專利名稱：一種抗禽流感卵黃抗體注射液及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫學技術(shù)領(lǐng)域，涉及ー種卵黃抗體制劑及其應(yīng)用，具體地說是ー種抗禽流感卵黃抗體注射液及其用途。
背景技術(shù)：
禽流感是流感病毒引起的家禽的ー種急性、高度致死性傳染病，目前本病主要是通過免疫接種禽流感疫苗來進行預(yù)防。但是，由于肉仔雞飼養(yǎng)周期較短，禽流感疫苗均為滅活苗，到出欄前尚未吸收完全，肌肉中形成許多小結(jié)節(jié)，必然會影響雞肉的品質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題，是提供一種抗禽流感卵黃抗體注射液及其用途。本發(fā)明所制備的抗禽流感卵黃抗體為免疫球蛋白，屬于蛋白質(zhì)，分子量較小，使得注射液進入體內(nèi)后容易被機體吸收，肌肉不易產(chǎn)生結(jié)節(jié)；通過提高肉仔雞機體禽流感的抗體水平來預(yù)防禽流感，抗禽流感卵黃抗體注射液在肉仔雞上使用，藥カ更直接、藥效更快， 預(yù)防禽流感，操作方便、靈活、效果好，而且有助于雞肉產(chǎn)品質(zhì)量的提高。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是
1、所用試劑
硫酸銨(分析純、純度> 99. 0%)；硫柳汞(分析純、純度> 98. 0%)；新流H9 ニ聯(lián)油苗(生產(chǎn)廠家揚州威克生物工程有限公司)；禽流感H5m-4-5油苗(生產(chǎn)廠家哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司)；禽流感H9 (生產(chǎn)廠家揚州威克生物工程有限公司)
2、制備方法
一種抗禽流感卵黃抗體注射液，該注射液的制備方法按照以下步驟順序進行
①誘導(dǎo)產(chǎn)生抗禽流感抗體
用禽流感疫苗按免疫程序免疫產(chǎn)蛋母雞進行免疫注射，誘導(dǎo)免疫母雞產(chǎn)生抗禽流感抗
體；
②禽流感卵黃抗體注射液的制備
收集免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃后，再對卵黃抗體進行提取和純化，即得抗禽流感卵黃抗體注射液。作為本發(fā)明的ー種限定，所述免疫程序為
I、母源抗體低吋，不同日齡段的免疫方法
7日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗0. 2mL ； 15日齡免疫禽流感H5m-4_5油苗0. 3mL ；
II、母源抗體高吋，不同日齡段的免疫方法 14日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗0. 2mL ；
21日齡免疫禽流感腳1-4-5油苗0. 3mL ； 40日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗或禽流感H9 0. 5mL ； 50日齡免疫禽流感H5m-4-5油苗0. 5mL ；110日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗或禽流感H9 lmL； 130日齡免疫禽流感H5m-4-5油苗ImL ；
III、以后每隔60天使用禽流感H5m-4-5油苗進行一次加強免疫，每隔80天使用禽流感H9進行一次加強免疫，對產(chǎn)蛋母雞進行免疫，再提取免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃制備。作為本發(fā)明的另ー種限定，所述提取純化和注射液的制備方法按照以下步驟順序進行
(1)卵黃的分離
將高免雞蛋消毒，在無菌條件下打破蛋殼，分離出卵黃；
(2)上清液的提取
將蛋黃倒入已滅菌的容器內(nèi)，加入緩沖液調(diào)節(jié)PH值為5. 5-7. 5，勻漿后，0-4°C靜止 3-4h或過夜，收取上清液；
(3)沉淀的收集
上清液中加入25-40%的硫酸銨，5000r/min離心30min，0_4°C靜止3_4h或過夜，收集沉淀；
(4)注射液的制備
加原上清液體積的10%的注射用水，使沉淀溶解，加入0. 01%的防腐保鮮劑，0. 22微米濾膜過濾除菌，制成注射液，冷凍保存。作為進一歩限定，所述緩沖液為乙酸和乙酸鈉。本發(fā)明還有ー種限定，所述防腐保鮮劑為硫柳汞。本發(fā)明還提供了上述抗禽流感卵黃抗體注射液的ー種用途，即將所述抗禽流感卵黃抗體注射液用于預(yù)防肉仔雞禽流感。所述抗禽流感卵黃抗體注射液按照肉仔雞每Ikg體重0. 2-0. 5mL的量進行肌內(nèi)注射?？骨萘鞲新腰S抗體注射液的應(yīng)用對于所制得的上述抗禽流感卵黃抗體注射液， 檢測應(yīng)用效果，通過對比試驗和采用血凝抑制試驗來測定抗體效價，來對所制得的注射液的應(yīng)用效果進行評定，其中檢測方法參照國標GB/T 14926. 54-2001試驗動物的血凝抑制
