專利名稱：一種單克隆抗體用于治療食管癌的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗表皮生長因子受體的單克隆抗體在治療食管癌的用途。
背景技術(shù)：
根據(jù)世界衛(wèi)生組織報告，目前全球每年新發(fā)腫瘤患者約有1000萬，死亡近600萬。 自20世紀70年代以來，我國惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率一直呈上升趨勢，2010年癌癥發(fā)病總?cè)藬?shù)約為200萬人，死亡150萬。目前腫瘤死亡率以超過心腦血管病而躍居首位。惡性腫瘤已成為人類的“第一殺手”。全球食管癌年新發(fā)病例約46. 2萬，發(fā)病率居惡性腫瘤的第8位，死亡率居第6位。 該疾病呈明顯的地域性分布，我國是食管癌高發(fā)國家，每年新發(fā)病例數(shù)占全球總病例數(shù)的一半左右，且95%以上為鱗狀細胞癌。盡管手術(shù)、放療和化療等治療技術(shù)都有顯著發(fā)展，但食管癌的療效仍然很差。美國食管癌的5年生存率為16%，歐洲也僅為10%。同期放化療 (放療50. 4Gy+同期4個療程的DDP+5FU化療)是局部區(qū)域性食管癌非手術(shù)治療的標準方案，5年生存率為27%，但3級以上的嚴重毒性高達63%。前期的研究表明，食管鱗癌患者存在較高的EGFR異常表達，約為50%。晚期食管癌中高達71 88%。EGFR異常表達的食管癌患者病期更晚、惡性程度更高、預(yù)后更差。在一項II期臨床研究中，TKI藥物吉非替尼作為食管癌的二線方案治療時療效并不令人滿意有效率(CR+PR)僅為2. 8%，控制率(CR+PR+SD)為30. 6%，中位生存時間只有5. 5月。 一項I期臨床試驗中，厄洛替尼聯(lián)合同期放化療治療食管癌耐受性很好，進一步的研究還在進行當(dāng)中。最近，百泰生物藥業(yè)有限公司與古巴共同研發(fā)了一種新的抗EGFR的單克隆抗體——尼妥珠單抗注射液(Nimotuzumab，商品名泰欣生)，該產(chǎn)品是抗EGFR的重組人源化單克隆抗體，其人源化程度達95%，為中度親和力(親和常數(shù)為I(T9M)，半衰期長達302小時。尼妥珠單抗是人IgGl類型的抗體，它表達在鼠源骨髓瘤NSO細胞系中。該人源化單抗顯示出與其鼠源單抗相同的活性，表現(xiàn)出對EGFR良好的結(jié)合性。從以上臨床研究的初步結(jié)果來看，尼妥珠單抗具有良好的有效性和安全性。與同類產(chǎn)品比較，因其人源化程度高和中度親和力，不良反應(yīng)發(fā)生率和嚴重程度明顯降低。該產(chǎn)品在國外多個國家已上市，國內(nèi)也通過了 SFDA的審核批準，獲得了新藥證書 (國藥證字S20080001)，已于2008年上市銷售。是中國第一個在腫瘤靶向治療領(lǐng)域抗EGFR 的重組人源化單克隆抗體。以獲得臨床批件，批件號2008L04846，目前處于臨床研究階段。本藥物的治療機制尼妥珠單抗是抗EGFR的重組人源化單克隆抗體，其人源化達95%，中度親和力 (10_9)，有較長半衰期003小時)。由于它是單克隆抗體，所以特異性強；而且加之它是一個人源化抗體，所以不會發(fā)生其他抗體所容易產(chǎn)生的致命免疫應(yīng)答反應(yīng)。研究已經(jīng)證實尼妥珠單抗參與了抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒(ADCC)和補體依賴的細胞毒(CDC)這兩種重要的免疫學(xué)系統(tǒng)的效應(yīng)機制。在51Cr釋放實驗中使用人肺癌細胞系作為靶目標證明了尼
