對轉(zhuǎn)運治療性分子穿過血腦屏障的增強的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明是至少部分地基于以下研究結(jié)果：發(fā)現(xiàn)二聚體形式的BBB轉(zhuǎn)遷移抗體(例如，TMEM30A(CDC-50A)結(jié)合抗體FC5)與單價FC5VHH相比極大地增強轉(zhuǎn)運穿過BBB。本發(fā)明尤其提供增強藥理學活性劑轉(zhuǎn)運穿過血腦屏障的分子，增強轉(zhuǎn)運穿過血腦屏障的方法，以及治療具有神經(jīng)成分的病癥或疾病的方法。
【專利說明】對轉(zhuǎn)運治療性分子穿過血腦屏障的增強
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 大分子在整個身體內(nèi)的分布一般是由血液中的大分子介導的擴散，其穿過毛細血 管脈管結(jié)構(gòu)的高度窗孔內(nèi)皮細胞襯里擴散至組織中。在高度血管化的大腦中不存在大分子 的自由擴散。大腦毛細血管內(nèi)皮細胞缺乏在循環(huán)系統(tǒng)其余部分中可見的窗孔并具有高度 專業(yè)化的內(nèi)皮細胞緊密細胞內(nèi)接合。這些緊密接合用于防止大于400kDa的分子從毛細血 管的管腔自由擴散至近腔側(cè)。另外，毛細血管包含各種轉(zhuǎn)運體系統(tǒng)，例如有機陰離子轉(zhuǎn)運體 (OATS)和多藥耐藥（MDR)系統(tǒng)，其積極建立可能以其他方式擴散穿過內(nèi)皮細胞的分子的轉(zhuǎn) 運梯度。限制性屏障的組合防止了外來試劑（例如包括毒素和病毒）的進入，以及限制了 治療性實體的擴散。另外，這些限制性血腦屏障（BBB)有效阻斷潛在治療性蛋白、肽和小分 子以藥理學治療劑量被動遞送到腦實質(zhì)中。
[0003] -種成功實現(xiàn)轉(zhuǎn)運治療性分子穿過BBB內(nèi)皮細胞的策略已經(jīng)利用了受體介導的 轉(zhuǎn)胞吞作用（RMT)。這個策略使用特異性結(jié)合于BBB內(nèi)皮細胞上的蛋白質(zhì)的抗體或分子， 其典型地涉及于分子穿過BBB內(nèi)皮細胞的轉(zhuǎn)運中。此類抗體在經(jīng)歷穿過BBB內(nèi)皮細胞的轉(zhuǎn) 胞吞作用的同時被用作穿梭分子以遞送所連接的有效負載。這種技術(shù)的應用實例包括使用 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體和膜島素受體的抗體（Yu等，2011. Science Translational Medicine.第3 卷）。在這兩種情況下，RMT抗體在C端融合至治療性蛋白結(jié)構(gòu)域并且已顯示可轉(zhuǎn)運分子穿 過BBB。不幸的是，常用的RMT靶標轉(zhuǎn)鐵蛋白和胰島素受體在眾多組織中高度且廣泛地表 達。這種廣泛的靶標表達導致短的循環(huán)半衰期，其轉(zhuǎn)而又限制了 BBB內(nèi)皮細胞暴露時間以 及從而限制了分子在大腦中的給藥。另外，這些抗體靶向代謝上關(guān)鍵的細胞功能，從而產(chǎn)生 潛在的安全性風險。
[0004] 利用活性BBB轉(zhuǎn)運分子來穿過BBB的改進型靶向部分，例如源自轉(zhuǎn)遷移穿過BBB 的抗體分子的結(jié)合位點，對于治療劑向大腦中的遞送將具有很大益處。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明是至少部分地基于以下研究結(jié)果：發(fā)現(xiàn)包含血腦屏障（BBB)轉(zhuǎn)遷移 抗體（例如TMEM30A (CDC-50A)結(jié)合抗體（例如，單結(jié)構(gòu)域抗體FC5))的融合蛋白與 單價VHH相比極大地增強轉(zhuǎn)運穿過BBB。初始結(jié)合和BBB內(nèi)皮轉(zhuǎn)運實驗顯示，F(xiàn)C5( - 種美洲駝單結(jié)構(gòu)域VHH抗體（sdAb))可促進轉(zhuǎn)運穿過BBB內(nèi)皮細胞層（參見例如美 國專利7, 943, 129)。已知由于低分子量和缺乏Fc結(jié)構(gòu)域，Vhh的循環(huán)半衰期較短 (Jain，M.，Kamal，N.和 Batra，S.K. (2007) Trends in biotechnology25 (7) ,307-316; Batra, S. K. , Jain, M. , ffittel, U. A. , Chauhan, S. C.和 Colcher, D. (2002) Current opinion in biotechnologyl3 (6)，603-608)。令人驚訝的是，通過將BBB轉(zhuǎn)遷移單結(jié)構(gòu)域抗體與人 Fc的N端融合產(chǎn)生二價抗體樣構(gòu)建體，使這種構(gòu)建體的循環(huán)半衰期得到極大增強。此種結(jié) 合位點并入Fc構(gòu)建體中產(chǎn)生二價分子，有可能產(chǎn)生二價結(jié)合，每個結(jié)合部分結(jié)合于在細胞 表面上表達的假定靶標（例如，TMEM30A)。由于親合力影響，二價結(jié)合可以驅(qū)動表觀結(jié)合親 和力的顯著變化（Reynolds, J.A. (1979)Biochemistryl8(2)，264-269 ;Hubble，J. (1999) Molecular immunology36(l), 13-18)。如本文所示，相互作用的親和力增加。鑒于這種親 和力增加，未預測到如下研究結(jié)果：添加 Fc以形成二價分子可顯著增強轉(zhuǎn)運穿過BBB。未 預測到所述轉(zhuǎn)運增強是由于，雖然Fc結(jié)構(gòu)域的添加由于質(zhì)量增加而可延長β相藥物動力 學，從而通過結(jié)合于FcRn而防止分子的腎濾過和促進體內(nèi)抗體再循環(huán)，但由于在結(jié)合于高 表達靶標時消除了循環(huán)結(jié)合分子，增強的表觀親和力增加還可具有相反的作用。然而，最令 人驚訝的是，如本文所示，發(fā)現(xiàn)呈結(jié)合位點-Fc構(gòu)象（從氨基至羧基端，S卩，結(jié)合位點融合于 Fc的N端）的融合蛋白相比于呈Fc-結(jié)合位點構(gòu)象（結(jié)合位點融合于Fc的C端）的融合 蛋白具有更高的活性。盡管在體外進行的初始實驗中顯示Fc-結(jié)合位點融合蛋白（結(jié)合位 點融合于Fc的C端）與內(nèi)皮細胞的結(jié)合增加，但上述是事實。還提供了單價形式的結(jié)合位 點-Fc構(gòu)建體。
