專利名稱：含有油酸的組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包含具有神經(jīng)元細(xì)胞保護(hù)活性的油酸的組合物。
技術(shù)背景目前，隨著老齡化問(wèn)題引起社會(huì)的注意，人們對(duì)老年人的生活習(xí) 性與福利諸如住房條件、健康狀況、文化和休閑等方面的關(guān)注逐漸增 加，對(duì)相關(guān)統(tǒng)計(jì)資料的需求也在增加。老齡化社會(huì)的主要死因是慢性 退行性疾病而不是急性傳染疾病，急性傳染疾病是多年前的主要死 因。特別是在慢性退行性疾病中，腦部缺血疾病非常重要，它在直接 致死因中位列第二。腦卒中是退行性疾病中的主要公眾健康問(wèn)題之一，其死亡率僅次于因心臟病引發(fā)的死亡率。腦卒中主要可分為兩類腦缺血和腦出血， 前者由血循環(huán)減弱引起，后者由血管出血引起。血循環(huán)減弱是由血塊 或其它東西引起的血管栓塞引起的。腦缺血性卒中占腦卒中的80%。據(jù)報(bào)道，釋放過(guò)量興奮神經(jīng)傳遞素、產(chǎn)生自由基、抑制蛋白質(zhì)合 成、基因異常表達(dá)及激活免疫反應(yīng)等是腦神經(jīng)元細(xì)胞損害的原因。但 是，目前還沒(méi)有開(kāi)發(fā)展出有效保護(hù)腦神經(jīng)元細(xì)胞免遭損害的藥物。t-PA (組織纖溶酶原激活劑)是FDA唯一批準(zhǔn)的血小板凝結(jié)抑 制劑，其能溶解血塊并迅速補(bǔ)充氧氣和葡萄糖。相應(yīng)地，由于該藥物 不能直接保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞，因此其需要快速使用，并且該藥物的性質(zhì) 決定了在過(guò)量或長(zhǎng)時(shí)間用藥的情況下可由薄血管壁引發(fā)出血性腦卒 中。MK-801，是一種有效抑制初始鈣內(nèi)流的鈣通道阻礙劑，曾進(jìn)行 臨床試驗(yàn)，但已經(jīng)停止并進(jìn)一步研究。因此，目前需要尋找通過(guò)可靠試驗(yàn)顯示對(duì)腦部疾病具有治療和預(yù)防作用的安全有效的自然資源。油酸是一種存在于活體中的不飽和脂肪酸，它的分子量(282.5 )、 熔點(diǎn)(13.3°C)、沸點(diǎn)(223 °C/10mmHg),是一種無(wú)色、油狀液體。 自然界中，它作為諸如橄欖油等植物油和諸如牛、豬油等動(dòng)物油的主 要組分存在。油酸可通過(guò)硬脂酸自棕櫚酸中重制，也可在植物中轉(zhuǎn)變 為亞油酸。它作為與甘油和酯(甘油酯)連接的模式而不是自由形式 存在于細(xì)胞膜中。其在一個(gè)分子中包含一個(gè)雙鍵且表現(xiàn)為不同于反式 異構(gòu)體(縮酸)的順式幾何異構(gòu)體。目前已有報(bào)道稱，油酸具有抗癌作用(Menendez等，Annals of Oncology, p10， 2005)，可通過(guò)降低血液粘滯性促進(jìn)血液循環(huán)(Alberts 等，Gerland Publishing, Inc., New York, 1994),促進(jìn)髓鞘形成和神經(jīng)元 細(xì)胞的再生(Medina和Tabernero, J. Physiology, 96, pp265-271, 2002)。然而，至今還沒(méi)有關(guān)于油酸的神經(jīng)元細(xì)胞保護(hù)活性的公開(kāi)或暗 示，特別是通過(guò)動(dòng)物模型試驗(yàn)來(lái)治療或抑制神經(jīng)疾病諸如腦卒中的相 關(guān)報(bào)道。本發(fā)明的發(fā)明人對(duì)油酸的藥理作用和作用機(jī)制進(jìn)行了深入的科 學(xué)研究。研究結(jié)果是，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)油酸具有新的藥理作用，特別是， 對(duì)感覺(jué)神經(jīng)功能紊亂具有預(yù)防或治療活性，本發(fā)明將完整披露此研究 結(jié)果。
