專利名稱：一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物、藥物組合物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物，更具體地說(shuō)是由白花丹參提取精制而成的一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物(丹參酮混合物)、藥物組合物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血栓閉塞性脈管炎(Thromboangitis Obliterans, ΤΑ0)是一種以節(jié)段性、非動(dòng)脈粥樣硬化性、無(wú)菌性炎癥和血管腔內(nèi)血栓形成為特征的慢性閉塞性疾病，主要累及四肢遠(yuǎn)端的中、小動(dòng)脈和靜脈，好發(fā)于下肢，病程長(zhǎng)多呈緩進(jìn)性并逐漸加重，常致肢體發(fā)生缺血或瘀血病損，甚者肢體潰爛脫落，是一種慢性周?chē)芗膊?。我?guó)各地均有發(fā)病，多見(jiàn)于北方寒冷地區(qū)，尤其是青壯年男性多見(jiàn)，嚴(yán)重危害人們的身體健康。白花丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge var alba)是唇形科植物丹參的變型，主產(chǎn)于山東章丘、萊蕪、泰安等丘陵地區(qū)，其根入藥，2002年白花丹參被收入《山東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》?！度珖?guó)中草藥匯編沖記載白花丹參形似丹參，惟花白色，有的可略帶紫暈，產(chǎn)于山東， 亦以根入藥，當(dāng)?shù)赜杏冒谆ǖ⒕浦委熝ㄩ]塞性脈管炎者(全國(guó)中草藥匯編[上冊(cè)]，人民衛(wèi)生出版社，1975)。白花丹參根在臨床上用于脈管炎治療，取得了令人滿意的療效。山東省章丘縣醫(yī)院從1967年開(kāi)始應(yīng)用民間驗(yàn)方白花丹參治療血栓閉塞性脈管炎，自1971年10月至1975 年12月應(yīng)用白花丹參治療脈管炎147例，臨床治愈率27. 2%，顯著好轉(zhuǎn)率45. 6%，總有效率93. 2%，經(jīng)過(guò)治療，患肢血液循環(huán)有不同程度的改善，并能減輕疼痛和促進(jìn)潰瘍愈合，且臨床分組對(duì)比觀察，白花丹參的療效高于丹參的，參見(jiàn)中醫(yī)雜志，1976，(11) :23-對(duì)。據(jù)《山東中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》和《治療與保健藥酒》記載將白花丹參浸泡于55度的白酒制成的白花丹參酒作為單方或驗(yàn)方，民間用以治療脈管炎已有80多年的歷史，而且認(rèn)為白花丹參對(duì)脈管炎的療效優(yōu)于丹參的，參見(jiàn)許青峰，治療與保健藥酒，1988，pll7。藥理實(shí)驗(yàn)研究為應(yīng)用白花丹參治療脈管炎提供了可靠的理論依據(jù)。通過(guò)研究白花丹參對(duì)小鼠血小板粘附功能及血液流變學(xué)的影響，發(fā)現(xiàn)白花丹參具有明顯的抗血小板粘附凝集作用，并且具有降低血液粘度的功能，參見(jiàn)韓紀(jì)舉等，中藥材，2007，30 (6) :699-701。 白花丹參對(duì)H2O2損傷后人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞有顯著保護(hù)作用，參見(jiàn)焦鵬等，中國(guó)中藥雜志， 2011,36(13) :1830-1832，能有效促進(jìn)人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞的增值、黏附和釋放NO能力，顯著改善人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能，參見(jiàn)焦鵬等，中華中醫(yī)藥雜志，2011J6(11) :2687力689。CN1899371A(CN200610045270. X)提供一種白花丹參在制藥領(lǐng)域中的應(yīng)用及白花丹參藥物的制備方法。白花丹參的丹參素含量是紫花丹參的兩倍，該物質(zhì)用于治療心腦血管疾病及其他相關(guān)疾病，具有祛淤止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的功效。所述白花丹參藥物的制備方法是a.取白花丹參置入提取罐內(nèi)，加入4 10倍重量份的水進(jìn)行水提取，過(guò)濾得水提液；或?qū)谆ǖ⒊⒎鬯楹筮M(jìn)行超聲提取，過(guò)濾得超微提取粉；b.取a工序的超微提取粉或經(jīng)濃縮至相對(duì)密度為1. 0 1. 4的水提液，加入50% 90%的乙醇進(jìn)行醇沉淀，過(guò)濾后用20 % 40 %的強(qiáng)堿，溶液調(diào)pH = 6. 5 8. 5，冷放后過(guò)濾，重復(fù)醇沉淀，得濾液；c.將 b工序的濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 0 1. 4，加入0. 