一種免疫增強(qiáng)劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種免疫增強(qiáng)劑及其制備方法，該免疫增強(qiáng)劑由活性成分和藥學(xué)上可用的輔料制備而成，其中的活性成分是黃瓜葉的水部位提取物，制備方法為：將黃瓜葉原料用乙醇溶液回流提取，過濾，濾液減壓濃縮至干，得粗提取物，用水溶解，加石油醚萃取，棄掉石油醚萃取液，所得水萃余液濃縮后得黃瓜葉的水部位提取物。本發(fā)明的免疫增強(qiáng)劑的原料來源穩(wěn)定，價(jià)廉高效，制備方法簡單。
【專利說明】一種免疫増強(qiáng)劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種免疫增強(qiáng)劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 免疫是機(jī)體的一種生理功能，機(jī)體依靠這種功能識別"自己"和"非已"成分，從而 破壞和排斥進(jìn)入機(jī)體的抗原物質(zhì)，或機(jī)體本身所產(chǎn)生的損傷細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞等，以維持機(jī) 體的健康，抵抗或防止微生物或寄生物的感染或其它所不希望的生物侵入的狀態(tài)。
[0003] 免疫系統(tǒng)是機(jī)體執(zhí)行免疫應(yīng)答及免疫功能的重要系統(tǒng)。由免疫器官、免疫組織、免 疫細(xì)胞和免疫分子組成，是防衛(wèi)病原體入侵最有效的武器，它能發(fā)現(xiàn)并清除異物、外來病原 微生物等引起內(nèi)環(huán)境波動的因素。胸腺和脾是機(jī)體主要的中樞和外周免疫器官，胸腺是T 淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的主要場所，脾是B淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的主要場所。胸腺和脾指數(shù)可直 接反映免疫器官的發(fā)育狀態(tài)和機(jī)體的免疫水平。
[0004] 免疫增強(qiáng)劑是通過不同方式，達(dá)到增強(qiáng)機(jī)體免疫力的一類免疫治療藥物。對于免 疫力低下的人群或畜禽，服用免疫增強(qiáng)劑可以提高其免疫力，從而預(yù)防疾病的發(fā)生。因此， 尋求一種增強(qiáng)機(jī)體抵抗病原體感染能力免疫增強(qiáng)劑，這顯得尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于通過對天然產(chǎn)物進(jìn)行研宄，從而提供一種提高機(jī)體免疫功能的 免疫增強(qiáng)劑及其制備方法。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)研宄并不懈探索，最終獲得 了如下技術(shù)方案：
[0007] -種免疫增強(qiáng)劑，由活性成分和藥學(xué)上可用的輔料制備而成，所述的活性成分是 黃瓜葉的水部位提取物。其中，黃瓜葉選用萌蘆科黃瓜Cucumis sativus L.的葉。
[0008] 本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種根據(jù)上述免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其中該方法 包括如下步驟：
[0009] (1)將黃瓜葉原料用體積濃度為58% -65%乙醇溶液回流提取，過濾，濾液減壓濃 縮至干，得粗提取物；
[0010] (2)將步驟（1)所得粗提取物用水溶解，加石油醚萃取1-4次，得到石油醚萃取液 和水萃余液，將水萃余液濃縮成稠膏，干燥，得黃瓜葉的水部位提取物；
[0011] (3)將步驟（2)所得黃瓜葉的水部位提取物與藥學(xué)上可用的輔料混勻制備成口服 液或口服固體制劑。
[0012] 優(yōu)選地，如上所述免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其中步驟（1)中所述的回流提取的次 數(shù)為1-3次，每次I. 5-3h，每次乙醇溶液的加入量為黃瓜葉原料的5-10倍。
[0013] 優(yōu)選地，如上所述免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其中所述的口服固體制劑包括片劑、膠 囊劑或顆粒劑。
[0014] 胸腺和脾是機(jī)體主要的中樞和外周免疫器官，胸腺是T淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的主要 場所，脾是B淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的主要場所。胸腺和脾指數(shù)可直接反映免疫器官的發(fā)育狀 態(tài)和機(jī)體的免疫水平。本發(fā)明人在動物試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，每日給予小鼠高、低劑量的黃瓜葉提取 物，小鼠的胸腺和牌指數(shù)均較空白對照組顯著增高。通過MTT法測脾淋巴細(xì)胞的增殖活性， 發(fā)現(xiàn)兩個(gè)提取物干預(yù)組均高于空白對照組，說明本發(fā)明制備的黃瓜葉提取物能提高小鼠的 免疫功能。因此，本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種工業(yè)新用途，即上述的黃瓜葉的水部位 提取物在制備增強(qiáng)免疫功能或提高免疫力的藥物、保健品和食品中的應(yīng)用。由于本發(fā)明制 備的黃瓜葉提取物既可以用于具有免疫缺陷的患者，也可以用于提高畜禽的免疫力，尤其 是幼齡畜禽，因此在工業(yè)應(yīng)用時(shí)所述的藥物可制備成人用醫(yī)藥或獸藥。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的免疫增強(qiáng)劑原料來源穩(wěn)定，價(jià)廉高效，制備方法簡單， 且天然無毒無殘留，可用于制備成提高機(jī)體免疫力的人用醫(yī)藥或獸藥，以及制備成各種保 健品、營養(yǎng)強(qiáng)化食品等。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 以下是本發(fā)明所涉及黃瓜葉提取物的具體制備例和臨床應(yīng)用例，對本發(fā)明的技術(shù) 方案做進(jìn)一步作描述，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于該實(shí)施例。需要說明的是，各實(shí)施例 中的黃瓜葉選用萌蘆科黃瓜Cucumis sativus L.的葉。
