一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，它包括如下重量份數(shù)的組分：制黃精10～20份，枸杞子10～15份，生地黃10～15份，紅景天10～20份，三七粉5～10份，川芎10～15份，干地龍10～15份，葛根10～20份，荷葉10～20份。本發(fā)明還公開(kāi)了上述中藥組合物的制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明中藥組合物的臨床觀察顯示其對(duì)胰島素抵抗、降低血管炎癥因子、抗凝及一定的降糖、降脂、降壓等作用。且藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其了對(duì)炎癥因子有很好的抑制作用及血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用。
【專利說(shuō)明】一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]新近研究認(rèn)為，血管內(nèi)皮損傷是高血壓、高血脂、糖尿病、代謝綜合征及心腦血管疾病共同的病理基礎(chǔ)，是一種低度的全身性血管炎癥狀態(tài)，各種刺激，比如營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩等，導(dǎo)致細(xì)胞因子IL 一 6、TNF-a的分泌增加，作用于肝臟，導(dǎo)致CRP增加，并且通過(guò)抑制胰島素受體酪氨酸激酶的活性而加重胰島素抵抗，這些炎性因子可以直接干擾胰島素信號(hào)的傳導(dǎo)、降低內(nèi)皮型一氧化氮合酶的活性和一氧化氮，造成血管內(nèi)皮功能紊亂，發(fā)揮致炎作用，弓丨起并加重血壓、血脂、血糖等因素的異常及高發(fā)、致殘、致死的心腦血管并發(fā)癥。因此，降低炎癥因子的水平可減輕胰島素抵抗，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而減少心腦血管病變。
[0003]西醫(yī)治療上述疾病，可以說(shuō)是針對(duì)其每一個(gè)特征性表現(xiàn)，分別來(lái)治療高血壓、高血糖和血脂異常，治療只著眼于單個(gè)疾病，如降糖、降壓、調(diào)脂、抗凝、改善循環(huán)等對(duì)癥處理。針對(duì)慢性炎癥反應(yīng)及胰島素抵抗的治療，相關(guān)研究提示，他汀類、非留體抗炎藥、胰島素、噻唑烷二酮類、二甲雙胍等藥物具有減輕血管炎癥狀態(tài)作用，但療效并不確切。中醫(yī)針對(duì)炎癥因子的研究復(fù)方有補(bǔ)陽(yáng)還五湯、參地降糖顆粒(莪術(shù)、生曬參、生地黃、葛根、麥冬、何首烏)；蘆黃顆粒(由黃精、首烏、虎杖、漏蘆、姜黃、紅花等組成)；酸味中藥復(fù)方等均提示有降低炎癥因子的作用，但與本方立法治則藥物均有不同，本方更符合血管炎性病變的病理機(jī)制。
[0004]西藥針對(duì)其每一個(gè)特征性表現(xiàn)治療，如降糖、降壓、調(diào)脂等，但這樣會(huì)帶來(lái)病人需要4-6種以上的藥物的現(xiàn)象，尤其是老年肝腎功能減退，存在一些不利的相互影響及副作用；針對(duì)慢性炎癥反應(yīng)及胰島素抵抗的治療，療效并不確切，其中許多藥還有損傷心、肝、腎、肌酶的副作用，因此患者依從性差，尋求中醫(yī)藥治療的患者較多。中醫(yī)藥對(duì)血管內(nèi)皮炎癥的研究相對(duì)滯后，證型不一，方劑較多，機(jī)理闡述不清。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，該中藥組合物對(duì)炎癥因子有很好的抑制作用，對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞有很好的保護(hù)作用。
[0006]本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題，是提供上述中藥組合物的制備方法。
[0007]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0008] 一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，它包括如下重量份數(shù)的組分:制黃精10~20份，枸杞子10~15份，生地黃10~15份，紅景天10~20份，三七粉5~10份，川彎10~15份，干地龍10~15份，葛根10~20份，荷葉10~20份。
