專(zhuān)利名稱(chēng)：用于治療tweak 相關(guān)病癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療TWEAK相關(guān)病癥的方法和試劑，該病癥包括心臟、肝臟、腎臟、肺、脂肪、骨骼肌、神經(jīng)、骨、軟骨、皮膚、胃腸道、胰腺、生殖器官和結(jié)締組織疾病。本發(fā)明還涉及用于鑒定治療TWEAK相關(guān)病癥的TWEAK的激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。此外，本發(fā)明涉及表達(dá)編碼TWEAK多肽或其片段、類(lèi)似物或突變體的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，以及用這種動(dòng)物來(lái)鑒定TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。本發(fā)明還涉及用于診斷基于TWEAK表達(dá)的疾病的方法。本發(fā)明還涉及用TWEAK多肽、激動(dòng)劑或拮抗劑來(lái)影響祖細(xì)胞的細(xì)胞增生和分化的方法。
背景技術(shù)：
腫瘤壞死因子家族成員的配體因其結(jié)構(gòu)與TNF-α相似而如此命名，是各種過(guò)程如炎癥反應(yīng)、細(xì)胞免疫和凋亡中的重要成分。TNF配體可能作為II型膜結(jié)合蛋白通過(guò)直接細(xì)胞與細(xì)胞接觸而局部起作用，或作為具有自分泌、旁分泌或內(nèi)分泌功能的分泌蛋白而起作用。TNF家族成員通過(guò)其C末端的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合TNF受體(TNF-R)成員。各種TNF家族成員包括 TNF、淋巴毒素(LT)、Fas、CD27、CD30、CD40、4-lBB、0X-40、TRAMP、CAR-l、TRAIL、GITR、HVEM、osteoprotegrin、NGF、TRAIN、Kay (BAFF)、APRIL 和 TWEAK (TNF 相關(guān)而誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的能力弱。該細(xì)胞因子受體家族的特定特征在于富含半胱氨酸的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，最早通過(guò)兩種不同的TNF受體的分子克隆來(lái)顯示。該家族的基因編碼糖蛋白，特征為I型跨膜蛋白具有細(xì)胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，單一的跨膜結(jié)構(gòu)域和參與激活細(xì)胞功能的胞質(zhì)區(qū)域。富含半胱氨酸的配體結(jié)合區(qū)域具有一個(gè)緊密結(jié)合的二硫鍵連接的核心結(jié)構(gòu)域，根據(jù)特定的家族成員，該核心結(jié)構(gòu)域重復(fù)出現(xiàn)多次。絕大部分的受體具有四個(gè)結(jié)構(gòu)域，雖然可能少至I個(gè)或多達(dá)6個(gè)。TNF家族成員在調(diào)控免疫系統(tǒng)中起作用，控制細(xì)胞存活和分化，以及在急性宿主防御系統(tǒng)如炎癥中起作用。本領(lǐng)域一直在嘗試操作TNF家族成員來(lái)產(chǎn)生治療性效果，這可能提供控制疾病的獨(dú)特方法。例如，該家族的一些配體能夠直接誘導(dǎo)許多被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的程序性死亡，如LT、TNF、Fas配體和TRAIL。Fas和可能TNF以及CD30受體的活化能夠在未被轉(zhuǎn)化的具有免疫調(diào)控功能的淋巴細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。誘導(dǎo)編程細(xì)胞死亡的能力是多個(gè)TNF家族成員的重要和被深入研究的特性。Fas介導(dǎo)的凋亡似乎在外周和可能在胸腺中起調(diào)控自身反應(yīng)淋巴細(xì)胞的作用。此外，TNF和CD30系統(tǒng)與T細(xì)胞和大細(xì)胞退行發(fā)育的淋巴瘤細(xì)胞系的存活相關(guān)。這種細(xì)胞系對(duì)TNF、Fas或LT-β受體信號(hào)響應(yīng)的死亡具有凋亡的特征。TNF家族的配體抗原根據(jù)它們誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的能力被分成三類(lèi)。首先，TNF、Fas配體和TRAIL能夠有效地在許多細(xì)胞系中誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，其受體最可能具有極好的規(guī)則的死亡結(jié)構(gòu)域。大概DR-3的配體(TRAMP/WSL-1)也屬于這一類(lèi)。接著是如TWEAK、⑶30配體和LTalb2等配體，其引起僅限于少數(shù)細(xì)胞的較為微弱的死亡信號(hào)。在這些系統(tǒng)中進(jìn)行的研究已經(jīng)證明，存在分開(kāi)的較微弱的死亡信號(hào)機(jī)制。最后，存在不能有效地遞送死亡信號(hào)的成員?？赡芩蓄?lèi)別的配體都對(duì)一些細(xì)胞類(lèi)型產(chǎn)生抗增生作用，結(jié)果誘導(dǎo)細(xì)胞分化，如CD40?？傊劳鍪怯晌挥赥NF受體的胞質(zhì)一側(cè)的死亡結(jié)構(gòu)域集聚后引發(fā)的。這些死亡結(jié)構(gòu)域協(xié)調(diào)各種信號(hào)傳導(dǎo)成分的組裝，引起caspase級(jí)聯(lián)活化。一些受體缺乏規(guī)則的死亡結(jié)構(gòu)域，如LTb受體和CD30，但是能夠誘導(dǎo)細(xì)胞死亡，盡管較為微弱。相反，通過(guò)其他路徑如CD40發(fā)送信號(hào)是維持細(xì)胞存活所必需的。還需要進(jìn)一步鑒定和表征TNF家族成員的功能，從而便于開(kāi)發(fā)用于TNF家族相關(guān)疾病的新治療方法。TWEAK在篩選雜交到促紅細(xì)胞生成素探針的RNA中被分離。Chicheportiche等， J. Biol. Chem. 272:32401-32410 (1997) 0小鼠和人的肽具有異乎尋常的高度保守性，包括在受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域中具有93%氨基酸同一性。TffEAK被證實(shí)高效地從細(xì)胞中分泌，在許多組織中豐富地被表達(dá)，包括心臟、大腦、胎盤(pán)、肺、肝臟、骨骼肌、腎臟、胰腺、脾臟、淋巴結(jié)、胸腺、闌尾和外周血液淋巴細(xì)胞。一種已知的TWEAK受體是Fnl4，生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)的立即早期反應(yīng)基因，其降低對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的細(xì)胞附著和減弱血清刺激的生長(zhǎng)和遷移(Me i ghan-Mantha等，J. B i ο I.Chem. 274:33166-33176(1999))。Fnl4已經(jīng)被證明會(huì)被FGF、小牛血清和氟波醇酯(phorbolester)處理誘導(dǎo)，并且在心臟、腎臟、肺、皮膚、骨骼肌、卵巢和胰腺組織中，以及在肝細(xì)胞癌模型和其他癌細(xì)胞系中以相對(duì)高的水平被表達(dá)，在正常肝臟組織中以較低水平被表達(dá)。TffEAK與許多生物學(xué)過(guò)程相關(guān)。例如，用IFN- Y和TWEAK處理的HT29細(xì)胞被證明發(fā)生凋亡；盡管TWEAK誘導(dǎo)凋亡的能力是微弱的，并且僅少數(shù)細(xì)胞類(lèi)型易感。Chich印ortiche 等，J. Biol. Chem. 272:32401-32410(1997)。相反，TWEAK 已經(jīng)被證明在不依賴(lài)VEGF的路徑中誘導(dǎo)血管發(fā)生和內(nèi)皮細(xì)胞增生。Lynch等，J. Biol.Chem. 274:8455-8459 (1999)。星細(xì)胞被TWEAK特異地結(jié)合和刺激。TWEAK能夠滲入發(fā)炎的大腦中來(lái)影響星細(xì)胞的行為。暴露于TWEAK的星細(xì)胞分泌大量IL-6和IL-8，并上調(diào)ICAM-I表達(dá)。Saas 等，GLIA32:102-107 (2000)。TffEAK還與免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)相關(guān)。在用IFN- Y刺激時(shí)，單核細(xì)胞迅速地表達(dá)TWEAK，抗TWEAK的抗體部分地抑制它們對(duì)人鱗狀細(xì)胞癌的細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。抗TWEAK和抗TRAIL的抗體的結(jié)合幾乎完全抑制細(xì)胞毒性。Nakayama等，J. Exp.Med. 192:1373-1379(2000)。相反TWEAK的mRNA在用脂多糖(LPS)處理的小鼠中迅速消失，脂多糖是免疫炎癥反應(yīng)的誘導(dǎo)物。此外，在小鼠模型的自體免疫溶血性貧血和系統(tǒng)性紅斑狼瘡中，TWEAK的mRNA也減少。這些數(shù)據(jù)表明，下調(diào)TWEAK的表達(dá)是急性和慢性炎癥中的重要事件。Chicheportiche 等，Biochem. Biophys. Res. Comm. 279:162-165 (2000)。當(dāng)前，本領(lǐng)域缺乏對(duì)哪些病癥或疾病與TWEAK表達(dá)和功能相關(guān)的完整了解，包括TffEAK在炎癥和非炎癥病癥中的作用。發(fā)明概述本發(fā)明涉及TWEAK對(duì)于促進(jìn)各種病理狀況的嚴(yán)重性和進(jìn)展中的作用，包括多種組織和器官系統(tǒng)的疾病。這種病理狀況包括急性心臟損傷，慢性心力衰竭，非炎癥性充血性心肌病，充血性心力衰竭，肝臟上皮細(xì)胞增生，肝細(xì)胞死亡，肝臟纖維變性，肝細(xì)胞液泡化，其他肝臟損傷，膽管病癥，包括膽管增生，炎癥性腎臟病癥，如多病灶(multifocal)炎癥性、非炎癥性腎臟病癥，如腎小管腎病，腎小管增生，腎小球囊腫，腎小球腎病，Alport綜合癥，腎小管液泡化，腎透明管型(kidney hyaline cast)，腎纖維變性和炎癥性肺病，本發(fā)明建立了 TWEAK分子與某些心臟、肝臟、腎臟和肺疾病之間的因果關(guān)系。在此公開(kāi)的本發(fā)明還建立了 TWEAK與肝臟組織、腎小管、皮膚細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、骨骼肌、軟骨和骨的祖細(xì)胞，以及結(jié)締組織細(xì)胞類(lèi)型，如骨髓中的基質(zhì)細(xì)胞，以及成纖維細(xì)胞的行為之間的聯(lián)系。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療TWEAK相關(guān)病癥的方法，所述病癥即其中TWEAK的受體如FN14被表達(dá)的各種疾病，損傷情況或組織的其他病理狀況。這些病癥包括纖維變性，心肌病，和腎臟、肺、肝臟、皮膚、骨骼肌、脂肪代謝(如肥胖)、胃腸道、胰腺、生殖器官、神經(jīng)組織(包括神經(jīng)退行性病變)，軟骨、骨和結(jié)締組織的疾病。在優(yōu)選實(shí)施方案中，TWEAK相關(guān)病癥實(shí)質(zhì)上是非炎癥性的。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通過(guò)干擾TffEAK與其分子受體之間的相互作用來(lái)治療TWEAK相關(guān)病癥的方法。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑，和包含它們的用于治療TWEAK相關(guān)病癥的藥物組合物。這種TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑(即抑制劑)可能是抗TffEAK抗體或其衍生物；抗TWEAK受體抗體或其衍生物；TWEAK多肽片段；TWEAK多肽類(lèi)似物；TWEAK突變蛋白；TWEAK模擬物；TWEAK融合蛋白；TWEAK受體多肽片段；TWEAK受體多肽類(lèi)似物；TWEAK受體突變蛋白；TWEAK受體模擬物；TWEAK受體融合蛋白；有機(jī)化合物；和無(wú)機(jī)化合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑和用于治療需要組織再生或替換的宿主的藥物組合物。還涉及TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑在體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)祖細(xì)胞(progenitor)的群體的行為中的用途。該祖細(xì)胞可以是肝臟細(xì)胞類(lèi)型、腎小管、心肌細(xì)胞、肺細(xì)胞類(lèi)型、皮膚細(xì)胞類(lèi)型、骨骼肌細(xì)胞類(lèi)型、脂肪細(xì)胞、胃腸細(xì)胞類(lèi)型、胰腺細(xì)胞類(lèi)型、神經(jīng)組織細(xì)胞類(lèi)型、軟骨和骨細(xì)胞類(lèi)型、結(jié)締組織細(xì)胞類(lèi)型的前體(precursor)細(xì)胞,包括骨髓中的基質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑以及包含它們的藥物組合物可以被體內(nèi)施用來(lái)促進(jìn)在疾病或組織損傷狀況下的組織再生和替換，包括但不限于毒素、病毒、化學(xué)治療或放射物導(dǎo)致的損害，和遺傳性或退化性異常。在另一個(gè)實(shí)施方案中，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑和它們的藥物組合物可以與用干細(xì)胞或祖細(xì)胞的細(xì)胞治療聯(lián)合，用于再生組織和器官系統(tǒng)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干細(xì)胞或祖細(xì)胞群體可以在體外用TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑以及它們的組合物擴(kuò)增。通過(guò)使用TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑擴(kuò)增的祖細(xì)胞群體可以被移植到需要再生或替換組織的宿主中。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及鑒定用作TWEAK相關(guān)病癥治療的治療劑的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及表達(dá)編碼TWEAK多肽的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括TWEAK作為疾病的分子標(biāo)志的用途。更具體地，本發(fā)明涉及 I. 一種用于治療機(jī)體中的TWEAK相關(guān)病癥的方法，包括將TWEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑施用給所述機(jī)體的步驟，其中所述TWEAK相關(guān)病癥選自纖維變性；心臟?。桓闻K疾?。环尾考膊。荒I臟疾??；皮膚病；骨骼肌疾??；脂肪組織疾??；胃腸道疾??；胰腺疾病；生殖器官疾??；神經(jīng)疾病；軟骨疾??；骨??