抗生素耐藥性和抗性已成為成功治療許多常見(jiàn)細(xì)菌感染的嚴(yán)重威脅。實(shí)際上，根據(jù)美國(guó)傳染病學(xué)會(huì)(InfectiousDiseaseSocietyofAmerica)，相較于肺氣腫、HIV/艾滋病(AIDS)、帕金森病(Parkinson'sdisease)和兇殺的組合，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillinresistantStaphylococcusaureus，MRSA)每年殺死更多美國(guó)人。不僅常見(jiàn)感染性革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性病原體，諸如屎腸球菌(Enterococcusfaecium)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、肺炎克雷伯氏桿菌(Klebsiellapneumoniae)、鮑氏不動(dòng)桿菌(Acinetobacterbaumannii)、綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)和腸桿菌(Enterobacter)屬中的多抗藥性正在上升，而且抗性跡象見(jiàn)于沙門(mén)氏菌(Salmonella)和艱難梭菌(Clostridiumdifficile)中，并且日益見(jiàn)于淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae)中(GerardD.Wright，《抗生素：新的希望(Antibiotics：ANewHope)》，19(2012)，3-10)。因?yàn)榇丝剐蕴岣?，所以重要的醫(yī)學(xué)需求在于研發(fā)新型抗菌藥品。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：仍需要用于治療細(xì)菌感染的新型療法。本發(fā)明提供化合物(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，其可能用于治療細(xì)菌感染。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種用于治療有需要的個(gè)體體內(nèi)由炭疽桿菌(Bacillusanthracis)、蠟樣芽孢桿菌(Bacilluscereus)、伯克霍爾德菌屬(Burkholderiaspp.)、布魯氏菌屬(Brucellaspp.)、弗朗西斯氏菌屬(Francisellaspp.)、耶爾森氏菌屬(Yersinaspp.)、支原體屬(Mycoplasmaspp.)、脲原體屬(Ureaplasmaspp.)、沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis)或肺炎衣原體(Chlamydiapneumoniae)所導(dǎo)致的細(xì)菌感染的方法，其包含向個(gè)體投與有效量的(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于治療由選自以下的一或多種細(xì)菌所導(dǎo)致的細(xì)菌感染：炭疽桿菌、蠟樣芽孢桿菌、伯克霍爾德菌屬、布魯氏菌屬、弗朗西斯氏菌屬、耶爾森氏菌屬、支原體屬、脲原體屬、沙眼衣原體或肺炎衣原體。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途，其用于制造用以治療由選自以下的一或多種細(xì)菌所導(dǎo)致的細(xì)菌感染的藥劑：炭疽桿菌、蠟樣芽孢桿菌、伯克霍爾德菌屬、布魯氏菌屬、弗朗西斯氏菌屬、耶爾森氏菌屬、支原體屬、脲原體屬、沙眼衣原體或肺炎衣原體。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種醫(yī)藥組合物，其包含(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述醫(yī)藥組合物用于治療由選自以下的一或多種細(xì)菌所導(dǎo)致的細(xì)菌感染：炭疽桿菌、蠟樣芽孢桿菌、伯克霍爾德菌屬、布魯氏菌屬、弗朗西斯氏菌屬、耶爾森氏菌屬、支原體屬、脲原體屬、沙眼衣原體或肺炎衣原體。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供通過(guò)向有需要的個(gè)體投與有效量的(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，以治療由選自以下的一或多種細(xì)菌所導(dǎo)致的細(xì)菌感染的方法：炭疽桿菌、蠟樣芽孢桿菌、伯克霍爾德菌屬、布魯氏菌屬、弗朗西斯氏菌屬、耶爾森氏菌屬、支原體屬、脲原體屬、沙眼衣原體或肺炎衣原體。化合物(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮具有以下結(jié)構(gòu)：前述化合物和其合成方法揭示于國(guó)際申請(qǐng)案第PCT/GB2014/050164號(hào)中，所述申請(qǐng)案的全部?jī)?nèi)容明確地并入本文中。術(shù)語(yǔ)“細(xì)菌感染”包括由一或多種革蘭氏陰性、革蘭氏陽(yáng)性或非典型細(xì)菌所導(dǎo)致的感染。