一種藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明一種藥物組合物及其應(yīng)用，屬于中醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。所述藥物組合物由胡桃苷B和淫羊藿素按照重量比1:1組成。本發(fā)明還公開了所述藥物組合物在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明具有配制簡單，療效好，無副作用，安全性高，有利于患者及時(shí)減輕病狀，具有良好的開發(fā)前景及社會和經(jīng)濟(jì)效益的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種藥物組合物及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種藥物組合物及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 原發(fā)性肝癌（primary hepatic carcinoma, PHC)簡稱肝癌（hepatoma)，是指原發(fā) 于肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，被稱為"腫瘤之王"。其死亡率位列全世界第五， 我國第三。根據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，在2030年前，肝癌都將保持持續(xù)增長，其死亡率將高居 第二位。
[0003] 目前，國內(nèi)對晚期肝癌沒有好的治療方法。傳統(tǒng)治療方法有手術(shù)、放療、化療和介 入治療。這些治療手段不僅價(jià)格昂貴，而且治療過程常給患者帶來巨大的痛苦。如國內(nèi)外 公認(rèn)的晚期肝癌靶向藥物索拉菲尼一年的單一藥費(fèi)就十幾萬，而且對患者生命的延長時(shí)間 只有幾個(gè)月，同時(shí)可能會伴有腹瀉、皮疹、高血壓等較嚴(yán)重不良反應(yīng)。因此，尋找高效、安全、 經(jīng)濟(jì)的抗腫瘤藥物也成為醫(yī)藥學(xué)者的重要課題。
[0004] 抗癌藥物的研發(fā)一直是藥學(xué)研究的熱點(diǎn)，抗腫瘤藥物中有超過70%是天然產(chǎn)物或 其衍生物，如紫杉醇及其衍生物是目前臨床應(yīng)用效果較好的抗腫瘤藥物之一。因此，從天然 植物中尋找抗癌化合物或前體化合物，并將其有效組合對于腫瘤的治療具有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 胡桃苷B(Juglanoside B)為（4S)-4,5_ 二羥基-α-四氫萘酮-4-0-β-?-批喃葡 糖苷，結(jié)構(gòu)式如圖1所示，為一種天然的苷類化合物，其大量存在于青龍衣中。青龍衣為胡 桃科胡桃屬植物核桃楸（Juglans mandshurica Maxim.)未成熟的外果皮，主產(chǎn)于河北、山 東、東北等地，資源極為豐富。古代諸家多以其清熱解毒、祛風(fēng)療癬、止痛止痢等功效入藥。 現(xiàn)代研究表明，青龍衣在臨床應(yīng)用廣泛，可用于治療多種癌癥，如胃癌、肺癌等，且其治療效 果顯著。近年來，隨著人們對青龍衣化學(xué)成分和藥理作用研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)胡桃苷 B表現(xiàn)出一系列的藥理學(xué)功能，包括抗炎、抗腫瘤、促進(jìn)凋亡、保護(hù)肝損傷等作用。
[0006] 淫羊藿素（Icaritin)是淫羊藿苷的水解產(chǎn)物，分子量為386. 4,結(jié)構(gòu)式如圖2所 示，存在于淫羊藿中。淫羊藿又名仙靈脾、羊藿葉等，為小檗科植物淫羊藿屬的干燥葉。中 國淫羊藿資源極為豐富，約占世界總資源量的80%左右。主要有堅(jiān)筋骨、補(bǔ)腎陽、強(qiáng)心力等 藥用價(jià)值?，F(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿中的單一成分淫羊藿素能保護(hù)心血管系統(tǒng)，促進(jìn)骨骼 生長、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等功能。
[0007] 本發(fā)明的目的在于公開了一種藥物組合物。
[0008] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開了上述藥物組合物的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0010] 一種藥物組合物，其中，所述藥物組合物由胡桃苷B和淫羊藿素組成，其中胡桃苷 B與淫羊藿素之間的重量比為1:1。
[0011] 上述技術(shù)方案所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物用于制備治療肝癌的藥 物。