；結(jié)締組織疾病；細(xì)胞死亡；或表達(dá)TWEAK受體的組織的病理狀況。2.項(xiàng)I的方法，其中所述TWEAK相關(guān)病癥是非炎癥的病癥。3.項(xiàng)2的方法，其中所述TWEAK相關(guān)病癥是非炎癥性的心肌病。4.項(xiàng)I或2的方法，其中所述表達(dá)TWEAK受體的組織的病理狀況選自纖維變性；心肌?。荒I臟病癥；肺部病癥；肝臟病癥；皮膚病癥；骨骼肌病癥；脂肪組織病癥；胃腸道病癥；胰腺病癥；生殖器官病癥神經(jīng)組織病癥；軟骨病癥；骨病癥；或結(jié)締組織病癥。5.項(xiàng)I或2的方法，其中所述TWEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑選自抗TffEAK抗體；抗TWEAK受體的抗體；TWEAK多肽片段；TWEAK多肽類(lèi)似物；TWEAK突變蛋白；TWEAK模擬物；TWEAK融合蛋白；TWEAK受體多肽片段；TWEAK受體多肽類(lèi)似物；TWEAK受體突變蛋白；TWEAK受體模擬物；TWEAK受體融合蛋白；有機(jī)化合物；或無(wú)機(jī)化合物。6.項(xiàng)I或2的方法，其中所述TWEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑被施用給所述機(jī)體，給藥途徑選自注射、經(jīng)粘膜、口服、吸入、眼部、直腸、支架植入、體表、胃腸外、長(zhǎng)效植入、緩釋、基因治療或耳朵的路徑。7.項(xiàng)I或2的方法，其中所述TWEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑在呈遞的劑型中，該劑型選自片劑、藥丸、脂質(zhì)體、顆粒、球體、糖衣丸、膠囊、液體、凝膠、果汁、糖漿、懸浮液、支架包被或緩釋制劑。8. 一種用于治療機(jī)體中的TWEAK相關(guān)病癥的方法，包括將能夠干擾第一種TWEAK多肽與分子的作用的TWEAK拮抗劑施用給所述機(jī)體的步驟，所述分子選自細(xì)胞受體、第二種TWEAK多肽和與TWEAK相互作用的配偶體。9.用于鑒定作為T(mén)WEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑的化合物的方法，包括步驟(a)將表達(dá)編碼TWEAK多肽、或其片段或突變蛋白的外源DNA的試驗(yàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物暴露于所述化合物；(b)將來(lái)自所述試驗(yàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的纖維變性的、心臟、腎臟、肝臟、肺、皮膚、骨骼肌、月旨肪、胃腸道、胰腺、生殖器官、神經(jīng)、軟骨、骨或結(jié)締組織與來(lái)自表達(dá)外源DNA但是不被暴露于所述化合物的參比動(dòng)物的相應(yīng)的器官或組織比較；和(c)確定該化合物是否影響所述試驗(yàn)動(dòng)物的纖維變性的、心臟、腎臟、肝臟、肺、皮膚、骨骼肌、脂肪、胃腸道、胰腺、生殖器官、神經(jīng)、軟骨、骨或結(jié)締組織。10.項(xiàng)9的方法，其中所述化合物選自=TWEAK多肽；TWEAK多肽片段；TWEAK多肽類(lèi)似物；TWEAK突變蛋白；TWEAK模擬物；TWEAK融合蛋白；TWEAK受體多肽；TWEAK受體多肽片段；TWEAK受體多肽類(lèi)似物；TWEAK受體突變蛋白；TWEAK受體模擬物；TWEAK受體融合蛋白；有機(jī)化合物；或無(wú)機(jī)化合物。11.項(xiàng)9的方法，其中所述化合物是抗一種抗原的抗體，該抗原選自TWEAK多肽；TffEAK多肽片段；TWEAK突變蛋白；TWEAK模擬物；TWEAK融合蛋白；TWEAK受體多肽；TWEAK受體片段；TWEAK受體突變蛋白；TWEAK受體模擬物；TWEAK受體融合蛋白；表達(dá)TWEAK多肽，其片段、突變蛋白或融合蛋白的細(xì)胞；和表達(dá)TWEAK受體多肽，其片段、突變蛋白或融合蛋白的細(xì)胞。12.項(xiàng)9的方法，其中所述試驗(yàn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物和所述參比轉(zhuǎn)基因動(dòng)物各選自小鼠；大鼠；倉(cāng)鼠；兔；狗；貓；牛；豬；山羊 ’馬;綿羊；豚鼠；鳥(niǎo)；靈長(zhǎng)類(lèi)；魚(yú)；兩棲類(lèi)；昆蟲(chóng)；或無(wú)脊椎動(dòng)物。13.項(xiàng)9的方法鑒定的化合物，其中所述化合物選自=TWEAK多肽；TWEAK多肽片段；TWEAK多肽類(lèi)似物；TWEAK突變蛋白；TWEAK模擬物；TWEAK融合蛋白；TWEAK受體多肽；TffEAK受體多肽片段；TWEAK受體多肽類(lèi)似物；TWEAK受體突變蛋白；TWEAK受體模擬物；TffEAK受體融合蛋白；抗TWEAK多肽的抗體，或其片段、類(lèi)似物、突變蛋白、模擬物或融合蛋白；抗TWEAK受體多肽，或其片段、類(lèi)似物、突變蛋白、模擬物或融合蛋白的抗體；有機(jī)化合物；或無(wú)機(jī)化合物。14.項(xiàng)13的化合物，其中所述抗體是多克隆抗體。
15.項(xiàng)13的化合物，其中所述抗體是單克隆抗體。16.項(xiàng)15的化合物，其中所述單克隆抗體是人源化抗體。17.項(xiàng)14或15的化合物，其中所述抗體是異種抗體。18. 一種表達(dá)編碼TWEAK多肽的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述表達(dá)導(dǎo)致選自如下的病癥纖維變性；心肌?。荒I臟疾?。桓闻K疾??；肺疾??；皮膚疾病；骨骼肌疾??；脂肪組織疾??；胃腸道疾??；胰腺疾??；生殖器官疾??；神經(jīng)疾?。卉浌羌膊。还遣。唤Y(jié)締組織疾?。换蚣?xì)胞死亡。19.項(xiàng)18的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述動(dòng)物選自小鼠；大鼠；倉(cāng)鼠；兔；狗；貓；牛;豬；山羊；馬；綿羊；豚鼠；鳥(niǎo)；靈長(zhǎng)類(lèi)；魚(yú)；兩棲類(lèi)；昆蟲(chóng)；或無(wú)脊椎動(dòng)物。20.項(xiàng)18的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述DNA由組成型啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。21.項(xiàng)18的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述DNA由誘導(dǎo)型啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。22.項(xiàng)18的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述DNA由組織特異性啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。23.項(xiàng)18的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述TWEAK多肽選自全長(zhǎng)TWEAK多肽；可溶性TffEAK多肽；突變蛋白；或TWEAK多肽片段。24.表達(dá)編碼TWEAK多肽的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述DNA在選自下面的器官或組織中被表達(dá)心臟；血管；肺；肝臟；腎臟；皮膚；神經(jīng)；胎盤(pán)；骨骼?。灰认?；脾；淋巴；胸腺；闌尾；外周血液淋巴細(xì)胞；生殖器官；脂肪組織；胃腸組織；軟骨；骨；或結(jié)締組織。25.項(xiàng)24的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述DNA由組成型啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。26.項(xiàng)24的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述DNA由誘導(dǎo)型啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。27.項(xiàng)24的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，其中所述DNA由組織特異性啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。28.用于在機(jī)體中鑒定充血性心肌病的方法，包含在所述機(jī)體中檢測(cè)TWEAK蛋白表達(dá)、TWEAK蛋白功能、TffEAKmRNA表達(dá)的變化或染色體改變的步驟。29.項(xiàng)28的方法，其中所述TWEAK蛋白表達(dá)、TWEAK蛋白功能、TWEAKmRNA表達(dá)的變化或染色體改變通過(guò)選自下面的方法檢測(cè)(a)免疫分析；(b)免疫組織化學(xué)分析；(c)酶的或其他蛋白功能的分析；(d) Northern印跡；(e) Southern印跡；(f)單核苷酸多形性分析；或(g)熒光原位雜交分析。30.用于影響細(xì)胞增殖或分化的方法，包括將祖細(xì)胞暴露于TWEAK肽、TffEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑。31.項(xiàng)30的方法，其中所述祖細(xì)胞選自(a)干細(xì)胞；(b)全能細(xì)胞；(c)多潛能細(xì)胞；⑷多能細(xì)胞；(e)雙能細(xì)胞；(f)組織特異性細(xì)胞；(g)胚胎細(xì)胞；或(h)成體細(xì)胞。32.項(xiàng)30的方法，其中所述祖細(xì)胞是未分化的脂肪細(xì)胞。33.項(xiàng)30的方法，其中所述祖細(xì)胞是未分化的生肌細(xì)胞。
34.促進(jìn)組織替換或再生的方法，包括給需要組織替換或再生的機(jī)體施用一種化合物，該化合物選自(a)抗TWEAK抗體；(b)抗TWEAK受體抗體；(c) TffEAK多肽片段；(d)TffEAK多肽類(lèi)似物；(e) TffEAK突變蛋白；(f) TffEAK模擬物；(g) TffEAK融合蛋白；(h) TffEAK受體多肽片段；(i) TffEAK受體多肽類(lèi)似物；(J)TffEAK受體突變蛋白；(k) TWEAK受體模擬物；(I) TffEAK受體融合蛋白；(m)有機(jī)TWEAK激動(dòng)劑；(η)有機(jī)TWEAK拮抗劑；(ο)無(wú)機(jī)TWEAK激動(dòng)劑；或(P)無(wú)機(jī)TWEAK拮抗劑。35.項(xiàng)1、30和34的任何一項(xiàng)的方法，其中所述方法與祖細(xì)胞或組織移植治療聯(lián)
合應(yīng)用。36.項(xiàng)35的方法，其中所述細(xì)胞或組織移植治療擴(kuò)增細(xì)胞群體。
37.項(xiàng)30的方法，其中所述祖細(xì)胞是未分化的軟骨細(xì)胞。38.項(xiàng)30的方法，其中所述祖細(xì)胞是未分化的骨細(xì)胞。39.項(xiàng)30的方法，其中所述祖細(xì)胞是未分化的結(jié)締組織細(xì)胞。40. TWEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑在制備用于在機(jī)體中治療TWEAK相關(guān)病癥的藥物組合物中的用途，其中所述TWEAK相關(guān)病癥選自(a)纖維變性；(b)心臟??；(c)肝臟疾病；(d)肺疾病；(e)腎臟疾??；(f)皮膚病；(g)骨骼肌疾??；(h)脂肪組織疾??；⑴胃腸道疾病；(j)胰腺疾??；(k)生殖器官疾??；⑴神經(jīng)疾病；(m)軟骨疾?。?η)骨??；(ο)結(jié)締組織疾病；(P)細(xì)胞死亡；或(q)表達(dá)TWEAK受體的組織的病理狀況。41.項(xiàng)40的用途，其中所述TWEAK激動(dòng)劑或TWEAK拮抗劑選自(a)抗TWEAK抗體；(b)抗TWEAK受體抗體；(c) TffEAK多肽片段；(d) TWEAK多肽類(lèi)似物；(e) TffEAK突變蛋白；(f) TffEAK模擬物；(g) TffEAK融合蛋白；(h) TffEAK受體多肽片段；⑴TWEAK受體多肽類(lèi)似物；(j) TWEAK受體突變蛋白；(k) TffEAK受體模擬物；⑴TWEAK受體融合蛋白；(m)有機(jī)化合物；或(η)無(wú)機(jī)化合物。42. TffEAK拮抗劑在制備用于在機(jī)體中治療TWEAK相關(guān)病癥的藥物組合物中的用途，其中所述TWEAK拮抗劑能夠干擾第一種TWEAK多肽與一種分子的作用，該分子選自細(xì)胞受體、第二種TWEAK多肽和與TWEAK相互作用的配偶體。


附圖I :顯示TWEAK在充血性心肌病中的作用。A. FL-TffEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠表現(xiàn)為右側(cè)心房和心室栓塞，并且嚴(yán)重?cái)U(kuò)張。B.顯示正常的心臟作為比較。附圖2 :TWEAK在心臟中過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致心臟重塑(cardiac remodeling)。在用包含小鼠TWEAK DNA的腺病毒載體感染成年C57BL/6小鼠后第20天，在IOX放大倍數(shù)下觀察用蘇木精/曙紅染色的心臟的橫截面，與腺病毒一 GFP對(duì)照構(gòu)建體比較。附圖3 =TWEAK誘導(dǎo)膽管和卵形細(xì)胞(oval cell)增生，如與2周齡和7月齡的非轉(zhuǎn)基因(NTg)同窩小鼠相比，F(xiàn)L-TWEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠中所顯示。附圖4:在與非轉(zhuǎn)基因(NTg)同窩小鼠相比時(shí)，在FL-TWEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠中，對(duì)膽管上皮和卵形細(xì)胞標(biāo)記特異的A6mAb的染色增加，這表明TWEAK誘導(dǎo)膽管和卵形細(xì)胞增生。附圖5 :在FL-TWEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠的門(mén)脈區(qū)中存在大的、卵形細(xì)胞，這表明TffEAK誘導(dǎo)卵形細(xì)胞增生。