試驗 ο對比試驗將120只肉仔雞分為三組，分別為25日齡未注射這種抗禽流感卵黃抗體注射液而免疫禽流感疫苗、25日齡未注射這種抗禽流感卵黃抗體注射液而未免疫禽流感疫苗的肉仔雞和25日齡肉仔雞三組在30日齡攻毒禽流感抗原0. 2mL/只，其它飼養(yǎng)條件一樣，觀察至出欄，結(jié)果如下表所示
權(quán)利要求
1.一種抗禽流感卵黃抗體注射液，其特征在于該注射液的制備方法按照以下步驟順序進行①誘導(dǎo)產(chǎn)生抗禽流感抗體用禽流感疫苗按免疫程序?qū)Ξa(chǎn)蛋母雞進行免疫注射，誘導(dǎo)免疫母雞產(chǎn)生抗禽流感抗體；②禽流感卵黃抗體注射液的制備收集免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃后，再對卵黃抗體進行提取和純化后，制備得抗禽流感卵黃抗體注射液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種抗禽流感卵黃抗體注射液，其特征在于所述免疫程序為I、母源抗體低吋，不同日齡段的免疫方法7日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗0. 2mL ； 15日齡免疫禽流感H5m-4_5油苗0. 3mL ；II、母源抗體高吋，不同日齡段的免疫方法 14日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗0. 2mL ；21日齡免疫禽流感腳1-4-5油苗0. 3mL ； 40日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗或禽流感H9 0. 5mL ； 50日齡免疫禽流感H5m-4-5油苗0. 5mL ； 110日齡免疫新流H9 ニ聯(lián)油苗或禽流感H9 lmL； 130日齡免疫禽流感H5m-4-5油苗ImL ；III、以后每隔60天使用禽流感H5m-4-5油苗進行一次加強免疫，每隔80天使用禽流感H9進行一次加強免疫，對產(chǎn)蛋母雞進行免疫，再提取免疫產(chǎn)蛋母雞卵黃制備。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的ー種抗禽流感卵黃抗體注射液，其特征在于所述提取、純化和注射液的制備方法按照以下步驟順序進行(1)卵黃的分離將高免雞蛋消毒，在無菌條件下打破蛋殼，分離出卵黃；(2)上清液的提取將蛋黃倒入已滅菌的容器內(nèi)，加入緩沖液調(diào)節(jié)PH值為5. 5-7. 5，勻漿后，0-4°C靜止 3-4h或過夜，提取上清液；(3)沉淀的收集上清液中加入25-40%的硫酸銨，5000r/min離心30min，0_4°C靜止3_4h或過夜，收集沉淀；(4)注射液的制備加上清液體積的10%的注射用水，使沉淀溶解，加入0. 01%的防腐保鮮劑，0. 22微米濾膜過濾除菌，制成注射液，冷凍保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的ー種抗禽流感卵黃抗體注射液，其特征在于所述緩沖液為乙酸和乙酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的ー種抗禽流感卵黃抗體注射液，其特征在于所述防腐保鮮劑為硫柳汞。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的一種抗禽流感卵黃抗體注射液的用途，其特征在于它用于預(yù)防肉仔雞禽流感。
7.如權(quán)利要求6所述的ー種抗禽流感卵黃抗體注射液的用途，其特征在于所述抗禽流感卵黃抗體注射液按照肉仔雞每Ikg體重0. 2-0. 5mL的量進行肌內(nèi)注射。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抗禽流感卵黃抗體注射液，其制備方法包括抗禽流感抗體的制備、禽流感卵黃抗體注射液的制備等步驟，其可應(yīng)用于肉仔雞禽流感的預(yù)防，按照肉仔雞每1kg體重0.2-0.5mL的量進行肌內(nèi)注射。本發(fā)明通過提高肉仔雞體內(nèi)的禽流感抗體水平來預(yù)防禽流感，在肉仔雞上使用具有無毒、無害、無殘留、無污染的特點，能夠提高禽肉品質(zhì)。本發(fā)明用于抗禽流感卵黃抗體注射液，進一步地應(yīng)用于肉仔雞禽流感疾病的預(yù)防。
文檔編號A61P31/16GK102526727SQ201210000909
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月4日
發(fā)明者劉志輝, 武路剛, 牛志勇, 陳淑芳 申請人:河北科星藥業(yè)有限公司