[0009]上述治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，優(yōu)選的，包括如下重量份數(shù)的組分:制黃精20份，枸杞子15份，生地黃12份，紅景天20份，三七粉5份，川芎10份，干地龍10份，葛根20份，荷葉20份。[0010]上述治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物的制備方法，將配方量制黃精、枸杞子、生地黃、紅景天、三七粉、川芎、干地龍、葛根和荷葉混合，加3倍重量的蒸餾水浸泡2小時(shí)，再加3倍重量的蒸餾水煮沸I小時(shí)，收集濾液，重復(fù)加水煎煮三次，收集的濾液經(jīng)濃縮得到浸膏，過(guò)濾，4°C保存。
[0011]上述治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物在制備治療血管內(nèi)皮炎癥損傷疾病藥物中的應(yīng)用。
[0012]其中，所述的血管內(nèi)皮炎癥損傷疾病為高血壓、高血脂、2型糖尿病或代謝綜合征心腦血管并發(fā)癥。
[0013]方中以藥性平和制黃精益氣養(yǎng)陰行血為君藥，枸杞、生地養(yǎng)肝腎之陰，補(bǔ)陰以制陽(yáng)，增液以行舟，三藥共用益氣養(yǎng)陰扶正以治其本，針對(duì)其虛，；紅景天、三七粉、川芎、葛根活血化瘀以暢血行，針對(duì)其瘀；荷葉升清降脂，針對(duì)其濁；干地龍清熱剔絡(luò)，針對(duì)其久病入絡(luò)、干血之象。治瘀、化濁、剔絡(luò)為祛邪治標(biāo)之品。全方標(biāo)本同治共成益氣養(yǎng)陰、化瘀降濁、清熱剔絡(luò)之功，切合相關(guān)疾病血管炎性病變氣陰兩虛、痰瘀內(nèi)阻、久病入絡(luò)的病理機(jī)制。
[0014]黃精根莖中含有黃精多糖、黃精低聚糖、煙酸、醌類、黏液質(zhì)、氨基酸和鋅、銅、鐵等多種人體必需的微量元素。黃精醇提取物可增強(qiáng)心臟收縮力，增加冠脈流量，改善血液流變血參數(shù)和動(dòng)脈粥樣硬化病灶。具有降血壓、抑制高血糖以及防治動(dòng)脈粥樣硬化與肝脂肪浸潤(rùn)等藥理作用；還具有明顯地抗菌和抗病毒作用，可以提高人體免疫力，增加體內(nèi)超氧化物歧化酶的活性，延緩機(jī)體衰老。具有抗氧化、調(diào)血脂的作用，能增強(qiáng)免疫，消除衰老癥狀，改善心血管功能；給實(shí)驗(yàn)性高血脂兔灌服100%黃精煎劑，甘油三酯、β —脂蛋白及膽固醇均見(jiàn)下降。黃精多糖可顯著降低腎上腺素誘發(fā)的高血糖小鼠的血糖值；抗氧化作用；黃精煎液20%濃度，13ml/只喂飲，連續(xù)27天，使小鼠肝臟超氧化物歧化酶(S0D)活性升高，心肌脂褐質(zhì)含量降低。
[0015]生地抗炎、抗過(guò)敏作用地黃煎劑灌胃對(duì)大白鼠甲醛性關(guān)節(jié)炎和蛋清性關(guān)節(jié)炎有明顯的對(duì)抗作用，并能抑制松節(jié)油皮下注射引起的肉芽腫和組胺引起的毛細(xì)血管通透性的增加.地黃水提取液對(duì)組胺引起的血管通透性增加和醋酸引起的小鼠腹膜炎有明顯抑制作用，對(duì)蛋清所致急性炎癥也有抗炎作用，而地黃的醇及醚提取液則無(wú)抗炎作用；能夠激活纖溶系統(tǒng)，并有降低血清膽固醇和三酰甘油的作用，減少心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生；
[0016]枸杞:枸杞多糖是一種水溶性多糖，是枸杞中最主要的活性成分，很多研究表明枸杞多糖具有促進(jìn)免疫、抗衰老、抗腫瘤、清除自由基、抗疲勞、抗輻射、保肝、生殖功能保護(hù)和改善等作用。有降血脂、降血壓、降血糖、抗衰老的作用，實(shí)驗(yàn)證明枸杞多糖對(duì)正常及糖尿病模型動(dòng)物均有降血糖作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，寧夏枸杞子提取物可使大鼠的血糖持續(xù)降低，糖耐量顯著增高，這與枸杞子中含有胍的衍生物有關(guān)。
[0017]葛根可降低血壓、降血糖、降血脂、抗氧化、抑制血小板聚集、改善微循環(huán)障礙，肖立中等探討葛根素對(duì)急性心肌梗死病人梗死面積及脂肪酸代謝、炎癥反應(yīng)及斑塊穩(wěn)定性的影響，葛根素可明顯縮小急性心肌梗死面積，可能與降低血漿自由脂肪酸、抑制炎癥及穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊有關(guān)。