附圖6 :與非轉(zhuǎn)基因(NTg)同窩小鼠相比，TffEAK在FL-TWEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠中引起肝細(xì)胞液泡化。附圖7 :用包含小鼠TWEAK DNA的腺病毒載體感染的小鼠中的血清TWEAK水平。附圖8 =TWEAK在肝臟中過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致肝細(xì)胞死亡和膽管增生。在用包含小鼠TWEAK DNA的腺病毒載體感染成年C57BL/6小鼠后第3和11天，在20X放大倍數(shù)下觀察用蘇木精/曙紅染色的肝臟的橫截面，與腺病毒一 GFP對(duì)照構(gòu)建體比較。附圖9 :在CCl4引起肝臟損傷后，TWEAK受體Fnl4在小鼠中被誘導(dǎo)。在正常小鼠肝臟和014損傷的肝臟中原位雜交Fnl4mRNA，表明如果在正常的成年肝臟中有任何可檢測(cè)的表達(dá)，也是微弱的，而在損傷后顯著地誘導(dǎo)Fnl4表達(dá)。蘇木精/曙紅(H&E)染色的切片展示相應(yīng)的正常健康的肝臟和CC14損傷的肝臟組織。附圖10 :在膽管結(jié)扎的小鼠模型中，膽管上皮細(xì)胞中Fnl4表達(dá)被上調(diào)，用于原位 雜交的直接抗Fnl4的反義mRNA探針的染色增加表明了這一點(diǎn)。蘇木精/曙紅(H&E)染色的切片展示在明視野顯微鏡下的相應(yīng)切片。附圖11 :在2周齡、8周齡和7月齡時(shí)，與非轉(zhuǎn)基因(NTg)小鼠的腎臟比較的FL-TffEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠腎臟的橫截面。這些結(jié)果表明在8周齡和7月齡的TWEAK Tg小鼠腎臟中腎小管嗜堿性，腎小球中的儲(chǔ)尿腔(urinary space)擴(kuò)張，即腎小球囊腫，在7月齡具有近端嗜堿性腎小管。附圖12 :具有H&E染色的FL-TWEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠的腎臟的橫截面。A.表示鄰近的近端腎小管上皮嗜堿性的腎小球腎病。B.節(jié)段性腎小球膜的細(xì)胞過(guò)多(segmentalmesangial hypercellularity)、腎小囊上皮肥大、和腎小囊增厚。附圖13 :來(lái)自?xún)芍籉L-TWEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠腎臟的連續(xù)切片，用H&E(上面)和擴(kuò)增的細(xì)胞核抗原(PCNA)(下面)染色。嗜堿性腎小管對(duì)應(yīng)于表達(dá)PCNA的腎小管，即增生的腎小管。附圖14 =FL-TffEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠腎臟的連續(xù)切片，用H&E、得自T. Purpureas的凝集素(近端腎小管的標(biāo)記)和得自A. Hypogaea的凝集素(遠(yuǎn)端腎小管的標(biāo)記)標(biāo)記。結(jié)果表明嗜堿性腎小管不表達(dá)任何上皮標(biāo)記。附圖15 =TWEAK在腎臟中過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致腎小管增生和腎小球腎病。在用包含小鼠TWEAK DNA的腺病毒載體感染成年C57BL/6小鼠后第11天，在20X和40X放大倍數(shù)下觀察用蘇木精/曙紅染色的腎臟的橫截面，與腺病毒一 GFP對(duì)照構(gòu)建體比較。附圖16 =TffEAK mRNA在整個(gè)成年野生型小鼠腎臟中廣泛的表達(dá)。在5X倍數(shù)下觀察蘇木精染色的腎臟的橫截面，或在用正義或反義TWEAK探針原位雜交后，在暗視野顯微鏡下觀察。附圖17 :Fnl4mRNA在野生型小鼠腎臟的外層髓質(zhì)的近端腎小管中被表達(dá)。在5X倍數(shù)下觀察蘇木精染色的腎臟的橫截面，或在用正義或反義Fnl4探針原位雜交后，在暗視野顯微鏡下觀察。附圖18 =TffEAK在腎臟纖維變性中的作用，得到Alports腎臟中的Fnl4mRNA上調(diào)的支持。Fnl4mRNA水平上升的倍數(shù)以?xún)芍环謩e具有導(dǎo)致Alports疾病的突變的小鼠在4，5，6和7周齡與野生型動(dòng)物比較來(lái)表示。mRNA水平通過(guò)與含有對(duì)應(yīng)于一部分Fnl4基因的核苷酸序列的基因芯片雜交來(lái)確定。在第4和7周，給出兩只小鼠中每只小鼠的重復(fù)結(jié)果(分別用小鼠I重復(fù)和小鼠2重復(fù)柱來(lái)表示)。在第7周，F(xiàn)nl4mRNA在疾病被抑制的兩種情況下降低，即sTGF R-Fc處理和在VLA-I敲除的小鼠中(在附圖18中或者用sTGFP R-Fc處理的兩只單個(gè)小鼠("sTGFbR處理〃)或者兩只單個(gè)的Alport/VLA-IKO小鼠("Alport/VLA-1K0")表示。附圖19 :在一種腎臟纖維變性小鼠模型，單側(cè)輸尿管阻塞(UUO)中用TWEAK拮抗劑處理顯著地降低腎臟纖維變性。三色一馬森(Trichrome-Masson)染色的石臘腎臟切片上的藍(lán)色染色區(qū)域(纖維變性區(qū)域)的結(jié)構(gòu)改變的量化表明，膠原質(zhì)含量在AB. Gll (抗TffEAK單克隆Ab)處理的腎臟樣本中下降到與在sTGF-β R-Ig陽(yáng)性對(duì)照樣本中觀察的水平相似的水平。相反，同種型對(duì)照倉(cāng)鼠抗體(ΗΑ4/8)處理的腎臟沒(méi)有顯示出腎臟纖維變性降低，與載體(PBS)處理的腎臟類(lèi)似。附圖20 =TffEAK轉(zhuǎn)基因在肺中引起肉芽腫性和淋巴組織細(xì)胞炎癥。Α.用Η&Ε染色 的來(lái)自FL-TWEAK轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠肺的橫截面。B.用Η&Ε染色的來(lái)自sTWEAK(Tg)小鼠肺的橫截面。附圖21:TWEAK mRNA在成年野生型小鼠的內(nèi)襯于肺的支氣管和肺泡的細(xì)胞中被表達(dá)。在IOX放大倍數(shù)下用蘇木精染色觀察肺的橫截面，或者在用正義或反義TWEAK探針原位雜交后在暗視野顯微鏡下觀察。附圖22 :Fnl4mRNA在成年野生型小鼠的支氣管和肺泡中被表達(dá)。在IOX放大倍數(shù)下用蘇木精染色觀察肺的橫截面，或者在用正義或反義Fnl4探針原位雜交后在暗視野顯微鏡下觀察。附圖23 =TffEAK在體外對(duì)3T3-L1細(xì)胞脂肪細(xì)胞分化的抑制作用。3T3-L1細(xì)胞被采用標(biāo)準(zhǔn)方法誘導(dǎo)來(lái)進(jìn)行分化。在第O天，細(xì)胞不被處理、用對(duì)照試劑(重組的可溶性人CD40L-FLAG100ng/ml)或100ng/ml各種形式的TWEAK (重組可溶性人TWEAK-FLAG、重組可溶性人TWEAK、Fe-人TWEAK)處理，以及地塞米松和胰島素，并且每天補(bǔ)充。在一個(gè)試驗(yàn)組中，阻斷性抗TWEAK mAb AB. Gll還與Fc_hTWEAK同時(shí)被加入。在第7天用Oil-red O染色細(xì)胞。附圖24 =TffEAK在體外對(duì)肌細(xì)胞生成的抑制作用。C2C12成肌細(xì)胞在DMEM基礎(chǔ)生長(zhǎng)培養(yǎng)液中生長(zhǎng)到接近匯合，在第O天被轉(zhuǎn)移到含有2%馬血清的低血清分化培養(yǎng)液中來(lái)引發(fā)分化。細(xì)胞不被處理或在第O天用Fc-hTWEAK(100ng/ml)處理。使用相差顯微鏡來(lái)檢測(cè)肌管形成，在分化的第6天拍攝照片。在另一個(gè)試驗(yàn)組中，F(xiàn)nl4-Fc或中和性抗TNF抗體與Fc-hTWEAK同時(shí)被加入，從而證明Fc-hTWEAK的抑制作用是TWEAK特異的，不是通過(guò)TNF調(diào)節(jié)。附圖25 =TWEAK能夠結(jié)合到人間充質(zhì)干細(xì)胞上。人間充質(zhì)干細(xì)胞(hMSCs)用重組的的Fc-TWEAK蛋白培養(yǎng)，接著用PE-偶聯(lián)的山羊抗人Fe或山羊抗小鼠Fe第二抗體培養(yǎng)。Fc-TWEAK結(jié)合hMSCs的能力采用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)分析測(cè)定。背景染色通過(guò)單獨(dú)用第二抗體染色(僅用第二抗體)來(lái)提供。發(fā)明詳述除非本文特別指出，所用的與本發(fā)明有關(guān)的科技術(shù)語(yǔ)具有與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解相同的含義。此外，除非上下文另有規(guī)定，單數(shù)術(shù)語(yǔ)包括復(fù)數(shù)形式，而復(fù)數(shù)術(shù)語(yǔ)包括單數(shù)形式。一般地，本文所描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)物、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)、病毒和蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)和雜交所用的相關(guān)命名和技術(shù)是本領(lǐng)域那些公知和常用的。除非特別指出，本發(fā)明的方法和技術(shù)通常按照本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法進(jìn)行，這些方法被描述在本說(shuō)明書(shū)全文中所引用和討論的各種概括或特定參考文獻(xiàn)中。參見(jiàn)，如Sambrook等 Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第二版，Cold Spring Harbor LaboratoryPress, Cold Spring Harbor,紐約(1989)和 Ausubel 等，Current Protocols in MolecularBiology, Greene Publishing Associates (1992),以及 Harlow 和 Lane Antibodies: ALaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,紐約(1990)，在此引入作為參考。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)按照生產(chǎn)商的說(shuō)明進(jìn)行，如本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)或本文所描述。與分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)、和醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)相關(guān)的所用命名，和實(shí)驗(yàn)室操作和技術(shù)，是本領(lǐng)域熟知和通常使用的。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)被用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和呈遞，以及治療患者。
為了本文所描述的發(fā)明被更加充分地理解，給出如下的詳細(xì)描述。在本說(shuō)明書(shū)中使用如下術(shù)語(yǔ)“抗體”是指完整的免疫球蛋白，或指其抗原結(jié)合部分，該部分可與完整抗體競(jìng)爭(zhēng)而與抗原特異性結(jié)合。抗原結(jié)合部分可以通過(guò)重組DNA技術(shù)或通過(guò)酶促或化學(xué)裂解完整抗體來(lái)制備?？乖Y(jié)合部分包括，例如，F(xiàn)ab、Fab’、F(ab’)2、Fv、dAb和互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙抗和含有至少一部分免疫球蛋白的多肽，該部分免疫球蛋白足以賦予該多肽特異性結(jié)合抗原的能力。Fab片段是單價(jià)片段，由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成；F(ab’)2片段是雙價(jià)片段，其包含在鉸鏈區(qū)通過(guò)二硫鍵連接的兩個(gè)Fab片段；Fd片段由VH和CHI結(jié)構(gòu)域組成；Fv片段由VL和抗體的一個(gè)臂的VH結(jié)構(gòu)域組成；和dAb片段(Ward等，Nature341:544-546, 1989)由VH結(jié)構(gòu)域組成。單鏈抗體(scFv)是其中VL和VH區(qū)域通過(guò)合成接頭配對(duì)來(lái)形成單價(jià)分子的抗體，這使得它們可以作為單一的蛋白鏈被制備(Bird 等,Science242:423-426 (1988)和 Huston 等,Proc.Natl. Acad. Sci. USA85:5879-5883, (1988))。雙抗(diabody)是二價(jià)的，雙特異性抗體，其中VH和VL結(jié)構(gòu)域在單一多肽鏈上被表達(dá)，但是采用一個(gè)極短的接頭使得在同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域不能配對(duì)，從而迫使該結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(參見(jiàn)，如 Holliger 等,Proc. Natl. Acad. Sci. USA90:6444-6448 (1993)，和 Poljak等，Structure〗 1121-1123 (1994))。一個(gè)或多個(gè)CDRs被共價(jià)地或非共價(jià)地結(jié)合到分子上來(lái)使之成為一種免疫粘附素。免疫粘附素可納入CDR(S)作為較大的多肽鏈的部分，可以共價(jià)地將⑶R(s)連接到另一個(gè)多肽鏈上，或者可以非共價(jià)地納入⑶R(s)。⑶R使得免疫粘附素特異性地結(jié)合到特定的目標(biāo)抗原上?？贵w可以具有一個(gè)或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。如果存在一個(gè)以上結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)可以與另一個(gè)相同或不同。例如，天然的免疫球蛋白具有兩個(gè)相同的結(jié)合位點(diǎn)，單鏈抗體或Fab片段具有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，而“雙特異性”或“雙功能”抗體具有兩個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)?！翱贵w譜(antibody repertoire) ”是指動(dòng)物或人中的每種不同的抗體種類(lèi)的總和?？贵w譜的多樣性來(lái)自，例如，免疫球蛋白基因重組、免疫球蛋白基因結(jié)合多樣性、末端脫氧轉(zhuǎn)移酶活性和體細(xì)胞超變(somatic hypermutation)?！扒逗峡贵w”是從其原始形式被改變來(lái)包含來(lái)自另一個(gè)蛋白質(zhì)的氨基酸序列的抗體。嵌合抗體保留至少一部分原始抗體氨基酸序列，通常是包含抗原結(jié)合區(qū)域(Fab)的那部分。嵌合抗體的例子包括但是不限于，雙特異性抗體和與其他非免疫球蛋白序列的融合。“順式調(diào)控元件”通常是指在特定條件下或在特定細(xì)胞中調(diào)控基因序列的可誘導(dǎo)的或組成型表達(dá)。表達(dá)控制序列調(diào)控的細(xì)胞過(guò)程的例子包括但是不限于，基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)翻譯、信使RNA剪接、免疫球蛋白同種型轉(zhuǎn)換、蛋白質(zhì)糖基化、蛋白質(zhì)裂解、蛋白質(zhì)分泌、細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)定位和細(xì)胞外蛋白質(zhì)自歸巢(homing)。“細(xì)胞因子”一般是指免疫系統(tǒng)的信號(hào)分子。細(xì)胞因子包括但是不限于白細(xì)胞介素(IL)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)、腫瘤壞死因子(TNF)、淋巴毒素(LT)、干擾素、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞 集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細(xì)胞CSF、粒細(xì)胞CSF和遷移抑制因子。“胚胎干細(xì)胞(ES) ”是指多潛能(pluripotent)或多能(multipotent)細(xì)胞，當(dāng)被注射到胚泡中時(shí)，其能夠形成許多或所有出生前、出生后或成年動(dòng)物的組織。