[0006] 因此，在一個方面，本發(fā)明涉及包含至少一個藥理學活性劑和至少一個結(jié)合位點 (例如，BBB轉(zhuǎn)遷移結(jié)合位點，其結(jié)合于TMEM30A)的結(jié)合分子，其中結(jié)合于TMEM30A的所述 至少一個結(jié)合位點是i)直接地或ii)通過插入氨基酸序列融合至Fc部分的N端。
[0007] 在一個實施方案中，所述結(jié)合分子包含至少兩個結(jié)合位點。
[0008] 在一個實施方案中，所述至少一個結(jié)合位點包含F(xiàn)C5氨基酸序列。在一個實施方 案中，所述結(jié)合分子包含結(jié)合于TMEM30A的至少兩個或至少三個（例如，兩個或三個）結(jié)合 位點。在一個實施方案中，所述結(jié)合分子包含結(jié)合于TMEM30A的至少三個或至少四個（例 如，三個或四個）結(jié)合位點。
[0009] 在一個實施方案中，至少一個BBB轉(zhuǎn)遷移位點（例如，源自轉(zhuǎn)遷移穿過BBB的抗體 分子的結(jié)合位點）是直接基因融合至Fc部分。
[0010] 在一個實施方案中，至少一個BBB轉(zhuǎn)遷移位點（例如，源自轉(zhuǎn)遷移穿過BBB的抗體 分子的結(jié)合位點）是通過包含肽接頭的插入氨基酸序列基因融合至Fc部分。
[0011] 在一個實施方案中，至少一個BBB轉(zhuǎn)遷移位點（例如，源自轉(zhuǎn)遷移穿過BBB的抗體 分子的結(jié)合位點）是通過由肽接頭組成的插入氨基酸序列基因融合至Fc部分。
[0012] 在一個實施方案中，兩個BBB轉(zhuǎn)遷移位點（例如，源自轉(zhuǎn)遷移穿過BBB的抗體分子 的結(jié)合位點）是通過包含肽接頭的氨基酸序列融合至完全Fc區(qū)的兩個不同的Fc部分的N 端。
[0013] 在一個實施方案中，至少一個BBB轉(zhuǎn)遷移位點（例如，源自轉(zhuǎn)遷移穿過BBB的抗體 分子的結(jié)合位點）是融合至scFc分子的N端。
[0014] 在一個實施方案中，至少一個藥理學活性劑是融合至Fc區(qū)的C端。
[0015] 在一個實施方案中，至少一個藥理學活性劑是小的化學實體。
[0016] 在一個實施方案中，所述小的化學實體在半胱氨酸殘基處融合至結(jié)合分子。在一 個實施方案中，所述半胱氨酸殘基是工程改造的半胱氨酸殘基。
[0017] 在一個實施方案中，至少一個藥理學活性劑是多肽。
[0018] 在一個實施方案中，至少一個藥理學活性劑包含抗原結(jié)合位點（例如，源自非BBB 轉(zhuǎn)遷移抗體的抗原結(jié)合位點）。
[0019] 在一個實施方案中，所述藥理學活性劑選自由scFv分子、Fab分子和單結(jié)構(gòu)域抗 體組成的組。
[0020] 在一個實施方案中，至少一個藥理學活性劑是基因融合至結(jié)合分子。
[0021] 在一個實施方案中，至少一個藥理學活性劑是共價連接至結(jié)合分子。
[0022] 在一個實施方案中，BBB轉(zhuǎn)遷移位點是通過包含抗體分子的VH結(jié)構(gòu)域的插入氨基 酸序列基因融合。
[0023] 在一個實施方案中，BBB轉(zhuǎn)遷移位點是通過包含抗體分子的VL結(jié)構(gòu)域的插入氨基 酸序列基因融合。
[0024] 在一個實施方案中，至少一個BBB轉(zhuǎn)遷移位點是基因融合至完整抗體分子的VH結(jié) 構(gòu)域的N端。
[0025] 在一個實施方案中，至少一個BBB轉(zhuǎn)遷移位點是基因融合至完整抗體分子的VL結(jié) 構(gòu)域的N端。
[0026] 在一個實施方案中，兩個BBB轉(zhuǎn)遷移位點是基因融合至完整抗體分子的VH結(jié)構(gòu)域 和VL結(jié)構(gòu)域的N端。
[0027] 在一個實施方案中，插入氨基酸序列進一步包含肽接頭。
[0028] 在一個實施方案中，藥學活性劑選自由以下組成的組：神經(jīng)活性肽、小的化學實 體，和結(jié)合于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的靶標的抗體的可變區(qū)。
[0029] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種治療神經(jīng)病癥的方法，其包括向受試者施用 本發(fā)明的結(jié)合分子。
[0030] 在一個實施方案中，所述神經(jīng)病癥為貯積病癥。在一個實施方案中，所述神經(jīng)病癥 為慢性疼痛。在一個實施方案中，所述神經(jīng)病癥為癲癇癥。在一個實施方案中，所述神經(jīng)病 癥為多發(fā)性硬化癥。在一個實施方案中，所述神經(jīng)病癥為蛋白質(zhì)病。在一個實施方案中，所 述病癥為脫髓鞘病癥。
[0031] 在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及本發(fā)明的結(jié)合分子用于制造供治療神經(jīng)病癥的 藥物的用途。
[0032] 附圖簡述
[0033] 圖1示出了（a)單獨的FC5重鏈單結(jié)構(gòu)域抗體、（b)與人IgGl agly Fc結(jié)構(gòu)域N 端融合（FC5-Fc)或（c)與人IgGlagly Fc結(jié)構(gòu)域C端融合（Fc-FC5)以及并有非BBB轉(zhuǎn)遷 移結(jié)構(gòu)域作為藥學活性部分的可能的抗體樣構(gòu)建體（d、e)的圖解表示。分子（f)和（g)說 明了 FC5重鏈單結(jié)構(gòu)域抗體向完全抗體分子的添加；所述重鏈單結(jié)構(gòu)域抗體可以例如融合 至VL或VH結(jié)構(gòu)域，或兩者。
[0034] 圖2。示出了 2. 5ug的每種純化蛋白在4-12% Bis-Tris SDS PAGE上的電泳。在 每種凝膠上標示10-220kD的SDS PAGE分子量標準。圖A示出了（1)非還原性泳道FC5和 (2)還原性泳道FC5,圖B示出了（1)非還原性泳道FC5-Fc和⑵還原性泳道FC5-Fc，以及 圖C示出了（1)非還原性泳道Fc-FC5和（2)還原性泳道Fc-FC5。
[0035] 圖 3。示出 了與對照抗體 12F6A(hIgGl)、CRL2434(mIgGl)和 C37H(僅 Vhh)相比， FC5Fc、FcFC5和FC5穿過體外SV40大鼠 BBB轉(zhuǎn)化內(nèi)皮細胞系的轉(zhuǎn)運率增加。