5 % 2 %活性炭，加熱煮沸，過(guò)濾，滅菌，得液體劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明還提供白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物。術(shù)語(yǔ)說(shuō)明總菲醌，是指白花丹參中的總丹參酮，在天然藥物化學(xué)教材中丹參酮稱為丹參醌， 該類化合物從結(jié)構(gòu)母核上屬于菲醌類結(jié)構(gòu)。白花丹參總菲醌提取物，是指從白花丹參中提取的各種丹參酮的混合物。本發(fā)明技術(shù)方案如下一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物，以白花丹參的根為原料，通過(guò)溶劑提取、溶劑萃取、層析和純化制備而成；主要含有丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I，其次還含有少量的1，2- 二氫丹參酮I、次丹參酮、15，16- 二氫丹參酮I、1-羰基次丹參酮和小紅參醌B， 其中丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I三者的總含量不低于70wt%，丹參酮IIA和隱丹參酮的質(zhì)量比為0. 45 0. 80。本發(fā)明治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物，是按以下方法制備的以白花丹參的根為原料，粉碎后，以甲醇、95%乙醇或乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取、超聲提取，所述溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復(fù)提取1 3次，除去藥渣， 合并濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35(60°C測(cè)定)膏狀物，所得膏狀物以水懸浮，以有機(jī)溶劑萃取2 3次，合并萃取液，再以水洗滌萃取液2 3次，將有機(jī)溶劑萃取液濃縮，進(jìn)行硅膠柱層析分離，硅膠柱洗脫溶劑是石油醚-乙酸乙酯，收集石油醚-乙酸乙酯5 3體積比的洗脫部分，蒸去溶劑，合并，進(jìn)行結(jié)晶與重結(jié)晶，即得白花丹參總菲醌提取物。優(yōu)選的，所述的萃取用有機(jī)溶劑是乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷。本發(fā)明治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物制備方法，詳細(xì)步驟如下⑴溶劑提取原料白花丹參的根經(jīng)過(guò)粉碎后，以甲醇、95%乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取或超聲提取，所用溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復(fù)提取1 3次，除去藥渣，合并濾液，所得濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35(60°C測(cè)定)膏狀物。優(yōu)選的，所述加熱提取是用95%乙醇為溶劑進(jìn)行回流提取，溶劑為原料的10重量倍。(2)萃取將步驟(1)得到的膏狀物以6 12重量倍的蒸餾水懸浮，用與水等體積的有機(jī)溶劑萃取，重復(fù)2 3次，合并萃取液，減壓濃縮，再用與濃縮物等體積的水萃取洗滌，重復(fù)水洗2 3次，棄掉水層，然后分出上層的有機(jī)溶劑層，減壓蒸去溶劑，得固體物。(3)柱層析
將步驟( 萃取得到的固體物進(jìn)行硅膠柱層析分離純化，先以石油醚-乙酸乙酯 100 3，體積比洗脫4 6個(gè)保留體積，然后以石油醚-乙酸乙酯5 3體積比洗脫8 12個(gè)保留體積，收集石油醚-乙酸乙酯5 3的洗脫部分，減壓蒸去溶劑，得紅色提取物。(4)純化將上述得到的紅色提取物以95%乙醇溶解，析晶，濾出結(jié)晶，再以95%乙醇重結(jié)晶，得白花丹參總菲醌提取物。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，步驟O)中所述的萃取用有機(jī)溶劑是乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷，最優(yōu)選二氯甲烷作為萃取用有機(jī)溶劑。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，步驟( 中所述的萃取與減壓濃縮，當(dāng)萃取2次時(shí)減壓濃縮至萃取液體積量的0. 5倍，當(dāng)萃取3次時(shí)減壓濃縮至萃取液體積量的0. 35倍。本發(fā)明方法所得的白花丹參總菲醌中丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I三者的總量不低于70%，而其中最主要的兩個(gè)成分隱丹參酮和丹參酮IIA的質(zhì)量比0. 45 0. 80。本發(fā)明的治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物與藥用輔料組合制成不同劑型的藥物制劑。