專利名稱：一種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種發(fā)酵物的制備方法。
背景技術(shù)：
據(jù)統(tǒng)計(jì)，由血栓及動脈粥樣硬化引起的心腦血管疾病是人類最主要的疾病死亡原因之一。由于其發(fā)病原因受多種因素控制，因此攻克此類疾病成為當(dāng)今世界面臨的最嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)之一。血栓病(腦、心、四肢梗塞等)發(fā)病率高，死亡率高，其中腦中風(fēng)患者中70%是腦血栓。一旦患上血栓性疾病,治療費(fèi)用相當(dāng)昂貴，因此人們需要高效、低毒、價(jià)格低廉的溶栓藥物。
根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究的最新成果，血液中血纖維蛋白的凝結(jié)和溶解作用是整個過程的關(guān)鍵。纖溶酶系統(tǒng)是一個具有多種生理功能的蛋白溶解酶系統(tǒng)，其主要作用是降解血管壁上沉積的纖維蛋白，是血液中凝塊消除、恢復(fù)血流的主要因素。目前臨床上使用的溶栓藥都有一個共同的缺陷，即出血并發(fā)癥，同時(shí)治療費(fèi)用高、半衰期短，不能口服。黃苗為豆科植物蒙古黃苗Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge. var.mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜莢黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.的干燥根?，F(xiàn)代藥理研究表明黃芪總皂苷具有抗血栓形成作用，其作用機(jī)制與提高前列環(huán)素(PGI2)和一氧化氮(NO)水平有關(guān)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法；目的是為了提高黃芪的生物活性，發(fā)揮更廣泛的藥理作用。具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、黃芪浸泡于水中10 24小時(shí)，過濾，將浸泡后的黃芪裝袋，每袋50 250g，在121°C下滅菌20 40分鐘，冷卻至室溫；二、向每袋黃芪中接入I 5ml濃度為I X IO5 I X 108cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在22 32°C下發(fā)酵10 50天，干燥，即完成具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備；其中步驟二中側(cè)耳菌菌液，所述側(cè)耳菌(Pleurotus ostreatus)的編號為ACCC50128。本發(fā)明中黃芪主要含有皂苷、黃酮、多糖、氨基酸及微量元素，具有利尿、強(qiáng)心、提高機(jī)體免疫力和抗衰老等功效。黃芪味甘，微溫，歸脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽、托毒排膿、斂瘡生肌、利水消腫、固表止汗的功效。側(cè)耳菌(Pleurotus ostreatus)系擔(dān)子菌綱口蘑科側(cè)耳屬真菌，是民間常用食用菌，不僅營養(yǎng)價(jià)值高，同時(shí)又具有一定的藥用價(jià)值。側(cè)耳菌含有多糖、多肽、酶等生物活性成分，具有免疫促進(jìn)、降血脂、清除自由基、抗腫瘤等多種藥理活性。側(cè)耳菌具有強(qiáng)大的酶系和生物轉(zhuǎn)化能力，黃芪經(jīng)側(cè)耳菌發(fā)酵后，使多糖、肽及酶類等生物活性成分的組成及含量發(fā)生較大變化，一方面提高原有活性成分的含量，另一方面通過微生物的轉(zhuǎn)化生成新的活性物質(zhì)，從而擴(kuò)大其藥理活性范圍。利用微生物發(fā)酵，不僅降低了用藥成本，提高了功效，還為新藥開發(fā)提供了途徑。本發(fā)明所制備的黃芪發(fā)酵物，含有多糖及可溶性蛋白質(zhì)，活性成分含量高，有直接纖溶作用又具有激活纖溶酶原的作用，對血塊的溶解作用非常明顯，具有較好的降解血栓纖維蛋白的能力，溶解率達(dá)到96. 31% 99. 73%，而且經(jīng)過藥理、毒理實(shí)驗(yàn)表明，無毒副作用，服用安全。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，按以下歩驟實(shí)現(xiàn)一、黃苗浸泡于水中10 24小時(shí),過濾,將浸泡后的黃苗裝袋,姆袋50 250g,在121°C下滅菌20 40分鐘，冷卻至室溫；ニ、向每袋黃芪中接入I 5ml濃度為IXlO5 lX108cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在22 32°C下發(fā)酵10 50天，干燥，即完成具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備；其中步驟ニ中側(cè)耳菌菌液，所述側(cè)耳菌(Pleurotus ostreatus)的編號為ACCC50128。本實(shí)施方式中側(cè)耳菌的編號為ACCC50128，購買自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏管理中心。本實(shí)施方式中的黃芪為蒙古黃芪或膜莢黃芪，從市場上購買得到。本實(shí)施方式步驟ー中的過濾是為了濾去多余水分。本實(shí)施方式中所得具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物，可作為原料制成任何一種藥劑學(xué)上所述的常規(guī)劑型(常規(guī)劑型為注射劑、凍干粉針劑、片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、混懸齊 、ロ服液、氣霧劑、噴霧劑、滴鼻劑、栓劑)。
具體實(shí)施方式