[0036] 圖 4a_c。圖 4 (a)不出了 FC5_Fc (〇）、Fc_FC5 ( )或融合至 huFc agly 結(jié)構(gòu)域 的N端的不相關(guān)對照駱駝科動物Vhh(Vhh-FC) (Λ)與SV40大鼠 BBB轉(zhuǎn)化內(nèi)皮細胞系的結(jié)合。 圖（4b)示出了 FC5-Fc(〇）和Fc-FC5( )與初級大鼠 BBB內(nèi)皮細胞系的結(jié)合。圖4c示 出了 FC5-Fc與在EBNA293細胞中瞬時表達的大鼠（□)或人（? )TMEM30A以及Fc-FC5 與在EBNA293細胞中瞬時表達的大鼠(▲)或人（·）TMEM30A的結(jié)合。
[0037] 圖5a_c。圖5a示出了在Hargreaves動物模型中FC5與達拉根（Dalargin)共價 交聯(lián)（FC5-Dal)以抑制疼痛的能力?？s爪速率以基于20秒時間框架的最大可能作用的百 分比MPE)表示。陰性對照顯示對側(cè)非發(fā)炎對照爪的縮爪速率（·）并且陽性對照顯 示當向大鼠 IV注射單獨的PBS時發(fā)炎爪的快速縮爪速率（〇）。在Hargreaves動物中比 較單一 IV 劑量的 21mg/Kg(mpk)的 FC5-Dal ( )與三個 IV 劑量的 7mpk 的 FC5-Dal ( □) 抑制縮爪速率的功效。圖5b示出了每個所評價的爪的％ MPE反應相對于時間的平均曲線 下面積。圖5c示出了在時間0、1小時和2小時向大鼠 IV注射三次劑量的7mpk的不相關(guān) Vaa-Dal (灰色方塊）或單獨的FC5(空心方塊）的其他陰性對照實驗。還示出了對側(cè)對照 爪（實心圓）。在Hargreaves動物中測定關(guān)于縮爪速率的抑制的％ MPE。
[0038] 圖6a_d。在Hargreaves模型中評價Fc_FC5_Dal的功效。在圖6a中在時間0時 以2mpkat向大鼠 IV給藥以及在圖6B中在時間0和2小時時以2mpkat向大鼠 IV給藥。在 圖6C和圖6D中，在時間0時以6. 5mpk向每只大鼠 IV給藥。
[0039] 圖7a_d。比較FC5_Fc_Dal與陰性對照Fc-Dal在Hargreaves模型中的功效。在 時間0時以0. 5、2. 5或6. Ompk的單一濃度的FC5-Fc-Dal或Fc-Dal向大鼠 IV給藥。數(shù)據(jù) 以給定時間下的最大可能作用（MPE)的百分比形式呈現(xiàn)于圖7a和圖7b中或以曲線下面積 百分比形式呈現(xiàn)于圖7c和圖7d中。
[0040] 發(fā)明詳述
[0041] 發(fā)現(xiàn)包含至少一個BBB轉(zhuǎn)遷移單結(jié)構(gòu)域抗體（例如，其結(jié)合于TMEM30A (⑶C-50A) (例如，F(xiàn)C5單結(jié)構(gòu)域））的融合蛋白相比于單價VHH極大地增強轉(zhuǎn)運穿過BBB。特別地，結(jié) 合位點-Fc構(gòu)象（從氨基至羧基端）顯示增強的活性。至少部分地基于這種顯著增加的轉(zhuǎn) 運，本文描述了具有增加的轉(zhuǎn)運穿過血腦屏障的分子、用于增強轉(zhuǎn)運穿過血腦屏障的方法， 以及使用所述分子的治療方法。
[0042] 在進一步描述本發(fā)明之前，為方便起見，某些術(shù)語描述于下：
[0043] I.定義
[0044] 如本文所用，術(shù)語"蛋白質(zhì)"或"多肽"是指兩個或更多個天然氨基酸或非天然氨 基酸的聚合物。
[0045] 術(shù)語"氨基酸"包括丙氨酸（Ala或A);精氨酸（Arg或R);天冬酰胺（Asn或N); 天冬氨酸（Asp或D);半胱氨酸（Cys或C);谷氨酰胺（Gin或Q);谷氨酸（Glu或E);甘氨 酸（Gly或G);組氨酸（His或H);異亮氨酸（lie或I);亮氨酸（Leu或L);賴氨酸（Lys或 K);甲硫氨酸（Met或M);苯丙氨酸（Phe或F);脯氨酸（Pro或P);絲氨酸（Ser或S);蘇 氨酸（Thr或T);色氨酸（Trp或W);酪氨酸（Tyr或Y);以及纈氨酸（Val或V)。非傳統(tǒng) 氨基酸也在本發(fā)明的范圍內(nèi)并包括正亮氨酸、鳥氨酸、正纈氨酸、高絲氨酸以及例如Ellman 等，Meth.Enzym. 202:301-336(1991)中所述的其他氨基酸殘基類似物。為了產(chǎn)生此類非天 然存在的氨基酸殘基，可以使用Noren等，Science244:182(1989)和Ellman等，同上的程 序。簡要地說，這些程序涉及用非天然存在的氨基酸殘基來化學活化抑制型tRNA，接著進 行RNA的體外轉(zhuǎn)錄和翻譯。還可使用本領(lǐng)域中已知的肽化學來實現(xiàn)非傳統(tǒng)氨基酸的引入。 如本文所用，術(shù)語"極性氨基酸"包括具有凈電荷為零、但在其側(cè)鏈的不同部分中具有非零 部分電荷的氨基酸（例如1?、1、5、￥、隊0、〇。這些氨基酸可參與疏水性相互作用和靜電 相互作用。如本文所用，術(shù)語"帶電荷氨基酸"包括在其側(cè)鏈上可具有非零凈電荷的氨基酸 (例如R、Κ、Η、E、D)。這些氨基酸可參與疏水性相互作用和靜電相互作用。
[0046] 如本文所用，術(shù)語"接頭肽"是指聯(lián)接或連接兩個多肽序列、例如連接兩個多肽結(jié) 構(gòu)域的氨基酸序列，所述氨基酸序列本質(zhì)上并不天然聯(lián)接或連接所述兩個多肽結(jié)構(gòu)域。在 一個實施方案中，接頭肽為合成的。如本文所用，術(shù)語"合成"是指并不天然存在的氨基酸 序列。
[0047] 本發(fā)明的接頭肽通過肽鍵聯(lián)接兩個氨基酸序列。在一個實施方案中，接頭肽將BBB 轉(zhuǎn)遷移部分聯(lián)接至第二部分，例如，F(xiàn)c部分結(jié)構(gòu)域或區(qū)域。在一個實施方案中，本發(fā)明的接 頭肽將藥理學活性部分聯(lián)接至線性序列中的第二部分，例如，作為BBB轉(zhuǎn)遷移部分或Fc部 分結(jié)構(gòu)域或區(qū)域的第二部分。在另一個實施方案中，接頭肽聯(lián)接兩個藥理學活性部分。在 一個實施方案中，接頭肽將一個或多個Fc部分結(jié)構(gòu)域或區(qū)域聯(lián)接或基因融合至非Fc部分。
[0048] 在多肽的上下文中，"線性序列"或"序列"是多肽中在氨基至羧基端方向上的氨基 酸順序，其中在所述序列中彼此相鄰的殘基在多肽的一級結(jié)構(gòu)中是連續(xù)的。
