生物衍生的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)已被用于組織的修復(fù)和再生。然而，衍生自真皮和小腸的兩種最常用的基質(zhì)具有缺陷。這些組織需要苛刻的處理?xiàng)l件才能具有完好的細(xì)胞結(jié)構(gòu)、較好地血管化以及與脂肪組織相關(guān)聯(lián)，但這些條件可損壞原本的ECM結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的實(shí)施方案克服了這些挑戰(zhàn)中的一個(gè)或多個(gè)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本公開(kāi)提供了本發(fā)明的若干示例性實(shí)施方案，并將在下文對(duì)一部分示例性實(shí)施方案進(jìn)行討論。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了具有去細(xì)胞化的胸膜組織的生物衍生的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)。在一個(gè)實(shí)施方案中，胸膜組織來(lái)源于哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，胸膜組織來(lái)源于豬、牛、綿羊、犬、鼠、猴、山羊、馬、鳥(niǎo)或人類。在又一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)被配置成片材、打孔的片材、層合的片材、條狀物、片狀物、線圈、圓柱體、織物、真空壓制材料、海綿、微粉化粉末、膏狀物、可注射的凝膠、噴霧劑、乳液或涂層。本發(fā)明的基質(zhì)能夠用于修復(fù)、重建、密封或接合神經(jīng)組織、皮組織、心血管組織、心包組織、肌組織、膀胱組織、眼組織、牙周組織、骨、肌腱、韌帶、盆底組織或腹部組織。在一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)具有多個(gè)去細(xì)胞化的胸膜組織層。在另一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)具有至少8N乘以層的數(shù)量的破裂強(qiáng)度。在又一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)具有至少2N乘以層的數(shù)量的拉伸強(qiáng)度。在又一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)具有不超過(guò)0.105mm乘以層的數(shù)量的厚度。在一個(gè)實(shí)施方案中，具有去細(xì)胞化的胸膜組織的ECM由四個(gè)去細(xì)胞化的胸膜組織層組成，并且具有由包括標(biāo)準(zhǔn)偏差的平均不超過(guò)約363MPa或約524MPa的彎曲模量來(lái)表征的彈性，并且彎曲模量通過(guò)三點(diǎn)彎曲測(cè)試進(jìn)行測(cè)量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)還具有沉積于ECM的至少一個(gè)表面上的微粉化ECM，該微粉化ECM包括由去細(xì)胞化的胸膜組織制成的微粒。在該實(shí)施方案中，在本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的銑床中使胸膜微粉化，然后將其施用至去細(xì)胞化的胸膜上，并使用熱處理、壓縮或生物相容性粘合劑進(jìn)行固定或粘結(jié)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，基質(zhì)具有至少一個(gè)生物可吸收的聚合物層，其中所述生物可吸收的聚合物為膠原、明膠、脫乙酰殼多糖、氧化纖維素、氧化再生纖維素、包含丙交酯的共聚物、包含乙交酯的共聚物、或它們的組合。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了制備根據(jù)本文所述實(shí)施方案的生物衍生的ECM的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，該方法涉及提供胸膜組織；使胸膜組織去細(xì)胞化；以及凍干胸膜組織。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法涉及再水合胸膜組織形成去細(xì)胞化的ECM的額外步驟。