[0018]川芎具有抗血栓、降低血液粘度、加快紅細(xì)胞及血小板電泳速率、有效地抑制腦缺血時(shí)體內(nèi)血小板的激活、減少纖維蛋白原含量，在急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者的治療中可明顯降低CRP增高的程度，提示川芎嗪具有降低炎癥因子、抗炎的作用，其抗炎作用可能是有效治療心腦血管疾病的藥理學(xué)機(jī)制之一。
[0019]紅景天:紅景天苷(salidroside)是傳統(tǒng)中藥紅景天中最重要的有效成份之一，臨床上具有抗疲勞，抗氧化，保肝，改善血液循環(huán)等多種藥理功能。有關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，紅景天苷抑制了 TNF-a、IL-6、IL-10炎癥因子的分泌，這與其mRNA的表達(dá)結(jié)果一致，并呈現(xiàn)劑量依賴性。另外，紅景天苷還能抑制N0、PGE_2的合成。以上數(shù)據(jù)表明，在體外實(shí)驗(yàn)中，紅景天苷能夠通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的分泌而發(fā)揮抗炎作用。結(jié)果顯示，紅景天苷通過(guò)調(diào)控[Ca~(2+)]_丨、。六1^、,-1^41?和？38獻(xiàn)?1(8通路而抑制細(xì)胞因子了,-0、IL_6、IL-1 β分泌和炎性介質(zhì)NO、PGE_2合成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，紅景天苷通過(guò)對(duì)小鼠血清炎性細(xì)胞因子的抑制作用，提高了內(nèi)毒血癥小鼠的生存率，對(duì)小鼠內(nèi)毒素血癥產(chǎn)生較好的預(yù)防和治療作用。
[0020]三七粉主要有效成分PNS、PDS, PTS以及三七氨酸。抗炎作用，PNS對(duì)組胺、醋酸、二甲苯、5-羥色胺，緩激肽等引起的毛細(xì)血管通透性升高具有明顯的抑制作用。對(duì)蛋清、甲醛、右旋糖酐、5-羥色胺、角叉萊膠引起的大鼠足跖腫脹，巴豆油和二甲苯所致的小鼠耳腫脹均有顯著的抑制作用。對(duì)大鼠棉球肉芽腫的形成也有明顯的抑制作用。
[0021]地龍含蚯蚓解熱堿(系酪氨酸的衍生物)、蚯蚓素、蚯蚓毒素、琥珀酸、花生烯酸、地龍BI ;本品還含有含氮物質(zhì)如黃嘌呤、次黃嘌呤、腺嘌呤、膽堿、胍及氨基酸等，具有抗炎、降壓、溶栓、中樞抑制、松弛平滑肌、抑制血栓形成、直接抗癌、解熱、平喘、利尿、抗心律失常作用。尹友生等用地龍粉喂飼腎炎模型大鼠，治療后測(cè)定血清白介素-6顯著低于對(duì)照組。地龍能顯著提高巨噬細(xì)胞活化率、細(xì)胞表面Fe受體功能增強(qiáng)、提高其吞噬中性紅細(xì)胞的能力；明顯地增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的免疫活性，蚯蚓制劑能提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力和降低體內(nèi)丙二醛含量，從而增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力與保護(hù)細(xì)胞作用。
[0022]荷葉具有利尿、通腸毒、解熱、抑菌、解痙、降低血清中甘油三酯和膽固醇含量等作用。荷葉中富含的黃酮類物質(zhì)，是大多數(shù)氧自由基的清除劑，可以提高SOD (超氧化物歧化酶)的活力，減少M(fèi)DA (脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛)及OX — LDL (氧化低密度脂蛋白)的生成；荷葉有降血脂作用。荷葉煎劑治療高脂血癥，I個(gè)療程20日，降膽固醇總有效率達(dá)91.3%，其中顯效37.8%。有資料報(bào)道，荷葉中的生物堿有降血脂作用，且臨床上常用于肥胖癥的治療。
[0023]本發(fā)明組方的優(yōu)勢(shì)在于:
[0024]制黃精、枸杞子、生地黃，益氣養(yǎng)陰，補(bǔ)氣行血，增液行舟，以治其本；
[0025]紅景天、三七粉、川芎、葛根，活血化瘀以暢行血；
[0026]荷葉，升清降濁以化脂質(zhì)；
[0027]干地龍，清熱剔絡(luò)以動(dòng)其瘀；
[0028]諸藥合之，可益氣養(yǎng)陰，化瘀降濁，清熱剔絡(luò)，標(biāo)本同治、扶正祛邪，因而可治療高血壓、高血脂、2型糖尿病、代謝綜合征及心腦血管疾病所反應(yīng)的氣陰兩虛、痰瘀內(nèi)阻，久病入絡(luò)血管內(nèi)皮炎性病變。