ニ 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中黃芪浸泡于水中12 22小時(shí)，過濾，將浸泡后的黃芪裝袋，每袋100 200g，在121°C下滅菌25 35分鐘。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中黃芪浸泡于水中18小時(shí)，過濾，將浸泡后的黃芪裝袋，每袋150g，在121°C下滅菌30分鐘。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟ニ中向每袋黃芪中接入2 4ml濃度為IXlO5 lX107cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在25 30°C下發(fā)酵20 40天。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟ニ中向每袋黃芪中接入3ml濃度為lX106cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在28°C下發(fā)酵35天。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，按以下歩驟實(shí)現(xiàn)一、黃芪浸泡于水中20小時(shí)，過濾，將浸泡后的黃芪裝袋，每袋200g，在121°C下滅菌40分鐘，冷卻至室溫；ニ、向每袋黃芪中接入5ml濃度為I X 106cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在25°C下發(fā)酵45天，干燥，即完成具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備；其中步驟ニ中側(cè)耳菌菌液，所述側(cè)耳菌(Pleurotus ostreatus)的編號為ACCC50128。、
本實(shí)施方式中黃芪為蒙古黃芪。本實(shí)施方式得到的具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物與黃芪藥材相比，進(jìn)行纖溶酶活性及體外溶栓實(shí)驗(yàn)，過程如下纖溶活性測定通過20IU/mL、40IU/mL、60IU/mL、80IU/mL、100IU/mL 濃度尿激酶的纖溶活性建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以尿激酶標(biāo)準(zhǔn)品單位數(shù)的對數(shù)為橫坐標(biāo)，溶菌圈垂直兩直徑乘積的對數(shù)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。稱取黃芪藥材和黃芪發(fā)酵物2g，加入IOmL生理鹽水于4°C浸提24h，離心后取上清液。取供試品溶液各10 y L和尿激酶標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)于同一瓊脂糖纖維蛋白平板上，置37°C恒溫箱中反應(yīng)18h，取出后用游標(biāo)卡尺測量溶圈垂直兩直徑，將供試品垂直兩直徑乘積的對數(shù)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算供試品纖溶活性。血塊溶解率的測定家兔心臟采血，凝固成血塊，切成小塊，重量在IOOmg左右，用濾紙吸去其表面水分后，精確稱重，放置于不同試管中。加入500ii L樣液,取同體積0. 9%生理鹽水作為空白對照，放置于37°C恒溫6h，取出用濾紙吸干水分稱重，計(jì)算血塊溶解率。纖溶活性及溶栓作用結(jié)果如下表I纖溶酶活性及體外溶栓實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.ー種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，其特征在于具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、黃芪浸泡于水中10 24小時(shí)，過濾，將浸泡后的黃芪裝袋，每袋50 250g，在121°C下滅菌20 40分鐘，冷卻至室溫；ニ、向每袋黃芪中接入I 5ml濃度為I X IO5 I X 108cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在22 32°C下發(fā)酵10 50天，干燥，即完成具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備； 其中步驟ニ中側(cè)耳菌菌液，所述側(cè)耳菌(Pleurotus ostreatus)的編號為ACCC50128。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，其特征在于步驟一中黃芪浸泡于水中12 22小時(shí)，過濾，將浸泡后的黃芪裝袋，每袋100 200g，在121°C下滅菌25 35分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，其特征在于步驟一中黃芪浸泡于水中18小時(shí)，過濾，將浸泡后的黃芪裝袋，每袋150g，在121°C下滅菌30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的ー種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，其特征在于步驟ニ中向每袋黃芪中接入2 4ml濃度為I X IO5 I X 107cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在25 30°C下發(fā)酵20 40天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的ー種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，其特征在于步驟ニ中向每袋黃芪中接入3ml濃度為I X 106cfu/ml的側(cè)耳菌菌液，在28°C下發(fā)酵35天。
全文摘要
一種具有溶栓作用的黃芪發(fā)酵物的制備方法，它涉及一種發(fā)酵物的制備方法。它目的是為了提高黃芪的生物活性，發(fā)揮更廣泛的藥理作用。方法一、黃芪浸泡于水中過濾后裝袋，滅菌，冷卻；二、向每袋黃芪中接入側(cè)耳菌菌液，發(fā)酵后干燥，即完成。本發(fā)明中黃芪經(jīng)側(cè)耳菌發(fā)酵后，使多糖、肽及酶類等生物活性成分的組成及含量發(fā)生較大變化，提高原有活性成分的含量，轉(zhuǎn)化生成新的活性物質(zhì)，從而擴(kuò)大其藥理活性范圍。本發(fā)明中制備的黃芪發(fā)酵物具有直接纖溶作用又具有激活纖溶酶原的作用，對血塊的溶解作用非常明顯，具有較好的降解血栓纖維蛋白的能力，溶解率達(dá)到96.31%～99.73%，而且經(jīng)過藥理、毒理實(shí)驗(yàn)表明，無毒副作用，服用安全。
文檔編號A61K36/481GK102716181SQ20121022898
公開日2012年10月10日 申請日期2012年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月4日
發(fā)明者方自若, 曹思思, 王偉明, 陳麗艷 申請人:黑龍江省中醫(yī)研究院