一種雙重肝靶向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體的制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了提供一種利用半乳糖醛酸、甘草次酸、聚乙二醇對β-谷甾醇進行修飾后制備雙重肝靶向絞股藍皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體的方法，與普通絞股藍脂質(zhì)體相比，肝實質(zhì)細胞靶向效率和長循環(huán)效果大大提高。該新型長循環(huán)脂質(zhì)體肝靶向性好，同時能顯著延長絞股藍皂苷在體內(nèi)的滯留時間，使絞股藍皂苷主動靶向于肝腫瘤細胞，提高腫瘤治療的效果。
【專利說明】一種雙重肝靶向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體的制劑及其制備 方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，尤其涉及一種生產(chǎn)雙重肝靶向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì) 體的方法，更具體地說，本發(fā)明涉及雙重肝靶向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體和含有雙重肝靶 向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體的藥物制劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 肝臟由實質(zhì)細胞和非實質(zhì)細胞（內(nèi)皮細胞、枯否細胞）組成，肝癌、肝炎均發(fā)生在 肝實質(zhì)細胞。去唾液酸糖蛋白受體（Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)在哺乳動物的 肝實質(zhì)細胞膜表面大量存在，該受體能專一性地識別以半乳糖為端基的脂質(zhì)體，因而以這 樣的脂質(zhì)體為載體，可將藥物導(dǎo)向肝實質(zhì)細胞。然而，僅靠 ASGPR受體結(jié)合是不夠的。有研 究表明ASGPR的結(jié)合活性可隨許多病理條件的變化而變化，幾乎所有的肝臟疾病，會導(dǎo)致 血清中存在結(jié)合抑制劑，ASGPR的結(jié)合活性會大幅度降低，在病理狀態(tài)下，ASGPR的結(jié)合活 性降低十分顯著。由此可見，僅通過ASGPR介導(dǎo)實現(xiàn)肝細胞靶向給藥的能力是有限的，增強 在病理狀態(tài)下配體與肝細胞的結(jié)合能力，十分必要。Negishi在20世紀90年代初證實了大 鼠肝細胞膜組分中含有大量甘草次酸（glycyrrhetinic acid，GA)特異結(jié)合位點。所以，與 ASGPR與GA受體特異性結(jié)合的半乳糖、甘草次酸均能靶向至肝實質(zhì)細胞。
[0003] 脂質(zhì)體是靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型，它是由脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成的內(nèi)部為水相的 封閉囊泡。脂質(zhì)體作為一種智能給藥載體，具有靶向性，生物相容性，提高藥物穩(wěn)定性以及 降低毒副作用等顯著優(yōu)點，因而得到人們越來越多的關(guān)注。普通脂質(zhì)體雖然能夠改善藥物 的療效，但是進入體內(nèi)后很快被體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，主要靶向在腎、肝、脾、骨髓等網(wǎng)狀 內(nèi)皮系統(tǒng)器官中，藥物在體內(nèi)滯留時間短，且在體內(nèi)易受蛋白、酶等的作用而發(fā)生滲漏，影 響療效，使毒性增大。
[0004] 近年來，長循環(huán)脂質(zhì)體成為國內(nèi)外的研究熱點。長循環(huán)脂質(zhì)體是靶向制劑的一 種，它具有長效、降低毒性及穩(wěn)定包封藥物等優(yōu)點，用長循環(huán)脂質(zhì)體包封后提高了藥物的靶 向性，降低了毒性。長循環(huán)脂質(zhì)體是一種表面修飾了天然或合成親水性聚合物的新型脂質(zhì) 體，這些聚合物形成的立體柔性親水表面，增加了脂質(zhì)體的親水性和空間位阻，防止生物分 子、細胞與脂質(zhì)體相互作用，使脂質(zhì)體不易被血液中的調(diào)理素識別，從而可以降低體內(nèi)網(wǎng)狀 內(nèi)皮系統(tǒng)對脂質(zhì)體的吞噬，增加其在體內(nèi)環(huán)境中的穩(wěn)定性，使其具有更長的體內(nèi)循環(huán)時間， 更高的血藥濃度，因此可以更好的發(fā)揮療效，降低毒性。長循環(huán)脂質(zhì)體中，研究最多的就是 聚乙二醇（PEG)修飾的脂質(zhì)體（Advanced Drug Delivery Reviews，1997, 24, 235-242)，表 面修飾聚乙二醇的脂質(zhì)體在靜脈注射后具有"隱形"的特點，即可逃避血漿中的調(diào)理素的 調(diào)理，從而減少巨噬細胞對藥物的吞噬，阻礙血液蛋白成分及磷脂的結(jié)合，延長藥物在體 內(nèi)的循環(huán)時間（Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology，2006,33， 557-562)。