從胚泡注射得到的動(dòng)物通常被稱(chēng)作“嵌合”動(dòng)物，由于其體細(xì)胞和/或生殖細(xì)胞通常來(lái)源于胚泡供體和被注射的ES細(xì)胞。ES細(xì)胞的重要特性在于其能夠形成動(dòng)物的生殖細(xì)胞系，產(chǎn)生被傳遞到嵌合動(dòng)物后代的任何期望的可遺傳的特征。無(wú)限增生的ES細(xì)胞是生產(chǎn)具有靶向內(nèi)源基因序列破壞的動(dòng)物或者生成具有外源基因的動(dòng)物(轉(zhuǎn)基因)的有力工具?！氨磉_(dá)控制序列”是指在特定條件下或在特定細(xì)胞中組成型表達(dá)或可誘導(dǎo)表達(dá)基因序列的序列。表達(dá)控制序列調(diào)控的細(xì)胞過(guò)程的例子包括但是不限于，基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)翻譯、信使RNA剪接、免疫球蛋白同種型轉(zhuǎn)換、蛋白質(zhì)糖基化、蛋白質(zhì)裂解、蛋白質(zhì)分泌、細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)定位和細(xì)胞外蛋白質(zhì)自歸巢。“融合蛋白”是指包含兩種或多種蛋白質(zhì)的氨基酸序列的嵌合蛋白。典型地，融合蛋白產(chǎn)生自本領(lǐng)域熟知的體外重組技術(shù)。但是，融合蛋白可以從體內(nèi)交換或其他重組事件中產(chǎn)生。“人免疫球蛋白分子”是指由人免疫球蛋白基因序列編碼的免疫球蛋白。免疫球蛋白基因序列可以在任何細(xì)胞或動(dòng)物，人或非人類(lèi)中被表達(dá)?！叭嗽椿贵w”是衍生自非人類(lèi)的物種的抗體，其中重鏈和輕鏈的框架區(qū)和恒定區(qū)中特定的氨基酸被突變，以在人中避免或消除免疫反應(yīng)?？蛇x擇地，人源化抗體可以通過(guò)將來(lái)自人抗體的恒定區(qū)融合到非人類(lèi)物種的可變區(qū)上來(lái)制備。如何制備人源化抗體的實(shí)例可 以在美國(guó)專(zhuān)利6，054，297,5, 886，152和5，877，293中發(fā)現(xiàn)?！把装Y”或“炎癥性疾病”是指由細(xì)胞和組織反應(yīng)組成的基礎(chǔ)病理過(guò)程，在對(duì)損傷，異常刺激或生物學(xué)試劑響應(yīng)時(shí)在血管和鄰近組織中發(fā)生。同樣地，“非炎癥性病癥”或“非炎癥性疾病”是指實(shí)質(zhì)上是非炎癥的任何病癥或疾病，如本文所公開(kāi)的?！胺蛛x的蛋白質(zhì)”或“分離的多肽”一般是指蛋白質(zhì)或多肽，從其起源或來(lái)源來(lái)講(I)不是天然地結(jié)合在天然狀態(tài)下與其相伴的相關(guān)成分上，(2)不含有來(lái)自同一物種的其他蛋白，(3)由來(lái)自不同物種的細(xì)胞表達(dá)，(4)在天然條件下不存在。因此，嵌合地合成，在無(wú)細(xì)胞的生物系統(tǒng)中(如兔網(wǎng)狀細(xì)胞溶解產(chǎn)物)合成，或者在不同于其天然來(lái)源的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的多肽可以從其天然相關(guān)的成分中“分離”。還可以采用本領(lǐng)域熟知的純化技術(shù)，通過(guò)分離以使蛋白基本上不含有天然相關(guān)的成分?！澳M物”或“肽模擬物”是非肽的類(lèi)似物，其通常被用于制藥工業(yè)作為具有與模板妝類(lèi)似的性質(zhì)的藥物。Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986) ;Veber和Freidinger, TINS392 (1985)；和 Evans 等，J. Med. Chem. 30:1229 (1987)，在此引入作為參考。模擬物通常借助計(jì)算機(jī)分子建模來(lái)開(kāi)發(fā)。結(jié)構(gòu)上類(lèi)似于治療上有用的肽的肽模擬物可以被用于產(chǎn)生等價(jià)的治療性或預(yù)防性作用。一般地，模擬物在結(jié)構(gòu)上類(lèi)似于范例多肽(即，具有期望的生物化學(xué)性質(zhì)或藥學(xué)活性的多肽)，例如TWEAK，但是具有一種或多種肽鍵可選擇地通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法被一種鍵替換，該鍵選自一CH2NH—，—CH2S—, —CH2-CH2—,--CH=CH—(順式和反式)，一C0CH2—,—CH (OH) CH2—,和-CH2S0—。用相同類(lèi)型的D-氛基酸系統(tǒng)性地取代共有序列的一種或多種氨基酸(例如用D-賴(lài)氨酸取代L-賴(lài)氨酸)也可以被用于生產(chǎn)更加穩(wěn)定的肽。此外，包含共有序列或?qū)嵸|(zhì)上相同的共有序列變體的限定的肽可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)生產(chǎn)(Rizo和Gierasch, Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)，在此引入作為參考)；例如，通過(guò)增加能夠形成分子間二硫鍵的內(nèi)在半胱氨酸殘基，二硫鍵使肽環(huán)化?！半念?lèi)似物”是指來(lái)自野生型多肽但是氨基酸序列不同的多肽。氨基酸序列改變的多肽可以是突變蛋白，融合蛋白和模擬物。多肽類(lèi)似物還指與野生型多肽相比具有非氨基酸差別的多肽。這些差別可以是化學(xué)的和生物化學(xué)的，并且包括但是不限于特別在本文中 公開(kāi)的修飾類(lèi)型。“多肽片段”是指氨基末端和/或羧基末端被缺失但是剩下的氨基酸序列與天然序列的相應(yīng)部分相同的多肽。片段典型為長(zhǎng)至少5，6，8或10個(gè)氨基酸，優(yōu)選至少14個(gè)氨基酸，更加優(yōu)選長(zhǎng)至少20個(gè)氨基酸，通常至少長(zhǎng)50個(gè)氨基酸，和甚至更加優(yōu)選長(zhǎng)至少70個(gè)氨基酸?！白婕?xì)胞”是指能夠產(chǎn)生一種或多種細(xì)胞系的細(xì)胞。包括干細(xì)胞、全能細(xì)胞、多潛細(xì)胞、多能細(xì)胞、雙能細(xì)胞(bipotent cell),胚胎細(xì)胞或成體細(xì)胞(adult cell)。還包括組織特異性細(xì)胞，包括但是不限于，定向于能夠進(jìn)行終末分化的特定細(xì)胞系的細(xì)胞，來(lái)自于組織定居細(xì)胞(tissue resident cell)的細(xì)胞,和定向于特定組織的循環(huán)細(xì)胞?！皺C(jī)體”是人或非人類(lèi)機(jī)體。機(jī)體的例子是患者?！癟WEAK相關(guān)病癥”是指由異常TWEAK功能或調(diào)控產(chǎn)生的任何病癥。該術(shù)語(yǔ)還指不是直接從異常TWEAK功能或調(diào)控產(chǎn)生的任何病癥，而是產(chǎn)生自一些其他的機(jī)制，其中破壞、升高或另外改變TWEAK的活性對(duì)該病癥具有可檢測(cè)的結(jié)果。TWEAK相關(guān)病癥可以是炎癥性的或?qū)嵸|(zhì)上非炎癥性的，并且包括但是不限于本文特別公開(kāi)的病癥和疾病?！拜d體”是指使目標(biāo)DNA序列在其天然細(xì)胞之外被克隆、繁殖、重組、突變和表達(dá)的DNA分子。通常地，載體具有使基因序列在特定條件下或在特定細(xì)胞中可誘導(dǎo)地或組成型地表達(dá)的表達(dá)控制序列。載體的例子包括但是不限于質(zhì)粒，酵母人工染色體(YACs)，病毒，EB病毒，(EBV)來(lái)源的附加體，噬菌體、粘粒和噬菌粒?！爱惙N動(dòng)物”是指攜帶人免疫球蛋白基因座實(shí)質(zhì)部分的動(dòng)物。經(jīng)常地，異種動(dòng)物攜帶同源靶向內(nèi)源免疫球蛋白基因座，使得它們不能表達(dá)其內(nèi)源免疫球蛋白基因。實(shí)例包括XenoMouseTM細(xì)胞系的小鼠(Abgenix, Inc. , Fremont,加利福尼亞)，其能夠體內(nèi)重排轉(zhuǎn)基因的人免疫球蛋白基因，超變?nèi)丝勺兓颍庖咔虻鞍谆虻谋磉_(dá)，和免疫球蛋白同種型轉(zhuǎn)換。異種動(dòng)物能夠利用人免疫球蛋白基因序列發(fā)動(dòng)對(duì)抗原攻擊的有效體液應(yīng)答。在異種動(dòng)物中產(chǎn)生的抗體完全是人的，并且可從動(dòng)物本身或其后代中，從提取自動(dòng)物或其后代的培養(yǎng)細(xì)胞中和從異種B淋巴細(xì)胞系或其后代中產(chǎn)生的雜交瘤中分離得到。而且，被重排的編碼免疫球蛋白的人基因序列可以通過(guò)常規(guī)的重組技術(shù)分離得到，該免疫球蛋白產(chǎn)生來(lái)抵抗特定抗原攻擊?！爱惙N抗體”是指通過(guò)外源免疫球蛋白基因座編碼的抗體。例如，在XenoMouse 系的小鼠中，人抗體基因座編碼異種抗體?！爱惙N單克隆抗體”是指在來(lái)自異種動(dòng)物的克隆的、無(wú)限增生的細(xì)胞中如雜交瘤中產(chǎn)生的同源抗體群。例如從XenoMouse系小鼠中制備的雜交瘤產(chǎn)生異種抗體。對(duì)疾病的理解和治療根本上朝向于確定闡明疾病的分子機(jī)制或生物化學(xué)路徑。因此，醫(yī)生和科研人員能夠制備治療劑和配制藥物組合物，它們特異性地靶向這些分子機(jī)制或生物化學(xué)路徑。一些困擾人的最復(fù)雜且使人虛弱的疾病包括那些心臟、肝臟、腎臟、肺、皮膚、骨骼肌、脂肪代謝、胃腸道、神經(jīng)系統(tǒng)、胰腺、生殖器官、軟骨、骨、結(jié)締組織系統(tǒng)和祖細(xì)胞或干細(xì)胞的疾病。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于提供對(duì)這些疾病的了解的重要進(jìn)展。更加特別地，本發(fā)明提 供表達(dá)外源TWEAK蛋白的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，并首次證明TWEAK蛋白的表達(dá)與某些心臟、肝臟、腎臟和肺的病理狀況之間的相關(guān)關(guān)系。本發(fā)明還提供用于治療或預(yù)防這種病理狀況的方法，以及用于鑒定用于這些方法中的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法?？梢园凑毡景l(fā)明的方法治療的病理狀況包括急性的心臟損傷、慢性心力衰竭、非炎癥性充血性心肌病、充血性心力衰竭、肝臟上皮細(xì)胞增生、肝細(xì)胞死亡、肝臟纖維變性、肝細(xì)胞液泡化、肝臟損傷、膽管病癥，包括膽管增生、炎癥性腎臟病癥，如腎臟多病灶炎癥，非炎癥性腎臟病癥，如腎小管腎病，腎小管增生，腎小球囊腫、腎肥大、腎小囊增厚、腎小球腎病、Alport綜合癥、腎小管液泡化、腎透明管型、腎臟纖維變性和炎癥性肺病癥。本發(fā)明還提供用于檢測(cè)TWEAK結(jié)構(gòu)或功能，作為疾病的分子標(biāo)記的方法，包括TWEAK蛋白或其功能，TffEAK抗體和TWEAK核酸。本文所描述的TWEAK相關(guān)病癥采用TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑處理，TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑能夠改變TWEAK活性或者破壞膜結(jié)合或全長(zhǎng)形式的TWEAK多肽與其分子受體之間的相互作用?？蛇x擇地，治療劑和治療方法破壞膜結(jié)合或全長(zhǎng)形式的TWEAK多肽與另一種TWEAK多肽之間的相互作用。這種干涉可能發(fā)生在細(xì)胞表面、細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外或體外結(jié)合到固相上或在溶液中。在另一種選擇中，治療劑和治療方法破壞膜結(jié)合或全長(zhǎng)形式的TWEAK多肽與TWEAK相互作用的配偶體之間的相互作用。這種相互作用的配偶體可以是蛋白質(zhì)、核酸、糖、脂肪、脂肪酸和類(lèi)固醇。在一個(gè)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，TWEAK相關(guān)的病癥實(shí)質(zhì)上是非炎癥的。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，TffEAK相關(guān)的病癥是纖維變性、心肌病、腎臟疾病、肺部疾病或肝臟疾病。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，TWEAK相關(guān)的病癥是骨骼肌疾病、脂肪組織疾病、胃腸道疾病、胰腺疾病、生殖器官疾病、神經(jīng)組織疾病、細(xì)胞死亡、皮膚疾病、軟骨疾病、骨病或結(jié)締組織疾病、在另一個(gè)實(shí)施方案中，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以被用于在體內(nèi)通過(guò)影響祖細(xì)胞來(lái)治療患需要組織替換或再生的病癥、疾病或損傷的機(jī)體(如灼傷的或被放射的患者)。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以被用于與祖細(xì)胞或組織移植治療結(jié)合來(lái)體內(nèi)治療機(jī)體。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以被用于體內(nèi)擴(kuò)增細(xì)胞群或體外擴(kuò)增祖細(xì)胞群，用于隨后被移植到機(jī)體中，伴隨或不伴隨其他治療。用于體內(nèi)細(xì)胞治療或體外擴(kuò)增隨后用于移植的祖細(xì)胞群體可以是胚胎或成體來(lái)源的。成體(adult)來(lái)源的祖細(xì)胞可以是多能的或組織限制性的(Lagasse等，Immunityl4:425-436 (2001)；Jackson 等 J.Cl in.Invest.107:1355-402(2001) ；Anversa 和 Nadal-Ginard, Nature415:240-243 (2002) ；Gussoni 等，Nature40I :390-394 (1999) ；Brazelton等，Science290:1672-1674 (2000) ；Peterson 等，Science284:1168-1170 (1999) ；Lagasse等，Nature Medicine6:1229-1234 (2000))。心臟病在工業(yè)國(guó)家中是勞動(dòng)力喪失和死亡的重要原因。在美國(guó)，心臟病約占全部死亡率的40%，每年引起約750，000人死亡。心臟功能中最基礎(chǔ)的是心肌，主要由分支和吻合的紋狀肌細(xì)胞(心肌細(xì)胞)組成。心肌細(xì)胞比介于其中的間質(zhì)細(xì)胞大得多，占心肌體積的90%以上。正常的心肌中炎癥性細(xì)胞極少并且膠原質(zhì)也很少。心肌病很普遍，但是在不同心臟病癥中位于第二位。心肌病的例子包括炎癥性紊亂(如心肌病)，而非炎癥性心臟病癥如充血性心肌病、系統(tǒng)性代謝紊亂、肌肉營(yíng)養(yǎng)失調(diào)和·心肌細(xì)胞的遺傳異常。心肌病的主要類(lèi)型包括充血性的、肥大性的和限制性的心肌病。本發(fā)明的目的在于提供用于治療充血性心肌病的方法，充血性心肌病通常實(shí)質(zhì)上是非炎癥性的。在非炎癥性充血性心肌病的情況下，其約占心肌病的臨床病例的90%，心臟表現(xiàn)為進(jìn)行性的心臟肥大、擴(kuò)張和收縮(心臟收縮)障礙。充血性心肌病可能發(fā)生在任何年齡段，但是最普遍發(fā)生在年齡在20 - 60歲的人中。