一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物，本發(fā)明的白花丹參總菲醌提取物和一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。優(yōu)選的，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、滴丸及軟膠囊劑?？砂凑账巹W(xué)常規(guī)生產(chǎn)工藝制備。所述藥物組合物不同劑型的藥物制劑詳細(xì)說(shuō)明如下1、片劑或膠囊劑的制作，均按白花丹參總菲醌提取物總量的重量百分比取所述的白花丹參總菲醌提取物，加入2 5重量倍的稀釋劑1，5 IOwt%的濕潤(rùn)劑，4 15wt %的崩解劑，按常規(guī)濕法制粒，干燥后整粒，再加入0. 5 3wt %的潤(rùn)滑劑，壓片或裝入膠囊殼。上述稀釋劑I選自淀粉、糖粉、糊精或微晶纖維；上述濕潤(rùn)劑選自水或乙醇；上述崩解劑為羧甲基淀粉鈉；上述潤(rùn)滑劑為硬脂酸鎂或滑石粉。2、軟膠囊劑的制作取所述的白花丹參總菲醌提取物，加入稀釋劑II，混勻，再加入抗氧化劑、助懸劑， 攪拌均勻，室溫靜置，即得白花丹參總菲醌提取物軟膠囊內(nèi)容物的藥液；通過(guò)模具將其與事先用明膠、甘油、防腐劑制備的軟膠囊殼材料一起壓制成軟膠囊。上述稀釋劑II選自植物油；上述抗氧化劑選自抗壞血酸鈉、枸櫞酸或焦亞硫酸鈉；上述助懸劑選自蜂蠟、甲殼素甲基纖維素或瓊脂。3、滴丸的制作取所述的白花丹參總菲醌提取物，加入適量無(wú)水乙醇，然后加入聚乙二醇4000或聚乙二醇6000熔融液中，60°C水浴恒溫?cái)嚢?，直至乙醇揮盡為止；然后將該熔融液轉(zhuǎn)入滴丸機(jī)的貯液筒內(nèi)，在保溫80 85°C的條件下滴入冷凝液中，收集滴丸。優(yōu)選的，所述的白花丹參總菲醌提取物與聚乙二醇4000的重量比為1 6。
本發(fā)明的用于治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物及其藥物組合物制劑用于治療血栓閉塞性脈管炎，改善肢體缺血所引起的慢性潰瘍、疼痛、發(fā)冷及間歇跛行。本發(fā)明的治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物的藥效學(xué)研究。動(dòng)物=Wistar雄性大白鼠60只，體重280 300g，由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。藥物將按照實(shí)施例1方法制備白花丹參總菲醌提取物研細(xì)，過(guò)80目篩，用0. 5% 羧甲基纖維素鈉水溶液配制成0. lg/ml、0. 05g/ml和0. 025g/ml的混懸液。以目前臨床上治療血栓閉塞性脈管炎的常用口服藥通塞脈片(江蘇南星藥業(yè)有限責(zé)任公司產(chǎn))為陽(yáng)性對(duì)照，將其研細(xì)，過(guò)80目篩，用0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液配制成0. llg/ml的混懸液。造模與分組采用國(guó)內(nèi)外通用的股動(dòng)脈注射月桂酸法，參照文獻(xiàn)方法苗智如等， 中藥材，2008，31 (6) :880-882，制備血栓閉塞性脈管炎大鼠模型。將60只大鼠隨機(jī)為假手術(shù)組、模型組、通塞脈片對(duì)照組、白花丹參總菲醌提取物高劑量組、中劑量組和低劑量組。給藥采用灌胃法給藥。白花丹參總菲醌提取物高劑量組、中劑量組和低劑量組分別按照0. 6g/kg、0. 3g/kg和0. 15g/kg的給藥劑量給予已配制的高、中、低三種不同濃度白花丹參總菲醌提取物混懸液。陽(yáng)性對(duì)照組按照0. 66g/kg的劑量給予已配制的通塞脈片混懸溶液。各組均于手術(shù)后灌胃給藥，每天給藥1次，連續(xù)1周。實(shí)驗(yàn)結(jié)果大鼠體征指標(biāo)觀察大體觀察大鼠患肢皮膚顏色、溫度、患肢有無(wú)腫脹、有無(wú)壞疽及壞疽的程度、跛行狀況。參照王軍等，中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16(7) :421-423。采用的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)，I級(jí)病變局限于趾甲部；II級(jí)病變局限于趾部；III級(jí)病變局限于足爪部；IV級(jí)病變局限于膝關(guān)節(jié)以下；V級(jí)病變發(fā)展到膝關(guān)節(jié)以上。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示， 模型組的病變最嚴(yán)重，通塞脈片組與白花丹參總菲醌中、高劑量組的病變最輕，與模型組比較有顯著性差異。表1白花丹參總菲醌對(duì)TAO大鼠局部體征變化的影響
權(quán)利要求
1.一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物，以白花丹參的根為原料，通過(guò)溶劑提取、 溶劑萃取、柱層析和純化制備而成；主要含有丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I、l，2-二氫丹參酮I、次丹參酮、15，16- 二氫丹參酮I、l-羰基次丹參酮和小紅參醌B，其中所含丹參酮 IIA、隱丹參酮和丹參酮I三者的總含量不低于70wt%，丹參酮IIA和隱丹參酮的質(zhì)量比為 0. 45 0. 80。