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法涉及提供胸膜組織；使胸膜組織去細(xì)胞化；形成多個(gè)去細(xì)胞化的胸膜組織的胸膜組織層；將多個(gè)胸膜組織層堆疊在彼此的頂部上以形成疊堆；在真空下壓縮疊堆；以及凍干壓縮的疊堆。在又一個(gè)實(shí)施方案中，將多個(gè)胸膜組織層堆疊在彼此的頂部上形成疊堆的步驟按胸膜組織層的漿膜側(cè)面面向上，并且胸膜組織層的基底側(cè)面面向下來(lái)執(zhí)行。在另一方面，本發(fā)明提供了根據(jù)本文所述實(shí)施方案制備的具有去細(xì)胞化的胸膜組織的生物衍生的ECM。附圖說(shuō)明圖1a示出了低滲洗滌之前的染色的胸膜組織。圖1b示出了低滲洗滌之后的染色的胸膜組織。圖1c示出了脫氧核糖核酸酶處理之后的染色的胸膜組織。圖2和圖3示出了胸膜和腹膜組織之間的厚度、膠原以及彈性蛋白的量和分布的差異。圖2a、2b和2c示出了胸膜組織，并且圖3a、3b和3c示出了腹膜組織。圖4示出了對(duì)照物、四層胸膜層合物、四層腹膜層合物、可商購(gòu)獲得的十層SIS(小腸黏膜下層)層合物以及可商購(gòu)獲得的單層豬真皮的半透明度。對(duì)照物為未用任何ECM材料覆蓋的印刷字母。圖5a為SEM圖像，示出了本發(fā)明的胸膜的漿膜-基底膜類型構(gòu)造的頂部、底部和橫截面視圖。圖5b為SEM圖像，示出了SIS構(gòu)造的頂部、底部和橫截面視圖。圖5c為SEM圖像，示出了表皮基質(zhì)的頂部、底部和橫截面視圖。圖6為本發(fā)明的層合并凍干的胸膜構(gòu)造的SEM圖像，這些胸膜構(gòu)造用蘇木精和伊紅(H&E)、馬松三色、VerhoeffsVanGieson(EVG)和阿利新藍(lán)染色法染色。圖7示出了經(jīng)Brennen組織網(wǎng)格器處理以形成網(wǎng)格狀胸膜基質(zhì)的四層層合并凍干的胸膜構(gòu)造。圖8示出了通過(guò)利用鈍鋸齒和壓縮將該胸膜定位在兩個(gè)不銹鋼表面之間來(lái)處理四層層合并凍干的胸膜構(gòu)造，從而形成紋理化胸膜基質(zhì)。圖9a示出了構(gòu)造用于血管或神經(jīng)應(yīng)用的本發(fā)明的去細(xì)胞化的胸膜(未層合)，其中漿膜側(cè)面向芯軸以便為構(gòu)造提供低粘附性的內(nèi)表面。圖9b為被配置成管狀構(gòu)造的本發(fā)明的去細(xì)胞化的胸膜(未層合)的SEM圖像，其示出了良好形成的管狀構(gòu)造，該管狀構(gòu)造具有平滑的內(nèi)表面和粗糙的外表面。圖9c示出了在受損或病變的血管或自體移植的血管需要外部支座的情況下被構(gòu)造成用作外支架的本發(fā)明的去細(xì)胞化的胸膜(未層合)。圖10示出了接種在胸膜基質(zhì)上的成纖維細(xì)胞的顯微圖，其中已對(duì)該成纖維細(xì)胞進(jìn)行活/死細(xì)胞染色(分子探針)?；罴?xì)胞被染色為熒光綠。具體實(shí)施方式現(xiàn)將具體地參考本公開(kāi)的各種實(shí)施方案。本發(fā)明涉及包括去細(xì)胞化的胸膜組織的生物衍生的ECM。胸膜衍生的去細(xì)胞化的生物材料稀缺的原因之一是，將胸膜從與之附接的胸腔分離存在困難。衍生自胸膜組織的去細(xì)胞化的ECM組合物能夠用于重建、修復(fù)和替換、密封泄漏和接合結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，ECM包括多個(gè)去細(xì)胞化的胸膜組織層。胸膜包封肺并由位于結(jié)締組織上的一層間皮細(xì)胞組成，結(jié)締組織下方是具有彈性纖維的膠原組織的基質(zhì)。來(lái)源于胸膜的去細(xì)胞化的ECM在其功能性質(zhì)上不同于其他ECM，并因其較少的細(xì)胞、脂肪和血管而比衍生自表皮和粘膜下的材料更具優(yōu)勢(shì)。來(lái)源于胸膜的去細(xì)胞化的ECM也不包含見(jiàn)于粘膜下組織和皮組織中的任何腺體元素。由于胸膜衍生自胸腔，因此其具有較低的生物負(fù)載，并且由此可經(jīng)受不那么苛刻的處理方法。(生物負(fù)載是指細(xì)菌含量，并且因?yàn)樾厍恢苯咏佑|的細(xì)菌量比真皮(衍生自皮膚)和SIS(其衍生自腸)更少)。胸膜為牢固的基質(zhì)，因此不需要額外的交聯(lián)。膜中的高含量彈性蛋白是有利的，因?yàn)槠溥m應(yīng)呼吸作用期間肺的舒張和收縮。胸膜ECM可來(lái)源于哺乳動(dòng)物，并且還可獲得自：豬、牛、綿羊、犬、鼠、猴、山羊、馬、鳥(niǎo)和人類。在一個(gè)實(shí)施方案中，ECM的胸膜組織來(lái)源于哺乳動(dòng)物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，胸膜衍生自豬。