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由炭疽桿菌或蠟樣芽孢桿菌所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由伯克霍爾德菌屬，例如鼻疽伯克霍爾德菌(Burkholderiamallei)、類鼻疽伯克霍爾德菌(Burkholderiapseudomallei)和洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderiacepacia)所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由布魯氏菌屬，例如羊種布魯氏菌(Brucellamelitensis)、流產(chǎn)布魯氏菌(Brucellaabortus)、犬種布魯氏菌(Brucellacanis)、豬種布魯氏菌(Brucellasuis)和綿羊布魯氏菌(Brucellaovis)所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由弗朗西斯氏菌屬，例如土拉弗朗西斯氏菌(Francisellatularensis)、新兇手手弗朗西斯氏菌(Francisellanovicida)和蜃樓弗朗西斯氏菌(Francisellaphilomiragia)所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由耶爾森氏菌屬，例如鼠疫耶爾森氏菌(Yersinapestis)和小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(Yersinaenterocolitica)所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由支原體屬，例如雞毒支原體(Mycoplasmagallisepticum)、生殖支原體(Mycoplasmagenitalium)、貓血支原體(Mycoplasmahaemofelis)、人型支原體(Mycoplasmahominis)、豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae)、綿羊肺炎支原體(Mycoplasmaovipneumoniae)和肺炎支原體(Mycoplasmapneumoniae)所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由脲原體屬，例如微小脲原體(Ureaplasmaparvum)和解脲脲原體(Ureaplasmaurealytirum)所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌感染是由沙眼衣原體或肺炎衣原體所導(dǎo)致。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌對(duì)除(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮外的一或多種抗菌劑具有抗性。術(shù)語(yǔ)“耐性”和“抗菌劑抗性”是指暴露于一或多種抗菌劑下能夠存活的細(xì)菌。在一個(gè)實(shí)施例中，細(xì)菌對(duì)以下中的一或多者具有抗性：氨基糖苷類抗生素(例如阿米卡星(amikacin)、慶大霉素(gentamicin)、卡那霉素(kanamycin)、新霉素(neomycin)、奈替米星(netilmicin)、托普霉素(tobramycin)、巴龍霉素(paromonycin)、壯大觀霉素(spectinomycin))、袢霉素(ansamycin)抗生素(例如利福昔明(rifaximin)、鏈霉素(streptomycin))、碳青霉烯類抗生素(例如厄他培南(ertapenem)、多尼培南(doripenem)、亞胺培南/西司他汀(imipenem/cilastatin)、美羅培南(meropenem))、頭孢霉菌素(cephalosoprin)抗生素(例如頭孢羥氨芐(cefadroxil)、唑啉頭孢菌素(cefaxolin)、頭孢唑啉(cefatolin)、頭孢氨芐(cefalexin)、頭孢克洛(cefaclor)、頭孢孟多(cefamandole)、頭孢西丁(cefoxitin)、頭孢羅齊(cefprozil)、頭孢呋辛(cefuroxime)、頭孢克肟(cefisime)、頭孢地尼(cefdinir)、頭孢托侖(cefditoren)、頭孢哌酮(cefoperazone)、頭孢噻肟(cefotaxime)、頭孢泊肟(cefpodoxime)、頭孢他啶(ceftazidime)、頭孢布騰(certibuten)、頭孢唑肟(ceftizoxime)、頭孢曲松(ceftriaxone)、頭孢吡肟(cefepime)、頭孢洛林酯(ceftarolinfosamil)頭孢吡普(ceftobiprole))、糖肽抗生素(例如替考拉寧(teicoplanin)、萬(wàn)古霉素(vancomycin)、特拉萬(wàn)星(telavancin))、林可酰胺類抗生素(例如克林霉素(clindamycin)、林可霉素(lincomycin))、達(dá)托霉素(daptomycin)、大環(huán)內(nèi)酯抗生素(例如阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、地紅霉素(dirithromycin)、紅霉素(erythromycin)、羅紅霉素(roxithromycin)、醋竹桃霉素(troleandomycin)、泰利霉素(telithromycin)、螺旋霉素(spiramycin))、氨曲南(aztreonam)、呋喃唑酮(furazolidone)、呋喃妥英(nitrofuantoin)、惡唑烷酮抗生素(例如利奈唑胺(linezolid)、泊斯唑胺)(posizolid)、雷德唑胺(radezolid)、特地唑胺(torezolid))、青霉素(penicillin)抗生素(例如阿莫西林(amoxacillin)、氨芐西林(amptcillin)、阿洛西林(azlocillin)、羧芐青霉素(carbenicillin)、氯唑西林(cloxacillin)、雙氯西林(dicloxacillin)、氟氯西林(flucloxacillin)、美洛西林(mezlocillin)、甲氧西林(methicillin)、萘夫西林(nafcillin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素、哌拉西林(piperacillin)、替莫西林(temocillin)、替卡西林(ticarcillin))、阿莫西林/克拉維酸鉀(amoxicillin/clavulante)、氨芐西林/舒巴坦(ampicilin/sulbactam)、哌拉西林/三唑巴坦(piperacillin/tazobactam)、替卡西林/克拉維酸(ticarcillin/clavulanate)、喹諾酮抗菌劑