通常通過(guò)非侵入性的心臟成像來(lái)診斷，特別是通過(guò)二維心回波描記術(shù)診斷。充血性心肌病的組織病理學(xué)的特征在于心肌細(xì)胞退行性變伴隨輕度到中度的肥大，不存在炎癥細(xì)胞和間質(zhì)纖維變性。臨床的充血性心肌病出現(xiàn)緩慢的漸進(jìn)的充血性心力衰竭，但是患者可能迅速?gòu)拇鷥敔顟B(tài)滑落到失代償狀態(tài)，通常需要進(jìn)行心臟移植。50%的患者在兩年之內(nèi)死亡，75%在五年之內(nèi)死亡。死亡的原因典型的是漸進(jìn)的心力衰竭或心率失常，但是可能出現(xiàn)由于心臟內(nèi)血栓脫落而引起的栓塞。表現(xiàn)為充血性心肌病的心臟被擴(kuò)大、松弛，為正常心臟的2 - 3倍重。所有的腔室都擴(kuò)張，壁變薄，纖維變性，并且典型地為壁孔血栓癥。在少數(shù)充血性的心肌病中，由于左心室擴(kuò)張導(dǎo)致二尖瓣或三尖瓣回流。心肌細(xì)胞過(guò)度增生，核擴(kuò)大。一些充血性心肌病的病因包括心肌炎、濫用酒精或其他毒素、懷孕(圍產(chǎn)期心肌病)、缺血、冠心病、高血壓和遺傳影響。特發(fā)性充血性心肌病(IDC)是一種未知病因的疾病，其特征在于一側(cè)或兩側(cè)心室擴(kuò)張、心臟收縮功能障礙，并且逐步發(fā)展為充血性心力衰竭。應(yīng)當(dāng)指出，術(shù)語(yǔ)“IDC”被本領(lǐng)域的技術(shù)人員與術(shù)語(yǔ)“充血性心肌病”交換使用，表明IDC實(shí)際上是充血性心肌病的一種廣義分類(lèi)，不是濫用酒精、毒素?fù)p傷或心肌病的結(jié)果。在顯微鏡下，IDC的特征為心肌細(xì)胞增生、核過(guò)大和間質(zhì)的和血管周?chē)睦w維變性。與心肌病不同，壞死和細(xì)胞浸潤(rùn)通常不顯著出現(xiàn)在IDC患者中，這表明其病因是非炎癥性。與該病因?qū)W一致的是抗炎癥藥物如強(qiáng)的松在治療IDC中通常是無(wú)效的。本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種治療或預(yù)防與TWEAK活性相關(guān)的充血性心肌病的方法。由于充血性心肌病(如IDC)的病因在很大程度上是未知的，還沒(méi)有開(kāi)發(fā)出特定的治療方法。通常采用物理的、飲食的和藥理學(xué)的干涉(如β_腎上腺素受體拮抗劑、鈣離子拮抗劑和抗凝血?jiǎng)?治療患者的心力衰竭來(lái)控制該疾病的癥狀。此外，當(dāng)可能時(shí)，進(jìn)行心臟移植。本領(lǐng)域的技術(shù)人員不能確定任何可以被用于診斷IDC的免疫學(xué)的、組織化學(xué)的、形態(tài)學(xué)的、超結(jié)構(gòu)的或微生物學(xué)的標(biāo)記。但是，流行病學(xué)證據(jù)表明易感IDC是有遺傳基礎(chǔ)的。在20%的IDC患者中，一度(first-degree)相關(guān)也顯示IDC跡象,表明頻繁的家族傳播。本領(lǐng)域的技術(shù)人員已經(jīng)認(rèn)識(shí)到需要確定亞臨床和臨床心臟病患者中的IDC的分子遺傳
T 己 O迄今，與充血性心肌 病相關(guān)的基因的列表包括心肌鈣蛋白T、d —肌聚糖(d-sarcoglycan)、心臟b肌球蛋白重鏈、心肌動(dòng)蛋白、a_原肌球蛋白、核纖層蛋白A/C、肌間線(xiàn)蛋白、心斯里蘭卡肉桂咸受體(cardiac ryanodine recaptor)、橋粒斑蛋白、斑珠蛋白、肌營(yíng)養(yǎng)不良蛋白和tafazzin。還需要尋找引起充血性心肌病的其他遺傳因子和設(shè)計(jì)靶向這些因子的治療劑。本發(fā)明首次證明了 TWEAK和充血性心肌病之間的因果聯(lián)系。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種在患者中鑒定充血性心肌病的方法，通過(guò)檢測(cè)TWEAK蛋白表達(dá)、TWEAK蛋白功能、TWEAK mRNA表達(dá)的變化或染色體改變。用于檢測(cè)疾病的分子標(biāo)記的方法和試劑在本領(lǐng)域是熟知的，包括免疫學(xué)或免疫組織化學(xué)分析，酶或其他蛋白功能分析，和標(biāo)準(zhǔn)的雜交分析，如northern印跡、Southern印跡、單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析,和突光原位雜交(FISH)分析。應(yīng)當(dāng)指出，非炎癥性充血性心肌病的特征在于漸進(jìn)的心臟肥大、擴(kuò)張和收縮障礙。相反，Chagas病是心肌病的一種罕見(jiàn)形式，是一種炎癥性的心臟病，在慢性Trypanosoma cruzi感染后，在人類(lèi)和試驗(yàn)動(dòng)物中產(chǎn)生。Chagas病在美國(guó)中部和南部流行，對(duì)Chagas病的研究已經(jīng)在Chagas病患者的血清中鑒定出抗自身的抗體。Joshua Wynne 和 Eugene Braunwald, Heart Disease, A Textbook ofCardiovascularMedicine, 2，Ch. 41，1442-1444 (第五版1997)。本文公開(kāi)的方法被用于治療更加常見(jiàn)的、與TWEAK活性相關(guān)的非炎癥型的充血性心肌病。一個(gè)成年人的腎臟每天處理超過(guò)1，700L血液，產(chǎn)生大約IL尿液。腎臟在廢物排泄、代謝，水、鹽和PH平衡中起作用，以及對(duì)內(nèi)分泌系統(tǒng)起作用。腎臟疾病更可能導(dǎo)致發(fā)病而不是死亡，美國(guó)每年死亡約35，000人。相反，每年有數(shù)百萬(wàn)人遭受非致死性腎臟疾病，如感染、腎結(jié)石和尿路堵塞。典型地，腎小球腎病由于免疫紊亂引起，而腎小管和腎間質(zhì)紊亂通常由毒素或感染劑引起。部分腎臟疾病包括急性腎病綜合癥、無(wú)病癥的血尿癥或蛋白尿癥、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、腎小管缺陷、尿路感染、腎結(jié)石、尿路阻塞和腎臟纖維變性。包括腎小管損傷的腎臟損傷通常也包括間質(zhì)組織損傷。腎小管疾病可以是炎癥性的或?qū)嵸|(zhì)上非炎癥性的，包括局部缺血或中毒性的腎小管損傷。部分腎小管疾病的列表包括急性腎小管壞死和急性腎衰竭；腎小管的炎癥反應(yīng)和間質(zhì)組織炎癥反應(yīng)(腎小管間質(zhì)組織腎炎)；腎小管增生；腎小管間質(zhì)組織纖維變性(由腎小管上皮細(xì)胞與間質(zhì)組織成纖維細(xì)胞、單核細(xì)胞、腎小球超濾液、細(xì)胞因子和化學(xué)因子成分引起的疤痕疾病)；和常染色體顯性的多囊性腎臟疾病(ADPKD)(—種由PKDl或PKD2基因突變引起的遺傳紊亂，特征為來(lái)自腎小管和集合管的大、充滿(mǎn)液體的囊腫)。腎小球疾病是最令人恐懼的腎臟疾病。例如，慢性腎小球腎炎是人的慢性腎衰竭的最常見(jiàn)原因。在所謂的次級(jí)腎小球疾病中，腎小球可能通過(guò)免疫紊亂受損，免疫紊亂如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，以及血管疾病，如高血壓和結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎。此外，代謝疾病，如糖尿病(即糖尿病腎病)和遺傳性病癥，如Fabry病，影響腎小球。最主要的腎小球疾病包括主要的腎小球腎炎和腎小球腎病。遺傳性腎炎包括主要與腎小球損傷相關(guān)的家族性腎臟疾病。Alports綜合癥是一種腎炎形式，伴隨著神經(jīng)性耳聾和各種眼病，包括晶狀體脫落、晚期白內(nèi)障和角膜營(yíng)養(yǎng)失調(diào)。這些疾病由于其顯性X連鎖基因型，在男性中更加普遍。但是由于常染色體其中之一的顯性和隱性基因型，某些女性也患有此病。Alport腎臟的腎小球表現(xiàn)為節(jié)段性的增生或硬化。有時(shí)由于中性脂肪和粘多糖沉積，上皮細(xì)胞具有泡沫狀外觀。腎小球和腎小管基底膜表現(xiàn)為不規(guī)則的增厚或變薄，伴隨致密板的斷裂和疊片。由于腎臟疾病具有極其重要的臨床意義，本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到需要了解其生理的和遺傳的病因。本領(lǐng)域技術(shù)人員還意識(shí)到需要開(kāi)發(fā)用于治療慢性和急性腎臟疾病的新治療試劑。本發(fā)明首次證明了 TWEAK和腎臟疾病之間的因果關(guān)系。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于治療腎臟疾病的方法。在一個(gè)更加優(yōu)選 的實(shí)施方案中，腎臟疾病可以是Alport綜合癥。在本發(fā)明的其他更加優(yōu)選實(shí)施方案中，目標(biāo)腎臟疾病的特征為多病灶的炎癥、腎小管腎病、腎小管增生、囊腫、腎小球腎病、腎小管液泡化、纖維變性或透明管型。肺部疾病曾經(jīng)并仍然是人類(lèi)普遍罹患的疾病。主要的呼吸系統(tǒng)感染，如支氣管炎，支氣管肺炎和其他類(lèi)型肺炎，通常必須由醫(yī)生治療。肺部疾病可能會(huì)因?yàn)榄h(huán)境因素如吸煙、空氣污染和其他吸入物惡化。慢性支氣管炎、肺氣腫、肺纖維變性和惡性腫瘤也是非常常見(jiàn)的。其次還涉及許多晚期疾病，在最嚴(yán)重的患者中存在肺水腫、肺腫漲不全，或支氣管肺炎。哮喘是慢性復(fù)發(fā)的炎癥性疾病，表現(xiàn)為超反應(yīng)氣道。該綜合癥典型地表現(xiàn)為陣發(fā)性、可逆的支氣管狹窄。哮喘由氣管支氣管樹(shù)對(duì)各種刺激反應(yīng)增加引起，通常與IgE對(duì)外部變應(yīng)原反應(yīng)相關(guān)。有兩種主要類(lèi)型的哮喘。第一種類(lèi)型為外源性哮喘，由暴露于外源性抗原引起的I型超敏性反應(yīng)起始。外源性哮喘病癥的列表包括特異反應(yīng)性(過(guò)敏性)哮喘、職業(yè)性哮喘和過(guò)敏性支氣管肺曲霉病。第二種類(lèi)型是內(nèi)在哮喘，由非免疫性機(jī)制產(chǎn)生，被許多因素觸發(fā)，例如攝取阿司匹林、肺部感染、應(yīng)激、受冷、吸入刺激物和鍛煉。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到需要更加清楚了解肺部疾病，包括非炎癥性和炎癥性的疾病，如哮喘。更為深入的了解將方便開(kāi)發(fā)用于治療肺部疾病的改進(jìn)的藥物制劑。本發(fā)明首次證明TWEAK與肺部疾病之間的因果關(guān)系，以及用于治療這些疾病的方法。在本發(fā)明的更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，肺部疾病的特征為炎癥，包括肉芽腫性和/或淋巴組織細(xì)胞性炎癥。肝臟是消化和代謝平衡的主要調(diào)節(jié)器，包括食入的氨基酸、糖、脂肪和維生素的加工處理，以及血清蛋白的合成、解毒和將內(nèi)源性廢物和污染性生物異源物排泄到膽汁中。因此，肝臟疾病通常是非常嚴(yán)重的，有時(shí)威脅生命安全。肝臟容易受到許多類(lèi)型的疾病的攻擊，包括代謝性、毒性的、微生物的、循環(huán)的和腫瘤性轉(zhuǎn)化侵害。毒素或免疫紊亂可能引起肝細(xì)胞腫漲，外觀上變得水腫，具有不規(guī)則的叢生細(xì)胞質(zhì)和大片清澈的空間。此外，滯留的膽汁物質(zhì)可能引起肝臟細(xì)胞變?yōu)榕菽瓲詈湍[漲。物質(zhì)如鐵、銅和脂肪小滴(脂肪變性)的沉積物可在肝細(xì)胞內(nèi)集聚。在酒精性肝病和懷孕的急性脂肪肝的情況下，出現(xiàn)沒(méi)有轉(zhuǎn)移核的微滴(稱(chēng)作微泡脂肪變性)。
肝細(xì)胞壞死從嚴(yán)重的肝臟損傷產(chǎn)生，表現(xiàn)為，其中，局部缺血性凝結(jié)物壞死。通常，毒性的或免疫學(xué)相關(guān)的病癥中的細(xì)胞死亡表現(xiàn)為聚集的肝細(xì)胞和收縮、固縮、強(qiáng)烈的嗜曙紅性的含有核片段的“聚集體”(Councilman bodies)(由凋亡產(chǎn)生)?？蛇x擇地，肝細(xì)胞可能滲透性腫漲和破裂(細(xì)胞溶解壞死)。肝炎由對(duì)肝臟的某些損傷引起，與急性或慢性炎癥細(xì)胞的流入相關(guān)。肝細(xì)胞壞死可能在炎癥開(kāi)始之前，或者反之亦然。纖維變性，是肝臟損傷的一種不可逆轉(zhuǎn)的結(jié)果，通常由炎癥或非炎癥性機(jī)制產(chǎn)生，例如直接毒性侵害。膠原的特征性沉積影響血流和肝細(xì)胞灌注。伴隨連續(xù)纖維變性，肝臟被細(xì)分為具有周?chē)毯劢M織的再生肝細(xì)胞結(jié)節(jié)(硬化)。卵形細(xì)胞(oval cell)因其外形為小的、增生性的上皮細(xì)胞，具有卵圓形細(xì)胞核和稀疏的嗜堿性細(xì)胞質(zhì)而得名。卵形細(xì)胞通常定居在連接肝內(nèi)導(dǎo)管的末端膽管中，所述肝內(nèi)導(dǎo)管位于具有肝細(xì)胞索的肝門(mén)三聯(lián)中。這些細(xì)胞來(lái)源于定居的肝臟祖細(xì)胞，或來(lái)自循環(huán)或 定向于肝臟的骨髓祖細(xì)胞。這些導(dǎo)管性祖細(xì)胞具有分化為膽汁導(dǎo)管上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞的潛能。本發(fā)明證明在小鼠中TWEAK轉(zhuǎn)基因的表達(dá)能夠擴(kuò)增導(dǎo)管祖細(xì)胞群體。由于肝臟疾病引起的高水平發(fā)病率和死亡率，本領(lǐng)域認(rèn)識(shí)到必須闡明這種疾病的分子和遺傳基礎(chǔ)。確定因果關(guān)系因素便于發(fā)現(xiàn)用于治療慢性和急性肝臟疾病的治療試劑。本發(fā)明證明了 TWEAK與肝臟疾病之間的因果關(guān)系，并且有力地提供用于治療這些疾病的方法。在更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，肝臟疾病是上皮增生、肝細(xì)胞液泡化、導(dǎo)致纖維變性的膽管損傷、肝細(xì)胞死亡或肝臟損傷。骨骼肌系統(tǒng)對(duì)于體態(tài)和運(yùn)動(dòng)是非常重要的。停止使用會(huì)使骨骼肌萎縮，這可能亞于去除神經(jīng)或血液供應(yīng)和暴露于藥物如糖腎上腺皮質(zhì)激素的病癥。在遺傳或退化性病癥中骨骼肌也可能萎縮。這些病癥或疾病可以是炎癥性的或?qū)嵸|(zhì)上非炎癥性的。肌肉營(yíng)養(yǎng)失調(diào)組成了大量的遺傳性肌病，在不是神經(jīng)疾病時(shí)表現(xiàn)為萎縮和丟失肌纖維；該病中包括的一種常見(jiàn)形式是Duchenne肌肉營(yíng)養(yǎng)失調(diào)。先天性肌肉疾病還可能發(fā)生在糖原儲(chǔ)存疾病的情況下，如酸性麥芽糖酶缺乏癥，在肌無(wú)力、運(yùn)動(dòng)差、心臟擴(kuò)大，并且通常早年死于心力衰竭的嬰兒中發(fā)生。導(dǎo)致肌肉萎縮的先天性疾病還包括但是不限于線(xiàn)粒體肌病、脂肪肌病、中心管肌病和橫紋肌溶解。肌病病癥還在成年人中產(chǎn)生，最為常見(jiàn)的是酒精性肌病。骨骼肌萎縮還可以作為神經(jīng)性疾病的一部分，包括但是不限于肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)。此外，骨骼肌萎縮還被稱(chēng)為惡病質(zhì)，是最末期的癌癥患者中存在的重要病理狀況，并且通常直接導(dǎo)致患者死亡。在炎癥或自體免疫中發(fā)生的骨骼肌疾病包括多肌炎，炎癥性肌病，和腎上腺糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的萎縮。本發(fā)明建立了 TWEAK與成肌細(xì)胞分化為肌管的能力之間的聯(lián)系。