外來體檢測用單克隆抗體的制作方法
【專利摘要】外來體檢測或捕捉用單克隆抗體，其選自：能夠檢測或捕捉外來體的、識別SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的氨基酸編號113～195的單克隆抗體或其抗體片段、識別SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的氨基酸編號104～202的單克隆抗體或其抗體片段、識別SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的氨基酸編號36～54的單克隆抗體或其抗體片段、和識別SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的氨基酸編號113～201的單克隆抗體或其抗體片段。本發(fā)明的外來體檢測用單克隆抗體可以以良好的靈敏度和特異性檢測機體內(nèi)外來體上的CD9、CD63或CD81。
NITE BP-1481
2012.12.12

FERM BP-11519
2012.12.14

FERM BP-11521
2012.12.14

NITE BP-1480
2012.12.12

FERM BP-11520
2012.12.14

NITE BP-1482
2012.12.12
【專利說明】外來體檢測用單克隆抗體

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及檢測外來體的抗體的套件。更詳細而言，涉及針對外來體表面的特定 抗原（CD9、CD63、CD81)的單克隆抗體或其抗體片段、含有該單克隆抗體或其抗體片段的套 件、使用該單克隆抗體或其抗體片段來檢測來源于外來體的miRNA的方法、測定該套件與 來源于受試者的機體試樣的復(fù)合體的方法、使用該套件的癌或免疫系疾病的診斷方法和用 于實施該方法的試劑盒、以及使用該套件的抗癌劑或抗免疫系疾病藥的藥效評價方法和用 于實施該方法的試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 外來體是存在于機體內(nèi)的體液中的囊泡顆粒。已知與通常的細胞表面相同地，在 外來體表面存在各種膜蛋白。另一方面，還已知在外來體內(nèi)部，除了細胞因子等各種蛋白質(zhì) 以外，還含有microRNA(miRNA)。此外，據(jù)報道外來體分泌自各種細胞、例如免疫系的細胞 或各種癌細胞，作為機體內(nèi)的細胞間通信的媒介發(fā)揮功能而與生理現(xiàn)象關(guān)聯(lián)、或者與癌等 疾病的關(guān)聯(lián)性受到關(guān)注。
[0003] 例如，在非專利文獻1中，報道了使用作為腫瘤標志物的EpCAM的抗體來分離卵巢 癌患者的循環(huán)血液中的外來體，并在來源于該外來體的miRNA表達量與卵巢癌患者之間發(fā) 現(xiàn)了關(guān)聯(lián)性。因此，只要可簡便地捕捉與癌等疾病關(guān)聯(lián)的外來體的量的變化，則可期待在外 來體的診斷藥中的應(yīng)用。
[0004] 此外，⑶9、⑶63和⑶81是屬于四跨膜蛋白家族的4次穿膜型膜蛋白，在許多外來 體上表達。例如,非專利文獻2中報道了用⑶63的抗體、或腫瘤關(guān)聯(lián)標志物的Caveolin-I 的抗體對黑素瘤患者血漿中的外來體進行檢測、定量化，與正常人相比有所上升。專利文獻 1中通過組合CD63抗體或針對各種膜蛋白的抗體等來與離心后的血漿樣品反應(yīng)，并對來源 于癌患者中的外來體的信號進行定量、分析。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)文獻 專利文獻 專利文獻I:W02010/065968號小冊子 非專利文獻 非專利文獻I:D.D.Taylor，etal·、Gynecol.Oncol.、2008、110、pl3_21 非專利文獻 2 :M.Logozzi，etal.、PLoS0NE、2009、4、pl-10。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明要解決的技術(shù)問題 作為抗CD9抗體、抗CD63抗體和抗CD81抗體，銷售有各種抗體。這些市售抗體是通過 直接免疫表達CD9、CD63或CD81的細胞而得的抗體之一，而并不是利用設(shè)計的特定抗原進 行免疫得到的抗體。因此，在靈敏度、特異性方面尚不充分，為了迅速且簡便、而且準確且精 度良好地檢測外來體,需要進一步的技術(shù)開發(fā)。
[0007] 本發(fā)明的課題在于提供：能夠以良好的靈敏度和特異性檢測或捕捉機體內(nèi)外來體 的單克隆抗體或其抗體片段、含有該單克隆抗體或其抗體片段的套件、測定該套件與來源 于受試者的機體試樣的復(fù)合體的方法、使用該套件的癌或免疫系疾病的診斷方法、以及使 用該套件的抗癌劑或抗免疫系疾病藥的藥效評價方法。
[0008] 用于解決技術(shù)問題的方法 本發(fā)明人為了解決上述課題而反復(fù)深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過制備并使用針對外來體 上的CD9、CD63和CD81的特定序列的單克隆抗體，能夠以良好的靈敏度和特異性檢測和捕 捉機體內(nèi)外來體，從而完成了本發(fā)明。