[0029]中醫(yī)癥狀積分療效結(jié)果提示，觀察組治療后積分低于對(duì)照組，療效指數(shù)(51.12 ±13.07)高于對(duì)照組(39.23 ±13.67)，觀察組中顯效2例、有效31例、無(wú)效2例，對(duì)照組中有效25例、無(wú)效9例，觀察組療效明顯優(yōu)于對(duì)照組。炎癥因子結(jié)果提示，治療后觀察組CRP、TNF、IL-6水平降低，對(duì)照組水平未見(jiàn)明顯改變，觀察組療效明顯優(yōu)于對(duì)照組。
[0030]本方對(duì)LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞隨著中藥濃度的升高，抑制率有著明顯的降低(P < 0.01具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)，說(shuō)明本方對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥有著良好的保護(hù)作用，TNF-a誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞抑制率沒(méi)有LPS高，但從數(shù)據(jù)上看本方對(duì)其還是有一定的保護(hù)作用(P < 0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)；
[0031]LPS可誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO (P《0.01)，本方可以保護(hù)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥，抑制其釋放NO (高中低都P《0.01)，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
[0032]經(jīng)LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞3中炎癥介質(zhì)有明顯的升高，而加入三個(gè)濃度的本方的細(xì)胞炎癥介質(zhì)的分泌逐漸減少，且p〈0.0I，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明本方通過(guò)對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥具有顯著療效。
[0033]本方對(duì)對(duì)PI3K / Akt信號(hào)通路的影響，由數(shù)據(jù)可知:沒(méi)加抑制劑的情況下:總的akt沒(méi)有變化，磷酸化akt在加入LPS后開(kāi)始減少，隨著加入的中藥低中高三個(gè)濃度后又逐漸增加。在加入抑制劑的情況下pakt、enos及nf_kb加如中藥后都沒(méi)有改變，說(shuō)明本方是通過(guò)PI3K-AKT通路實(shí)現(xiàn)作用的。
[0034]有益效果:本發(fā)明組合物的臨床觀察提示了其對(duì)胰島素抵抗、降低血管炎癥因子、抗凝及一定的降糖、降脂、降壓等作用，藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其了對(duì)炎癥因子有很好的抑制作用及血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用?？捎糜谥委煾哐獕?、高血脂、2型糖尿病、代謝綜合征心腦血管并發(fā)癥所呈現(xiàn)的全身血管炎癥狀態(tài)，降低炎癥因子的水平，減輕胰島素抵抗，從而控制“三高”及心腦血管病變。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1為cck-8法測(cè)該方對(duì)LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。
[0036]圖2為cck-8法測(cè) 該方對(duì)TNF-a誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。
[0037]圖3為細(xì)胞圖片，陰性組(正常臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)。
[0038]圖4為細(xì)胞圖片，陽(yáng)性組(LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞)。
[0039]圖5為細(xì)胞圖片，低濃度組(加入lmg/ml本方及LPS)。
[0040]圖6為細(xì)胞圖片，中濃度組(加入2mg/ml本方及LPS)。
[0041]圖7為細(xì)胞圖片，高濃度組(加入4mg/ml的本方及LPS)。
[0042]圖8為硝酸還原酶法測(cè)加入本方的LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中NO的變化。