因此，本發(fā)明的目的在于提供通過(guò)采用體內(nèi)或體外方法促進(jìn)骨骼肌再生來(lái)治療骨骼肌疾病的方法。在肥胖病癥中發(fā)生脂肪細(xì)胞聚積，這些病癥包括與代謝紊亂相關(guān)的肥胖癥如II型糖尿病。脂肪細(xì)胞內(nèi)生到器官中，稱(chēng)作脂肪浸潤(rùn)，發(fā)生在各種條件下，是肌肉營(yíng)養(yǎng)失調(diào)的病理構(gòu)成。本發(fā)明已經(jīng)證明了 TWEAK與前脂肪細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞的能力之間的聯(lián)系。因此，本發(fā)明的目的在于提供通過(guò)用TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑或它們的藥物組合物調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化來(lái)治療與脂肪細(xì)胞沉積或脂肪細(xì)胞缺乏相關(guān)的疾病的方法。按照本發(fā)明的治療TWEAK相關(guān)病癥的方法采用TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑或包含它們的藥物組合物。本發(fā)明的治療TWEAK相關(guān)病癥的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑在本文被描述，并且是本領(lǐng)域已知的。這些試劑包括那些公開(kāi)在如PCT國(guó)際公開(kāi)WO 98/05783, WO 98/35061, WO99/19490, WO 00/42073和WO 01/45730中，全部在此引入作為參考。用于本發(fā)明的方法中的TWEAK拮抗劑包括抗TWEAK的抗體，如人的、非人類(lèi)的、人源化的或異種的抗體，如本文所描述，并且是單克隆的、多克隆的或合成的。而且，抗體可以是全長(zhǎng)的，其片段，或者包含抗原識(shí)別序列的融合蛋白。用于本發(fā)明的方法的TWEAK拮抗劑還包括抗TWEAK受體的抗體。在此，TWEAK受體可以是FN14或者被TWEAK結(jié)合的TNF-R家族的其他成員。抗TWEAK受體的抗體可以人的、非人類(lèi)的、人源化的或異種的抗體，如本文所描述，并且是單克隆的、多克隆的或合成的。而且，抗體可以是全長(zhǎng)的，其片段，或者包含抗原識(shí)別序列的融合蛋白。用TWEAK或TWEAK受體抗原免疫動(dòng)物可以通過(guò)本領(lǐng)域知曉的任何方法進(jìn)行。參見(jiàn)如 Harlow 和 Lane, Antibodies:A Laboratory Manual,紐約:ColdSpring HarborPress, 1990。用于免疫非人動(dòng)物的方法在本領(lǐng)域是已知的，參見(jiàn)如Harlow和Lane以及美國(guó)專(zhuān)利5，994，619，動(dòng)物如小鼠、大鼠、綿羊、山羊、豬、牛、馬等。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，抗原與或不與佐劑一起被施用，來(lái)刺激免疫反應(yīng)。這種佐劑包括，其中，完全或不完全的Freund 佐劑、RIBI (胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激復(fù)合物)。被選擇用于免疫的抗原可以是如下任何之一 =TWEAK多肽=TWEAK多肽片段；TWEAK突變蛋白；TWEAK模擬物；TWEAK融合蛋白；TWEAK受體多肽；TWEAK受體片段；TWEAK受體突變蛋白；TWEAK受體模擬物；TWEAK受體融合蛋白；表達(dá)TWEAK多肽、片段、突變蛋白或其融合蛋白的細(xì)胞；表達(dá)TWEAK受體多肽、片段、突變蛋白或其融合蛋白的細(xì)胞。通過(guò)免疫在動(dòng)物中產(chǎn)生的免疫球蛋白從各種組織或動(dòng)物的體液中收集，包括血清、乳汁、腹水、脾臟、胸腺、外周血液細(xì)胞、胎兒肝臟、骨髓、腹膜和任何其他具有高免疫球蛋白濃度的組織或體液。此外，可以制備和分離雜交瘤，其將單克隆抗體分泌到培養(yǎng)液中。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體是多克隆抗體、單克隆抗體或人源化抗體。在更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，人源化抗體包含人抗體恒定區(qū)和/或構(gòu)架區(qū)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體是異種抗體。在更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，異種抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。異種抗體是一種物種的完整抗體，其在一個(gè)完全不同的物種中被表達(dá)。例如，如果小鼠表達(dá)用于制備完整的人抗體所需的DNA，那么生成的抗體是異種的(即在小鼠中制備的人抗體)。靶向滅活(敲除)技術(shù)提供破壞動(dòng)物正常表達(dá)內(nèi)源免疫球蛋白基因的可能。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)提供了制備生產(chǎn)異種免疫球蛋白的非人類(lèi)動(dòng)物的機(jī)會(huì)。這種異種動(dòng)物可以與上述免疫球蛋白敲除的動(dòng)物交配，生成僅生產(chǎn)異種免疫球蛋白而不是內(nèi)源免疫球蛋白的動(dòng)物。異種免疫球蛋白基因的表達(dá)使得可以產(chǎn)生極度多樣化的人抗體譜，包括單克隆抗體。這是因?yàn)?I)外源免疫球蛋白基因保留其順式調(diào)控元件，并且經(jīng)受宿主動(dòng)物的正常的變化(V)、多樣(D)和連接(J)重組事件；(2)外源免疫球蛋白基因以與內(nèi)源免疫球蛋白基因座相似的方式被表達(dá)；和(3)生成的抗體顯然支持正常的B淋巴細(xì)胞的發(fā)育和體液反應(yīng)。外源免疫球蛋白基因可以被導(dǎo)入到動(dòng)物中，作為完整的免疫球蛋白基因座，免疫球蛋白基因座的一部分，或作為“微小的基因座(minilocus) ”，其中比較完整的外源Ig基因座通過(guò)包含來(lái)自該Ig基因座的少量單個(gè)基因來(lái)模擬。此外，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可以被加工來(lái)表達(dá)編碼改進(jìn)的抗體的轉(zhuǎn)基因，如單鏈抗體或嵌合抗體。
用于本發(fā)明的方法的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以是如本文所描述的TWEAK多肽或其片段、類(lèi)似物、突變蛋白或模擬物。類(lèi)似物區(qū)別于天然的TWEAK氨基酸序列，或以不涉及該序列的形式存在，或兩者。在優(yōu)選實(shí)施方案中，TWEAK多肽類(lèi)似物是突變蛋白。制備突變蛋白的方法在分子生物學(xué)領(lǐng)域是熟知的，包括通過(guò)隨機(jī)突變、定點(diǎn)突變、缺失和截?cái)鄟?lái)改變DNA分子。用于突變DNA的技術(shù)在本領(lǐng)域是熟知的，并且包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)突變、飽和(即化學(xué)的或放射的)突變、DNA化學(xué)合成、丙氨酸掃描突變、寡核苷酸介導(dǎo)的突變(體外與DNA模板雜交隨后通過(guò)酶催化延長(zhǎng))、表達(dá)盒(重組的)突變，和組合突變(將隨機(jī)降解的序列導(dǎo)入TWEAK DNA中)。TffEAK多肽結(jié)合到TWEAK受體上，結(jié)合到其他TWEAK多肽上，或結(jié)合到其他TWEAK作用的配偶體上。TWEAK片段可以是膜結(jié)合的，并且可以在藥物組合物中被傳遞，該組合物中包含脂質(zhì)體或其他細(xì)胞的或擬細(xì)胞的傳遞系統(tǒng)。TWEAK片段還可以是可溶性的TWEAK多肽，其含有去除跨膜結(jié)構(gòu)域的截?cái)嗷騼?nèi)部缺失。此外，用于本發(fā)明的方法的TWEAK多肽可能不產(chǎn)生TWEAK反應(yīng)，或者導(dǎo)致改變的TWEAK反應(yīng)。這種TWEAK多肽的例子是TWEAK蛋白類(lèi) 似物，包括缺失或截?cái)嗟耐蛔凅w、含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的肽、TWEAK模擬物，以及非氨基酸序列改進(jìn)的TWEAK多肽。用于本發(fā)明的方法的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以是如本文描述的TWEAK受體多肽，或其片段、類(lèi)似物、突變蛋白或模擬物。TWEAK受體多肽可以被TWEAK多肽結(jié)合，或結(jié)合到其他TWEAK受體多肽，或結(jié)合到其他TWEAK受體作用配偶體上。TffEAK受體片段可以是膜結(jié)合的，并且可以在藥物組合物中被呈遞，該組合物包含脂質(zhì)體或其他細(xì)胞的或擬細(xì)胞的呈遞系統(tǒng)。TffEAK受體片段還可以是可溶性的TWEAK受體多肽，其含有去除跨膜結(jié)構(gòu)域的截?cái)嗷騼?nèi)部缺失。此外，用于本發(fā)明的方法的TWEAK受體多肽可能不產(chǎn)生TWEAK反應(yīng)，或者產(chǎn)生改變的TWEAK反應(yīng)。這種TWEAK受體多肽的例子是TWEAK受體蛋白類(lèi)似物，包括缺失或截?cái)嗟耐蛔凅w、含有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的肽、TWEAK受體模擬物，以及非氨基酸序列改進(jìn)的TWEAK受體多肽。此外，用于本發(fā)明的方法中的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以是有機(jī)或無(wú)機(jī)的化合物。有機(jī)化合物可以是小的有機(jī)化合物，如在本領(lǐng)域熟知的化學(xué)文庫(kù)中發(fā)現(xiàn)的化合物。其他有機(jī)化合物包括但是不限于核酸、多肽、糖、脂質(zhì)和脂肪酸、類(lèi)固醇，或者它們的衍生物。無(wú)機(jī)化合物可以是基于硅石(silica)的或其他礦物質(zhì)和鹽的。有機(jī)或無(wú)機(jī)的化合物可以結(jié)合到如本文描述的TWEAK多肽、TffEAK受體多肽或其他與TWEAK相互作用的配偶體上。對(duì)TWEAK或TWEAK受體的非序列修飾可以從體內(nèi)或體外化學(xué)衍生該多肽中產(chǎn)生，包括但是不限于，乙?；⒓谆?、磷酸化、羧化、氧化態(tài)或糖基化的改變。此外，化學(xué)衍生可以包括偶聯(lián)到有機(jī)多聚物上，如聚乙二醇(PEG)或醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已知的其他多聚物上。因此，TWEAK多肽類(lèi)似物可以從非氨基酸序列修飾中產(chǎn)生。TWEAK或TWEAK多肽可以作為融合蛋白被表達(dá)。融合蛋白在本領(lǐng)域是熟知的。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以從大量不同融合配偶體成分中選擇，包括那些來(lái)自原核生物和真核生物的。按照本發(fā)明，任何個(gè)體包括人和動(dòng)物可以以藥學(xué)上可接受的方式用藥學(xué)上有效量的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑或包含這種試劑的組合物處理一段時(shí)間，足以在被施用一段時(shí)間的個(gè)體中治療TWEAK相關(guān)病癥?？蛇x擇地，個(gè)體可以接受預(yù)防有效量的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑或者含有這種試劑的組合物，足以在被施用一段時(shí)間的個(gè)體中預(yù)防TWEAK相關(guān)病癥。可以用于本發(fā)明的方法的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以通過(guò)本文公開(kāi)的方法被配制在藥物組合物中，并且可以通過(guò)胃腸外路徑、注射、經(jīng)粘膜、口服、吸入、眼部、直腸、長(zhǎng)效埋植、體表、緩釋或支架包被(stent coating)的方法。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以是各種用于施用的常規(guī)方式。包括例如固體、半固體的和液體的劑量形式，例如液體溶液和懸浮液、漿液、凝膠、面霜、香膏、乳劑、洗液、粉末、噴霧劑、泡沫、貼劑、油膏、藥膏和滴劑。此外，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以通過(guò)基因治療路徑來(lái)呈遞。簡(jiǎn)而言之，編碼蛋白或表達(dá)反義分子的核酸分子可以采用任何本領(lǐng)域知曉的適合將核酸分子呈遞到靶向組織或器官的載體呈遞給機(jī)體。典型的載體包括脂質(zhì)體、質(zhì)粒和病毒載體(例如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺伴隨病毒)。TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑或包含它們的組合物的最有效的施用模式和劑量方案將取決于期望的效果、先前的治療方法，如果有的話(huà)，個(gè)體健康狀況、病癥本身的狀況、對(duì)TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的反應(yīng)以及治療醫(yī)生的判斷。TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑,或者包含它們的組合