本發(fā)明還提供了用于準(zhǔn)備移植的方法，該方法使用溫和的處理方法以保留原本的ECM結(jié)構(gòu)和組合物。該方法包括從期望源獲得胸膜并用一系列低滲和高滲鹽溶液處理膜以破壞細(xì)胞和細(xì)胞膜。然后用獨(dú)特的洗滌劑組合(并且如果需要，用堿性溶液)處理膜以進(jìn)一步破壞細(xì)胞并溶解DNA和其他核酸。可沖洗胸膜以除去任何殘留的洗滌劑和堿性溶液。然后可將經(jīng)沖洗的胸膜儲(chǔ)存于水溶液中以用作凍結(jié)、冷凍干燥材料，或通過(guò)電子束或γ射線殺菌進(jìn)行最終消毒。可對(duì)胸膜衍生的ECM進(jìn)行成形和再構(gòu)造以用作片材、打孔的片材、層合的片材、條狀物、片狀物、線圈、圓柱體、織物、真空壓制材料、海綿、微粉化粉末、膏狀物、可注射的凝膠、噴霧劑、乳液或涂層?？赏ㄟ^(guò)將ECM的層堆疊在彼此的頂部以制備機(jī)械性質(zhì)復(fù)合基質(zhì)。還可沉積胸膜ECM，其中第二微粉化ECM位于頂部。還可實(shí)現(xiàn)具有其他合成的可生物吸收的聚合物的復(fù)合基質(zhì)?？蓪⑸鲜霾牧系母鞣N構(gòu)造應(yīng)用于多種組織包括神經(jīng)組織、皮組織、心血管組織、心包組織、肌組織、膀胱組織、眼組織、牙周組織、骨、肌腱、韌帶的修復(fù)、重建、密封泄漏和組織接合，盆底修復(fù)，尿失禁的治療以及腹壁修復(fù)。在將胸膜ECM植入修復(fù)部位內(nèi)時(shí)，胸膜ECM可被改造并整合進(jìn)修復(fù)組織內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，衍生自胸膜的ECM具有至少8N乘以層的數(shù)量的破裂強(qiáng)度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的ECM具有至少2N乘以層的數(shù)量的拉伸強(qiáng)度。在又一個(gè)實(shí)施方案中，衍生自胸膜的ECM的厚度為不超過(guò)0.105mm乘以層的數(shù)量。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的ECM包括四個(gè)去細(xì)胞化的胸膜組織層，并且具有由包括標(biāo)準(zhǔn)偏差的平均不超過(guò)約363MPa或不超過(guò)約524MPa的彎曲模量來(lái)表征的彈性，其中彎曲模量通過(guò)三點(diǎn)彎曲測(cè)試進(jìn)行測(cè)量。在一個(gè)實(shí)施方案中，衍生自胸膜的ECM還包括沉積在ECM的至少一個(gè)表面上的微粉化ECM，該微粉化ECM包括由去細(xì)胞化的胸膜組織制成的微粒。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的ECM還包括生物可吸收的聚合物的至少一個(gè)層，其中所述生物可吸收的聚合物為膠原、明膠、脫乙酰殼多糖、氧化纖維素、氧化再生纖維素、包含丙交酯的共聚物、包含乙交酯的共聚物、或它們的組合。本發(fā)明還提供了制備生物衍生的ECM的方法。該方法包括以下步驟：提供胸膜組織；使胸膜組織去細(xì)胞化；凍干胸膜組織；以及從凍干的胸膜組織形成基質(zhì)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該方法還包括再水合胸膜組織形成去細(xì)胞化的ECM的步驟。制備生物衍生的ECM的另一種方法包括以下步驟：提供胸膜組織；使胸膜組織去細(xì)胞化；干燥胸膜組織以形成干燥的去細(xì)胞化的胸膜組織；形成干燥的去細(xì)胞化的胸膜組織的多個(gè)胸膜組織層；將多個(gè)胸膜組織層堆疊在彼此的頂部上以形成疊堆；在真空下壓縮疊堆；以及凍干壓縮的疊堆。在另一個(gè)實(shí)施方案中，將多個(gè)胸膜組織層堆疊在彼此的頂部上形成疊堆的步驟按胸膜組織層的漿膜側(cè)面面向上，并且胸膜組織層的基底側(cè)面面向下來(lái)執(zhí)行。本發(fā)明還提供了生物衍生的ECM，該生物衍生的ECM包括根據(jù)本公開(kāi)的制備生物衍生的ECM的任何方法制備的去細(xì)胞化的胸膜組織。以下實(shí)施例旨在說(shuō)明本發(fā)明的原理和實(shí)施，而非限制本發(fā)明。在本公開(kāi)內(nèi)容的幫助下，本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)的許多其他實(shí)施方案對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將顯而易見(jiàn)。