(例如環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、依諾沙星(enoxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、萘啶酸(nalidixicacid)、諾氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、曲伐沙星(trovafloxin)、格帕沙星(grepafloxacin)、司帕沙星(sparfloxacin)、替馬沙星(temafloxacin))、磺酰胺抗生素(例如磺胺米隆(mafenide)、磺胺醋酰胺、磺胺嘧啶、磺胺嘧啶銀、磺胺地托辛(sulfadimethoxine)、磺胺甲二唑、磺胺甲基異惡唑、磺胺、柳氮磺胺吡啶、磺胺異惡唑、甲氧芐氨嘧啶/磺胺甲基異惡唑-TMP-SMX))和四環(huán)素(tetracycline)抗生素(例如地美環(huán)素(demeclocycline)、多西環(huán)素(doxycycline)、二甲胺四環(huán)素(minocycline)、氧四環(huán)素(oxytetracycline)、四環(huán)素、泰環(huán)素(tigeclycline))。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌對(duì)多西環(huán)素具有抗性。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌對(duì)左氧氟沙星及/或環(huán)丙沙星具有抗性。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌對(duì)阿奇霉素具有抗性。在一些實(shí)施例中，細(xì)菌對(duì)四環(huán)素具有抗性。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種治療患有性傳播細(xì)菌感染個(gè)體的方法，其包含向個(gè)體投與有效量的(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明提供(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽，其用于治療由選自以下的一或多種細(xì)菌所導(dǎo)致的細(xì)菌感染：炭疽桿菌、蠟樣芽孢桿菌、伯克霍爾德菌屬、布魯氏菌屬、弗朗西斯氏菌屬、耶爾森氏菌屬、支原體屬、脲原體屬、沙眼衣原體或肺炎衣原體。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供一種用于治療有需要的個(gè)體體內(nèi)患有囊性纖維化、布魯氏菌病(brucellosis)、兔熱病、瘟疫、敗血癥、耶爾森氏菌病(yersiniosis)、骨盆炎性疾病、非典型肺炎、非特異性尿道炎、肺炎、支氣管肺發(fā)育異常或腦膜炎的個(gè)體體內(nèi)的炭疽感染、鼻疽病、類鼻疽病、肺部感染的方法，其包含向個(gè)體投與有效量的(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽。術(shù)語(yǔ)“治療(treat/treating/treatment)”包括降低或抑制涉及個(gè)體體內(nèi)細(xì)菌感染的酶活性或蛋白活性，改善個(gè)體體內(nèi)細(xì)菌感染的一或多種癥狀，或減緩或延緩個(gè)體體內(nèi)細(xì)菌感染的發(fā)展。術(shù)語(yǔ)“治療(treat/treating/treatment)”還包括減弱或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)、復(fù)制，或降低或抑制個(gè)體體內(nèi)細(xì)菌的細(xì)菌接種量。術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”包括例如靈長(zhǎng)類動(dòng)物、牛、馬、豬、綿羊、狗、貓、兔、大鼠、鳥(niǎo)類(包括野生和家養(yǎng)鳥(niǎo)類，諸如火雞、鵝、雞、鴨及類似者)和小鼠。在一些實(shí)施例中，個(gè)體是靈長(zhǎng)類動(dòng)物，例如人類。在一些實(shí)施例中，個(gè)體患有革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌感染。在一些實(shí)施例中，個(gè)體患有革蘭氏陰性細(xì)菌感染。在一些實(shí)施例中，個(gè)體患有非典型細(xì)菌感染。在一些實(shí)施例中，個(gè)體需要治療(例如依靠治療個(gè)體將在生物學(xué)上或醫(yī)學(xué)上受益)。在一些實(shí)施例中，個(gè)體患有重大潛在疾病病況，例如囊性纖維化，其使針對(duì)細(xì)菌感染治療的反應(yīng)復(fù)雜化。在一些實(shí)施例中，個(gè)體患有一或多種細(xì)菌感染(例如由兩種或更多種細(xì)菌感染共感染)。在一些實(shí)施例中，個(gè)體患有由淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhoeae)所導(dǎo)致的感染。在一些實(shí)施例中，個(gè)體共感染有沙眼衣原體和淋病奈瑟氏菌。在一些實(shí)施例中，個(gè)體有感染上性傳播細(xì)菌感染的風(fēng)險(xiǎn)(例如沙眼衣原體或淋病奈瑟氏菌感染)。術(shù)語(yǔ)“有效量”包括(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽將引起個(gè)體的生物或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的量，所述反應(yīng)為例如降低或抑制涉及細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶或細(xì)菌感染的酶活性或蛋白活性，改善細(xì)菌感染的癥狀，或減緩或延緩細(xì)菌感染的發(fā)展。