物可以以醫(yī)藥或獸醫(yī)制備物可接受的任何劑量形式一次或在一系列治療中被施用。提供單一劑量時(shí)，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑，或者包含它們的組合物的量將依賴(lài)于特定的施用模式，特定TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑，或組合物，劑量水平和劑量頻率。典型的制備物將含有在約O. 01%和約99%之間的，優(yōu)選在約1%和約50%之間的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑或者它們的組合物(w/w)。治療的或預(yù)防的有效量的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的示例性的、非限定的范圍在約O. 005-10. 00mg/kg體重之間，更加優(yōu)選在約O. 05-1. Omg/kg體重之間。TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑，或者包含它們的組合物可以被單獨(dú)施用，或者作為制藥的或獸醫(yī)的制備物的一部分，或者作為預(yù)防性制備物的一部分，含有或不含佐劑。它們通過(guò)胃腸外或口服路徑被施用。例如，可以通過(guò)口腔、肺、鼻腔、耳朵、肛門(mén)、真皮、眼部、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、粘膜、舌下、皮下、經(jīng)皮、體表或顱骨內(nèi)路徑施用，或者被施用到口腔內(nèi)。在醫(yī)藥或獸醫(yī)上應(yīng)用，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以被局部施用到任何上皮表面。這種表面包括口腔、眼部、耳朵、肛門(mén)和鼻腔表面。藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)的混合、溶解、制粒、制備糖衣、粉碎、乳化、裝入膠囊、包載或凍干方法來(lái)制備。用于按照本發(fā)明的用途的藥物組合物可以以常規(guī)的方式被配制，采用一種或多種生理上可接受的載體，包括賦形劑和輔劑，其方便將活性化合物加工到可以被藥學(xué)上使用的制備物中。合適的制劑將取決于特定的施用路徑。對(duì)于經(jīng)粘膜的施用，在制劑中使用適合透過(guò)屏障的滲透劑。這種滲透劑在本領(lǐng)域通常是已知的。對(duì)于眼部施用，使用在適當(dāng)?shù)柠}水溶液中的懸浮液，這在本領(lǐng)域是已知的。對(duì)于口服使用，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑很容易通過(guò)將活性試劑與常規(guī)的藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合來(lái)配制。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以被配制成藥片、藥丸、脂質(zhì)體、顆粒、球體、糖衣丸、膠囊、液體、凝膠、果汁、糖漿、懸浮液等，給被處理的患者口服攝取。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑或包含它們的組合物，還可以包含任何用于醫(yī)藥品或獸醫(yī)制備物的常規(guī)載體或佐劑。這些載體或佐劑包括如Freund佐劑、離子交換物、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、緩沖物質(zhì)，如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物性脂肪酸的不完全甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)，例如魚(yú)精蛋白硫酸鹽、磷酸二氫鈉、氯化鈉、鋅鹽、硅膠、鎂、三硅酸鹽、纖維素物質(zhì)和聚乙二醇。用于體表或凝膠形式的佐劑可以包括，例如，羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸鹽、聚氧乙烯-聚氧丙烯-阻斷的聚合體、聚乙二醇和木臘酒精(wood waxalcohol)。用于口服使用的藥物組合物可以作為固體賦形劑獲得，可選擇地碾磨生成的混合物，并加工顆粒混合物，如果需要在加入合適的輔劑后進(jìn)行，來(lái)獲得片劑或糖衣丸的核心。合適的賦形劑包括填充物如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制備物如，玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入分解劑，如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或褐藻酸或其鹽，如藻酸鈉。糖衣丸核心用合適的包被提供。為此，采用濃縮的糖溶液，其可選擇地含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、carbopol膠、聚乙二醇、和/或二氧化鈦、漆溶液(lacquersolution)、和合適的有機(jī)溶劑和溶劑混合物。染料或色素可以被加入到片劑或糖衣丸包被中來(lái)用于辨認(rèn)或者用于表征不同的活性化合物劑量的組合。

可以口服使用的藥物組合物包括由明膠制備的推入式(push-fit)膠囊，以及由明膠和可塑劑制備的軟的密封膠囊，可塑劑如甘油和山梨醇。推入式的膠囊可以含有活性成分，其與填充物如乳糖、粘合劑如淀粉，和/或滑潤(rùn)劑如滑石粉或硬酯酸鎂，以及可選擇地，穩(wěn)定劑混合。在軟膠囊中，活性化合物可以被溶解或懸浮在合適的液體中，如脂肪性油、液體石蠟、或者液體聚乙二醇。此外，可以加入穩(wěn)定劑。用于口服施用的所有組合物應(yīng)當(dāng)為適合這種施用的劑量。對(duì)于口腔施用，組合物采用以常規(guī)方式配制的片劑或錠劑形式。對(duì)于通過(guò)吸入施用，TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑通常以從加壓包裝或噴霧器中產(chǎn)生的氣霧噴霧的方式方便遞送，使用合適的推進(jìn)劑，如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氧化碳或其他合適的氣體。在為加壓的氣霧劑時(shí)，劑量單位可以通過(guò)提供用于呈遞測(cè)定量的閥門(mén)來(lái)決定。用于吸入器或吹入器中的膠囊和藥筒如明膠的，可以配制成含有化合物和合適的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末狀混合物。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以被配制來(lái)用于通過(guò)注射的胃腸外施用，如通過(guò)大藥丸注射，或連續(xù)灌注。該試劑可以被配制在水溶液中，水溶性懸浮液中，油性懸浮液中，或者乳狀液中，并且可能含有配制試劑，如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。用于注射的劑型可以單位劑量的形式呈遞，如在安瓿中或在多劑量容器中，加入防腐劑。典型的水溶液制劑包括生理相容的緩沖液，如Hanks溶液、Ringer溶液或者生理鹽水緩沖液。典型的油性懸浮液可以包括親脂性溶劑或賦形劑，包括脂肪酸如芝麻油、或合成的脂肪酸酯，如乙基油酸酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體。水溶液注射懸浮液可以還有提高懸浮液粘度的物質(zhì)，如羥甲基纖維素鈉，山梨醇或葡聚糖?？蛇x擇地，懸浮液還可以含有合適的穩(wěn)定劑或提高化合物溶解性的試劑，以制備高濃度的溶液。可選擇地，在使用前，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以粉末的形式來(lái)與合適的賦形劑配制，例如滅菌的無(wú)致熱原水。TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以配制成直腸組合物，如栓劑或滯留灌腸劑，如含有常規(guī)的栓劑基質(zhì)如可可油或其他甘油酯。除了所描述的劑型，TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以配制成存儲(chǔ)制備物。這種長(zhǎng)效制劑可以通過(guò)植入(例如皮下地或肌肉內(nèi)地)或者通過(guò)肌肉內(nèi)注射施用。因此，例如，該化合物可以與合適的聚合的或疏水的物質(zhì)(例如作為可接受的油中的乳劑)或者離子交換樹(shù)脂一起配制，或者配制成難溶(sparingly soluble)的衍生物,作為難溶的鹽。TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的藥學(xué)上載體是疏水性的，是包含苯甲醇、非極性表面活性齊U、易溶于水的有機(jī)聚合物和水相的共溶劑系統(tǒng)。共溶劑系統(tǒng)可以是VPD共溶劑系統(tǒng)。VPD是具有3%w/v苯甲醇、8%w/v非極性表面活性劑聚山梨醇酯80和65%w/v聚乙二醇300的溶液，加入無(wú)水乙醇到總體積。VPD共溶劑系統(tǒng)(VPD 5ff)由VPD與5%葡聚糖水溶液以I: I稀釋組成。這種共溶劑系統(tǒng)對(duì)疏水性化合物的溶解性高，并且其本身在系統(tǒng)施用時(shí)產(chǎn)生的毒性低。自然地，共溶劑系統(tǒng)的組成可以極大地改變而不破壞其溶解性和毒性特性。此外，對(duì)共溶劑成分的確定也是變化的例如，其他的低毒性非極性表面活性劑可以被用來(lái)替代聚山梨醇酯80 ;聚乙二醇的含量多少也是可以變化的；其他生物相容的聚合物可以替換聚乙二醇，如聚乙烯吡咯烷酮；并且其他糖或多糖可以用于替代葡聚糖。可選擇地，可以采用其他用于疏水性藥物組合物的呈遞系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳劑是用 于疏水性藥物的呈遞賦形劑或載體的例子。某些有機(jī)溶劑，如二甲基亞砜也可以被使用，雖然它們具有較大的毒性。此外，TffEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可以采用緩釋系統(tǒng)來(lái)呈遞，如含有治療劑的固體疏水性聚合物的半透性基質(zhì)。各種緩釋物質(zhì)是可以獲得的，并且是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，緩釋膠囊可以釋放化合物數(shù)周到超過(guò)100天。根據(jù)TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的化學(xué)性質(zhì)和生物穩(wěn)定性，還可以采用其他用于蛋白質(zhì)穩(wěn)定的策略。藥物組合物還可以包含合適的固體或凝膠相載體或賦形劑。這種載體或賦形劑的例子包括但是不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物如聚乙二醇。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑作為具有藥學(xué)上相容的平衡離子的鹽被提供。藥學(xué)上相容的鹽可以用許多酸加工形成，包括但是不限于鹽酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、蘋(píng)果酸、琥珀酸等。鹽傾向于更容易溶解在水或其他質(zhì)子溶劑中，是相應(yīng)的無(wú)堿基形式。TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以被配制成用于包被支架的藥物組合物，來(lái)治療與TWEAK相關(guān)的心臟病癥。本發(fā)明還涉及用于鑒定TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。這種TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑可用于治療TWEAK相關(guān)病癥，即疾病，損傷狀況或組織的其他病理狀況，其中TWEAK受體如FN14被表達(dá)。這些病癥包括纖維變性和心臟(如心肌病)、腎臟、肺部、肝臟、皮膚、骨骼肌、脂肪代謝(如肥胖癥)、胃腸道、胰腺、生殖器官、神經(jīng)組織(包括神經(jīng)退行性病變)、軟骨、骨和結(jié)締組織的疾病。這種TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑還可以用于按照本發(fā)明通過(guò)體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)祖細(xì)胞的行為來(lái)促進(jìn)組織替換。用于鑒定TWEAK拮抗劑的方法的一個(gè)實(shí)施例包括步驟1)將表達(dá)編碼TWEAK多肽或其片段、類(lèi)似物、突變蛋白或模擬物的外源DNA轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)動(dòng)物暴露于候選的TWEAK拮抗劑的化合物；2)將來(lái)自轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)動(dòng)物的纖維變性的、心臟、腎臟、肝臟、肺、皮膚、骨骼肌、脂肪、胃腸道、胰腺、生殖器官、神經(jīng)、軟骨、骨或結(jié)締組織與來(lái)自表達(dá)外源DNA但是不暴露于該化合物的參比動(dòng)物的相同器官或組織相比較；和3)確定該化合物是否影響纖維變性的、心臟、腎臟、肝臟、肺、皮膚、骨骼肌、脂肪、胃腸道、胰腺、生殖器官、神經(jīng)、軟骨、骨或結(jié)締組織。在另一個(gè)實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)動(dòng)物是哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物，如本文所述。本文公開(kāi)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表達(dá)編碼TWEAK多肽的外源DNA，其中該表達(dá)導(dǎo)致TWEAK相關(guān)病癥。在該實(shí)施例中，產(chǎn)生表達(dá)截?cái)嗟?、可溶性形式或全長(zhǎng)的、膜結(jié)合形式的外源TWEAK蛋白的轉(zhuǎn)基因小鼠。表達(dá)外源TWEAK蛋白的小鼠具有表型，該表型包括非炎癥性充血性心肌病，充血性心力衰竭，肝臟上皮細(xì)胞增生，肝細(xì)胞液泡化，肝臟損傷和炎癥性腎臟病癥，如多病灶炎癥，非炎癥性腎臟病癥，如腎小管腎病、囊腫、腎小球腎病、腎小 管增生、腎臟纖維變性和炎癥性肺病。此外，用表達(dá)外源TWEAK蛋白的各種病毒載體 感染的野生型小鼠表現(xiàn)為腎小管增生、肝細(xì)胞死亡、肝臟纖維變性和肝臟損傷等。有了這些動(dòng)物，本領(lǐng)域技術(shù)人員便擁有用于發(fā)現(xiàn)藥物的有力工具。特別地，表達(dá)外源TWEAK蛋白的動(dòng)物可作為實(shí)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)用于預(yù)防或治療本文公開(kāi)的TWEAK相關(guān)病癥的TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法的模型系統(tǒng)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，用于動(dòng)物模型系統(tǒng)的單位是哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物。在更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠、兔、狗、貓、奶牛、豬、山羊、馬、綿羊、豚鼠和靈長(zhǎng)類(lèi)。在更加優(yōu)選的實(shí)施方案中，非哺乳動(dòng)物的動(dòng)物是鳥(niǎo)、魚(yú)、兩棲類(lèi)、昆蟲(chóng)和無(wú)脊椎動(dòng)物。編碼TWEAK多肽的外源DNA在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中通過(guò)表達(dá)控制序列被表達(dá)，表達(dá)控制序列在動(dòng)物中控制外源DNA的表達(dá)?？刂妻D(zhuǎn)錄的表達(dá)控制序列包括，如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)、基因座控制區(qū)、RNA聚合酶持續(xù)合成信號(hào)和染色質(zhì)重塑元件?？刂妻D(zhuǎn)錄后事件的表達(dá)控制序列包括剪接供體和受體位點(diǎn)和改變被轉(zhuǎn)錄的RNA的半衰期的序列，如指導(dǎo)poly (A)的添加序列或RNA結(jié)合蛋白的結(jié)合位點(diǎn)。控制翻譯的表達(dá)控制序列包括核糖體結(jié)合位點(diǎn)，指引多肽靶向表達(dá)到或在特定細(xì)胞區(qū)室中的序列，和改進(jìn)翻譯速率和效率的5’和3’非翻譯區(qū)中的序列。