實(shí)施例1：組織獲得和去細(xì)胞化豬胸膜(來(lái)自5頭豬的大約10個(gè)胸膜組織)獲得自各種動(dòng)物源，包括特定的無(wú)病原體的農(nóng)場(chǎng)。獲得的胸膜來(lái)自豬，對(duì)其進(jìn)行物理清潔以除去粘附的脂肪組織，用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)沖洗然后在冰上并通過(guò)船舶隔夜遞送。組織的物理清潔方法為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。用于樣品制備的一種方法為用鈍的刮刀除去粘附的組織。收到胸膜后，用包含0.1％乙二胺四乙酸(EDTA)的PBS沖洗樣品三次，然后在-20攝氏度下冷凍儲(chǔ)存直到被處理。胸膜組織獲自商業(yè)組織源(Lafayette,IN的組織源)以及獲自FarmtoPharmofWarren,NJ。得自組織源的胸膜組織來(lái)自經(jīng)認(rèn)證的無(wú)病原體的豬。經(jīng)測(cè)量，胸膜組織的尺寸為大約12英寸×12英寸，通過(guò)在室溫下解凍將其去細(xì)胞化，并且一旦解凍，就將4-5個(gè)胸膜置于裝有DPBS(-Ca,-Mg)和0.1％EDTA的1升Nalgene燒瓶中。用DPBS和0.1％EDTA將胸膜洗滌三次，每次洗滌30分鐘，每次洗滌更換一次DPBS和0.1％EDTA。然后將胸膜轉(zhuǎn)移至裝有10mMTris-HCl、pH8.0的新燒瓶中，并將其置于旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)器上，于4攝氏度下溫和搖動(dòng)16小時(shí)以除去細(xì)胞化的組分。隨后用溶于10mMTris-HCl的1％TritonX-100(pH8.0)于37攝氏度下處理胸膜24小時(shí)。然后將胸膜樣品轉(zhuǎn)移至裝有1:1v/v20mMTrisHCl(pH8.0)以及具有Ca++和Mg++的DPBS和不含脫氧核糖核酸酶的核糖核酸酶的新燒瓶中保存24小時(shí)。然后將樣品洗滌2次，每次用PBS洗滌，每次洗滌30分鐘。然后用1.0M氯化鈉(NaCl)于室溫下處理胸膜樣品1小時(shí)，隨后用PBS額外洗滌三次。該洗滌方案旨在洗滌出死細(xì)胞、細(xì)胞碎片以及先前處理步驟中所用的殘留化學(xué)品。在處理的最后，通過(guò)以下處理對(duì)樣品進(jìn)行消毒：用溶于20％乙醇的0.15％過(guò)氧乙酸(PAA)處理20分鐘，隨后用PBS洗滌3次，每次洗滌30分鐘。用DAPI對(duì)未固定的胸膜樣品進(jìn)行染色，以顯現(xiàn)細(xì)胞核。圖1a示出了低滲洗滌之前的胸膜組織，圖1b示出了低滲洗滌之后的胸膜組織，并且圖1c示出了用脫氧核糖核酸酶處理后的胸膜組織。實(shí)施例2：胸膜和腹膜豬胸膜和腹膜組織獲自相同的動(dòng)物源。對(duì)獲得的胸膜和腹膜進(jìn)行物理清潔以除去粘附的脂肪組織。各個(gè)樣品中的一個(gè)用包含0.1％乙二胺四乙酸(EDTA)的PBS沖洗三次，然后在-20攝氏度下冷凍儲(chǔ)存直到被處理。將樣品解凍，并將大約1cm×1cm的片進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)固定。圖2和圖3示出了胸膜和腹膜組織之間的厚度、膠原以及彈性蛋白的量和分布的差異。圖2a、2b和2c示出了胸膜組織，并且圖3a、3b和3c示出了腹膜組織。圖2a為用蘇木精-伊紅染色的胸膜的橫截面，并且示出了胸膜的厚度。圖2b和2c為用三色法染色的胸膜的橫截面，并且示出了膠原和彈性蛋白的分布。膠原以藍(lán)色示出，并且彈性蛋白以棕色示出。圖3a為用蘇木精-伊紅染色的腹膜的橫截面，并且示出了腹膜的厚度。圖3b和3c為用三色染色法染色的腹膜，并且示出了膠原和彈性蛋白的分布。膠原以藍(lán)色示出，并且彈性蛋白以棕色示出。用膠原酶或木瓜蛋白酶酶解相等重量(25mg)的經(jīng)凍干處理的胸膜和腹膜組織。使用25mg膠原酶NB6，并在37攝氏度下連續(xù)攪拌。使用100u(5ml)的木瓜蛋白酶。所有溶液均為5mL(溶于無(wú)菌PBS中)。組織的本體可溶于木瓜蛋白酶和膠原酶中。對(duì)于胸膜，膠原酶不能溶解的材料為6.4mg，并且木瓜蛋白酶不能溶解的材料為9.1mg。對(duì)于腹膜，膠原酶不能溶解的材料為8.4mg，并且木瓜蛋白酶不能溶解的材料為13.7mg。實(shí)施例3：去細(xì)胞化的胸膜的層合就胸膜本身的結(jié)構(gòu)而言，其具有片面性，兩個(gè)表面不相同，漿膜為平滑的側(cè)面并且基底膜(BM)為粗糙的側(cè)面。