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“有效量”包括當(dāng)向個(gè)體投與(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮或其藥學(xué)上可接受的鹽時(shí)，至少部分有效減輕、抑制及/或改善細(xì)菌感染，或抑制細(xì)菌DNA旋轉(zhuǎn)酶，及/或減弱或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)、復(fù)制或個(gè)體體內(nèi)細(xì)菌的細(xì)菌接種量的量。范例實(shí)例1合成(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮(化合物1)如下所述合成化合物1：中間物13-氯-6-[(2R,6S)-2,6-二甲基嗎啉-4-基]-7-氟-1,2-苯并惡唑-5-甲醛將二異丙基乙胺(5.9g，45.9mmol)添加到無(wú)水乙腈(50ml)中的3-氯-6,7-二氟-1,2-苯并惡唑-5-甲醛冰冷溶液(根據(jù)國(guó)際申請(qǐng)公開(kāi)案第WO2010/043893號(hào)中所述程序制備，5.0g，23.0mmol)中，隨后添加順-2,6-二甲基嗎啉(2.6g，23.0mmol)，且在密封管中在85℃下加熱混合物12小時(shí)。使溶液冷卻到室溫，且在真空下去除揮發(fā)物。將殘余物溶解在乙酸乙酯中，用水洗滌，隨后用鹽水洗滌，且隨后用無(wú)水Na2SO4干燥。在真空下去除溶劑，得到粗產(chǎn)物，使用乙酸乙酯于石油醚中的梯度在硅膠柱上純化粗產(chǎn)物，以獲得固態(tài)標(biāo)題化合物。產(chǎn)率：6.0g(84％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ：1.0(d，6H)，2.9(t，2H)，3.1(d，2H)，3.8(m，2H)，7.7(s，1H)，10.2(s，1H)。MS(ES)MH+:對(duì)于C14H14CIFN2O3為313。中間物23-氯-6-[(2R,6S)-2,6-二甲基嗎啉-4-基]-5-(1,3-二氧環(huán)戊-2-基)-7-氟-1,2-苯并惡唑在迪安-斯塔克(Dean-Stark，回流管)設(shè)備中在回流下加熱中間物1(16.3g，52.2mmol)、乙二醇(8.1g，130.6mmol)和吡啶對(duì)甲苯磺酸酯(1.31g，5,2mmol)于甲苯(300mL)中的溶液達(dá)16小時(shí)。在真空下去除溶劑，且將殘余物溶解在二乙醚(75mL)中，用水((3×25mL)和鹽水(25mL)洗滌。用無(wú)水Na2SO4干燥有機(jī)層且過(guò)濾。在真空下去除溶劑，得到標(biāo)題化合物，進(jìn)一步通過(guò)用熱己烷研磨來(lái)純化標(biāo)題化合物。產(chǎn)率：18.0g(80％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ：1.1(d，6H).2.8(t，2H)，3.0(d，2H)，3.3(m，4H)，3.8(m，2H)，5.7(s，1H)，7.6(s，1H)。中間物3(4R)-3-{6-[2R,6S)-2,6-二甲基嗎啉-4-基]-5-(1,3-二氧環(huán)戊-2-基)-7-氟-1,2-苯并惡唑-3-基}-4-甲基-1,3-惡唑烷-2-酮在0℃下經(jīng)10分鐘時(shí)間，將(4R)-4-甲基-1,3-惡唑烷-2-酮(根據(jù)Nishiyama，T.；Matsui，Shigeki；Yamada，F(xiàn).《雜環(huán)化學(xué)雜志(J.Het.Chem.)》(1986)，23(5)，1427-9中所述程序合成，1.0g，9.9mmol)于二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液緩慢添加到NaH(0.24g，9.9mmol)于二甲基甲酰胺(10mL)中的攪拌溶液中。在室溫下攪拌混合物30分鐘，且在相同溫度下添加中間物2(1.1g，3.1mmol)于二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液。在80℃下加熱混合物12小時(shí)，且倒入冰冷的水中，且用乙酸乙酯(2×20mL)提取。用無(wú)水Na2SO4干燥有機(jī)層，且在真空下去除溶劑。使用乙酸乙酯于石油醚中的梯度通過(guò)硅膠柱色譜純化粗產(chǎn)物。產(chǎn)率：0.15g(12％)。MS(ES)MH+:對(duì)于C20H24FN3O6為422.4。中間物4(4S)-3-{6-[(2R,6S)-2,6-二甲基嗎啉-4-基]-5-(1,3-二氧環(huán)戊-2-基)-7-氟-1,2-苯并惡唑-3-基}-4-甲基-1,3-惡唑烷-2-酮使用(4S)-4-甲基-1,3-惡唑烷-2-酮(根據(jù)Nishiyama，T.；Matsui，Shigeki；Yamada，F(xiàn).《雜環(huán)化學(xué)雜志(J.Het.Chem.)》(1986)，23(5)，1427-9中所述程序合成)以類似于合成中間物3所述的方法自中間物2制備中間物4。MS(ES)MH+:對(duì)于C20H24FN3O6為422.4?；衔?(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮在85℃下加熱中間物4(0.36mmol)和巴比妥酸(barbituricacid，0.3mmol)于乙酸(1mL)中的攪拌混合物達(dá)16小時(shí)。蒸發(fā)溶劑，將殘余物溶解在甲醇(2mL)中，且添加水(5mL)。過(guò)濾所沉淀固體，且通過(guò)反相HPLC(10mM乙酸銨于水中，CH3CN)純化，洗脫兩種組分。分離第二洗脫組分呈固體狀，且識(shí)別為標(biāo)題化合物。如同兩種組分的第一洗脫一樣，通過(guò)反相HPLC(10mM乙酸銨于水中，CH3CN)分離標(biāo)題化合物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.9(d，3H)，1.15(d，3H)，1.4(d，3H)，2,9(d，1H)，3.1(t，1H)，3.5-3.6(m，2H)，3.8(m，1H)，3.9(d，1H)，4.0(d，1H)，4.2(q，1H)，4.6-4.7(m，2H)，7.6(s，1H)，11.5(s，1H)，11.8(s，1H)。