3妥珠單抗的ADCC活性。當(dāng)使用人的補體源時，人源化單抗尼妥珠單抗可以固定、激活和誘導(dǎo)標記細胞的溶解。這個結(jié)果揭示尼妥珠單抗可以通過這些免疫學(xué)效應(yīng)機制(ADCC和CDC) 誘導(dǎo)腫瘤細胞的溶胞效應(yīng)。在老鼠細胞上通過阻斷EGFR受體進行了一些體內(nèi)和體外的實驗，以用來演示尼妥珠單抗在腫瘤細胞系和移植的腫瘤細胞上的抗增殖活性。尼妥珠單抗在三維培養(yǎng)基(該培養(yǎng)基對于腫瘤抑制有理想的品質(zhì))上有格外的活力。單抗尼妥珠單抗通過抑制促血管生成生長因子比如VEGF的產(chǎn)生而證明了其抗血管生成的屬性，還通過伴隨細胞周期S期減少的Gl停止證明了其致細胞凋亡的屬性。在測定尼妥珠單抗的抗腫瘤活性的體內(nèi)試驗中，免疫組化分析揭示被治療患者腫瘤的血管供應(yīng)顯著降低。這些結(jié)果暗示尼妥珠單抗可以有效作為針對EGFR依賴的腫瘤的治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種有效治療食管癌的藥物，經(jīng)本發(fā)明人深入而廣泛的研究發(fā)現(xiàn)，尼妥珠單抗可以非常有效的治療食管癌，在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。尼妥珠單抗的分子結(jié)構(gòu)是已知的，如中國專利CN10M609C所述，該單克隆抗體是一人源化單克隆抗體，是針對特異抗原產(chǎn)生的特異純化抗體，它具有高度專一性，能夠特異性針對腫瘤細胞進行靶向治療，從分子水平逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的惡性生物學(xué)行為，因而有“生物導(dǎo)彈”之稱。尼妥珠單抗的分子量大約為150000道爾頓，輕鏈分子量大約為23000道爾頓， 重鏈分子量大約為52000道爾頓。該人源化抗體是這樣構(gòu)建的使用人免疫球蛋白REl和 EU的輕鏈和重鏈將其親代鼠源單抗(ior egf/r3，簡稱r3)互補決定區(qū)CDR移植到人免疫球蛋白的骨架上，同時突變回3個鼠源氨基酸殘基(分別是Ser75，Thr76和Thr9;3)，以完全恢復(fù)其對抗原的親和力。尼妥珠單抗是人IgGl類型的抗體，它表達在鼠源骨髓瘤NSO細胞系中。該人源化單抗顯示出與其鼠源單抗相同的活性，可以抑制EGF結(jié)合到其受體上。尼妥珠單抗表現(xiàn)出對EGFR良好的結(jié)合性，并且有10_9M的解離常數(shù)。該類藥物具有靶向性強、特異性高和毒副作用低等特點，并能增強放、化療的治療效果，代表著腫瘤治療領(lǐng)域的最新發(fā)展方向。本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的目的在于提供一種有效治療食管癌的藥物，所述的藥物的活性成分為抗 EGFR單克隆抗體，該單克隆抗體指尼妥珠單抗(Nimotuzunab，簡稱h_R3)。本發(fā)明的第一方面，提供了一種抗EGFR的單克隆抗體的用途，用于制備治療食管癌的藥物。所述藥物的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。所述藥物的起始劑量是根據(jù)國外治療食管癌臨床研究中劑量為200mg/w，結(jié)果顯示其良好的有效性和安全性。所述的疾病是指食管癌。所述的疾病是指包括食管癌的鱗狀上皮細胞癌，腺癌以及未分化癌。所述的腺癌又可分為單純腺癌、腺鱗癌、粘液表皮樣癌和腺樣囊性癌。
所述藥物的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。 所述藥物的給藥劑量是每周給藥一次，每次100-200mg/l. 5m2體表面積，優(yōu)選為200mg/l. 5m2體表面積。在使用該藥物時，是將安全有效量的尼妥珠單抗施用于哺乳動物，其中，該安全有效量通常至少為50mg/l. 5m2體表面積，持續(xù)應(yīng)用6_8周。具體劑量還應(yīng)根據(jù)給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍內(nèi)的。本發(fā)明藥物可以通過常規(guī)途徑進行給藥，其中包括但不限于靜脈滴注、靜脈注射等方式。


圖1為抗體依賴性細胞調(diào)節(jié)細胞毒特異減退的結(jié)果100/1效應(yīng)器/靶位率圖2為抗體依賴性細胞調(diào)節(jié)細胞毒特異減退的結(jié)果50/1效應(yīng)器/靶位率圖3為抗EGFR單抗對荷載H-125人腺癌細胞裸鼠的抗腫瘤作用圖4為抗EGFR單抗對荷載A431腫瘤細胞裸鼠的抗腫瘤作用圖5為長期毒性試驗中三種抗體在兩個計量條件下對荷載A431SCID小鼠的作用圖6為尼妥珠單抗聯(lián)合放化療治療食管癌的生存期曲線7為尼妥珠單抗聯(lián)合放化療治療食管癌的病理表現(xiàn)