本發(fā)明的漿膜和基底膜類型構(gòu)造的多層胸膜生物基質(zhì)通過(guò)如下方式由實(shí)施例1中所述的胸膜組織構(gòu)造：將胸膜的第一層以漿膜表面面向下并且基底膜側(cè)面面向上的方式置于無(wú)菌的特氟龍片材上，以第二胸膜層的基底膜側(cè)置于第一層的BM側(cè)的上方的方式放置第二胸膜層。第三層被布置為使得漿膜側(cè)在第二層的漿膜側(cè)的上方。第四層被布置為使得漿膜層在第三層的BM側(cè)上方，從而形成四層構(gòu)造，其中一側(cè)為漿膜，并且相對(duì)側(cè)為基底膜，由此形成雙峰表面構(gòu)造，即該構(gòu)造的一側(cè)為BM外露的，并且另一側(cè)為漿膜側(cè)外露的。將第二無(wú)菌的特氟龍片材置于該構(gòu)造上方。然后將整個(gè)構(gòu)造置于兩個(gè)無(wú)菌的紙巾之間并置于兩個(gè)不銹鋼板之間。然后在真空(22英寸汞)并同時(shí)在室溫下施用壓力(20000lb)6小時(shí)來(lái)層合該構(gòu)造。本發(fā)明的基底膜-基底膜類型構(gòu)造的多層胸膜生物基質(zhì)以如上類似的方式構(gòu)造，但本發(fā)明的四層構(gòu)造的頂部和底部側(cè)為相同的：要么均為漿膜，要么均為基底膜。(在另一方面，還設(shè)想可形成大于四層的多層組織構(gòu)造。)在另一個(gè)實(shí)施方案中，將合成的網(wǎng)格定位于兩個(gè)或多個(gè)胸膜層的中間以層合胸膜基質(zhì)。為裝配植入物，將兩層胸膜置于彼此上，同時(shí)確保在這兩層之間不會(huì)產(chǎn)生氣泡。將針織式合成網(wǎng)格(聚丙烯)置于的兩個(gè)胸膜層頂部中央，并用兩個(gè)額外的胸膜覆蓋該合成網(wǎng)格。然后通過(guò)將該構(gòu)造置于如上所述的壓力和真空下進(jìn)行層合以形成復(fù)合層合物。(在另選的實(shí)施方案中，預(yù)期胸膜層還可縫合在一起以實(shí)現(xiàn)層合結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的層合物還可通過(guò)將微粉化或微?；男啬さ暮疂{液澆筑和/或交聯(lián)在胸膜上，之后將另一個(gè)膜置于其上來(lái)實(shí)現(xiàn)。這樣形成封裝在胸膜層構(gòu)造之間的胸膜微粉化粉末。隨后將使用作為滲入和橋鍵形成劑的微?；?微粉化材料凍干該構(gòu)造?？赏ㄟ^(guò)首先去細(xì)胞和凍干胸膜組織來(lái)獲得微?；?微粉化胸膜。然后使用任何類型的碾磨或絞碎設(shè)備對(duì)凍干的胸膜進(jìn)行機(jī)械微粉化或微粒化，然后將其懸浮在水性溶液中以形成漿液。)實(shí)施例4：構(gòu)造的凍干和再水合將上述實(shí)施例3中所述的構(gòu)造置于處于真空下的凍干機(jī)中并凍干。通過(guò)以下程序干燥層合的胸膜構(gòu)造：使凍干架的溫度呈斜線形式降至至負(fù)四十(40)攝氏度，并保持60分鐘，其中真空設(shè)置為500mT。然后將架的溫度呈斜線形式升至負(fù)二十五(25)攝氏度，并保持4小時(shí)，其中真空設(shè)置為100mT。然后將架的溫度呈斜線形式升至負(fù)二十(20)攝氏度，并保持9小時(shí)，其中真空設(shè)置為50mT。然后將架的溫度呈斜線形式升至負(fù)十(10)攝氏度，并保持4小時(shí)，其中真空設(shè)置為50mT。然后將架的溫度呈斜線形式升至負(fù)五(5)攝氏度，并保持2小時(shí)，其中真空設(shè)置為50mT。然后將架的溫度呈斜線形式升至零(0)攝氏度，并保持90分鐘，其中真空設(shè)置為50mT。然后將架的溫度呈斜線形式升至十(10)攝氏度，并保持90分鐘，其中真空設(shè)置為50mT。然后將架的溫度呈斜線形式升至二十(20)攝氏度，并保持60分鐘，其中真空設(shè)置為50mT。干燥之后，將層合的胸膜構(gòu)造于冷凍溫度以上儲(chǔ)存，最佳條件為在避光環(huán)境中的四(4)攝氏度條件。使用之前，取出該構(gòu)造并通過(guò)將其浸入二十(20)攝氏度至三十七(37)攝氏度下的生理鹽水溶液中約2分鐘再水合。實(shí)施例5：層合凍干構(gòu)造的掃描電鏡(SEM)對(duì)層合并凍干的胸膜構(gòu)造樣品執(zhí)行SEM以確定基質(zhì)的片面性，從而評(píng)估層合和凍干對(duì)基質(zhì)的影響。利用SEM來(lái)分析樣品。還包括用于對(duì)比的可商購(gòu)獲得的十層小腸黏膜下層(SIS)層合物和豬真皮。SEM圖像于圖5a-5c中示出，其示出了頂部和底部視圖以及橫截面視圖。