[0049] 如本文所用，術(shù)語"連接的"、"融合的"或"融合"可互換使用。這些術(shù)語是指通過 包括化學綴合或重組方式在內(nèi)的任何方式將兩個以上元件或成分接合在一起。如本文所 用，術(shù)語"共價融合"或"共價偶聯(lián)"意指指定部分是彼此直接共價鍵合，或者通過一個或多 個插入部分如連接肽或部分彼此間接共價接合。在一個優(yōu)選的實施方案中，部分是共價融 合的。一種共價鍵是肽鍵。本領(lǐng)域中已知化學綴合的方法（例如，使用異雙官能交聯(lián)劑）。 融合部分也可為基因融合的。如本文所用，術(shù)語"基因融合的"、"基因連接的"或"基因融 合"是指兩個或更多個蛋白質(zhì)、多肽或其片段通過編碼所述蛋白質(zhì)、多肽或片段的單一多核 苷酸分子的基因表達經(jīng)由其單獨的肽主鏈的共線性、共價鍵聯(lián)或連接。所述基因融合導致 單一連續(xù)基因序列的表達。優(yōu)選的基因融合是框內(nèi)的，即，兩個或更多個開放閱讀框（0RF) 以維持原始0RF的正確閱讀框的方式融合以形成更長的連續(xù)0RF。因此，所得重組融合蛋白 是包含兩個或更多個對應于由原始0RF編碼的多肽的蛋白質(zhì)區(qū)段（所述區(qū)段本質(zhì)上并不通 常如此接合）的單一多肽。在這種情況下，所述單一多肽在加工期間裂解以得到包含兩個 多肽鏈的二聚分子。
[0050] 主題多肽包含至少一個藥理學活性部分。藥理學活性部分是指能夠在生物學情形 下執(zhí)行作用或反應的部分。例如，術(shù)語"藥理學活性部分"是指結(jié)合于生物系統(tǒng)的成分（例 如，生物流體中或細胞表面上或細胞基質(zhì)中的蛋白質(zhì)）并且所述結(jié)合產(chǎn)生生物作用（例如， 如通過活性部分和/或其所結(jié)合的成分的變化（例如，活性部分和/或其所結(jié)合的成分的 裂解、信號的傳輸、或細胞中或受試者中的生物反應的增強或抑制）所測量）的藥理學活性 分子或其部分。優(yōu)選的藥學活性部分是治療性部分。
[0051] 示例性藥理學活性部分可包含例如藥物、抗體分子或其部分（例如，F(xiàn)(ab)、scFv、 VH結(jié)構(gòu)域或VL結(jié)構(gòu)域）的抗原結(jié)合片段（例如，為賦予、誘導或阻斷生物反應）、受體的配 體結(jié)合部分或配體的受體結(jié)合部分、酶等。在一個實施方案中，藥理學活性部分包含成熟形 式的蛋白質(zhì)。在另一個實施方案中，藥理學活性部分包含保留生物活性的全長蛋白的一部 分。其他示例性藥理學活性部分包括治療上有用的氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、核酸（包括但不限 于多核苷酸、寡核苷酸）、碳水化合物以及脂質(zhì)。本發(fā)明的示例性藥理學活性部分包括神經(jīng) 營養(yǎng)因子、生長因子、酶、抗體、神經(jīng)傳遞素、神經(jīng)調(diào)節(jié)劑、抗生素、抗病毒劑、抗真菌劑、成像 或可檢測劑、同位素以及化學治療劑等。本發(fā)明的藥理學活性部分還包括當治療劑被遞送 至靶組織時可以被活化的藥物、前藥和前體。術(shù)語"藥理學活性部分"不欲包括BBB轉(zhuǎn)遷移 部分。藥理學活性劑為非BBB轉(zhuǎn)遷移部分。
[0052] 本發(fā)明的結(jié)合分子為"嵌合"或"融合"蛋白。所述蛋白包含連接至其本質(zhì)上并不 天然連接的第二氨基酸序列的第一氨基酸序列。所述氨基酸序列可正常存在于集合在融合 多肽中的單獨的蛋白質(zhì)中，或者它們可正常存在于相同蛋白質(zhì)中但以新的排列置于融合多 肽中?？墒褂帽绢I(lǐng)域中眾所周知的方法產(chǎn)生嵌合蛋白，例如，通過化學合成，或通過產(chǎn)生和 翻譯以所需關(guān)系編碼肽區(qū)域的多核苷酸。
[0053] 本發(fā)明的多肽為結(jié)合分子，S卩，其包含源自BBB轉(zhuǎn)遷移抗體的結(jié)合域或結(jié)合位點。 BBB轉(zhuǎn)遷移抗體促進與其連接的部分轉(zhuǎn)遷移穿過BBB。示例性BBB轉(zhuǎn)遷移抗體結(jié)合位點描 述于美國專利7, 943, 129中。在一個實施方案中，BBB轉(zhuǎn)遷移抗體結(jié)合于TMEM30A。如本文 所用的術(shù)語"結(jié)合結(jié)構(gòu)域"或"結(jié)合位點"是指介導與靶標分子的特異性結(jié)合的多肽的部分、 區(qū)域或位點（例如TMEM30A結(jié)合位點或促進BBB轉(zhuǎn)遷移的其他位點）。示例性結(jié)合結(jié)構(gòu)域 包括抗原結(jié)合位點（例如，VH和/或VL結(jié)構(gòu)域）或包含這種結(jié)合位點的分子（例如，抗體 或單結(jié)構(gòu)域抗體）。
[0054] 本發(fā)明的多肽關(guān)于BBB轉(zhuǎn)遷移部分是單價或多價的，例如，包含至少1個、2個、3 個、4個、5個或更多個BBB轉(zhuǎn)遷移部分。
[0055] 如本文所述的藥理學活性部分還可包括例如源自抗體分子的結(jié)合結(jié)構(gòu)域或結(jié)合 位點（例如，來自不會轉(zhuǎn)遷移穿過BBB的抗體的VH和/或VL結(jié)構(gòu)域）、包含這種結(jié)合位點 的分子（例如，抗體或單結(jié)構(gòu)域抗體）、配體的受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或 催化結(jié)構(gòu)域。如本文所用的術(shù)語"配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域"是指天然受體（例如，細胞表面受體） 或至少保留定性配體結(jié)合能力并且優(yōu)選相應的天然受體的生物活性的其區(qū)域或衍生物。如 本文所用的術(shù)語"受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域"是指天然配體或至少保留定性受體結(jié)合能力并且優(yōu)選 相應的天然配體的生物活性的其區(qū)域或衍生物。
[0056] 在一個實施方案中，本發(fā)明的多肽是修飾抗體。如本文所用，術(shù)語"修飾抗體"包 括合成形式的抗體，其被改變以使得其并非天然存在的，例如，包含至少兩個重鏈部分但非 兩個完全重鏈的抗體（例如，結(jié)構(gòu)域缺失抗體或微型抗體（minibody));多特異性形式的抗 體（例如，雙特異性、三特異性等），其被改變以結(jié)合于兩種或更多種不同的抗原，例如，結(jié) 合于TMEM30A和接合于Fc部分、結(jié)構(gòu)域、區(qū)域或scFc區(qū)域的治療上相關(guān)的靶結(jié)合位點。