[0043]圖9為elisa法測(cè)本方對(duì)LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生TNF_a的影響。
[0044]圖10為elisa法測(cè)本方對(duì)LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的影響。
[0045]圖11為elisa法測(cè)本方對(duì)LPS誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生IL_8的影響。
[0046]圖12為沒(méi)加抑制劑的Western blot檢測(cè)該方對(duì)LPS誘導(dǎo)的HUVEC中Akt蛋白磷酸化表達(dá)的蛋白成像。
[0047]圖13為加抑制劑的PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002后對(duì)該方LPS誘導(dǎo)的HUVEC中Akt以及下游的NF- K B、eNOS活性的蛋白成像。
[0048]圖14為為沒(méi)加抑制劑的Western blot檢測(cè)該方對(duì)LPS誘導(dǎo)的HUVEC中Akt蛋白磷酸化表達(dá)的影響。
[0049]圖15為為加抑制劑的PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002后對(duì)該方LPS誘導(dǎo)的HUVEC下游的eNOS活性的影響。
[0050]圖16為為加抑制劑的PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002后對(duì)該方LPS誘導(dǎo)的HUVEC下游的NF- κ B活性的影響。
[0051]圖17為為加抑制劑的PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002后對(duì)該方LPS誘導(dǎo)的HUVEC中Akt蛋白磷酸化表達(dá)的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0052]根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的內(nèi)容僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書(shū)中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。
[0053]實(shí)施例1:[0054]一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，包括如下重量份數(shù)的組分:制黃精20份，枸杞子15份，生地黃12份，紅景天20份，三七粉5份，川芎10份，干地龍10份，葛根20份，荷葉20份。
[0055]制備工藝:
[0056]上將配方量制黃精、枸杞子、生地黃、紅景天、三七粉、川芎、干地龍、葛根和荷葉混合，加3倍重量的蒸餾水浸泡2小時(shí)，再加3倍重量的蒸餾水煮沸I小時(shí)，收集濾液，重復(fù)加水煎煮三次，收集的濾液經(jīng)濃縮得到浸膏，以一次性針頭過(guò)濾器過(guò)濾浸膏，4°C保存。
[0057]實(shí)施例2:
[0058]一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，包括如下重量份數(shù)的組分:制黃精15份，枸杞子12份，生地黃10份，紅景天15份，三七粉8份，川彎12份，干地龍12份，葛根15份，荷葉15份。
[0059]制備工藝同實(shí)施例1。
[0060]實(shí)施例3:
[0061]一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，包括如下重量份數(shù)的組分:制黃精10份，枸杞子10份，生地黃15份，紅景天10份，三七粉10份，川芎15份，干地龍15份，葛根10份，荷葉10份。
[0062]制備工藝同實(shí)施例1。
[0063]實(shí)施例4:Cck-8法測(cè)本方對(duì)細(xì)胞炎癥的影響(圖1-圖7)。
[0064]分別以LPS、TNF_a和高濃度葡萄糖造模及cck_8法檢測(cè)本方(實(shí)施例1)保護(hù)下的細(xì)胞增殖。
[0065]I實(shí)驗(yàn)?zāi)康?初步探索本方對(duì)細(xì)胞炎癥的保護(hù)作用。