圖5a示出了本發(fā)明的胸膜漿膜-基底膜類型構(gòu)造的不同的片面性(頂表面和底表面在表面特征上的差異)。圖5b的SIS構(gòu)造顯示出除了淺淡壓痕外無(wú)表面上的差異(無(wú)片面性)，該淺淡壓痕很有可能是壓縮期間導(dǎo)致的。同樣，圖5c的表皮基質(zhì)顯示出兩側(cè)無(wú)差異(無(wú)片面性)。通過(guò)SEM獲得的橫截面圖像示出了四層層合凍干構(gòu)造(圖5a)。出乎意料的是，這些層并不像SIS標(biāo)本(圖5b)那樣有差異，這表明4個(gè)層已融合在一起。還注意到在胸膜構(gòu)造中的層之間的互連性。SIS示出了10個(gè)不同的層，并且在層之間無(wú)融合(圖5b)。有利的是，本發(fā)明的胸膜基質(zhì)示出了孔隙，而SIS和表皮構(gòu)造為具有小孔隙的密致材料(分別為圖5b和圖5c)。實(shí)施例6：層合凍干構(gòu)造的組織結(jié)構(gòu)本發(fā)明的層合并凍干的胸膜構(gòu)造在10％的中性緩沖福爾馬林中固定24小時(shí)，用無(wú)菌的PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)沖洗并運(yùn)輸以進(jìn)行組織結(jié)構(gòu)評(píng)估。用石蠟灌封、處理樣品，然后用本領(lǐng)域已知的蘇木精和伊紅(H&E)、馬松三色、VerhoeffsVanGieson(EVG)和阿利新藍(lán)染色法對(duì)其進(jìn)行染色。參見(jiàn)圖6，H&E和馬松三色染色法確定了去細(xì)胞方案的效力，因?yàn)闆](méi)有在經(jīng)處理的基質(zhì)的任何區(qū)域中觀察到細(xì)胞或細(xì)胞碎片。另外，處理之后的ECM的總體結(jié)構(gòu)看起來(lái)是保留完好的。EVG染色法確定保留了彈性蛋白，該彈性蛋白賦予基質(zhì)獨(dú)特的特性。此外，利用阿利新藍(lán)染色法對(duì)蛋白聚糖染色，由此得知蛋白聚糖保留了下來(lái)，由此證明處理的本質(zhì)是溫和的。出乎意料的是，如SEM圖像所確定，在本發(fā)明的構(gòu)造中存在4個(gè)層的完全融合，其還與構(gòu)造的獨(dú)特的打開(kāi)基質(zhì)結(jié)構(gòu)相結(jié)合。實(shí)施例7：將本發(fā)明的層合構(gòu)造構(gòu)造成可植入的形式還可對(duì)層合并凍干的胸膜構(gòu)造進(jìn)行處理以用于具體的應(yīng)用?？墒剐啬せ|(zhì)為多孔的以允許用于流體運(yùn)輸?？椎某叽?、形狀、構(gòu)造和密度可變化并可使用機(jī)械方法或受控的激光微加工形成。還可在非凍干的層合物和后來(lái)凍干的層合物中形成孔。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，通過(guò)Brennen組織網(wǎng)格器(美國(guó)明尼蘇達(dá)州圣保羅的Brennen醫(yī)療公司(BrennenMedical,St.Paul,MN))對(duì)層合的胸膜構(gòu)造進(jìn)行處理以獲得網(wǎng)格狀的生物基質(zhì)。參見(jiàn)圖7，用Brennen組織網(wǎng)格器對(duì)四層層合并凍干的胸膜構(gòu)造進(jìn)行處理，得到網(wǎng)格狀的胸膜基質(zhì)。還可將層合的胸膜構(gòu)造紋理化以根據(jù)應(yīng)用增強(qiáng)一個(gè)或兩個(gè)表面的附著特性。參見(jiàn)圖8，對(duì)四層層合并凍干的胸膜構(gòu)造進(jìn)行處理從而得到所示出的紋理化胸膜基質(zhì)，方法是利用鈍鋸齒和壓縮將其設(shè)置在兩個(gè)不銹鋼表面之間。還可將去細(xì)胞化的胸膜(未層合)處理成管狀構(gòu)造。在一個(gè)實(shí)施方案中，將去細(xì)胞化的胸膜片材沿其自身纏繞數(shù)次，以形成管狀形狀。使用2mm直徑的不銹鋼芯軸并用具有突出部分的無(wú)菌醫(yī)用級(jí)特氟龍帶將其覆蓋。特氟龍帶提供了非粘附性的表面，以有利于形成后容易取出該構(gòu)造。將去細(xì)胞化的胸膜圍繞芯軸緊緊纏繞數(shù)次。這可基于所需的厚度和強(qiáng)度定制。為制得用于血管或神經(jīng)應(yīng)用的構(gòu)造，使?jié){膜側(cè)面向芯軸以便為構(gòu)造提供低粘附性的內(nèi)表面(圖9a)。然后在真空下用實(shí)施例4中所描述的方法將管狀構(gòu)造凍干。凍干后，通過(guò)牽拉特氟龍的突出部分以釋放該構(gòu)造，從而移除該構(gòu)造。參見(jiàn)圖9b，SEM圖像示出了良好形成的管狀構(gòu)造，該管狀構(gòu)造具有平滑的內(nèi)表面和粗糙的外表面。