[0005] 絞股藍又名七葉膽、五葉參，主要有效成分為多糖類、黃酮類、皂苷類及微量元素 類，其功效主要是促進人體脂肪類物質(zhì)代謝、營養(yǎng)人體細胞，同時具有不錯的解毒消炎作 用，廣泛應(yīng)用于高血脂、脂肪肝、肥胖、便秘、失眠、乙肝、慢性呼吸道炎癥（咽喉炎、腸胃炎 等）的治療與保健。皂苷是其中一種有效成分。絞股藍皂苷之所以"神奇"是因為其皂苷 類成分（84種）超過人參所含的數(shù)倍，其對治療和預(yù)防高血壓等心血管疾病、糖尿病、便秘、 痔瘡、哮喘、偏頭痛、痤瘡、色斑等癥狀有顯著功效，并有較為明顯的鎮(zhèn)靜、催眠、消除疲勞、 增進食欲、抗衰老的作用，對腫瘤、肝炎、胃炎、胃及十二指腸潰瘍、胃下垂、口腔炎、冠心病、 動脈硬化、膽結(jié)石、肢體麻木、皮膚粗糙、男性不育、性功能衰退、肥胖及白發(fā)禿頂?shù)染哂休^ 佳療效。絞股藍皂苷還可能成為21世紀人類征服心血管疾病、糖尿病、緊張癥、癌癥和艾滋 病的主要生理活性物質(zhì)。
[0006] 為了使絞股藍皂苷能在體內(nèi)緩慢釋放，長時間抑制炎性細胞或腫瘤的生長，我們 利用靶向和長循環(huán)原理，首先利用半乳糖和甘草次酸實現(xiàn)脂質(zhì)體的靶向肝實質(zhì)細胞的功 能，利用在脂質(zhì)體表面連接的親水性聚合物PEG，使脂質(zhì)體在體內(nèi)長期滯留而不被單核吞噬 細胞系統(tǒng)（MPS)捕獲，延長釋藥時間，改善藥物的緩釋性能。
[0007] 絞股藍皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體首次以半乳糖醛酸、甘草次酸和聚乙二醇修飾的β-谷 甾醇為膜材，制備絞股藍皂苷長循環(huán)脂質(zhì)體，使藥物以最小的損失到達作用部位，可以提高 絞股藍皂苷的藥效，減少用量，是一種新型的劑型，是技術(shù)創(chuàng)新的結(jié)果。現(xiàn)有技術(shù)是采用甘 草次酸這種靶向基團來修飾聚乙二醇，以期利用甘草次酸的肝靶向來達到細胞級的靶向目 的，但是，甘草次酸是一種疏水性化合物，在水中溶解性較差，形成脂質(zhì)體后甘草次酸往往 不會暴露在外，就不容易與肝上的受體細胞結(jié)合達到靶向的目的。而在本專利中，我們在甘 草次酸的外圍還采用親水的半乳糖來對甘草次酸進行修飾，半乳糖暴露在脂質(zhì)體的外圍， 能與其受體ASGPR結(jié)合，除此之外，還改善了甘草次酸的親水性，使得甘草次酸暴露，易于 與受體結(jié)合，提高靶向性。因為它具有雙重靶向性，能準確地達到細胞級的病變部位，這種 給藥方法是其他方法所不能比擬的。本實驗采用逆向蒸發(fā)法，薄膜分散法，乙醇注入法制備 了雙重肝靶向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體，并考察了其包封率，篩選出一種制備雙重肝靶向 長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體的最優(yōu)方法，使其利用效率達到最高。該雙重肝靶向長循環(huán)絞股 藍皂苷脂質(zhì)體能以最少的用量，達到最好的治療效果，靶向及長循環(huán)脂質(zhì)體可能作為未來 一種給藥的新發(fā)展方向。
[0008] 目前尚未見有關(guān)雙重肝靶向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體的相關(guān)報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種利用對β -谷留醇進行聚乙二醇、半乳糖醛酸和甘草 次酸修飾生產(chǎn)長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體的處方和方法，該方法工藝簡單。由于該方法中采 用半乳糖醛酸、甘草次酸和聚乙二醇對谷留醇進行修飾，制劑中不含有膽固醇，不僅如 此，與僅用半乳糖醛酸和甘草次酸修飾的普通長循環(huán)脂質(zhì)體相比，該新型長循環(huán)脂質(zhì)體肝 實質(zhì)細胞的靶向效率更高，還能顯著延長絞股藍皂苷在體內(nèi)的滯留時間，使絞股藍皂苷更 有效地被動靶向于腫瘤細胞，提高抑瘤率，減少絞股藍皂苷的用藥量，提高治療效率。
[0010] 本發(fā)明中提供一種如式I所示的用半乳糖醛酸、甘草次酸、聚乙二醇修飾的β-谷 甾醇的制備方法，所述的方法不僅可以有效進行，而且可以得到產(chǎn)率較高的、易于分離的、 價格便宜的式I化合物。

【權(quán)利要求】
1. 一種半乳糖醛酸、甘草次酸、聚乙二醇修飾β-谷留醇為膜材的雙重肝靶向長循環(huán) 脂質(zhì)體，其特征在于，材料中含有如式I所示的化合物，該化合物的制備方法包括步驟： (1)將β-谷甾醇、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶混合于二氯甲烷中，在30-60°C反應(yīng)得到 如式IV所示的化合物； (2)將式IV化合物、雙端氨基聚乙二醇、4-二甲氨基吡陡、1-乙基-(3-二甲基氨基丙 基）碳二亞胺鹽酸鹽混合于二氯甲烷中，在30-60°C反應(yīng)得到如式III所示的化合物； (3)將式III化合物、甘草次酸、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二 亞胺鹽酸鹽混合于二氯甲烷中，在30-60°C反應(yīng)得到如式II所示的化合物； (4)將式II化合物、半乳糖醛酸、4-二甲氨基吡啶、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳 二亞胺鹽酸鹽混合于二氯甲烷中，在30-60°C反應(yīng)得到如式I所示的化合物； 步驟⑴的反應(yīng)中β-谷甾醇、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶的摩爾比為1 ： 0. 