MS(ES)MH+:對(duì)于C22H22FN5O7為488.4；[α]D20＝-92(c＝1；MeOH)。同樣通過(guò)HPLC純化自化合物1合成中分離為第二洗脫組分的是(2R,4S,4aS)-11-氟-2,4-二甲基-8-[(4S)-4-甲基-2-氧代-1,3-惡唑烷-3-基]-1,2,4,4a-四氫-2'H,6H-螺[1,4-惡嗪并[4,3-a][1,2]惡唑并[4,5-g]喹啉-5,5'-嘧啶]-2',4',6'(1'H,3'H)-三酮1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ：0.9(d，3H)，1.15(d，3H)，1.4(d，3H)，2.9(d，1H)，3.1(t,1H)，3.6-3.7(m，2H)，3.8-4.0(m，1H)，3.9(d，1H)，4.1(d，1H)，4.2(q，1H)，4.6-4.7(m，2H)，7,6(s，1H)，11.5(s，1H)，11.8(s，1H)。MS(ES)MH+:對(duì)于C22H22FN5O7為488.4。[α]D20＝+224(c＝1；MeOH)。實(shí)例2化合物1抵抗人類支原體的活體外抗菌活性化合物1是DNA旋轉(zhuǎn)酶和拓?fù)洚悩?gòu)酶IV的超螺旋化和脫連環(huán)化活動(dòng)的研究性抑制劑，其具有抵抗數(shù)種不同類型細(xì)菌的活性。初步數(shù)據(jù)表明此試劑對(duì)生物體保持活性，此類生物體對(duì)其他試劑，諸如氟喹諾酮(fluoroquinolones)和四環(huán)素、包括用于諸如淋病奈瑟氏菌的性傳播感染的試劑具有抗性。進(jìn)行本研究以通過(guò)測(cè)試少量臨床分離株和參考菌株(其代表作為重要人類病原體的五種柔膜細(xì)菌)，來(lái)增加對(duì)化合物1抵抗其他人類病原體的活體外活性的了解。受測(cè)生物體包括肺炎支原體、人型支原體、生殖支原體、解脲脲原體和微小脲原體。M肺炎主要是呼吸道的病原體，其造成諸如咽炎、氣管支氣管炎和肺炎的疾病，而其余種屬則是成年男性和女性體內(nèi)泌尿生殖道的重要病原體，且亦可在懷孕或生產(chǎn)期間垂直傳播時(shí)造成新生兒的全身性疾病。根據(jù)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)學(xué)會(huì)(ClinicalLaboratoryStandardsInstitute，CLSI)(CLSI2011)的指導(dǎo)原則進(jìn)行易感性測(cè)試。受測(cè)菌株包括生物體，其包含調(diào)節(jié)四環(huán)素抗性的tetM基因、帶來(lái)抗大環(huán)內(nèi)酯性的23S核糖體核糖核酸中的突變，和其他生物體，其包含帶來(lái)抗氟喹諾酮性的DNA旋轉(zhuǎn)酶及/或拓?fù)洚悩?gòu)酶IV中的突變。方法抗菌劑.研究中所包括的藥物概括于表1中?？紤]到每種藥物的純度百分比，稱量適當(dāng)量的每種粉末狀藥物來(lái)制備10mL儲(chǔ)備溶液。根據(jù)每個(gè)制造商的說(shuō)明溶解抗菌劑。表1測(cè)試化合物和對(duì)照/參考化合物化合物純度來(lái)源化合物198.9％阿奇霉素95.2％Fluka/Sigma-AldrichSwitzerland多西環(huán)素100％Sigma-AldriehSt.Louis，MO左氧氟沙星99％Sigma-AldrichSt.Louis，MO細(xì)菌菌株.在此研究中使用衍生自成人和兒童各種身體部位的已知滴定度的臨床分離株純凈培養(yǎng)物，所述培養(yǎng)物已在UAB診斷支原體實(shí)驗(yàn)室(DiagnosticMycoplasmaLaboratory)的菌種保藏中經(jīng)儲(chǔ)存在負(fù)70℃下。分離株的原始來(lái)源和分離的年份(當(dāng)可用時(shí))以及特定抗藥性(在相關(guān)時(shí))概括于表2中。表2受測(cè)細(xì)菌菌株生殖支原體(n-5)肺炎支原體(n-12)人型支原體(n＝12)脲原體屬(n-15)表2注釋縮寫(xiě)：Uu＝解脲脲原體，Up＝微小脲原體，BAL＝支氣管肺泡灌洗液，CSF＝腦脊髓液，ETA＝氣管內(nèi)抽吸物如先前所述通過(guò)實(shí)時(shí)PCR識(shí)別脲原體屬(Xiao等人.通過(guò)實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行的人類脲原體屬和細(xì)菌血清型變種的檢測(cè)和特性描述(DetectionandcharacterizationofhumanUreaplasmaspeciesandserovarsbyreal-timePCR).《臨床微生物學(xué)雜志(J.Clin.Microbiol)》.2010，48，2715-2723)。三種臨床分離株顯示為兩個(gè)種屬的混合物，其有時(shí)存在(Xiao等人.人類脲原體中的廣泛水平基因轉(zhuǎn)移質(zhì)疑出于診斷目的的血清分型的效用(Extensivehorizontalgenetransferinureaplasmasfromhumansquestionstheutilityofserotypingfordiagnosticpurposes).《臨床微生物學(xué)雜志(J.Clin.Microbiol)》.2011，49，2818-2826)。通過(guò)UAB診斷支原體實(shí)驗(yàn)室中的PCR確定人型支原體和脲原體屬中tetM的存在?；铙w外易感性測(cè)試方法：此研究所用的試驗(yàn)為培養(yǎng)液微量稀釋最低抑制濃度(MIC)試驗(yàn)，其發(fā)表在《用于人類支原體抗菌劑易感性測(cè)試的方法，批準(zhǔn)指南，CLSI文獻(xiàn)M43-A(MethodsforAntimicrobialSusceptibilityTestingofHumanMycoplasmas，ApprovedGuideline，CLSIDocumentM43-A)》中(CLSI2011)。