一種褐藻多酚的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種從生物體中提取褐藻多酚的方法，采用以下步驟對褐藻多酚進行提?。涸项A處理、浸取、冷卻洗滌、樹脂吸附、洗脫和冷凍干燥，借助于本發(fā)明提供的技術方案，可以達到收率高、成本低，便于工業(yè)化生產等優(yōu)點。
【專利說明】一種褐藻多酚的提取方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及海洋生物領域，特別涉及一種從褐藻類生物中提取褐藻多酚的方法?！颈尘凹夹g】
[0002]褐藻多酚廣泛存在于海洋植物褐藻中，它以苯三酚為結構單元，主要分為寡聚間苯三酚和Eckol類多酚。研究證明褐藻多酚具有抗心血管疾病、抗菌、抗病毒、溶藻、抗氧化、抗糖尿病綜合征、保肝以及抑制賴氨酸酶透明質酸酶等廣泛的生物活性。褐藻多酚具有不同于陸地植物多 酚的結構及活性，是一類獨特的天然物質。
[0003]目前有報道的關于褐藻多酚的提取方法主要采用乙醇溶液室溫避光提取得粗提液，然后經有機溶劑洗滌、減壓蒸餾等步驟得到褐藻多酚精提物。但是這些方法得到的產品具有咖啡因、生物堿含量較高，產品安全性低、耗時長等缺點，因此不利于工業(yè)化生產。

【發(fā)明內容】

[0004]有鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種褐藻多酚的提取方法，與文獻中方法相比，具有純度高、收率高、生產成本低，有利于工業(yè)化生產的特點。
[0005]本發(fā)明采用以下的技術方案:用含有褐藻多酚的生物材料作為原材料，進行以下步驟的操作:
[0006]原料預處理:稱取一定量新鮮的含有褐藻多酚的生物原材料，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，用自來水反復沖洗干凈，烘干、進行破碎；
[0007]浸取:將破碎后的生物材料按濕重加入0.002~0.02%的抗氧化劑，與含有機溶劑50~90%的水溶液按1: 2~9的比例混合，充分攪拌后置于超聲波中處理3~6min，放入40~80°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取I~6小時，分離得上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
[0008]冷卻洗滌:將浸取后溶液置于O~4°C冷柜中靜止2~8小時，分離得上清液，用體積比為1:1~4有機溶劑水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
[0009]吸附:將上述步驟得到的溶液用大孔樹脂進行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；
[0010]洗脫:用含50~85%有機溶劑的洗脫劑進行洗脫解吸，并收集目標產物；
[0011]冷凍干燥:目標產物經冷凍干燥后得到成品褐藻多酚。
[0012]所述含有褐藻多酚的生物材料為生活于海洋或淡水中，含有褐色色素的絲狀或絲原植體的藻類。
[0013]所述含有褐藻多酚的生物材料為馬尾藻屬褐藻或海帶屬植物。
[0014]所述浸取步驟中加入的抗氧化劑為叔丁基對羥基茴香醚(BHA) ,2,6- 二叔丁基化羥基甲苯(BHT)、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉中的一種或幾種。
[0015]所述浸取步驟中用到的有機溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一種或幾種。[0016]所述浸取步驟中上清液的分離方法為虹吸、離心、過濾中的一種或幾種。
[0017]所述冷卻洗滌步驟中用到的有機溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一種或幾種。
[0018]所述洗脫步驟中的有機溶劑為乙醇、丙酮、甲醇、甲苯、乙酸乙酯、氯仿中的一種或幾種。
[0019]所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)或液態(tài)。 [0020]所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)。
[0021]浸取過程中用到的溶液中還經常加入微量的NaCl，(NH4)2S04, KCl等鹽類用來加強浸取的效果；在第一次將上清液浸取完畢后，濾渣再重復浸提一次，合并兩次提取液減壓旋蒸除去有機溶劑。
[0022]本發(fā)明與現有方法相比，具有以下優(yōu)點:(I)本發(fā)明首先采用有機溶劑粗提取多酚，產品純度、提取率相對水提取法均有提高，產品的氧化程度相對水提取法較低；(2)本發(fā)明中浸取步驟加入了一定量的抗氧化劑，有效地防止了褐藻多酚的氧化；(3)粗提之后采用大孔樹脂進行吸附分離，這種方法簡單，操作方便，能耗較低，操作條件溫和，避免了有效成分失活，產品收率和純度高利于工業(yè)化、規(guī)?；a。綜上所述，本發(fā)明具有收率高、生產成本低，利于工業(yè)化生產的特點。
【具體實施方式】
[0023]結合具體實施例進行說明。
[0024]實施例1
[0025]通過以下步驟進行褐藻多酚的提取:
[0026]第一步:稱取1000g新鮮海帶，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，然后用自來水反復沖洗干凈，在105°C烘箱內烘至恒重，得到固形物約為100g，用組織搗碎勻漿機破碎；
[0027]第二步:將破碎后的生物原材料按濕重加入0.002%叔丁基對羥基茴香醚(BHA)，與含乙醇70%的水溶液按1: 2的比例混合，充分攪拌后置于超聲波中處理3min，放入60°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取I小時，分離上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
[0028]第三步:置于4°C冷柜中靜止8小時，分離得上清液，用體積比為1:1氯仿水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
[0029]第四步:用大孔樹脂進行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；
[0030]第五步:用含85%乙醇的洗脫劑進行洗脫解吸，并收集目標產物；
[0031]第六步:目標產物經冷凍干燥后得到0.03g褐藻多酚固體，產率為0.3%0。