[0057] 如本文所用，術(shù)語"Fc區(qū)域"應定義為對應于天然免疫球蛋白的Fc區(qū)域的多肽部 分，即，如通過其兩個重鏈的各自Fc結(jié)構(gòu)域（或Fc部分）的二聚締合而形成。天然Fc區(qū) 域為同型二聚的并包含兩個多肽鏈。相比之下，如本文所用，術(shù)語"基因融合的Fc區(qū)域"或 "單鏈Fc區(qū)域"（scFc區(qū)域）是指如例如美國申請20110243966中所述的在單一多肽鏈內(nèi) 基因連接（即，編碼于單一連續(xù)基因序列中）的由Fc結(jié)構(gòu)域（或Fc部分）構(gòu)成的合成二 聚Fc區(qū)域。在一個實施方案中，當使用scFc區(qū)域時，結(jié)合分子關(guān)于BBB轉(zhuǎn)遷移部分為單價 的。
[0058] 如本文所用，術(shù)語"Fc結(jié)構(gòu)域"是指開始于鉸鏈區(qū)中木瓜蛋白酶裂解位點正上游 (即IgG中的殘基216,將重鏈恒定區(qū)的第一個殘基定為114)并且結(jié)束于抗體的C端的單 一免疫球蛋白重鏈部分。因此，完全Fc結(jié)構(gòu)域包含至少鉸鏈結(jié)構(gòu)域、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu) 域。如本文所用，術(shù)語"Fc區(qū)域"是指類似于天然抗體的Fc區(qū)域的二聚Fc結(jié)構(gòu)域（例如， 無論是形成傳統(tǒng)的兩個多肽鏈形式或呈單鏈Fc區(qū)域形式）。
[0059] 如本文所用，術(shù)語"Fc結(jié)構(gòu)域部分"或"Fc部分"包括Fc結(jié)構(gòu)域或源自Fc結(jié)構(gòu) 域的氨基酸序列。在某些實施方案中，F(xiàn)c部分包含以下至少一者：鉸鏈（例如，上部、中部 和/或下部鉸鏈區(qū)）結(jié)構(gòu)域、CH2結(jié)構(gòu)域、CH3結(jié)構(gòu)域、CH4結(jié)構(gòu)域、或其變體、部分或片段。 在其他實施方案中，F(xiàn)c部分包含完全Fc結(jié)構(gòu)域（即，鉸鏈結(jié)構(gòu)域、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu) 域）。在一個實施方案中，F(xiàn)c部分包含與CH3結(jié)構(gòu)域（或其部分）融合的鉸鏈結(jié)構(gòu)域（或 其部分）。在另一個實施方案中，F(xiàn)c部分包含與CH3結(jié)構(gòu)域（或其部分）融合的CH2結(jié)構(gòu) 域（或其部分）。在另一個實施方案中，F(xiàn)c部分由CH3結(jié)構(gòu)域或其部分組成。在另一個實 施方案中，F(xiàn)c部分由鉸鏈結(jié)構(gòu)域（或其部分）和CH3結(jié)構(gòu)域（或其部分）組成。在另一個 實施方案中，F(xiàn)c部分由CH2結(jié)構(gòu)域（或其部分）和CH3結(jié)構(gòu)域組成。在另一個實施方案中， Fc部分由鉸鏈結(jié)構(gòu)域（或其部分）和CH2結(jié)構(gòu)域（或其部分）組成。在一個實施方案中， Fc部分缺乏CH2結(jié)構(gòu)域的至少一部分（例如，CH2結(jié)構(gòu)域的全部或一部分）。
[0060] 在一個實施方案中，本發(fā)明的結(jié)合分子包含完全Fc區(qū)域，無論是以一條多肽鏈 (scFc分子）形式存在或在野生型形式中以兩條多肽鏈存在。
[0061] 特異性結(jié)合是指兩個分子形成在生理條件下相對穩(wěn)定的復合物。特異性結(jié)合的特 征在于高親和力和低至中等能力，與通常具有低親和力與中等至高能力的非特異性結(jié)合相 區(qū)別。典型地，當親和常數(shù)KA高于ΚΛΓ 1或更優(yōu)選高于108Μ4時，結(jié)合被視為具特異性。必 要時，可通過改變結(jié)合條件在基本上不影響特異性結(jié)合的情況下減少非特異性結(jié)合。本領(lǐng) 域技術(shù)人員可使用常規(guī)技術(shù)對適當結(jié)合條件進行優(yōu)化，例如分子的濃度、溶液的離子強度、 溫度、允許結(jié)合的時間、阻斷劑（例如血清白蛋白、乳酪蛋白）的濃度等。
[0062] 在一個實施方案中，本發(fā)明的Fc部分包含本領(lǐng)域中已知為FcRn結(jié)合所需的Fc分 子的至少部分，本文稱為新生兒受體（FcRn)結(jié)合伴侶。FcRn結(jié)合伴侶為可被FcRn受體特 異性結(jié)合的分子或其部分，隨后FcRn受體活性轉(zhuǎn)運所述FcRn結(jié)合伴侶。
[0063] 本發(fā)明的FcRn結(jié)合伴侶涵蓋可被FcRn受體特異性結(jié)合的分子，包括全IgG、IgG 的Fc片段和包括FcRn受體的完全結(jié)合區(qū)域的其他片段。在另一個實施方案中，本發(fā)明的 結(jié)合分子的Fc部分結(jié)構(gòu)域或區(qū)域被修飾以使得其展現(xiàn)與FcRn的結(jié)合減少、最小或無結(jié) 合。已經(jīng)基于X射線結(jié)晶學描述了結(jié)合于FcRn受體的IgG的Fc部分的區(qū)域（Burmeister 等，1994, Nature372:379)。Fc與FcRn的主要接觸區(qū)域接近CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域的交 界。Fc-FcRn接觸點都在單一 Ig重鏈內(nèi)。FcRn結(jié)合伴侶包括全IgG、IgG的Fc片段和包括 FcRn的完全結(jié)合區(qū)域的其他IgG片段。主要的接觸位點包括CH2結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基248、 250-257、272、285、288、290-291、308-311 和 314 以及 CH3 結(jié)構(gòu)域的氨基酸殘基 385-387、 428和433-436。對于免疫球蛋白或免疫球蛋白片段或區(qū)域的氨基酸編號的提及都是基于 Kabat 等，1991，Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Public Health, Bethesda, Md〇