[0017] 實(shí)施例1黃瓜葉提取物的制備
[0018] 稱取黃瓜葉干品0. 61kg，研磨至末，置于帶有圓底燒瓶的提取裝置中，用體積濃度 為60 %的乙醇溶液8L回流提取2h，過濾，得到醇提液，重復(fù)2次，合并醇提液，減壓濃縮至 干，得粗提取物，用〇. 5L蒸餾水溶解，用石油醚等體積萃取3次，棄掉石油醚萃取液，將水萃 余液減壓濃縮成稠膏，冷凍干燥，粉碎成細(xì)粉，過100目篩，得到黃瓜葉提取物。
[0019] 實(shí)施例2黃瓜葉提取物增強(qiáng)小鼠免疫功能的試驗(yàn)研宄
[0020] 試驗(yàn)用36只6?8周齡清潔級雌性昆明小鼠隨機(jī)分為如下三組：空白對照組，提 取物高、低劑量組，每組12只。試驗(yàn)開始時(shí)稱量小鼠體質(zhì)量。將黃瓜葉提取物溶于水中，每 天每只小鼠灌胃0. 5mL左右。提取物各組灌胃給予本發(fā)明實(shí)施例1制備的黃瓜葉提取物進(jìn) 行干預(yù)，給藥量為：提取物高劑量組小鼠 I. 8g/kg體質(zhì)量；提取物低劑量組小鼠0. 6g/kg體 質(zhì)量；空白對照組以等體積生理鹽水灌胃。所用小鼠連續(xù)灌胃相應(yīng)的受試物飼養(yǎng)14d，第15 天頸椎脫白處死，稱小鼠體質(zhì)量。解剖取出胸腺和脾，吸干表面血跡，用電子天平稱取濕質(zhì) 量，計(jì)算胸腺和脾指數(shù)。
[0021] 另外，按如下方法進(jìn)行脾淋巴細(xì)胞增殖活性的測定：無菌取脾，在3mL預(yù)冷含1% 雙抗的PBS緩沖液中用注射器沖脾細(xì)胞，沖至脾發(fā)白。將沖洗液收集于5mL離心管中， 1500r/min離心lOmin。棄上清，每管加2mL紅細(xì)胞裂解液，重懸細(xì)胞。靜置3min，1500r/ min離心lOmin。用I %雙抗-PBS洗2次。用含I %雙抗的1640重懸細(xì)胞。調(diào)整細(xì)胞濃度 至50萬個(gè)/mL。取96孔板四周孔加200 μ L PBS (防止邊緣效應(yīng)），其余各孔加入細(xì)胞懸 液100 μ L，干預(yù)組加待測藥物100 μ L(提取物高、低劑量組的藥物濃度分別為72、14 μ g/ μ L)，空白對照組加培養(yǎng)液100 μ L，每組3個(gè)復(fù)孔。37°C孵育72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，于培養(yǎng) 板各孔內(nèi)加人511^/1]11^11'1'液，10以17 /孔。37<€培養(yǎng)411。150〇1'/111；[11離心10111；[11，棄上清，各 孔內(nèi)加入150 μ LDMSO,溶解lOmin，30min內(nèi)用酶標(biāo)儀測定490nm處的吸光度（OD)值。
[0022] 根據(jù)表1的試驗(yàn)結(jié)果可見，試驗(yàn)前，各組小鼠體質(zhì)量無明顯差異，而試驗(yàn)后提取物 高、低劑量組小鼠體質(zhì)量均較空白對照組顯著增加 （P < 0. 01)，這表明黃瓜葉提取物能促 進(jìn)小鼠的生長，且與使用劑量關(guān)系不大。
[0023] 表1試驗(yàn)前后各組小鼠體質(zhì)量比較
[0024]

【權(quán)利要求】
1. 一種免疫增強(qiáng)劑，由活性成分和藥學(xué)上可用的輔料制備而成，其特征在于，所述的活 性成分是黃瓜葉的水部位提取物。
2. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于，該方法包括如下 步驟： (1) 將黃瓜葉原料用體積濃度為58% -65%乙醇溶液回流提取，過濾，濾液減壓濃縮至 干，得粗提取物； (2) 將步驟（1)所得粗提取物用水溶解，加石油醚萃取1-4次，得到石油醚萃取液和水 萃余液，將水萃余液濃縮成稠膏，干燥，得黃瓜葉的水部位提取物； (3) 將步驟（2)所得黃瓜葉的水部位提取物與藥學(xué)上可用的輔料混勻制備成口服液或 口服固體制劑。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于，步驟（1)中所述的回流 提取的次數(shù)為1-3次，每次1. 5-3h，每次乙醇溶液的加入量為黃瓜葉原料的5-10倍。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫增強(qiáng)劑的制備方法，其特征在于，所述的口服固體制劑 包括片劑、膠囊劑或顆粒劑。
5. 權(quán)利要求2所述的黃瓜葉的水部位提取物在制備增強(qiáng)免疫功能或提高免疫力的藥 物、保健品和食品中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物為人用醫(yī)藥或獸藥。
【文檔編號】A61P37/04GK104435058SQ201410617085
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月6日
【發(fā)明者】陳風(fēng)彩, 張靜, 李艷, 崔玉萍, 李美華, 汲宗惠, 何丹 申請人:陳風(fēng)彩