發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問(wèn)題因此，本發(fā)明的目的是提供一種含有油酸和藥學(xué)上可接受載體的 藥物組合物，所述油酸以其保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞，治療或預(yù)防人類或哺乳 動(dòng)物所遭受的腦部疾病如腦卒中、腦部衰退疾病的有效劑量，作為藥 物組合物的活性成分。技術(shù)方案根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明提供一種包含油酸的藥物組合物，所述油酸以保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞的有效劑量作為藥物組合物的活性成分。 下文中，將詳述本發(fā)明。本發(fā)明涉及的油酸是c/s-9-十八烯酸，以下列化學(xué)結(jié)構(gòu)式1表示化學(xué)式1/ \這里所述的術(shù)語(yǔ)腦退行性疾病包括腦卒中，腦缺血，亨丁頓舞蹈癥，克雅病，阿耳滋海默癥(AD),帕金森癥(PD),老年癡呆癥及類似 疾病。以上所述的油酸可通過(guò)以下方式制備粉碎來(lái)自植物油或動(dòng)物油 的油料并從中提??；粉末用己烷或氯仿溶液提取并濃縮提取液，得到 非極性濃縮提取液，此提取液與溶劑混合物(丙酮己烷)作為流動(dòng) 相通過(guò)硅膠色譜柱，分離出所需油酸。本發(fā)明提供一種包含以上述方法制備的油酸和藥用載體的藥物 組合物，油酸以其保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞，治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物所遭 受的腦部疾病如腦卒中、腦部衰退疾病的有效劑量，作為藥物組合物 的活性成分。本發(fā)明還提供油酸在制造治療或預(yù)防人類或哺乳動(dòng)物所遭受的 腦部疾病如腦卒中、腦部衰退疾病的藥物中的用途。此外，本發(fā)明還提供治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物腦部疾病如腦卒中、腦 缺血的方法，包括將有效劑量的上述提取液及藥物可接受的載體一 起，施用于所述的哺乳動(dòng)物。本發(fā)明所述組合物可以是包含藥學(xué)上可接受載體、佐劑或稀釋劑 的藥物組合物，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、 赤藻糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯樹(shù)膠、藻酸鹽、白凝膠、磷酸鈣、 硅酸錦、纖維素、甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、水、苯甲酸甲酯(methylhydroxy benzoate )、苯甲酸丙酯(propylhydroxy benzoate )、滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油。組分中還可以包括填料、抗凝劑、潤(rùn) 滑劑、濕潤(rùn)劑、風(fēng)味劑、乳化劑、防腐劑及類似物。本發(fā)明組合物可 采用本領(lǐng)域公知的任何方法制備，以提供將其施用于病人后的活性成 分的速效，穩(wěn)定或延時(shí)的釋放。例如，本發(fā)明組合物可溶解在油、丙二醇或其它本領(lǐng)域常用于制 備注射劑的溶劑中。適當(dāng)?shù)妮d體實(shí)例包括但不限于生理鹽水、聚乙二 醇、乙醇、植物油、肉豆蔻酸異丙酯等。外用時(shí)，可將本發(fā)明提取物 制備成油膏和乳膏。包含本發(fā)明組合物的藥物可以制成任何形式如口服藥(粉劑、 片劑、膠囊、軟膠囊、藥水、糖漿劑、酏丸、粉劑、囊劑、顆粒)， 或外用藥(乳膏、油膏、洗劑、凝膠、香膏、藥貼、泥膏劑、噴霧劑、 氣霧劑及類此物)，或注射用藥(溶液、懸浮液、乳化液)。本發(fā)明組合物的藥物劑型可釆用藥劑學(xué)可接受的鹽的形式，也可 以單獨(dú)使用或聯(lián)合使用，還可以采用與其它活性藥物復(fù)合的形式。本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)施用對(duì)象的條件和體重、病情、劑型、給 藥途徑和時(shí)間來(lái)確定本發(fā)明提取物的使用劑量。但為了獲得期望的結(jié) 果， 一般本發(fā)明提取物的推薦施用量為0.01-10g/kg，優(yōu)選1 - 5g/kg 體重/天，此劑量可一天一次全部施用，也可分為一天幾次施用。按 組合物計(jì)，本發(fā)明組合物應(yīng)占組合物總重量為0.01-80%，優(yōu)選 0.5-50%。本發(fā)明藥物組合物可以多種途徑對(duì)目標(biāo)動(dòng)物諸如哺乳動(dòng)物(老 鼠，家畜或人)給藥?？