具體實施例方式本發(fā)明的實施方案通過下列實施例舉例說明。然而本發(fā)明的實施方案不限于這些實施例的特定細節(jié)，因為對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，其它的變化是已知的，或根據(jù)直接公開的內(nèi)容和附屬的權(quán)利要求是顯而易見的。因此，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。本文引用的參考文獻以其全文通過引用并入本文。下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑獲得。實施例1、臨床前藥效學(xué)試驗一、體外活性通過99mTc標記的尼妥珠單抗和H-125人肺腺癌腫瘤細胞系、A431人陰道上皮癌腫瘤細胞系以及MDA-MB-468人乳腺癌腫瘤細胞系的平衡結(jié)合試驗來測定尼妥珠單抗結(jié)合腫瘤細胞的能力。在室溫下使用冰凍干燥試劑盒(購自西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司)標記，15分鐘后，平均有(97. 38士0. 23) %的99mTc標記到了 IgG抗體上。在丙酮中單抗的快速紙層析顯示大約3%或更少的自由高锝酸跑到試劑前沿(Rf = 10)。這揭示幾乎所有的高锝酸都被還原。由1. 0%白蛋白浸滲的ITLC方法測定的尼妥珠單抗的膠體形態(tài)是(1.68士0.81)%。99111 標記的尼妥珠單抗的最大結(jié)合(Bmax)可達74. 02%，表1中顯示了每個細胞的EGFR的數(shù)目及抗體和所有細胞系的親和常數(shù)。表1、在人癌癥腫瘤細胞系上的尼妥珠單抗的結(jié)合特性
權(quán)利要求
1.一種抗表皮生長因子受體的單克隆抗體在制備治療食管癌的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述食管癌是指食管癌的鱗狀上皮細胞癌、腺癌及未分化癌中的任意一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述的腺癌是指單純腺癌、腺鱗癌、粘液表皮樣癌和腺樣囊性癌中的任意一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長因子受體的單克隆抗體為尼妥珠單抗。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長因子受體的單克隆抗體的給藥途徑是靜脈注射或靜脈滴注。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗表皮生長因子受體的單克隆抗體的給藥劑量是每周給藥一次，每次100-200mg/l. 5m2體表面積。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述藥物的給藥劑量是每周給藥一次，每次200mg/l. 5m2體表面積。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，更具體地涉及一種抗表皮生長因子受體的單克隆抗體在治療食管癌方面的用途，尤其是人源化單克隆抗體——尼妥珠單抗。該單克隆抗體是針對特異抗原產(chǎn)生的特異純化抗體，它具有高度專一性，能夠特異性針對腫瘤細胞進行靶向治療，從分子水平逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的惡性生物學(xué)行為，具有靶向性強、特異性高和毒副作用低等特點，并能顯著增強放、化療的治療效果。
文檔編號A61K39/395GK102441165SQ20111038018
公開日2012年5月9日 申請日期2011年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月25日
發(fā)明者呂慧, 李桂珠, 梁軍, 王海龍, 王綠化, 白先宏, 羅蘭多, 趙快樂, 鄭雋奇, 馬博晨, 馬國勝 申請人:百泰生物藥業(yè)有限公司