特征在于使用Mas G-蛋 白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(1-7)肽及其肽或非肽 的類似物、激動劑和拮抗劑，及其制劑，通過口服，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)， 皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途徑或作為 可植入或注射的裝置來使用。
24. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，在溫血動物中， 用于研究、預防和治療皮膚損傷，創(chuàng)傷，燒傷，紅斑，腫瘤；用作輔 助措施，用于器官移植，用胚胎干細胞、非胚胎干細胞的治療，器官 和組織的再植，和其他需要暫時或長期降低凋亡活性的治療；生殖系 統(tǒng)的障礙(精子發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)，支氣管疾病，腎 病，胃腸道和婦科疾病，血管生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù)(腔 內(nèi)假體和血管成形術(shù)后再狹窄)，放療后的血液體質(zhì)障礙，記憶和學習障礙，以及預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變，其特征在于是Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(l-7)肽及其肽或非 肽的類似物、激動劑和拮抗劑，與藥物學上或藥理學上可接受的賦形 劑或載體一起配制，作為凋亡活性的調(diào)節(jié)劑的用途。
25. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，其特征在于使 用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(1-7)肽及 其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其制劑，通過口服，肌內(nèi)， 靜脈內(nèi)，皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途 徑或作為可植入或注射的裝置來使用，在溫血動物中，用于研究、預 防和治療皮膚損傷，創(chuàng)傷，燒傷，紅斑，腫瘤；用作輔助措施，用于 器官移植，用胚胎干細胞、非胚胎干細胞的治療，器官和組織的再植， 和其他需要暫時或長期降低凋亡活性的治療；生殖系統(tǒng)的障礙(精子 發(fā)生，精子活力，勃起功能障礙)，支氣管疾病，腎病，胃腸道和婦 科疾病，血管生成，脫發(fā)，血液疾病和血管成形術(shù)(腔內(nèi)假體和血管 成形術(shù)后再狹窄)，放療后的血液體質(zhì)障礙，記憶和學習障礙，以及 預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變。
26. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，其特征在于使 用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(l-7)肽及 其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其制劑，通過口服，肌內(nèi)， 靜脈內(nèi)，皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途 徑或作為可植入或注射的裝置來使用，用于研究、預防和治療涉及肌 萎縮中肌肉分化、成熟和再生改變的疾病，如惡病質(zhì)，癌癥，AIDS, 由于多種因素引起的長期臥床，糖尿病，類皮質(zhì)激素的長期應用和各 種神經(jīng)綜合征，創(chuàng)傷病和導致肌萎縮的變性疾病，以及用于預防或治 療由老化產(chǎn)生的器官改變和作為生力輔助。
27. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，用于預防和治 療涉及肌萎縮中肌肉分化、成熟和再生改變的疾病，如惡病質(zhì)，癌癥， AIDS，由于多種因素引起的長期臥床，糖尿病，類皮質(zhì)激素的長期應 用和各種神經(jīng)綜合征，創(chuàng)傷病和導致肌萎縮的變性疾病，以及用于預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變和作為生力輔助，其特征在于使用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(l-7)肽及其 肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其制劑，通過口服，肌內(nèi)， 靜脈內(nèi)，皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途 徑或作為可植入或注射的裝置來使用。
28. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑用于預防和治療疾病的用途，其中涉及活性氧降低和所引起的內(nèi)皮機能障礙改善，其中疾病 有心血管疾病(全身性和肺部高血壓，妊娠期高血壓疾病，動脈粥樣硬化，血栓形成，心肌梗塞，心力表竭等等)，腎病，多代謝綜合征， 勃起功能障礙，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，血管炎，其特征在于使用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(l-7)肽及其肽或非 肽的類似物、激動劑和拮抗劑，通過口服，肌內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮下，局 部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途徑或作為可植入或 注射的裝置來使用。
29. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，其特征在于使 用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(l-7)肽及 其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，及其制劑，通過口服，肌內(nèi)， 靜脈內(nèi)，皮下，局部，經(jīng)皮，肛門，吸入(肺，鼻內(nèi)，頰內(nèi))給藥途 徑或作為可植入或注射的裝置來使用，用于研究、預防和治療疾病， 其中涉及活性氧降低和所引起的內(nèi)皮功能障礙改善，其中疾病有心血 管疾病(全身性和肺部高血壓，妊娠期高血壓疾病，動脈粥樣硬化， 血栓形成，心肌梗塞，心力衰竭等等)，腎病，多代謝綜合征，勃起 功能障礙，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，血管炎。
30. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，用于研究、預 防和治療涉及肌萎縮中肌肉分化、成熟和再生改變的疾病，如惡病質(zhì)，癌癥，AIDS,由于多種因素引起的長期臥床，糖尿病，類皮質(zhì)激素的 長期應用和各種神經(jīng)綜合征，創(chuàng)傷病和導致肌萎縮的變性疾病，以及 用于預防或治療由老化產(chǎn)生的器官改變和作為生力輔助，其特征在于 使用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，肽或非肽的，包括血管緊張素-(l-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，與藥物學上 或藥理學上可接受的賦形劑或載體一起配制。
31. Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，用于研究、預 防或治療疾病，其中涉及活性氧降低和所引起的內(nèi)皮功能障礙改善， 其中疾病有心血管疾病(全身性和肺部高血壓，妊娠期高血壓疾病， 動脈粥樣硬化，血栓形成，心肌梗塞，心力衰竭等等)，腎病，多代 謝綜合征，勃起功能障礙，中樞神經(jīng)系統(tǒng)的疾病，血管炎，其特征在 于使用Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑，包括血管緊張素-(1-7) 肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，與藥物學上或藥理學上 可接受的賦形劑或載體一起配制。
全文摘要
本發(fā)明的特征在于Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑作為凋亡活性調(diào)節(jié)劑用于研究、預防和治療疾病的用途。進一步的特征在于MasG-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，用于調(diào)節(jié)涉及蛋白激酶B/Akt活性改變的凋亡活性。本發(fā)明的另一個特征是Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，包括Ang-(1-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，作為凋亡活性的調(diào)節(jié)劑，用于研究、預防和治療器官和系統(tǒng)的變性疾病，作為輔助措施，用于器官移植，用胚胎干細胞、非胚胎干細胞的治療，器官和組織的再植和需要暫時或長期降低凋亡活性的其他治療，這些是非限制性的。本發(fā)明進一步要求保護Mas G-蛋白偶聯(lián)受體激動劑和拮抗劑的用途，包括血管緊張素-(1-7)肽及其肽或非肽的類似物、激動劑和拮抗劑，與藥物學和藥理學上可接受的賦形劑或載體一起配制，作為凋亡活性的調(diào)節(jié)劑。
文檔編號A61K38/08GK101247818SQ200680030230
公開日2008年8月20日 申請日期2006年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月28日
發(fā)明者A·J·費里拉, A·M·道斯萊斯, F·J·G·弗里扎德, F·巴羅斯德蘇薩, I·希爾瓦魯拉, L·R·德弗朗卡, L·卡佩斯貝克, M·J·卡姆帕格諾爾-桑圖斯, M·德卡斯特羅利奧, R·A·蘇扎道斯桑圖斯, R·D·西尼斯特拉, R·德法里亞厄希爾瓦, S·韋羅索布朗特皮恩黑羅, W·N·德奧利維拉薩姆帕伊奧 申請人:米納斯吉拉斯聯(lián)合大學