[0064] 可以根據(jù)諸如定點誘變等公認程序來修飾IgG的Fc區(qū)域以得到將被FcRn結(jié)合的 修飾IgG或Fc片段或其部分。所述修飾包括與FcRn接觸位點相距較遠的修飾以及保持或 甚至增強與FcRn結(jié)合的接觸位點內(nèi)的修飾。例如，人IgGlFc(Fc γ 1)中的下列單個氨基酸 殘基可以在Fc對于FcRn的結(jié)合親和力無顯著損失的情況下被取代：P238A、S239A、K246A、 K248A、D249A、M252A、T256A、E258A、T260A、D265A、S267A、H268A、E269A、D270A、E272A、 L274A、N276A、Y278A、D280A、V282A、E283A、H285A、N286A、T289A、K290A、R292A、E293A、 E294A、Q295A、Y296F、N297A、S298A、Y300F、R301A、V303A、V305A、T307A、L309A、Q311A、 D312A、N315A、K317A、E318A、K320A、K322A、S324A、K326A、A327Q、P329A、A330Q、P331A、 E333A、K334A、T335A、S337A、K338A、K340A、Q342A、R344A、E345A、Q347A、R355A、E356A、 M358A、T359A、K360A、N361A、Q362A、Y373A、S375A、D376A、A378Q、E380A、E382A、S383A、 N384A、Q386A、E388A、N389A、N390A、Y391F、K392A、L398A、S400A、D401A、D413A、K414A、 R416A、Q418A、Q419A、N421A、V422A、S424A、E430A、N434A、T437A、Q438A、K439A、S440A、S444A 和K447A，其中例如P238A表示在位置編號238處野生型脯氨酸被丙氨酸取代。
[0065] 某些上述突變可在Fc部分上賦予新的功能性。例如，一個實施方案包括N297A，從 而除去高度保守的N-糖基化位點。這種突變的作用在于減少糖基化，從而降低效應子功能 和/或免疫原性。作為由上述突變產(chǎn)生的新功能性的另一個實例，在一些情況下對于FcRn 的親和力可能增加超過野生型。這種增加的親和力可反映為增加的"開通"速率、降低的"關(guān) 閉"速率或增加的"開通"速率與降低的"關(guān)閉"速率。認為賦予FcRn增加的親和力的突變 包括 T256A、T307A、E380A 和 N434A (Shields 等，2001，J. Biol. Chem. 276:6591)。
[0066] 在一個實施方案中，F(xiàn)cRn結(jié)合伴侶為包括序列PKNSSMISNTP(SEQ ID N0:)并且 任選地進一步包括選自 HQSLGTQ(SEQ ID NO:)、HQNLSDGK(SEQ ID NO:)、HQNISDGK(SEQ ID N0:)或VISSHLGQ(SEQIDN0:)的序列的多肽（美國專利No·5,739,277)。
[0067] 本領(lǐng)域技術(shù)人員應熟知展現(xiàn)改變的效應子功能和/或FcRn結(jié)合的許多其他Fc突 變體或其類似物。另外，對免疫球蛋白恒定區(qū)（例如聚乙二醇化）或其片段進行化學修飾的 方法（參見例如 Aslam 和 Dentl998，Bioconjugation:Protein Coupling Techniques For the Biomedical Sciences Macmilan Reference, London)是本領(lǐng)域中眾所周知的，例如在 美國申請20120003210中。
[0068] 在一個實施方案中，使用本領(lǐng)域中已知的方法，例如通過使通常糖基化的殘基突 變或通過改變多肽的表達以便不發(fā)生糖基化，將BBB轉(zhuǎn)遷移部分所連接的Fc部分、結(jié)構(gòu)域 或區(qū)域無糖基化。作為實例，一個具體實施方案包括N297A突變，從而除去高度保守的N-糖 基化位點。在另一個實施方案中，F(xiàn)c部分包括在位置299處的突變，例如，T299突變?yōu)榱硪?種氨基酸，如美國專利7, 863, 419中所述。除了丙氨酸之外，可在上文指定或本領(lǐng)域中已知 的位置用其他氨基酸取代野生型氨基酸以降低Fc功能。
[0069] 在另一個實施方案中，可將 Armour, K. L.，Clark, M. R.，Hadley, A. G.和 Williamson L.M. (1999)，Eur J Immunol29:2613-2624中所公開的突變引入主題結(jié)合分子 中。
[0070] 可將突變單獨引入Fc中，產(chǎn)生一百種以上不同于天然Fc的Fc部分。另外，可一起 引入兩種、三種或三種以上的這些單獨的突變的組合，產(chǎn)生數(shù)百種以上潛在的Fc區(qū)域。此 夕卜，本發(fā)明構(gòu)建體的一個Fc部分可進行突變，而另一個Fc部分完全未進行突變，或者它們 都可進行突變但具有不同的突變。
[0071] 本發(fā)明嵌合蛋白中還涵蓋使用免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分的肽模擬物，例 如，F(xiàn)c片段的肽模擬物或FcRn結(jié)合伴侶的肽模擬物。在一個實施方案中，使用噬菌體展 示或通過化學文庫篩選來鑒定肽模擬物（參見例如McCafferty等，1990, Nature348:552 ; Kang 等，1991，Proc. Natl. Acad. Sci. USA88:4363 ;ΕΡ0 589 877B1)。
[0072] 在另一個實施方案中，本發(fā)明的Fc區(qū)域（例如，scFc區(qū)域）包含本領(lǐng)域中已知為 Fc γ R結(jié)合所需的Fc分子的至少部分。
[0073] 在一個實施方案中，本發(fā)明的Fc區(qū)域（例如，scFc區(qū)域）包含本領(lǐng)域中已知為蛋 白質(zhì)A結(jié)合所需的Fc分子的至少部分。在一個實施方案中，本發(fā)明的Fc區(qū)域（例如，scFc 區(qū)域）包含本領(lǐng)域中已知為蛋白質(zhì)G結(jié)合所需的Fc分子的至少部分。在一個實施方案中， 此種分子不結(jié)合于FcRn。