本發(fā)明的管狀胸膜構(gòu)造可在受損或病變的血管或自體移植的血管需要外部支座的情況下用作外支架。在這種情況下，根據(jù)如上所述制造管狀構(gòu)造，該管狀構(gòu)造無(wú)重疊，使得其能用作血管或神經(jīng)包裹物，如圖9c所示。實(shí)施例8：在胸膜基質(zhì)上接種細(xì)胞本發(fā)明的胸膜生物基質(zhì)支持細(xì)胞附著以及增殖的能力通過(guò)細(xì)胞接種實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估。為制備用于細(xì)胞接種實(shí)驗(yàn)的胸膜生物基質(zhì)，用包含抗生素、抗真菌藥的PBS將未經(jīng)處理和去細(xì)胞后的胸膜的10mm活檢穿孔器均沖洗20分鐘，更換3次沖洗液體使得它們保持清潔以進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。將每個(gè)穿孔器置于24孔的低密度培養(yǎng)皿中。將豬的真皮成纖維細(xì)胞(第二代)接種在胸膜生物基質(zhì)的基底膜側(cè)上，每10mm穿孔器具有60,000個(gè)細(xì)胞。將細(xì)胞接種在60微升完整的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，以促進(jìn)細(xì)胞附著。允許在用1mL完整的生長(zhǎng)培養(yǎng)基填充培養(yǎng)孔之前使細(xì)胞附著30分鐘(37攝氏度，5％CO2)。每2至3天更換培養(yǎng)基，并且在培養(yǎng)基中1周后，移除支架并進(jìn)行活/死細(xì)胞染色(分子探針)以顯現(xiàn)細(xì)胞。參見(jiàn)圖10，示出了接種在胸膜基質(zhì)上的成纖維細(xì)胞的顯微圖，其中已對(duì)該成纖維細(xì)胞進(jìn)行活/死細(xì)胞染色(分子探針)，其中活細(xì)胞被染色為熒光綠。數(shù)據(jù)表明接種在本發(fā)明的胸膜基質(zhì)上的成纖維細(xì)胞為活的，使得該基質(zhì)適用于植入。實(shí)施例9：胸膜組織生物基質(zhì)的機(jī)械性能根據(jù)本發(fā)明(實(shí)施例4)使用來(lái)源于不含病原體的農(nóng)場(chǎng)的胸膜制得的胸膜基質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行拉伸測(cè)試和彎曲測(cè)試以研究其厚度和機(jī)械強(qiáng)度。使用Instron5544(TJ-41),100-lb載荷細(xì)胞(LC-147)對(duì)四層層合基質(zhì)進(jìn)行機(jī)械測(cè)試。由實(shí)施例3所述的本發(fā)明的漿膜和基底膜類型構(gòu)造的多層胸膜生物基質(zhì)制得的基質(zhì)矩形，尺寸為6×1cm，對(duì)其進(jìn)行測(cè)試以測(cè)量濕潤(rùn)和干燥的拉伸強(qiáng)度(GL＝2cm，夾頭速度＝8cm/min)。使用至少六(6)個(gè)樣品。通過(guò)3點(diǎn)彎曲測(cè)試測(cè)定彎曲模量。樣品評(píng)估為干燥的。還執(zhí)行了縫合線拉離測(cè)試。結(jié)果展示胸膜基質(zhì)具有良好的機(jī)械性能，該機(jī)械性能可基于具體的應(yīng)用進(jìn)行定制。對(duì)得自相同源的腹膜進(jìn)行相似的處理并評(píng)估其拉伸強(qiáng)度。還評(píng)估可商購(gòu)獲得的豬SIS十層基質(zhì)以用于比較。需注意的是胸膜基質(zhì)比SIS基質(zhì)更具彈性和柔韌性表1：胸膜基質(zhì)的厚度和機(jī)械強(qiáng)度材料評(píng)估。胸膜層合物由先前描述的兩種不同源制得。為了比較，腹膜層合物由相同源制得。還得出了針對(duì)十層SIS基質(zhì)和豬表皮基質(zhì)的比較結(jié)果。使用federal高度尺在多個(gè)部位處測(cè)量厚度。表2：基質(zhì)的厚度?；|(zhì)(豬)厚度(mm)胸膜四層層合物源1(干燥)0.18±0.01胸膜八層層合物源1(干燥)0.56±0.03胸膜四層層合源物2(干燥)0.42±0.07腹膜四層層合物源2(干燥)0.57±0.08SIS十層層合物(干燥)0.15±0.01表皮基質(zhì)(濕潤(rùn))1.08±0.13從表2可以看出，本發(fā)明的基質(zhì)已獲得了易于處理和易于施用的厚度，該厚度不超過(guò)0.105mm(或更小)乘以層的數(shù)量。拉伸強(qiáng)度和模量。拉伸強(qiáng)度評(píng)估伸長(zhǎng)并最終使材料斷裂所需的力?