2.如權(quán)利要求1所述的白花丹參總菲醌提取物，其特征在于是按以下方法制備的以白花丹參的根為原料，粉碎后，以甲醇、95%乙醇或乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取、 超聲提取，所述溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復(fù)提取1 3次，除去藥渣，合并濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35膏狀物，60°C測(cè)定；所得膏狀物以水懸浮，以有機(jī)溶劑萃取2 3次，合并萃取液，再以水洗滌萃取液2 3次，將有機(jī)溶劑萃取液濃縮，進(jìn)行硅膠柱層析分離，硅膠柱洗脫溶劑是石油醚-乙酸乙酯，收集石油醚-乙酸乙酯 5 3體積比的洗脫部分，減壓蒸去溶劑，所得固體物再以95%乙醇溶解，放置，析晶，濾出結(jié)晶，再以95%乙醇重結(jié)晶，即得白花丹參總菲醌提取物。
3.權(quán)利要求1所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，步驟如下(1)溶劑提取原料白花丹參的根經(jīng)過(guò)粉碎后，以甲醇、95%乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取或超聲提取，所用溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復(fù)提取1 3次，除去藥渣，合并濾液，所得濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35膏狀物，60°C測(cè)定；(2)萃取將步驟(1)得到的膏狀物以10 12重量倍的水懸浮，用與水等體積的有機(jī)溶劑萃取， 重復(fù)2 3次，合并萃取液，減壓濃縮，再用與濃縮物等體積的水萃取洗滌，重復(fù)水洗2 3 次，棄掉水層，然后分出上層的有機(jī)溶劑層，減壓蒸去溶劑，得固體物；(3)柱層析將步驟( 萃取得到的固體物進(jìn)行硅膠柱層析分離純化，先以洗脫劑石油醚-乙酸乙酯100 3體積比洗脫4 6個(gè)保留體積，然后以石油醚-乙酸乙酯5 3體積比洗脫8 12個(gè)保留體積，收集石油醚-乙酸乙酯5 3的洗脫部分，減壓蒸去溶劑，得紅色提取物。(4)純化將上述得到的紅色提取物以95%乙醇溶解，放置，析晶，濾出結(jié)晶，再以95%乙醇重結(jié)晶，即得白花丹參總菲醌提取物。
4.如權(quán)利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟(1)的加熱提取是用95%乙醇為溶劑進(jìn)行回流提取，溶劑為原料的10重量倍。
5.如權(quán)利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟O)中所述的萃取用有機(jī)溶劑是乙酸乙酯或二氯甲烷，優(yōu)選乙酸乙酯。
6.如權(quán)利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟O)中所述的萃取與減壓濃縮，當(dāng)萃取2次時(shí)減壓濃縮至萃取液體積量的0. 5倍，當(dāng)萃取3次時(shí)減壓濃縮至萃取液體積量的0. 35倍。
7.如權(quán)利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟(3)中，先以石油醚-乙酸乙酯100 3體積比洗脫5個(gè)保留體積，然后以石油醚-乙酸乙酯5 3體積比洗脫10個(gè)保留體積，收集石油醚-乙酸乙酯5 3的洗脫部分。
8.一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物，包括權(quán)利要求1 2所述的白花丹參總菲醌提取物和一種或多種藥學(xué)上可接受載體或賦形劑。
9.如權(quán)利要求9所述的白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑及沖劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物、藥物組合物及制備方法。所述白花丹參總菲醌提取物是從白花丹參根中經(jīng)溶劑提取、柱層析純化得到的丹參酮的混合物，主要由丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I組成，三者總含量不低于70％，其中隱丹參酮與丹參酮IIA的質(zhì)量比為0.45～0.80。該總菲醌提取物對(duì)血栓閉塞性脈管炎具有較好的治療作用，可按照藥劑學(xué)常規(guī)生產(chǎn)工藝將其加工成各種劑型，如片劑、膠囊劑、軟膠囊、滴丸和沖劑。
文檔編號(hào)A61K125/00GK102512496SQ20121000461
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2012年1月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月9日
發(fā)明者孫隆儒, 季梅, 張大偉, 曹春泉, 朱海林, 謝婷婷 申請(qǐng)人:山東大學(xué)