在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中TWEAK表達(dá)的優(yōu)選表達(dá)控制序列包括指導(dǎo)高水平蛋白表達(dá)的病毒元件，如來(lái)自反轉(zhuǎn)錄病毒LTR的、巨細(xì)胞病毒(CMV)(如CMV啟動(dòng)子/增強(qiáng)子)的、猿猴病毒40 (SV40)(如SV40啟動(dòng)子/增強(qiáng)子)、腺病毒(如腺病毒晚期啟動(dòng)子(AdMLP))的、多瘤病毒的啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子，以及強(qiáng)大的哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子如天然的免疫球蛋白和肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子。在一個(gè)實(shí)施方案中，編碼TWEAK多肽的DNA由α抗胰蛋白酶(AAT)啟動(dòng)子起始。對(duì)病毒表達(dá)控制元件及其序列的進(jìn)一步描述，參見(jiàn)如美國(guó)專(zhuān)利5，168,062 ;4，510，245和 4，968，615。外源DNA還可以在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中從組織特異性表達(dá)控制元件包括啟動(dòng)子中被表達(dá)。組織特異性表達(dá)控制元件在本領(lǐng)域是已知的。合適的組織特異性啟動(dòng)子的非限制性例子包括肝臟特異性白蛋白啟動(dòng)子(Pinkert等，Genes Dev. 1:268-277(1987))、淋巴特異性啟動(dòng)子(如 Calame 和 Eaton, Adv. Tmmunol. 43:235-275 (1988) ；ffinoto 和Baltimore, EMBO J. 8:729-733 (1989) ；Banerji 等，Cell33:729-740 (1983)；以及 Queen和 Baltimore, Cell33:741-748 (1983))、神經(jīng)細(xì)胞特異性啟動(dòng)子(如 Byrne 和 RuddleProc. Natl. Acad. Sci. USA86:5473-5477 (1989))、胰腺特異性啟動(dòng)子(如 Edlund 等，Science230:912-916 (1985))、乳腺特異性啟動(dòng)子(如美國(guó)專(zhuān)利4，873，316和歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)264，166)，和發(fā)育調(diào)節(jié)啟動(dòng)子(如 Kessel 和 Gruss, Science249:374-379 (1990) ；CampesTilghman, Genes Dev. 3:537-546 (1989))。組織特異性啟動(dòng)子的其他非限制性例子包括心臟組織啟動(dòng)子α肌漿球蛋白重鏈啟動(dòng)子(MHC)、皮膚組織啟動(dòng)子角蛋白-14(Κ14)、肺組織啟動(dòng)子表面活性蛋白C(SPC)，以及腎臟組織啟動(dòng)子Ksp鈣粘著蛋白和腎臟雄激素調(diào)控蛋白(KAP)。外源DNA還可以從可誘導(dǎo)的真核啟動(dòng)子中被表達(dá)，如金屬硫蛋白(MT)啟動(dòng)子，或本領(lǐng)域已知的其他可誘導(dǎo)的真核啟動(dòng)子。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中被表達(dá)的TWEAK多肽可以是全長(zhǎng)的TWEAK多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中表達(dá)的多肽是TWEAK多肽片段。在優(yōu)選實(shí)施方案中，TffEAK多肽片段是可溶性TWEAK多肽。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在組織中表達(dá)編碼TWEAK多肽的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，該組織選自心臟；血液、血管；肺；肝臟；腎臟；腦；胎盤(pán)；骨骼?。灰认?；脾；淋巴；胸腺；闌尾；外周血液淋巴細(xì)胞；胃腸道；神經(jīng)元；皮膚；脂肪細(xì)胞；軟骨；骨；結(jié)締組織。在一個(gè)實(shí)施方案中，TWEAK DNA由組成型啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該DNA由誘導(dǎo)型啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，DNA由組織特異性啟動(dòng)子啟動(dòng)表達(dá)。
本發(fā)明還涉及鑒定TWEAK激動(dòng)劑化合物的方法，該化合物作為治療劑來(lái)治療TffEAK相關(guān)病癥或用于按照本發(fā)明通過(guò)體內(nèi)或體外調(diào)節(jié)祖細(xì)胞行為來(lái)促進(jìn)組織替換。激動(dòng)劑候選化合物可以被施用給正常的動(dòng)物中，并且評(píng)價(jià)它們對(duì)器官系統(tǒng)的作用。然后，來(lái)自被處理的動(dòng)物的纖維變性的、心臟、肝臟、腎臟、肺、皮膚、骨骼肌、脂肪、胃腸道、胰腺、生殖器官、神經(jīng)、軟骨、骨或結(jié)締組織與未處理的動(dòng)物的相同組織比較；從而確定該化合物是否已經(jīng)在任何所述組織中產(chǎn)生生物學(xué)作用。本發(fā)明還涉及用于調(diào)控TWEAK的基因的鑒定方法，這種基因可能作為治療靶點(diǎn)來(lái)治療TWEAK相關(guān)病癥。例如，可以在TWEAK轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的各種組織中確定RNA模式，并且與正常動(dòng)物比較，從而確定藥物靶點(diǎn)。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供影響祖先干細(xì)胞增生或分化的方法，包括產(chǎn)生肌肉細(xì)胞、軟骨、骨或結(jié)締組織細(xì)胞類(lèi)型的間質(zhì)干細(xì)胞類(lèi)型，例如基質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和真皮細(xì)胞。本發(fā)明的還有一個(gè)目的是提供影響卵形細(xì)胞的增生或分化能力的方法，卵形細(xì)胞產(chǎn)生膽汁上皮細(xì)胞或肝細(xì)胞和腎臟祖細(xì)胞，其產(chǎn)生小管的上皮。
實(shí)施例為了更好地理解本發(fā)明，給出如下的實(shí)施例。這些實(shí)施例僅僅是用于闡述目的，而無(wú)論如何不被解釋為限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例I制備TWEAK轉(zhuǎn)基因小鼠為了鑒定TWEAK活性的靶向器官和TWEAK體內(nèi)信號(hào)的生物學(xué)結(jié)果，構(gòu)建兩種小鼠TWEAK表達(dá)構(gòu)建體，并采用標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)用于在正常(C57Bl/6x DBA/2)F1和(C57Bl/6x SJL/J)F2 小鼠中過(guò)度表達(dá) TWEAK。R. S. Williams 和 P. D. Wagner, J. AppliedPhysiology88:1119-1126(2000)。所用的 TWEAK 表達(dá)構(gòu)建體如下(I)來(lái)自 SEQ ID NO: I的氨基酸101-249的TWEAK cDNA編碼可溶性形式的鼠TWEAK (命名為sTWEAK)，位于小鼠IgG信號(hào)序列的下游，被插入到CH269表達(dá)載體(載體P⑶EP4衍生物(Invitrogen)，含有SV40poly A附加序列)，位于人α抗胰蛋白酶(AAT)啟動(dòng)子和球蛋白內(nèi)含子的下游，位于人生長(zhǎng)激素(hGH)poly A序列的上游；和⑵編碼全長(zhǎng)的、跨膜形式的蛋白質(zhì)(命名為FL-TWEAK)的cDNA，對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: I的氨基酸1_249，被插入到pBlueScript表達(dá)載體上(如 Desplat-Jego 等,J. Neuroimmunologyl33:116-123 (2002)所描述)，含有SV40poly A添加位點(diǎn)。然后FL-TWEAK序列加上poly A添加位點(diǎn)被分離，并克隆到另一個(gè)載體上；然后，含有ApoE增強(qiáng)子-人AAT啟動(dòng)子調(diào)控區(qū)域的片段被插入到上游來(lái)構(gòu)建表達(dá)載體CA300。已經(jīng)證明AAT啟動(dòng)子主要在肝臟中引導(dǎo)轉(zhuǎn)錄，而在其他組織中水平較低，包括腎臟。P. Koopman 等，Genes Dev. 3:16-25 (1989)。對(duì)于sTWEAK轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體，采用對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO: 2的核苷酸468 — 488(5’弓I物)和核苷酸693 — 713的互補(bǔ)鏈序列(3’引物)的探針通過(guò)尾(tail)DNA PCR確定23種獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因建立者(founder)。此外，TffEAK的血清ELISA顯示這23只建立者動(dòng)物中的10只在其血清中具有可檢測(cè)的TWEAK，范圍在0. 06-3. Omg/ml。剩下的13只建立者不具有可檢測(cè)的血清TWEAK，即〈10ng/ml。10只PCR+中的9只，血清TWEAK+的建立者在約4_5月齡時(shí)開(kāi)始發(fā)病。表現(xiàn)為體重下降，弓背，毛皮蓬亂和眼鏡凸出。這些建立者中的5只意外地死亡，具有發(fā)病病癥的剩下的4只被處死。相反，13只PCR+而血清陰性的建立者中僅I 只發(fā)病或死亡。此外，4只PCR陰性的同窩仔畜中沒(méi)有一只發(fā)病/死亡。對(duì)于FL-TWEAK轉(zhuǎn)基因構(gòu)建體，通過(guò)尾DNA PCR和Northern印跡分析肝臟組織中的TWEAK mRNA的表達(dá)來(lái)確定兩只獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因建立者。此外，檢測(cè)TWEAK的血清ELISA顯示這兩只建立者動(dòng)物在其血清中都沒(méi)有可檢測(cè)水平的TWEAK，即少于10ng/ml。FL-TffEAK Tg建立者小鼠都沒(méi)有顯示臨床可觀察到的表型。實(shí)施例2用傳遞編碼aTWEAK的外源DNA的腺病毒載體感染的小鼠中TWEAK的過(guò)度表達(dá)為了體內(nèi)確定過(guò)度表達(dá)TWEAK的生物學(xué)作用，采用如在Tao等，MolecularTherapy3:28-35 (2001)中描述的標(biāo)準(zhǔn)腺病毒技術(shù)用復(fù)制缺陷的腺病毒載體感染8_10周齡的C57BL/6雌性成年小鼠，該腺病毒具有驅(qū)動(dòng)小鼠TWEAK ( “Adeno-TWEAK”)或水母綠色熒光蛋白(“GFP”)的巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子。包含GFP的腺病毒載體(“Adeno-GFP”)用作陰性對(duì)照。為了確定小鼠是否成功地用Adeno-TWEAK構(gòu)建體感染，血清中的TWEAK蛋白質(zhì)水平被測(cè)定，并且采用標(biāo)準(zhǔn)ELISA檢測(cè)在不同時(shí)間點(diǎn)監(jiān)控。在成年小鼠中系統(tǒng)地過(guò)度表達(dá)小鼠sTWEAK至少在三種主要器官肝臟、腎臟和心臟中導(dǎo)致組織變化。參見(jiàn)表I。這些表達(dá)腺病毒構(gòu)建體的小鼠的表型與表I中來(lái)自實(shí)施例
I的TWEAK Tg小鼠的表型比較。這些觀察值將在如下實(shí)施例中被更加詳細(xì)地討論。表I :在成年小鼠中TWEAK過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致組織重塑
權(quán)利要求
1.TWEAK拮抗劑在制備用于在受試者中治療腎臟病癥的藥物中的用途。
2.權(quán)利要求I的用途，其中所述腎臟病癥是炎癥性腎臟病癥。
3.權(quán)利要求2的用途，其中所述炎癥性腎臟病癥是多病灶炎癥。
4.權(quán)利要求I的用途，其中所述腎臟病癥是非炎癥性腎臟病癥。
5.權(quán)利要求4的用途，其中所述非炎癥性腎臟病癥是腎小管腎病，囊腫，腎小球腎病，Alport綜合癥,腎小管嗜堿性，腎小管擴(kuò)張,腎小管液泡化,透明管型，腎小管增生，或腎纖維變性。
6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的用途，其中所述TWEAK拮抗劑包括(a)抗TWEAK抗體；(b)抗TWEAK受體抗體；或(c) TffEAK受體多肽片段。
7.權(quán)利要求I的用途，其中所述腎臟病癥為急性腎病綜合癥、無(wú)病癥的血尿癥或蛋白尿癥、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、腎小管缺陷、尿路感染、腎結(jié)石、或尿路阻塞。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述腎小管缺陷是急性腎小管壞死、急性腎衰竭、腎小管間質(zhì)組織腎炎、腎小管增生、腎小管間質(zhì)組織纖維變性、或常染色體顯性的多囊性腎臟疾病(ADPKD)。
9.權(quán)利要求I的用途，其中所述腎臟病癥是主要的腎小球疾病。
10.權(quán)利要求9的用途，其中所述主要的腎小球腎病選自慢性腎小球腎炎、主要的腎小球腎炎、和腎小球腎病。
11.權(quán)利要求5的用途，其中所述腎臟病癥是腎纖維變性。
12.權(quán)利要求6的用途，其中所述抗TWEAK抗體是人的或人源化的，單克隆的，或嵌合的。
13.權(quán)利要求6的用途，其中所述抗TWEAK抗體是全長(zhǎng)的或抗原結(jié)合片段。
全文摘要
本發(fā)明提供用于治療TWEAK相關(guān)病癥的方法和試劑，該病癥包括心臟、肝臟、腎臟、肺、脂肪、骨骼、肌肉、神經(jīng)、骨和軟骨的病癥。本發(fā)明還提供用于鑒定治療TWEAK相關(guān)病癥的TWEAK的激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。此外，本發(fā)明提供表達(dá)編碼TWEAK多肽或其片段、類(lèi)似物或突變體的外源DNA的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，以及用這種動(dòng)物來(lái)鑒定TWEAK激動(dòng)劑或拮抗劑的方法。本發(fā)明還提供用于診斷基于TWEAK表達(dá)的疾病的方法。本發(fā)明還提供用TWEAK多肽、激動(dòng)劑或拮抗劑來(lái)影響祖細(xì)胞的細(xì)胞分化的方法。
文檔編號(hào)A61P17/00GK102793921SQ201210268648
公開(kāi)日2012年11月28日 申請(qǐng)日期2003年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月9日
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