此試驗(yàn)使用96孔微量滴定板，在其中將少量待測(cè)試生物體的限定接種物添加到加倍的抗菌劑稀釋液中。培育微量滴定板直到生長(zhǎng)對(duì)照組顏色改變。隨后，通過(guò)含有pH值指示物的培養(yǎng)液中缺少顏色變化來(lái)確定MIC終點(diǎn)。接著是所用程序的具體方面。介質(zhì).SP4培養(yǎng)液和SP4瓊脂用于測(cè)試肺炎支原體和生殖支原體。改良海弗里克氏(Hayflick's)支原體培養(yǎng)液和瓊脂用于測(cè)試人型支原體。謝波德氏(Shepard's)10B培養(yǎng)液和A8瓊脂用于測(cè)試脲原體屬。此等介質(zhì)和其制劑描述于CLSI文獻(xiàn)(CLSI2011)中。制備接種物.將生物體解凍到室溫，且在50mL圓錐形導(dǎo)管中在適當(dāng)?shù)念A(yù)熱介質(zhì)中稀釋，以得到大約為104CFU/mL的最終接種物。基于一式兩份地測(cè)試8種稀釋液和適當(dāng)對(duì)照組，至少為每種藥物制備5mL接種物。如果需要更多稀釋液來(lái)達(dá)成終點(diǎn)MIC，那么制備額外量的接種物，在使用之前在37℃下有氧地培育接種培養(yǎng)液2小時(shí)，以在接種微量滴定板之前使支原體變得具有代謝活性。因?yàn)殡逶w具有更快生長(zhǎng)速率，所以在接種微量滴定板之前僅培育一小時(shí)。培養(yǎng)液微量稀釋試驗(yàn)的操作.單個(gè)微量滴定盤(pán)用于4種藥物。一式兩份地測(cè)試每種藥物(藥物1-A、B行；藥物2-C、D行；藥物3-E、F行。)孔9、10、11和12分別用于溶劑、介質(zhì)、藥物和生長(zhǎng)對(duì)照組。將0.025mL適當(dāng)培養(yǎng)液介質(zhì)添加到微量滴定盤(pán)的2到8行和10行以及12行。將0.025mL最高濃度的待測(cè)試藥物添加到A、B行中的孔1、2和11中?？?1充當(dāng)藥物對(duì)照組。以相同方法將其他待測(cè)試藥物添加到其各自行中。通過(guò)對(duì)儲(chǔ)備溶液進(jìn)行適當(dāng)稀釋來(lái)制備最高藥物濃度。使用0.025mL多注式吸液管依序稀釋抗菌劑，從第2孔開(kāi)始，持續(xù)到孔8，棄去最終的0.025mL。通過(guò)并入0.025mL最高濃度(在無(wú)菌去離子水中1:10稀釋)的溶劑在孔9中制備溶劑對(duì)照組，如果任何除水外的物質(zhì)用作溶劑，那么所述最高濃度溶劑用于溶解受測(cè)抗菌劑。將0.175mL已預(yù)熱2小時(shí)的接種介質(zhì)的所要稀釋液添加到1到9行和12行中的每個(gè)孔中。孔12充當(dāng)生長(zhǎng)對(duì)照組。從孔12開(kāi)始添加接種物，且向后操作至孔1，以防止藥物殘留。將0.175mL適當(dāng)未接種的介質(zhì)添加到孔10和11(總共0.2mL)中以用于介質(zhì)和藥物對(duì)照組。通過(guò)以下來(lái)最終確定用于接種每個(gè)微量滴定盤(pán)的有效稀釋液的CFU/mL：制備接種物的6種連續(xù)稀釋液(0.1mL接種物于0.9mL適當(dāng)培養(yǎng)液中)，且將20μl每種稀釋液移液到適當(dāng)瓊脂板上，以驗(yàn)證制得恰當(dāng)稀釋液且接種物包含104到105CFU/mL。在空氣附加5％CO2中，在37℃下培育瓊脂板直到可以看見(jiàn)且可統(tǒng)計(jì)菌落。直到生長(zhǎng)變得可見(jiàn)所需要的時(shí)間根據(jù)種屬而變化，對(duì)于脲原體屬和人型支原體，其在24至72小時(shí)范圍內(nèi)，對(duì)于肺炎支原體和生殖支原體，其長(zhǎng)達(dá)數(shù)天。在37℃下有氧地培育微量稀釋盤(pán)，且在18至24小時(shí)后檢查，且隨后每天檢查生長(zhǎng)對(duì)照組孔中的顏色變化。確定MIC終點(diǎn)、質(zhì)量控制和試驗(yàn)驗(yàn)證.當(dāng)生物體對(duì)照組孔第一次顯示出顏色變化時(shí)，記錄MlC為抗菌劑抑制培養(yǎng)液介質(zhì)中的顏色變化的最低濃度。通過(guò)生物體對(duì)照組孔(亦即孔12)中從黃色到粉紅色的顏色變化證明了10B培養(yǎng)液中脲原體屬生長(zhǎng)的陽(yáng)性反應(yīng)。通過(guò)生物體生長(zhǎng)對(duì)照組孔(亦即孔12)中從粉紅色到更深紅光紅色的顏色變化證明了支原體培養(yǎng)液中人型支原體的陽(yáng)性反應(yīng)。通過(guò)生長(zhǎng)對(duì)照組孔中從粉紅色到黃色的顏色變化證明了SP4培養(yǎng)液中肺炎支原體和生殖支原體的陽(yáng)性反應(yīng)如果生物體濃度的對(duì)照組瓊脂板指示濃度在104和105CFU/mL之間，那么結(jié)果視為有效。對(duì)照組孔和預(yù)期結(jié)果為：孔9(溶劑對(duì)照組)-無(wú)顏色變化；孔10(介質(zhì)控制)-無(wú)顏色變化；孔11(藥物對(duì)照組)-無(wú)顏色變化；孔12(生長(zhǎng)對(duì)照組)-根據(jù)受測(cè)生物體而定的生長(zhǎng)和顏色變化，無(wú)渾濁。通過(guò)在每種受測(cè)分離株的接種物上進(jìn)行CFU量化，檢驗(yàn)生物體的純度。當(dāng)接種有肺炎支原體和生殖支原體時(shí)，SP4瓊脂用支原體屬檢測(cè)污染物或混合培養(yǎng)物。人型支原體在SP4或支原體瓊脂上生長(zhǎng)。人型支原體和共生呼吸道支原體屬產(chǎn)生煎蛋式菌落；而肺炎支原體和生殖支原體產(chǎn)生小型球形菌落。對(duì)于脲原體屬，A8瓊脂板產(chǎn)生棕色晶狀菌落，且將同樣檢測(cè)污染性支原體屬或細(xì)菌。生長(zhǎng)對(duì)照組孔中的任何渾濁都指示細(xì)菌污染且使結(jié)果無(wú)效。培養(yǎng)液微量稀釋MIC質(zhì)量控制限值.