[0032]實施例2
[0033]通過以下步驟進行褐藻多酚的提取:
[0034]第一步:稱取1000g新鮮海黍子，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，然后用自來水反復沖洗干凈，在105°C烘箱內烘至恒重，得到固形物約為50g，用組織搗碎勻漿機破碎；
[0035]第二步:將破碎后的生物原材料的按濕重加入0.02%的2，6- 二叔丁基化羥基甲苯(BHT)，與含丙酮80%的水溶液按1: 4的比例混合，充分攪拌后置于超聲波中處理6min，放入40°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取2小時，分離上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
[0036]第三步:置于2°C冷柜中靜止6小時，分離得上清液，用體積比為1: 2石油醚水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
[0037]第四步:用大孔樹脂進行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；
[0038]第五步:用含85%丙酮的洗脫劑進行洗脫解吸，并收集目標產物；
[0039]第六:目標產物經冷凍干燥后得到0.15g褐藻多酚固體，產率為3%。。
[0040]實施例3
[0041]通過以下步驟進行褐藻多酚的提取:
[0042]第一步:稱取1000g新鮮鼠尾藻，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，然后用自來水反復沖洗干凈，在105°C烘箱內烘至恒重，得到固形物約為50g，用組織搗碎勻漿機破碎；
[0043]第二步:將破碎后的生物原材料按濕重加入0.004%的2，6- 二叔丁基化羥基甲苯(BHT)和0.004%的亞硫酸鈉，與含甲醇50 %、甲苯25 %的水溶液按1: 3的比例混合，充分攪拌后置于超聲波中處理4min，放入50°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取3小時，分離上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
`[0044]第三步:置于:TC冷柜中靜止6小時，分離得上清液，用體積比為1:1: 3的氯仿:石油醚:水的溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；
[0045]第四步:用大孔樹脂進行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；
[0046]第五步:用含體積比為2: I: 2的甲醇:乙酸乙酯:水的溶液洗脫解吸，并收集目標產物；
[0047]第六步:目標產物經冷凍干燥后得到0.125g褐藻多酚固體，產率為2.5%。。
[0048]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種褐藻多酚的提取方法，其特征在于:用含有褐藻多酚的生物作為原材料，進行以下步驟的操作: 原料預處理:稱取一定量新鮮的含有褐藻多酚的生物原材料，去除沉淀物、浮游植物以及其它附著物，用自來水反復沖洗干凈，烘干、進行破碎；浸取:將破碎后的生物材料按濕重加入0.002~0.02%的抗氧化劑，與含有機溶劑50~90%的水溶液按1: 2~9的比例混合，充分攪拌后置于超聲波中處理3~6min,放入40~80°C恒溫水浴中、振蕩、避光浸取I~6小時，分離得上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑； 冷卻洗滌:將浸取后溶液置于O~4°C冷柜中靜止2~8小時，分離得上清液，用體積比為1:1~4有機溶劑水溶液洗滌上清液，減壓蒸餾除去有機溶劑；吸附:將上述步驟得到的溶液用大孔樹脂進行吸附，吸附飽和后，用2BV蒸餾水洗滌；洗脫:用含50~85%有機溶劑的洗脫劑進行洗脫解吸，并收集目標產物；冷凍干燥:目標產物經冷凍干燥后得到成品褐藻多酚。
2.根據權利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述含有褐藻多酚的生物材料為生活于海洋或淡水中，含有褐色色素的絲狀或絲原植體的藻類。
3.根據權利要求2所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述含有褐藻多酚的生物材料為馬尾藻屬褐藻或海帶屬植物。
4.根據權利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述浸取步驟中加入的抗氧化劑為叔丁基對羥 基茴香醚(BHA)、2，6-二叔丁基化羥基甲苯(BHT)、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉中的一種或幾種。
5.根據權利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述浸取步驟中用到的有機溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一種或幾種。
6.根據權利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述浸取步驟中上清液的分離方法為虹吸、離心、過濾中的一種或幾種。
7.根據權利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述冷卻洗滌步驟中用到的有機溶劑為丙酮、甲醇、甲苯、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚中的一種或幾種。
8.根據權利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述洗脫步驟中的有機溶劑為乙醇、丙酮、甲醇、甲苯、乙酸乙酯、氯仿中的一種或幾種。
9.根據權利要求1所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)或液態(tài)。
10.根據權利要求9所述的褐藻多酚的提取方法，其特征在于:所述最終獲得的褐藻多酚成品為固態(tài)。
【文檔編號】A61K36/03GK103610704SQ201310603063
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月26日 優(yōu)先權日:2013年11月26日
【發(fā)明者】苗強 申請人:威海市宇王集團有限公司