[0074] 如本文所述，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應了解，還可通過包括一個或多個氨基酸變化 (取代、添加或缺失）來修飾Fc結(jié)構(gòu)域以使得其氨基酸序列相比于野生型Fc部分有所改 變。本領(lǐng)域中已知許多此類變化或改變。在某些示例性實施方案中，F(xiàn)c部分保留效應子功 能（例如，F(xiàn)c γ R結(jié)合），并且在某些實施方案中，F(xiàn)c部分缺乏效應子功能或具有降低的效 應子功能。
[0075] 本發(fā)明的多肽的Fc結(jié)構(gòu)域或部分可來自任何同種型（A、E、G或M)并且可源自不 同的免疫球蛋白分子。例如，多肽的Fc結(jié)構(gòu)域或部分可包含源自IgGl分子的CH2和/或 CH3結(jié)構(gòu)域和源自IgG3分子的鉸鏈區(qū)。在另一個實例中，F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域或部分可包含部分源自 IgGl分子并且部分源自IgG3分子的嵌合鉸鏈區(qū)。在另一個實例中，F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域或部分可包 含部分源自IgGl分子并且部分源自IgG4分子的嵌合鉸鏈區(qū)。
[0076] 可使用本領(lǐng)域中已知的技術(shù)制備包含本發(fā)明的接頭肽的多肽。在一個實施方案 中，本發(fā)明的多肽為"重組產(chǎn)生的"，即使用重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。用于制備本發(fā)明的多肽的示 例性技術(shù)更詳細闡述于本文中。
[0077] 如本文所用，術(shù)語"藥學上可接受的載體"意指可與活性成分組合并且在組合后 可用于向受試者施用所述活性成分的化學組合物或化合物。如本文所用，術(shù)語"生理學上 可接受的"酯或鹽意指可與藥物組合物的任何其他成分相容的酯或鹽形式的活性成分， 其對待施用組合物的受試者無害。如本文所用，"藥學上可接受的載體"還包括但不限于 下列一種或多種：賦形劑；表面活性劑；分散劑；惰性稀釋劑；造粒和崩解劑；粘合劑；潤 滑劑；甜味劑；調(diào)味劑；著色劑；防腐劑；生理學上可降解的組合物如明膠；水性媒介物和 溶劑；油性媒介物和溶劑；懸浮劑；分散或潤濕劑；乳化劑、緩和劑；緩沖劑；鹽；增稠劑； 填充劑；乳化劑；抗氧化劑；穩(wěn)定劑；以及藥學上可接受的聚合物或疏水性材料?？砂?于本發(fā)明的藥物組合物中的其他"額外成分"是本領(lǐng)域中已知的并例如描述于Genaro 編，1985,Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.，Easton, Pa.中， 其以引用的方式并入本文中。
[0078] 如本文所用，"有效量"為足以產(chǎn)生治療反應的量。
[0079] 如本文所用，術(shù)語"蛋白質(zhì)病"是指特征為錯誤折疊的蛋白質(zhì)或聚集的蛋白質(zhì)的病 癥，所述病癥具有遺傳成分。
[0080] II.BBB轉(zhuǎn)遷移抗體
[0081] 在一個實施方案中，BBB轉(zhuǎn)遷移部分如美國專利7, 943, 129中所述。例如，在一個 實施方案中，BBB轉(zhuǎn)遷移部分包含以選自由以下組成的組的序列所示的氨基酸序列：SEQ ID N0:58(FC5)、SEQIDN0:86(FC44)和SEQIDN0:87(FC7)，如美國專利 7,943，129中所述。 在一個實施方案中，BBB轉(zhuǎn)遷移部分為FC5部分。FC5為源自駱駝科動物的重鏈抗體（HCA， 也稱為雙鏈、雙鏈重鏈抗體、Vhh或單結(jié)構(gòu)域抗體）。與也由駱駝科動物產(chǎn)生的常規(guī)IgG型四 鏈免疫球蛋白相比，這些抗體缺乏常規(guī)免疫球蛋白的輕鏈和CH1結(jié)構(gòu)域。這些天然存在的 重鏈抗體的一個顯著特征是Glu、Arg和Gly分別在其可變結(jié)構(gòu)域（稱為V。的VL界面位 置44、45和47(Kabat編號）的主要存在。常規(guī)四鏈抗體的重鏈的可變結(jié)構(gòu)域（稱為VH)中 的相同位置幾乎無一例外地被Gly、Leu和Trp占據(jù)。與常規(guī)四鏈抗體的VH結(jié)構(gòu)域的相對 不溶性相比，這些差異被認為是造成了駱駝科動物HCA可變結(jié)構(gòu)域（V。的高溶解性和穩(wěn)定 性。駱駝科動物Vhh結(jié)構(gòu)域的兩個更關(guān)鍵特征是其相對較長的CDR3和半胱氨酸對在CDR中 的高發(fā)生率。似乎半胱氨酸對介導二硫橋的形成并因此涉及調(diào)節(jié)抗體組合位點的表面拓撲 結(jié)構(gòu)。在駱駝sdAb-溶菌酶復合物的晶體結(jié)構(gòu)中，從sdAb突出并被CDR二硫鍵部分穩(wěn)定的 剛性環(huán)延伸超出組合位點并深深地滲透入溶菌酶活性位點（Desmyter等，Nature Struct. Biol.,3, 803-811(1996)) 〇
[0082] 在一個實施方案中，ΒΒΒ轉(zhuǎn)遷移抗體結(jié)合于TMEM30A(C6orf67、CDC50A)。結(jié)合 于TMEM30A的示例性部分是已知的或者可使用本領(lǐng)域中眾所周知的方法制備。例如，包含 TMEM30A或其部分的氨基酸序列的氨基酸序列可用于制備特異性識別TMEM30A氨基酸序列 的抗體或者從結(jié)合位點文庫中篩選特異性結(jié)合于TMEM30A的結(jié)合部分。來自所述抗體或源 自文庫的結(jié)合位點可用于本發(fā)明的結(jié)合分子中。TMEM30A的氨基酸序列示于下 ：
[0083]

【權(quán)利要求】
1. 一種結(jié)合分子，其包含至少一個藥理學活性劑和至少一個結(jié)合于TMEM30A的結(jié)合位 點，其中所述至少一個結(jié)合于TMEM30A的結(jié)合位點是i)直接地或ii)通過插入氨基酸序列 融合至Fc部分的N端。
2. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子包含至少兩個結(jié)合位點。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個結(jié)合位點包含F(xiàn)C5氨基酸序 列。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個結(jié)合位點由FC5氨基酸序列 組成。
5. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子包含至少兩個結(jié)合于TMEM30A的 結(jié)合位點。
6. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子包含至少三個結(jié)合于TMEM30A的 結(jié)合位點。
7. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合分子包含至少四個結(jié)合于TMEM30A的 結(jié)合位點。
8. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個TMEM30A結(jié)合位點是與所述Fc部 分直接基因融合。
9. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個TMEM30A結(jié)合位點是通過包含肽 接頭的插入氨基酸序列與所述Fc部分基因融合。
10. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個TMEM30A結(jié)合位點是通過由肽接 頭組成的插入氨基酸序列與所述Fc部分基因融合。
11. 如權(quán)利要求2所述的結(jié)合分子，其中兩個TMEM30A結(jié)合位點是通過包含肽接頭的氨 基酸序列與完全Fc區(qū)域的兩個不同F(xiàn)c部分的N端融合。
12. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個TMEM30A結(jié)合位點融合至scFc 分子的N端。
13. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個藥理學活性劑融合至所述Fc區(qū) 域的C端。
14. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個藥理學活性劑為小的化學實體。
15. 如權(quán)利要求13所述的結(jié)合分子，其中所述小的化學實體是在半胱氨酸殘基處融合 至所述結(jié)合分子。
16. 如權(quán)利要求14所述的結(jié)合分子，其中所述半胱氨酸殘基為工程改造的半胱氨酸殘 基。
17. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個藥理學活性劑為多肽。
18. 如權(quán)利要求17所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個藥理學活性劑包含抗原結(jié)合位 點。
19. 如權(quán)利要求18所述的結(jié)合分子，其中所述抗原結(jié)合位點是源自非TMEM30結(jié)合抗 體。
20. 如權(quán)利要求19所述的結(jié)合分子，其中所述藥理學活性劑選自由scFv分子、Fab分 子和單結(jié)構(gòu)域抗體組成的組。
21. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個藥理學活性劑是基因融合至所 述結(jié)合分子。
22. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述至少一個藥理學活性劑是共價連接至所 述結(jié)合分子。
23. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合位點是通過包含抗體分子的VH結(jié)構(gòu) 域的插入氨基酸序列基因融合的。
24. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述結(jié)合位點是通過包含抗體分子的VL結(jié)構(gòu) 域的插入氨基酸序列基因融合的。
25. 如權(quán)利要求23所述的結(jié)合分子，其中至少一個TMEM30A結(jié)合位點與完整抗體分子 的VH結(jié)構(gòu)域的N端基因融合。
26. 如權(quán)利要求24所述的結(jié)合分子，其中至少一個TMEM30A結(jié)合位點與完整抗體分子 的VL結(jié)構(gòu)域的N端基因融合。
27. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中兩個結(jié)合位點與完整抗體分子的VH結(jié)構(gòu)域和 VL結(jié)構(gòu)域的N端基因融合。
28. 如權(quán)利要求23或24所述的結(jié)合分子，其中所述插入氨基酸序列進一步包含肽接 頭。
29. 如權(quán)利要求1所述的結(jié)合分子，其中所述藥學活性劑選自由神經(jīng)活性肽、小的化學 實體和結(jié)合于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的靶標的抗體的可變區(qū)組成的組。
30. -種治療神經(jīng)病癥的方法，其包括向受試者施用如權(quán)利要求1-29中任一項所述的 結(jié)合分子。
31. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述神經(jīng)病癥為貯積病癥。
32. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述神經(jīng)病癥為慢性疼痛。
33. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述神經(jīng)病癥為癲癇癥。
34. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述神經(jīng)病癥為多發(fā)性硬化癥。
35. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述神經(jīng)病癥為蛋白質(zhì)病。
36. 如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述病癥為脫髓鞘病癥。
37. -種如權(quán)利要求1-29中任一項所述的結(jié)合分子的用途，其用于制造供治療神經(jīng)病 癥的藥物。
【文檔編號】A61P25/00GK104159922SQ201380004989
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月10日
【發(fā)明者】G.K.法林頓, W.西斯克 申請人:比奧根艾迪克Ma公司