出于質(zhì)量控制(QC)的目的，由CLSI(CLSI2011)為每種受測(cè)生物體所指定的美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection，ATCC)菌株包括于每天操作的每次試驗(yàn)內(nèi)。已為此等菌株確定數(shù)種抗菌劑的MIC參考范圍(CLSI2011)。所用QC菌株為：肺炎支原體ATCC29342、人型支原體ATCC23114和解脲脲原體ATCC33175。因?yàn)樯持гw的易感性測(cè)試尚未規(guī)范化，所以CLSI不推薦生殖支原體型菌株。因此，我們?yōu)榇松矬w選擇ATCC33530型菌株。此菌株已在我們的實(shí)驗(yàn)室中用于其他研究，且對(duì)于數(shù)種抗菌劑具有可預(yù)測(cè)的MIC。單一測(cè)試的可接受MICQC限值(單一藥物/單一生物體組合)在衍生自CLSI文獻(xiàn)(CLSI2011)的表3中列出。已呈現(xiàn)對(duì)于全部MIC試驗(yàn)都如預(yù)期表現(xiàn)的QC菌株的數(shù)據(jù)。表3受培養(yǎng)液微量稀釋測(cè)試的人型支原體、肺炎支原體和解脲脲原體的質(zhì)量控制菌株的MIC限值(μg/ml)表3注釋表3中的數(shù)據(jù)源自M-43-ACLSI文獻(xiàn)(CLSI2011)。結(jié)果生殖支原體.化合物1顯示出與左氧氟沙星和多西環(huán)素的活性類似的活體外活性。此等三種藥物的總MIC范圍在42倍稀釋＝0.25到2μg/mL內(nèi)?；衔?MIC范圍(0.5到1μg/mL)比阿奇霉素(MIC范圍<0.001μg/mL)弱。肺炎支原體.化合物1的MIC90(1μg/mL)與左氧氟沙星的MIC90相等，且高于多西環(huán)素(0.25μg/mL)4倍。大多數(shù)肺炎支原體分離株的阿奇霉素MIC<0.001μg/mL，但還選擇兩種菌株用于測(cè)試，因?yàn)槠浒⑵婷顾豈IC為16和32μg/mL，且包含23S核糖體核糖核酸中的突變。與那些對(duì)大環(huán)內(nèi)酯具有完全易感性的分離株類似，化合物1維持了抵抗此等兩種抗大環(huán)內(nèi)酯分離株的活體外效力。人型支原體.化合物1具有4μg/mL的MIC90和8μg/mL的最大MIC值而對(duì)人型支原體具有最低總活性。對(duì)于不含tetM的人型支原體分離株，多西環(huán)素MIC在0.016到0.063μg/mL范圍內(nèi)，而對(duì)于那些含有tetM的三種分離株，MIC為4μg/mL。對(duì)于那些分離株，相應(yīng)四環(huán)素MIC為32μg/mL。對(duì)于多西環(huán)素，化合物1MIC不受tetM存在的影響?；衔?的MIC90(4μg/mL)比左氧氟沙星的MIC90(0.25μg/mL)大16倍，且等于阿奇霉素的MIC90，阿奇霉素為通常不對(duì)此種屬極具活性的藥物。在對(duì)化合物1的可實(shí)現(xiàn)藥物濃度缺乏信息的情況下，不可能指示此等MIC將被視為具有易感性或是抗性。脲原體屬.化合物1的MIC90為1μg/mL，使其效力與左氧氟沙星類似。在抵抗抗左氧氟沙星脲原體和易感左氧氟沙星分離株方面，化合物1MIC沒(méi)有差別。類似地，在三種含有tetM的脲原體分離株中，相較于多西環(huán)素的4到8μg/mL，化合物1的MIC在0.5到2μg/mL范圍內(nèi)，其MIC不受影響，但相較于化合物1的MIC90(1μg/mL)，易感多西環(huán)素生物體的MIC90(0.125μg/mL)的活性高8倍。對(duì)于解脲脲原體(阿奇霉素MIC＝32μg/mL)的單一抗大環(huán)內(nèi)酯分離株，化合物1MIC為2μg/mL，其稀釋高于此藥物的MIC902倍，但總的來(lái)說(shuō)，化合物1的效力比阿奇霉素強(qiáng)4倍(1比4μg/mL的MIC90)。表4抵抗人類支原體的受測(cè)化合物1和三種比較物的MIC數(shù)據(jù)集生殖支原體(n＝5)MIC(μg/mL)肺炎支原體(n-12)MIC(μg/mL)人型支原體(n＝12)MSC(μg/L)脲原體屬(n-15)MIC(μg/mL)表5抵抗人類支原體的受測(cè)化合物1和三種比較物的數(shù)據(jù)匯總表4和表5注釋縮寫(xiě)：AZI＝阿奇霉素，DOX＝多西環(huán)素，LEV＝左氧氟沙星，Uu＝解脲脲原體，Up＝微小脲原體。與多西環(huán)素同時(shí)，同樣對(duì)抵抗四環(huán)素的3種含有tetM基因的人型支原體分離株進(jìn)行測(cè)試。對(duì)于四環(huán)素，3種分離株皆具有32μg/mL的MIC。討論感染人類的支原體和脲原體屬可在呼吸道以及泌尿生殖道中引起重大疾病。除淋病奈瑟氏菌和沙眼衣原體外，生殖支原體和解脲脲原體二者皆可引起男性尿道炎，且生殖支原體同樣引起女性宮頸炎和骨盆炎性疾病(WaitesKB，Taylor-RobinsonD.《支原體和脲原體(MycoplasmaandUreaplasma)》.《微生物教學(xué)手冊(cè)(ManualofClinicalMicrobiology)》，第10版.Washington，D.C.，ASMPress：970-985，2011)。因?yàn)樾律鷥后w內(nèi)的人型支原體和脲原體屬，有時(shí)發(fā)生血流、CSF和肺部的侵入性感染(Waites和Taylor-Robinson2011)。在免疫缺乏的情況下，侵入性疾病亦可發(fā)生在成人體內(nèi)(Waites和Taylor-Robinson2011)。因?yàn)樵趤喼薮蟓h(huán)內(nèi)酯抗性在肺炎支原體中變得極為常見(jiàn)且正逐漸擴(kuò)散到歐洲和北美，所以不再明確劃分支原體和脲原體感染的治療選擇方案；在一些地區(qū)，人型支原體和脲原體屬中四環(huán)素抗性比率可接近50％；且在生殖器支原體中，已充分表明其對(duì)大環(huán)內(nèi)酯和氟喹諾酮的抗性(WaitesKB，LysynyanskyI，BebearCM.(2014).人類和動(dòng)物支原體中出現(xiàn)的抗菌劑抗性(Emergingantimicrobialresistanceinmycoplasmasofhumansandanimals).