[0066]2實(shí)驗(yàn)儀器=NUAIR的二氧化碳孵箱(美國(guó)NUAIR公司)，LEICA的倒置顯微鏡(德國(guó)LEICA公司)，SpectraMax M5/M5e多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)SpectraMax公司)，Thrmo的全自動(dòng)離心機(jī)(美國(guó)Thrmo公司)。
[0067]3試驗(yàn)試劑=Gibco胎牛血清、胰蛋白酶，Hyclone的DMEM培養(yǎng)基，上海同仁化學(xué)研究所的cck-8試劑，Sigma的LPS (銅綠假單胞菌)。
[0068]4試驗(yàn)方法:cck-8法。
[0069]LPS組:實(shí)驗(yàn)步驟:人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)，培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)液中，其中含10%的胎牛血清，青霉素(60u/ml)，鏈霉素(100mg/l)，37°C下置于含5% 二氧化碳的培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞長(zhǎng)滿后用含0.25%的EDTA的胰蛋白酶消化，離心后在計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)，將2*104/孔的HUVEC接種于96孔板，在上述條件下培養(yǎng)24個(gè)小時(shí)，分為七個(gè)組，第一組為陰性組，第二組為只加lOOug/ml的LPS的陽(yáng)性組，第三到第七組是在陽(yáng)性組的基礎(chǔ)上分別加入了 lmg/ml、2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml的經(jīng)多次過(guò)濾提純的本方。繼續(xù)上法培養(yǎng)24小時(shí)后棄上清液,在96孔板中沒(méi)孔加入cck-8試劑,避光一小時(shí)后在全自動(dòng)酶標(biāo)儀上以450nm處測(cè)定吸光值。
[0070]5實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[0071]5.1經(jīng)過(guò)濃度的摸索，LPS在100ug/ml時(shí)抑制率達(dá)到40%，為理想值，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。
[0072]表1
[0073]
【權(quán)利要求】
1.一種治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，其特征在于，它包括如下重量份數(shù)的組分:制黃精10~20份，枸杞子10~15份，生地黃10~15份，紅景天10~20份，三七粉5~10份，川彎10~15份，干地龍10~15份，葛根10~20份，荷葉10~20份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物，其特征在于，它包括如下重量份數(shù)的組分:制黃精20份，枸杞子15份，生地黃12份，紅景天20份，三七粉5份，川彎10份,干地龍10份，葛根20份，荷葉20份。
3.權(quán)利要求1所述的治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物的制備方法，其特征在于，將配方量制黃精、枸杞子、生地黃、紅景天、三七粉、川芎、干地龍、葛根和荷葉混合，加3倍重量的蒸餾水浸泡2小時(shí)，再加3倍重量的蒸餾水煮沸I小時(shí)，收集濾液，重復(fù)加水煎煮三次，收集的濾液經(jīng)濃縮得到浸膏，過(guò)濾，4°C保存。
4.權(quán)利要求1所述的治療血管內(nèi)皮炎癥損傷的中藥組合物在制備治療血管內(nèi)皮炎癥損傷疾病藥物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的血管內(nèi)皮炎癥損傷疾病為高血壓、高血脂、2型糖尿病或代謝綜合征`心腦血管并發(fā)癥。
【文檔編號(hào)】A61K36/8969GK103566184SQ201310565771
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2013年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月14日
【發(fā)明者】郭宏敏, 陳衛(wèi)平 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)院