8-10 ： 0. 8-5 ； 步驟⑵中式IV化合物、雙端氨基聚乙二醇、4-二甲氨基吡陡、1-乙基-(3-二甲基氨 基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1:0.8-3 : 0.8-3 : 0.8-3; 步驟⑶的反應(yīng)中式III化合物、甘草次酸、4-二甲氨基吡陡、1-乙基-(3-二甲基氨 基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1:0.8-10 : 0.8-5 : 0.8-5; 步驟⑷中式II化合物、半乳糖醛酸、4-二甲氨基吡陡、1-乙基-(3-二甲基氨基丙 基）碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1:0.8-3 : 0.8-3 : 0.8-3;
其中，η= 30-60。
2. 如權(quán)利要求1所述的雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于它主要是由絞股藍皂 苷、磷脂材料、式I化合物所組成。
3. 如權(quán)利要求1、2所述的雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于，所述磷脂材料為：鞘 磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷 脂酰甘油、甘油磷脂酸、二磷脂酰甘油中的一種或幾種的混合物。
4. 如權(quán)利要求1、2所述的雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體的組成 還包括甘露醇、葡萄糖、吐溫-80、維生素E或聚乙二醇中的一種或幾種。
5. 如權(quán)利要求1、2所述的雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于按重量百分比該脂 質(zhì)體含如下組分：絞股藍皂苷2%?45%，磷脂材料40?85%，式I化合物占制劑重量的 10 ?40%。
6. 權(quán)利要求1-5任一項所述雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于它包括 如下步驟：（1)將絞股藍皂苷溶解于pH為6. 8?8. 0磷酸沖液中，制成質(zhì)量濃度為0. 1? 20mg/mL絞股藍皂苷緩沖液； (2) 當(dāng)固體單位為毫克時，液體單位以毫升計，以此類推。磷脂材料：式I化合物：乙醚： 絞股藍皂苷緩沖液溶液的比例按100?300份：15?200份：2?5份：5?30份選取，備 用； (3) 雙重肝靶向長循環(huán)絞股藍皂苷脂質(zhì)體的制備：將磷脂材料、式I化合物和乙醚混 合，然后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)使其成均勻類脂薄膜覆蓋在梨形瓶內(nèi)底部，向瓶中加入絞股藍皂苷緩沖 液溶液，加入玻璃珠，在30?60°C下旋轉(zhuǎn)振蕩15?60min后，放置0. 5?2h充分水合即 得。
7. 權(quán)利要求1-5任一項所述雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于它包括 如下步驟： (1) 當(dāng)固體單位為毫克時，液體單位以毫升計，以此類推。油相的制備：絞股藍皂苷：磷 脂材料：式I化合物：乙醇的比例按10?30份：40?300份：10?100份：5?50份的比 例選取材料，混合均勻，制備油相； (2) 水相的制備：水相為磷酸鹽緩沖液5?50份，緩沖液的pH為6. 8?8. 0 ; (3) 雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體的制備：在恒溫攪拌狀態(tài)下，將油相用針頭勻速注入到 溫度為35?60°C的水相中，恒溫攪拌1?4h除乙醇，即得。
8. 權(quán)利要求1-5任一項所述雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于它包括 如下步驟： (1) 當(dāng)固體單位為毫克時，液體單位以毫升計，以此類推。磷脂材料：式I化合物：二氯 甲烷的比例按40?300份：10?200份：50?500份制備油相，將油相置于圓底燒瓶中，旋 轉(zhuǎn)蒸去二氯甲烷； (2) 當(dāng)固體單位為毫克時，液體單位以毫升計，以此類推。按10?200份絞股藍皂苷溶 解于10?500份磷酸鹽緩沖液中，制成水相； (3) 將水相加入油相中，冰浴下，探頭超聲5?30min，形成均勻的乳劑； (4) 旋蒸除去有機相，形成膠態(tài)后加入磷酸鹽緩沖液10?150份，繼續(xù)減壓蒸發(fā)0. 5? 2h，探頭超聲3?20min，即得。
9. 如權(quán)利要求1所述的雙重肝靶向長循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于其可以制成凍干針劑、 注射劑、透皮制劑、氣霧劑、口服液、溶液劑、眼用制劑、片劑或膠囊劑。
【文檔編號】A61K47/34GK104436201SQ201410616889
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】喻樊 申請人:鹽城師范學(xué)院