[0012] 上述技術(shù)方案所述的藥物組合物，其中，藥物組合物的劑型為醫(yī)學(xué)上可接受的劑 型。
[0013] 上述技術(shù)方案所述的藥物組合物，其中，藥物組合物的劑型為粉劑、注射液、膠囊、 片劑或口服液中的一種。
[0014] 上述技術(shù)方案所述的藥物組合物在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述技術(shù)方案所述的應(yīng)用，其中，藥物組合物的具有降低JAK2和STAT3的mRNA水 平的作用。
[0016] 上述技術(shù)方案所述的應(yīng)用，其中，藥物組合物的劑型為醫(yī)學(xué)上可接受的劑型。
[0017] 上述技術(shù)方案所述的應(yīng)用，其中，藥物組合物的劑型為粉劑、注射液、膠囊、片劑或 口服液中的一種。
[0018] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0019] 1、在體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞Η印G2和鼠肝癌瘤株H22中，本發(fā)明的藥物組合物與單 獨(dú)使用胡桃苷B或淫羊藿素相比，可以顯著抑制兩種肝癌細(xì)胞的活性。
[0020] 2、在利用Η印G2細(xì)胞和H22細(xì)胞構(gòu)建的小鼠轉(zhuǎn)移瘤中，本發(fā)明的藥物組合物與單獨(dú) 使用胡桃苷B或淫羊藿素相比，可以顯著抑制腫瘤的生長。
[0021] 3、本發(fā)明的藥物組合物對腫瘤細(xì)胞生長抑制具有一定特異性，在相同濃度作用 下，藥物組合物對正常大鼠肝細(xì)胞BRL-3A的生長無明顯影響。因此，本發(fā)明的藥物組合物 可用于肝癌的治療，即其既可以發(fā)揮對腫瘤細(xì)胞的抑制作用，又可以發(fā)揮對正常肝細(xì)胞的 保護(hù)作用。
[0022] 4、本發(fā)明的藥物組合物能夠降低JAK2和STAT3的mRNA水平，說明本發(fā)明的藥物 組合物抑制肝癌細(xì)胞的增殖是通過JAK-STATs通路發(fā)揮作用，為治療肝癌提供了一種新的 藥物和方法。
[0023] 5、本發(fā)明的藥物組合物不僅配制簡單，療效好，無副作用，安全性高，有利于患者 及時(shí)減輕病狀，具有良好的開發(fā)前景及社會和經(jīng)濟(jì)效益。

【專利附圖】

【附圖說明】：
[0024] 1、圖1是胡桃苷B結(jié)構(gòu)式；
[0025] 2、圖2是淫羊藿素結(jié)構(gòu)式；
[0026] 3、圖3是各給藥組對HepG2細(xì)胞生長抑制率的影響；
[0027] 4、圖4是各給藥組對H22細(xì)胞生長抑制率的影響；
[0028] 5、圖5是各給藥組對小鼠 Η印G2移植性腫瘤生長的影響；
[0029] 6、圖6是各給藥組對小鼠 Η22移植性腫瘤生長的影響；
[0030] 7、圖7是本發(fā)明藥物組合物對RH-35細(xì)胞活性的效果；
[0031] 8、圖8是RT-PCR分析JAK2基因 mRNA水平的變化情況；
[0032] 9、圖9是ImageJ圖像分析軟件分析JAK2基因 mRNA水平表達(dá)情況；
[0033] 10、圖10是RT-PCR分析STAT3基因 mRNA水平的變化情況；
[0034] 11、圖11是ImageJ圖像分析軟件分析STAT3基因 mRNA水平表達(dá)情況。

【具體實(shí)施方式】：
[0035] 為使本發(fā)明的技術(shù)方案便于理解，以下結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明藥物組合物（胡 桃苷B與淫羊藿素組合物）的制備作進(jìn)一步說明。
[0036] 實(shí)施例1 :本發(fā)明藥物鉬合物的制各:
[0037] 按照胡桃苷B與淫羊藿素之間的重量比為1:1稱取原料，將兩者混合均勻，即得本 發(fā)明藥物組合物。
[0038] 以下結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)例對胡桃苷B與淫羊藿素組合藥物即本發(fā)明藥物組合物（胡桃 苷B+淫羊藿素）在肝癌治療中的應(yīng)用作進(jìn)一步說明。
[0039] 一、實(shí)驗(yàn)材料：
[0040] 1、藥物及試劑：
[0041] 胡桃苷B的提取方法參照劉麗娟等人發(fā)表在《中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)》第46-48頁的 《北青龍衣中胡桃苷B的分離及含量測定方法的建立》一文。淫羊藿素均購自上海源葉生物 科技有限公司，生產(chǎn)批號為20130715。生理鹽水、MTT (四甲基偶氮唑鹽）、苦味酸均由國藥 集團(tuán)化學(xué)試劑北京有限公司提供，生產(chǎn)批號為20131012。胎牛血清購置于四季青公司，生 產(chǎn)批號20130623。RNA提取試劑盒購置于北京莊盟國際生物基于科技有限公司，生產(chǎn)批號 20130501。MTT、DMS0購置于Sigma公司，生產(chǎn)批號20130215。PCR引物由北京奧科鼎盛生 物科技有限公司合成，生產(chǎn)批號20130322。