深A(yù)期使用所有給藥方式，例如口服給藥、 直腸給藥或通過(guò)靜脈、肌肉、皮下、皮內(nèi)、腦內(nèi)膜、腦外膜或腦室注 射。本發(fā)明人通過(guò)本領(lǐng)域公知的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，例如中腦動(dòng)脈阻塞模型試 驗(yàn)(由以下步驟組成如將尼龍絲注射進(jìn)頸內(nèi)動(dòng)脈以阻塞中腦動(dòng)脈；120分鐘后取出尼龍絲以引發(fā)動(dòng)脈血液噴涌)，證實(shí)包含深紅色上述 本發(fā)明提取物的組合物具有預(yù)防及治療腦卒中的作用。因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種包含上述油酸的保健食 品以上述過(guò)程制備的油酸，加入營(yíng)養(yǎng)學(xué)可接受的添加劑，保護(hù)神經(jīng) 元細(xì)胞，防止或改善腦部疾病如腦卒中和腦缺血。上述組合物可以以片劑、膠囊、藥丸或飲料的形式加入食品，添 加劑或飲料中，以預(yù)防腦部疾病如腦卒中和腦缺血。其中，為達(dá)到預(yù) 防腦部疾病如腦卒中和腦缺血的目的，上述本發(fā)明涉及的化合物在食物或飲料中的含量一般約占保健食品復(fù)合物總重量的0.1-15w/w%，， 優(yōu)選1-10 w/w %，占100 ml保健飲料的比例為1-30克，優(yōu)選3-10克?？紤]到本發(fā)明涉及的保健飲料必須包含預(yù)定比例的上述化合物， 對(duì)其它液體成分就不做特殊的限制，其中，其它組分可以是各種除臭 劑和自然碳水化合物等，如傳統(tǒng)飲料。舉例說(shuō)明上述自然碳水化合 物可以是單糖如葡萄糖、果糖等；可以是二糖如麥芽糖、蔗糖等；可 以是傳統(tǒng)糖如糊精、環(huán)式糊精；也可以是糖醇如木糖醇、赤藻糖醇等。 除去前述物質(zhì)的其它除臭劑，天然除臭劑如taumatin 、甜葉菊(stevia) 提取諸如levaudioside A，甘草酸等，合成除臭劑如糖精、阿司帕坦 等，也可以適當(dāng)?shù)厥褂?。上述自然碳?xì)浠衔镌?00ml飲料組合物中 的比例為1-20克，優(yōu)選5-12克。上述組合物之外的其它成分為各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)或 電解質(zhì)、合成風(fēng)味劑、色素、牛奶巧克力等的改良劑、褐藻酸及其鹽、 有機(jī)酸、增稠劑、pH值調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、丙三醇、，乙醇以 及用于碳酸飲料的碳化劑等。除前面提到的組分，其它組分還可以是 用于制備天然果汁、果汁飲料和蔬菜汁飲料的水果果汁，其中，各組 分可單獨(dú)使用或混合使用，其比例不重要但通常在組合物中約含 0陽(yáng)20%。可加入上述化合物的食物實(shí)例為各種食物、飲料、口香糖、多種 維生素、改善健康的食品及類似物。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，不偏離本發(fā)明精神或本發(fā)明范圍的，對(duì) 本發(fā)明的組分、用途及制備方法的各種修正和改變都是顯而易見(jiàn)的。有益效果本發(fā)明含油酸的組合物具有保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用，預(yù)防或治療腦 中風(fēng)以及腦缺血的作用。因此，其可用于人或哺乳動(dòng)物退行性腦疾病 的預(yù)防和治療。


通過(guò)下面結(jié)合附圖的詳述，將有助于理解本發(fā)明上述以及其它目的、特性和其它優(yōu)點(diǎn)，其中圖1顯示了利用TTC染色法檢測(cè)的不同濃度油酸對(duì)腦損傷組織 的保護(hù)作用；圖2顯示了使用5%吐溫20的對(duì)照組與試驗(yàn)組對(duì)腦損傷模型的腦 組織切片的效果的比較；圖3顯示了不同濃度油酸對(duì)神經(jīng)性能的修復(fù)活性。最佳實(shí)施方式下面實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。然而，應(yīng)理解本發(fā)明并不局限這些實(shí)施例中的任何方式。參考實(shí)施例1.試驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)例中的的步驟和實(shí)驗(yàn)方法描述如下 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重約為300g的8周齡斯普拉-道來(lái)氏雄性大鼠購(gòu)自Samtaco Co. Ltd.(首爾)，l周內(nèi)自由飲水和釆食以便其適應(yīng)試驗(yàn)環(huán)境。實(shí)驗(yàn)例l.神經(jīng)保護(hù)作用利用文獻(xiàn)(Zea longa等，Stroke 20 pp84-91, 1989)公開(kāi)的改進(jìn)的管腔內(nèi)縫線方法測(cè)定對(duì)由局部腦缺血引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷的神經(jīng)細(xì)胞 保護(hù)作用，具體如下用5%的異氟醚氣體(將含有70% N20和30% 02的氣體混合物 與5%異氟醚氣體的混合)口服麻醉大鼠，并在試驗(yàn)過(guò)程中維持5% 的異氟醚氣體。從大鼠頸部皮膚中央切開(kāi)，從臨近組織以及神經(jīng)小心地剝離位于 右手邊的CCA (頸總動(dòng)脈)以及ECA(頸外動(dòng)脈)。將ECA用結(jié)扎線 結(jié)扎，并將ICA (頸內(nèi)動(dòng)脈)和翼腭動(dòng)脈剝離開(kāi)，并利用上述同樣的 方式將其結(jié)扎，接著利用夾子將CCA和ICA阻斷。利用顯微手術(shù)剪將 ECA局部地阻斷，將血管鉆孔插入探針。探針由表面涂有諸如固化的 聚硅氧烷的硅酮以及活化劑的23mm的4-0尼龍線組成，目的是增加 其對(duì)血管的粘合力。ECA在20 mm的涂層探針插入到距離插入點(diǎn) 20mm處或少于20mm處，感覺(jué)到阻塞的地方結(jié)扎。同時(shí)固定探針，防 止恢復(fù)。再次將切開(kāi)的皮膚縫合好，大鼠在自然條件下從麻醉狀態(tài)恢 復(fù)。由于探針的插入，阻礙了MCA的血流量，引起了局部缺血，2小 時(shí)后將大鼠再次麻醉，并取出探針恢復(fù)頸動(dòng)脈血流量。再灌注24小時(shí) 后殺死大鼠，頸部脫臼分離腦，將腦組織切片成2mm厚，用2。/。的TTC 溶液染色，顯微鏡下觀察。體溫監(jiān)控并維持在37±0.5°C。剝離尾部到前鹵點(diǎn)+5.2, +3.2， +1.2， -0.8, -2.8, -4.8， -6.8, -8.8 mm的地方，剔除末端組織，獲得6組來(lái)源于腦基質(zhì)的厚度為2mm的腦切 片。用雙蒸水將2%氯化三苯四唑(2,3,5-氯化三苯四唑:TTC)稀釋到 最適量，灌注到16孔板。將腦切片置于16孔板中，在37。C下染色30 分鐘。利用數(shù)碼相機(jī)(Olympus Co. c2500L model, USA)對(duì)染色組織 進(jìn)行拍照，并將照片傳到電腦。利用OPTIMAS程序(MediaCybernetics Co., 6.51版本)來(lái)計(jì)算腦梗塞區(qū)域的體積，并利用圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行 分析。為了測(cè)定右半球水腫體積(A)外的腦梗塞的確切體積(B)，我們利用下面的經(jīng)驗(yàn)公式1和2來(lái)計(jì)算腦梗塞的確切體積。 公式1校正的腦梗塞體積(mm3)=(未損壞(左)半球總體積(mm3)-(損壞半球(右)的未受損體積(mm3))。公式2腦梗塞體積(％) -校正的腦梗塞體積(mm"/未損壞(左)半球 總 體積(mm3)xl00結(jié)果顯示，用不同濃度油酸(B: lmg /kg, C: 10mg/kg， D: 100mg/kg)處理的試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，由于神經(jīng)細(xì)胞損傷較少，因 而表現(xiàn)出較小的TTC (白色)染色區(qū)域，如圖1所示。圖2所示為對(duì)照 組的總腦梗塞半球組織的百分?jǐn)?shù)為37.1 (4.34%)。同時(shí)，試驗(yàn)組C和 D以劑量依賴的方式比對(duì)照組(32.9% (20.9, 3.48 %)和64.9%(13.0 , 2.79%))表現(xiàn)出對(duì)神經(jīng)細(xì)胞死亡更有效的保護(hù)作用。實(shí)施例2.