；|(zhì)的矩形尺寸為6×1cm，在濕潤(rùn)和干燥的條件下測(cè)量該基質(zhì)的拉伸強(qiáng)度。在評(píng)估之前于鹽水中水合濕潤(rùn)的樣品。拉伸強(qiáng)度為材料在拉伸載荷下斷裂成兩截的力。拉伸模量表示在拉伸載荷下材料對(duì)變形的抵抗的強(qiáng)度。表3：拉伸強(qiáng)度和模量。*源1為得自FarmtoPharm的組織。源2為不含病原體的豬的組織源。SIS為十層產(chǎn)品。表皮基質(zhì)為豬的真皮。3點(diǎn)彎曲測(cè)試。彎曲測(cè)試測(cè)量材料的硬度或剛度。彎曲測(cè)試測(cè)量在3點(diǎn)載荷條件下彎曲材料所需的力。彎曲模量用作當(dāng)曲折時(shí)材料剛度的指示。彎曲載荷是指導(dǎo)致材料彎曲變形的載荷。峰值彎曲載荷是材料在彎曲載荷下能夠承受的最大載荷。彎曲模量是表示材料在彎曲下抵抗變形的材料常數(shù)。值越小表明柔韌性越好。表4：3點(diǎn)彎曲測(cè)試。從表4可以看出，本發(fā)明的基質(zhì)的彎曲模量不超過(guò)平均約363MPa或不超過(guò)約524MPa，其包括標(biāo)準(zhǔn)偏差，而對(duì)照材料具有更高的彎曲模量?？p合線拉離測(cè)試。評(píng)估需要縫合線連接的材料的縫合線保持力。用于測(cè)量在對(duì)該材料施用縫合線后的材料拉離縫合線的材料的抵抗的測(cè)試。表5：縫合線拉離測(cè)試。破裂壓力。通過(guò)馬倫破裂測(cè)試評(píng)估破裂壓力，并評(píng)估破裂該樣品所需的力。表6：破裂強(qiáng)度測(cè)試(確定材料的相對(duì)破裂強(qiáng)度。)生物基質(zhì)的半透明度(臨床相關(guān))。生物基質(zhì)的半透明度由印刷為紅色的Arial28字體的英文字母的可視化能力來(lái)評(píng)估。切下1×1cm的生物基質(zhì)并將其置于干燥和濕潤(rùn)條件下(隨后在鹽水中再水合20分鐘)。捕集圖片以展示如圖4所示出的材料的半透明度。對(duì)照物為未用任何ECM材料覆蓋的印刷字母。再水合速度(臨床相關(guān))。切下1×1cm的生物材料，并將其置于鹽水內(nèi)，并且通過(guò)觸摸的剛度評(píng)估再水合的時(shí)間。在3分鐘內(nèi)再水合四層胸膜層合物和四層腹膜層合物。在20分鐘后再水合十層SIS。胸膜四層層合物源2腹膜四層層合物源2SIS十層層合物再水合時(shí)間～3min～3min～15-20min本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，在不脫離本發(fā)明的廣義發(fā)明構(gòu)思的情況下，可對(duì)上文所示和所述的示例性實(shí)施方案作出修改。因此，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于所示和所述的示例性實(shí)施方案，而是旨在涵蓋如權(quán)利要求書(shū)所限定的本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)的修改。例如，示例性實(shí)施方案的具體特征可以是或可以不是受權(quán)利要求書(shū)保護(hù)的發(fā)明的一部分，并且可將所公開(kāi)的實(shí)施例的特征加以組合。除非在本文具體示出，否則術(shù)語(yǔ)“一個(gè)/種”和“該/所述”不限于一個(gè)元件，而相反應(yīng)被解讀為意指“至少一個(gè)/種”。應(yīng)當(dāng)理解，為清楚理解本發(fā)明，本發(fā)明的說(shuō)明中的至少一些已經(jīng)簡(jiǎn)化以專注于相關(guān)的元件，同時(shí)為清楚起見(jiàn)，省去本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到也可構(gòu)成本發(fā)明一部分的其他元件。然而，由于此類元件是本領(lǐng)域熟知的，并且由于它們不必然地有利于更好地理解本發(fā)明，所以本文不提供對(duì)此類元件的說(shuō)明。另外，在方法不依賴于本文所示的步驟的特定順序的程度上，步驟的特定順序不應(yīng)視為對(duì)權(quán)利要求書(shū)的限制。涉及本發(fā)明方法的權(quán)利要求不應(yīng)限于以書(shū)寫的順序執(zhí)行其步驟，并且本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易地認(rèn)識(shí)到這些步驟可以變化并仍在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3