[0042] 2、細(xì)胞及動物：
[0043] (1)細(xì)胞株：HepG2細(xì)胞系，RH-35細(xì)胞系，BRL細(xì)胞系，H22肝癌瘤株，均由軍事醫(yī) 學(xué)科學(xué)院提供。
[0044] ⑵動物：BALB/c小鼠，清潔級，雄性，6-8周齡，體重（20±2)g，購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué) 院，動物合格證號SCXK-(軍）2007-004。
[0045] 3、材料及儀器：
[0046] Costar 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（美國Corning公司）；一次性0· 22 μ m針筒式微孔濾膜 (上海興亞凈化材料廠）。Forma恒溫(1)2培養(yǎng)箱（Thermo Electron Shanghai Instruments Co. , Ltd.) ;BioTek 多功會泛酶標(biāo)儀（Thermo Electron Shanghai Instruments Co. , Ltd.)； ABI7500熒光定量PCR儀（美國CY-TECH) ;FA2004分析天平（上海天平儀器廠）；ALC4239 低溫高速離心機(jī)（美國Sigma公司產(chǎn)品）；725型超低溫冰箱（美國Forma公司）。
[0047] 二、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
[0048] 所有處理數(shù)據(jù)均以；is表示，使用SPSS19. 0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差分析處理數(shù) 據(jù)，用LSD法進(jìn)行組間比較；否則采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，P < 0. 05表示有差異，P < 0. 01表 示有顯著性差異。
[0049] 實(shí)駘例1 :MTT法檢測各給藥組對人肝癌細(xì)胞株IfepG2的影響：
[0050] 培養(yǎng)Η印G2細(xì)胞系，細(xì)胞生長至50-60%融合時(shí)，將實(shí)驗(yàn)對象分為4組即胡桃苷B 組、淫羊藿素組、胡桃苷Β+淫羊藿素組和對照組。在各組的培養(yǎng)液中對應(yīng)的加入200 μ g/mL 的胡桃苷B、200yg/mL的淫羊藿素、本發(fā)明藥物組合物（其中胡桃苷B 200yg/mL+淫羊藿 素200 μ g/mL)和溶解化合物所用的DMS0 (二甲基亞砜），各100 μ L。培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)，使 用ΜΤΤ法測定細(xì)胞活力。方法如下：去上清，磷酸鹽緩沖液（PBS)洗2遍，MTT、37°C孵育4 小時(shí)，PBS洗2遍，DMS0溶解結(jié)晶，490nm測定吸光度，并計(jì)算生長抑制率。
[0051]

【權(quán)利要求】
1. 一種藥物組合物，其特征在于：所述藥物組合物由胡桃苷B和淫羊藿素組成，其中胡 桃苷B與淫羊藿素之間的重量比為1:1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組合物用于制備治療肝 癌的藥物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于：藥物組合物的劑型為醫(yī)學(xué)上可接 受的劑型。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于：藥物組合物的劑型為粉劑、注射 液、膠囊、片劑或口服液中的一種。
5. 權(quán)利要求1?4所述的藥物組合物在制備治療肝癌藥物中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于：藥物組合物的具有降低JAK2和STAT3的 mRNA水平的作用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于：藥物組合物的劑型為醫(yī)學(xué)上可接受的劑 型。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：藥物組合物的劑型為粉劑、注射液、膠囊、 片劑或口服液中的一種。
【文檔編號】A61K31/7034GK104147025SQ201410361020
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】趙艷玲, 肖小河, 王伽伯, 陳哲, 鄭全福 申請人:中國人民解放軍第三〇二醫(yī)院