神經(jīng)修復(fù)作用采用文獻(xiàn)(S/ro&， 2fi pp8191, 1989)公開(kāi)的神經(jīng)學(xué)上的評(píng)分法來(lái) 鑒定油酸的神經(jīng)修復(fù)活性，方法如下將大白鼠舉高距離底部50cm,利用下面的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)計(jì)算恢復(fù)評(píng)分 大鼠前掌直接朝向底部(5分)；受傷大鼠掌跳起來(lái)，沒(méi)有其它征兆(4 分)；掌完全跳起來(lái)(3分)；掌往左邊抽動(dòng)(2分)；大鼠轉(zhuǎn)向左邊(l 分)。將按照上述估分方法獲得的各組的總分平均獲得各組的最終神 經(jīng)學(xué)評(píng)分，結(jié)果如圖3所示。腹腔內(nèi)注射100mg/kg油酸的試驗(yàn)組(3.95 0.15%;p<0.001 )比對(duì)照組(2.86 0.21%)獲得更高的得分。實(shí)驗(yàn)例3.毒性試驗(yàn)方法(I)用實(shí)施例1中的油酸來(lái)對(duì)ICR小鼠(平均體重25士5g)和斯普拉-道來(lái)(氏)大鼠(300±10g, Jung-Ang Lab Animal Inc.)進(jìn)行急毒性試驗(yàn)。每組10只小鼠或大鼠，共分4組，分別口服試樣或溶劑(0.2 D, i.p.)， 劑量分別為100mg/kg、 250mg/kg、 500mg/kg和1000mg/kg,觀察兩周。方法(II)用實(shí)施例1中的提取物來(lái)對(duì)ICR小鼠和斯普拉-道來(lái)(氏)大鼠進(jìn)行 急毒性試驗(yàn)。每組10只小鼠或大鼠，共分4組，分別腹腔注射試樣或 溶劑(0.2 D， i.p.),劑量分別為25mg/kg、 50mg/kg、 100mg/kg和 200mg/kg，觀察24小時(shí)。錢(qián)在任何試驗(yàn)組或任何性別中，在死亡率、臨床征兆、體重變化和 總體表現(xiàn)中均未發(fā)現(xiàn)與治療相關(guān)的作用。這些結(jié)果表明本發(fā)明制備的提取物安全有效。 工業(yè)實(shí)用性本發(fā)明含油酸的組合物具有對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用和對(duì)腦中風(fēng) 和腦缺血的預(yù)防和治療作用。因此，其可用于人或哺乳動(dòng)物退行性腦 疾病的預(yù)防和治療。
權(quán)利要求
1、一種含有下式(I)所示油酸和藥用載體的藥物組合物，其中所述油酸作為保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞和治療或預(yù)防人或動(dòng)物遭受諸如腦中風(fēng)和腦缺血退行性腦疾病的有效量活性成分
2、 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述退行性腦疾病為 腦中風(fēng)、腦缺血、亨延頓舞蹈病、克雅病、阿耳茨海默病、帕金森病 或老年性癡呆。
3、 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述油酸分離自橄欖 油、植物油或動(dòng)物油。
4、 油酸在制備預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物或人退行性惱疾病藥物中的 應(yīng)用。
5、 一種用于預(yù)防或改善退行性腦疾病的保健食品，其含有權(quán)利 要求1中所述的油酸和營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可接受的添加劑。
6、 如權(quán)利要求5所述的保健食品，其為片劑、膠囊劑、丸劑或飲料。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有具有神經(jīng)保護(hù)活性的油酸的藥物組合物和保健食品。本發(fā)明所述油酸在神經(jīng)學(xué)性能上具有有效的神經(jīng)保護(hù)作用和痊愈作用。因此，其在預(yù)防或治療人或哺乳動(dòng)物的退行性腦疾病的方法中是有用的。
文檔編號(hào)A61P25/28GK101242823SQ200680030221
公開(kāi)日2008年8月13日 申請(qǐng)日期2006年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月19日
發(fā)明者夫映旻, 李大熙, 河妮娜, 鄭鎮(zhèn)姬, 金護(hù)哲, 金美蓮 申請(qǐng)人:慶熙大學(xué)校產(chǎn)學(xué)協(xié)力團(tuán)