海燕提取物的提取方法及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及海燕提取物在抗腫瘤藥物及保健食品中的應(yīng)用。所得提取物為海燕干燥全體，經(jīng)75%乙醇提取及大孔吸附樹脂洗脫純化后所得。本發(fā)明所得提取物具有較強(qiáng)體外抗腫瘤活性，可用于制備腫瘤藥物及有抗腫瘤活性的保健食品，如抗結(jié)腸癌藥物等。
【專利說明】海燕提取物的提取方法及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】:
本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及海燕抗腫瘤活性成分的提取純化方法及其在抗腫瘤藥物制備中的應(yīng)用。
[0002]【背景技術(shù)】:
海星為沿海的養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，海星的食量驚人，一個海星I天能吃掉十幾只扇貝，給貝類養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了減少海星帶來的經(jīng)濟(jì)損失和危害，迫切需要對海星帶來的災(zāi)害進(jìn)行治理，尤其是對前面提到的海星中對青島海域造成嚴(yán)重危害的兩個常見種，羅氏海盤車和海燕。近年來，海星的藥用價(jià)值逐步被重視，而根據(jù)中國海洋藥物詞典記載，這兩個種類當(dāng)中的海燕本身具有很高的藥用價(jià)值。海燕的干燥全體可以入藥，有補(bǔ)腎壯陽、祛風(fēng)濕、止痛的功效，主治陽痿、風(fēng)濕腰痛、胃痛等癥狀。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中沒有對海燕提取物的制備方法和其抗腫瘤活性的相關(guān)報(bào)道。
[0004]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的是提供一種海燕提取物的提取及精制方法，所述的海燕提取物含有抗腫瘤活性成分，能夠很好地應(yīng)用于制備抗腫瘤藥物。
[0005]本發(fā)明所述海燕提取物是通過如下技術(shù)方案獲得的:
(1)海燕干燥全體，用75%乙醇進(jìn)行提取；
(2)提取液經(jīng)濃縮后經(jīng)大孔吸附樹脂進(jìn)行分離，先用純水及10%乙醇進(jìn)行洗脫，然后用20%-60%乙醇進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；
其中，步驟(I)的提取次數(shù)為2-3次，提取時(shí)間為1-3小時(shí)。
[0006]其中，步驟(2)所述的大孔樹脂選自D101。
步驟(2)中40%至60%乙醇大孔吸附樹脂分離所得餾分，經(jīng)體外細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)測試表明，具有很好的抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HCTl 16增殖的作用。
[0007]本發(fā)明的海燕提取物可單獨(dú)或與其他藥學(xué)上可接受的成分構(gòu)成組合物以制備抗腫瘤藥物及食品和保健品。
[0008]所述的抗腫瘤藥物劑型為膠囊劑、片劑、口服制劑、微囊制劑、注射劑、栓劑、噴霧劑或軟膏劑。
[0009]【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1為海燕提取物抑制人結(jié)腸癌HCTl 16細(xì)胞增殖活性結(jié)果。
[0010]HX-4:海燕75%乙醇提取物大孔吸附樹脂40%乙醇洗脫餾分；HX-6:海燕75%乙醇提取物大孔吸附樹脂60%乙醇洗脫餾分。
[0011]【具體實(shí)施方式】:下面結(jié)合實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步的描述，但具體實(shí)例并不對本發(fā)明做任何限定
實(shí)例1:海燕提取物的制備
(I)海燕(Asterina pectinifera)干燥全體5公斤,用3倍量75%乙醇進(jìn)行提取3次，每次3小時(shí)。合并提取液。
[0012](2)提取液經(jīng)濃縮后干燥后，所得浸膏用水溶解，經(jīng)DlOl型大孔吸附樹脂進(jìn)行分離，先用純水及10%乙醇進(jìn)行洗脫，再用20%至60%乙醇進(jìn)行洗脫，收集40%至60%乙醇洗脫液。
[0013]實(shí)例2:海燕提取物抑制人結(jié)腸癌HCTl 16細(xì)胞增長活性測試
(I)細(xì)胞培養(yǎng)
人結(jié)腸癌細(xì)胞HCTl 16從Human Sciences Research Resource Bank (日本人類科學(xué)基金會，東京，日本)獲得，培養(yǎng)于含有10%熱滅活小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，37°C，5% CO2，飽和濕度條件下培養(yǎng)。選取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
[0014](2)體外細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)
噻唑藍(lán)比色法(MTT)檢測細(xì)胞生長情況，PC3細(xì)胞分別種于96孔培養(yǎng)板，每個孔細(xì)胞數(shù)為5 X 13,培養(yǎng)于含有10%熱滅活小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，在37°C，5% 0)2條件下培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)24 h后，以PBS沖洗細(xì)胞，然后分別加入新的培養(yǎng)液和系列濃度的待測樣品。實(shí)驗(yàn)組設(shè)6個藥物濃度組，每組藥物的終濃度分別為5、10、20、50、100、200 Pg/ml，對照組加入同樣濃度的二甲基亞砜(DMS0)，培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h每孔加入20 μ? MTT溶液(5mg/ml)，離心棄上清，加入200 μ? DMSO充分溶解結(jié)晶物，酶標(biāo)儀測570 nm處吸光度值。因?yàn)槲舛戎蹬c培養(yǎng)液中活細(xì)胞數(shù)成正比，所以通過吸光度值可以計(jì)算細(xì)胞存活百分率。所得結(jié)果如圖1所示，經(jīng)梯度洗脫餾分腫瘤生長抑制活性結(jié)果表明，海星75%乙醇提取物經(jīng)大孔吸附樹脂分離，40%到60%洗脫餾分具有很強(qiáng)的體外抑制人結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞增殖活性。
【權(quán)利要求】
1.一種海燕提取物，其特征在于，制備步驟如下: (1)海燕干燥全體，用75%乙醇進(jìn)行提取； (2)提取液經(jīng)濃縮后經(jīng)大孔吸附樹脂進(jìn)行分離，用20%、40%、60%乙醇進(jìn)行洗脫，得到洗脫液； (3)收集40%至60%乙醇大孔吸附樹脂分離所得餾分，濃縮干燥后得到海燕目標(biāo)活性提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述海燕提取物，其特征在于所述步驟(I)中，有機(jī)溶劑為75%乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述海燕提取物，其特征在于所述步驟(2)中，梯度洗脫濃度為40%至60%濃度百分比的乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述海燕提取物，其特征在于收集40%至60%乙醇洗脫液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述海燕提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述，其特征在于所述抗腫瘤藥物為抗結(jié)腸癌藥物。
【文檔編號】A61K35/616GK104434983SQ201410752544
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月10日
【發(fā)明者】陳剛, 裴月湖, 王海峰, 何鳳軍, 白皎 申請人:沈陽藥科大學(xué)