《柔膜細(xì)菌分子生物學(xué)和發(fā)病機(jī)理(MollicutesMolecularBiologyandPathogenesis)》.G.Browning和C.Cifti.Norfolk，UK，CaisterAcademicPress：289-322)。免疫抑制患者和那些隨時(shí)間推移已受到諸多抗生素療程的患者，其感染有抗藥性生物體的風(fēng)險(xiǎn)更大(Waites2014)。出于此等原因，需要不受交互抗性影響的新型試劑，所述交互抗性涉及諸如大環(huán)內(nèi)酯、四環(huán)素和氟喹諾酮的其他藥物類別。此小型初步研究已表明，化合物1對(duì)生殖支原體、肺炎支原體、解脲脲原體和微小脲原體具有活體外活性，其與左氧氟沙星，另外瞄準(zhǔn)DNA復(fù)制的試劑類似，且其效力不受存在帶來(lái)氟喹諾酮抗性的突變的影響。此外，支原體和脲原體屬中大環(huán)內(nèi)酯和四環(huán)素抗性似乎不對(duì)化合物1的MIC產(chǎn)生任何重大可測(cè)量的影響，但應(yīng)測(cè)試更多分離株以確認(rèn)此觀測(cè)結(jié)果。不存在影響大環(huán)內(nèi)酯與核糖體核糖體結(jié)合的突變時(shí)，阿奇霉素為抵抗生殖支原體和肺炎支原體的最強(qiáng)力受測(cè)試劑。抵抗脲原體屬時(shí)，化合物1的MIC90比阿奇霉素小4倍，使其在四種受測(cè)試劑中成為最具活性的藥物。結(jié)論●總的來(lái)說(shuō)，化合物1抵抗肺炎支原體、生殖支原體和脲原體屬的活體外活性與左氧氟沙星類似，其所有MIC<2μg/mL，而就MIC90(4μg/mL)而言，其抵抗人型支原體的效力略低?！竦挚闺逶w屬時(shí)，化合物1的MIC90(1μg/mL)比阿奇霉素低4倍，使其在抵抗此等生物體時(shí)在四種受測(cè)試劑中效力最強(qiáng)?！駧?lái)大環(huán)內(nèi)酯或氟喹諾酮抗性的突變或在少數(shù)受測(cè)分離株中存在tetM不會(huì)影響化合物1抵抗肺炎支原體、人型支原體和脲原體屬的活體外活性?！窕衔?可為一種潛在有用的試劑，其用于進(jìn)一步發(fā)展可能治療由泌尿生殖道或呼吸道中的人類支原體和脲原體所導(dǎo)致的感染。實(shí)例3化合物1抵抗?jié)撛谏锟植乐髁x試劑的活體外抗菌活性充分表明了類別A和B選定試劑用作生物恐怖主義試劑可能性。為此目的，我們確定了來(lái)自多種藥物類別的化合物的抗菌易感性概況，以及化合物1抵抗多種分離株的概況，分離株為以下中的每一種：炭疽桿菌(B.anthracis)、鼻疽伯克霍爾德菌(B.mallei)、類鼻疽伯克霍爾德菌(B.pseudomallei)、流產(chǎn)布魯氏菌(B.abortus)、羊種布魯氏菌(B.melitensis)、豬種布魯氏菌(B.suis)、土拉弗朗西斯氏菌(F.tuiarensis)和鼠疫耶爾森氏菌(Y.pestis)。遵循臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)的指導(dǎo)原則，以培養(yǎng)液微量稀釋試驗(yàn)形式進(jìn)行測(cè)試。結(jié)果描述為抗菌劑的最低濃度(μg/ml)，所述濃度在視覺(jué)上完全抑制微量稀釋孔中生物體的生長(zhǎng)。材料和方法抗菌劑篩查三(3)種比較物化合物(多西環(huán)素、左氧氟沙星和氯胺苯醇)和化合物1抵抗多種分離株的抗菌活性，所述分離株為以下中的每一種：炭疽桿菌、鼻疽伯克霍爾德菌、類鼻疽伯克霍爾德菌、流產(chǎn)布魯氏菌、羊種布魯氏菌、豬種布魯氏菌、土拉弗朗西斯氏菌和鼠疫耶爾森氏菌。根據(jù)支持者提供的說(shuō)明且根據(jù)CLSI指導(dǎo)原則制備化合物。一式三份地測(cè)試每種總濃度為12的全部測(cè)試和比較物化合物。濃度范圍為具有64μg/mL初始濃度和0.031μg/mL結(jié)束濃度的兩倍稀釋方案細(xì)菌菌株將10種分離株用于藥物篩查，每一種為炭疽桿菌、鼠疫耶爾森氏菌、鼻疽伯克霍爾德菌、類鼻疽伯克霍爾德菌、豬種布魯氏菌、羊種布魯氏菌、流產(chǎn)布魯氏菌和土拉弗朗西斯氏菌的3種分離株(表6)。此外，包括以下質(zhì)量控制菌株：大腸桿菌25922、金黃色葡萄球菌29213、綠膿桿菌27853、肺炎鏈球菌49619和大腸桿菌35218。表6篩查的細(xì)菌分離株活體外易感性測(cè)試方法(在適當(dāng)時(shí))使用由CLSI指導(dǎo)原則所概述的培養(yǎng)液微量稀釋方法進(jìn)行測(cè)試。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，使用96孔、具有0.2毫升/孔試驗(yàn)體積的U形底微量培養(yǎng)板進(jìn)行測(cè)試。含有適當(dāng)培養(yǎng)液和兩倍稀釋測(cè)試化合物的板接種有目標(biāo)濃度為5.0×105CFU/mL(5.0×104CFU/孔)的細(xì)菌試劑，且隨后視試劑而定培育24至72小時(shí)。培育后，以肉眼觀察培養(yǎng)板，且將個(gè)別孔評(píng)估為渾濁、部分清澈或完全清澈。MIC描述為視覺(jué)上抑制生物體生長(zhǎng)的藥物最低濃度(μg/mL)。生長(zhǎng)介質(zhì)、接種物制備和培育條件提供于下文表7中。表7生長(zhǎng)介質(zhì)、接種物制備和培育條件上述篩查結(jié)果顯示于表8和表9中。表8化合物1和三種比較物抵抗選定細(xì)菌的抗菌易感性表9化合物1的活體外活性(μg/ml)生物體N范圍MIC50MIC90炭疽桿菌100.12-10.250.5炭疽桿菌300.12-40.251豬種布魯氏菌101-212鼻疽伯克霍爾德菌100.25-64232鼻疽伯克霍爾德菌302-321632類鼻疽伯克霍爾德菌1032-643264類鼻疽伯克霍爾德菌2832->3232>64土拉弗朗西斯氏菌278-161616鼠疫耶爾森氏菌101->6422鼠疫耶爾森氏菌302-848當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3