[0009]艮P、本發(fā)明涉及： < 1 >外來體檢測或捕捉用單克隆抗體，其選自：能夠檢測或捕捉外來體的、識別SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?195的單克隆抗體或其抗體片段、識 別SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的氨基酸編號104?202的單克隆抗體或其抗體片段、 識別SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的氨基酸編號36?54的單克隆抗體或其抗體片段、 和識別SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?201的單克隆抗體或其抗體片 段。 更詳細而言，涉及以下的< 2 >?< 13 >。
[0010]<2>外來體檢測或捕捉用單克隆抗體，其選自：作為識別SEQIDNO: 1所示的 氨基酸序列的氨基酸編號113?195的單克隆抗體片段的由以保藏編號FERMABP-11519 保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（CD9-12A12抗體）或其片段； 作為識別SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的氨基酸編號104?202的單克隆抗體片段 的由以保藏編號FERMABP-11520保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶63-8A12抗體)或其 片段； 作為識別SEQIDNO:2所示的氨基酸序列的氨基酸編號104?202的單克隆抗體片段 的由以保藏編號FERMABP-11521保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶63-13C8抗體)或其 片段； 作為識別SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?201的單克隆抗體片段 的由以保藏編號NITEABP-1480保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶81-4G6抗體)或其片 段； 作為識別SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?201的單克隆抗體片段 的由以保藏編號NITEABP-1481保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶81-6D12抗體）或其 片段；和 作為識別SEQIDNO:3所示的氨基酸序列的氨基酸編號36?54的單克隆抗體片段的 由以保藏編號NITEABP-1482保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶81-12C4抗體）或其片 段。
[0011] <3>單克隆抗體或其抗體片段的套件，其包含選自下述的同一或二種抗體 或其抗體片段的組合：⑶9-12A12抗體或其抗體片段、⑶63-8A12抗體或其抗體片段、和 ⑶63-13C8抗體或其抗體片段。
[0012] <4>前述<3 >所述的套件，其選自：固相抗體為⑶9-12A12抗體或其抗體片 段、標記抗體為CD9-12A12抗體或其抗體片段的套件； 固相抗體為CD9-12A12抗體或其抗體片段、標記抗體為CD63-13C8抗體或其抗體片段 的套件； 固相抗體為CD63-8A12抗體或其抗體片段、標記抗體為CD9-12A12抗體或其抗體片段 的套件；和 固相抗體為CD63-8A12抗體或其抗體片段、標記抗體為CD63-13C8抗體或其抗體片段 的套件。
[0013] <5 >前述<3 >或<4>所述的套件，其用于檢測外來體。
[0014] < 6 >疾病特異性的外來體檢測用單克隆抗體的套件，其包含選自⑶9-12A12 抗體或其抗體片段、CD63-8A12抗體或其抗體片段、和CD63-13C8抗體或其抗體片段中的抗 體或其抗體片段、與疾病特異性膜蛋白抗體或其抗體片段的組合。
[0015] < 7 >癌或免疫系疾病的診斷試劑盒，其含有前述< 3 >?< 5 >中任一項所 述的套件的單克隆抗體或其抗體片段。
[0016] < 8 >癌或免疫系疾病的診斷試劑盒，其含有前述< 6 >所述的套件的單克隆 抗體或其抗體片段。
[0017] <9>癌或免疫系疾病的診斷試劑盒，其含有前述< 6>所述的套件。
[0018] <10>檢測外來體的miRNA的方法，該方法包括：使來源于受試者的機體試樣 與前述< 1>或< 2 >所述的單克隆抗體接觸而捕捉該外來體。
[0019] <11>測定來源于外來體復(fù)合體的信號強度的方法，該方法包括：使來源于受 試者的機體試樣與前述<3>?<5>中任一項所述的套件的單克隆抗體接觸而形成該外 來體復(fù)合體。
[0020] < 12 >癌或免疫系疾病的判定方法，其是用于判定受試者是否具有癌或免疫 系疾病的發(fā)病的方法，該方法包括： 步驟（I):使來源于受試者的機體試樣與前述< 3 >?< 5 >中任一項所述的套件的 單克隆抗體接觸而形成外來體復(fù)合體，并測定來源于該復(fù)合體的信號強度的步驟；和 步驟（II):將前述步驟（I)中測定得到的信號強度與對照者的信號強度進行對比，在確 認前述受試者的信號強度較對照者的信號強度強時，判定前述受試者具有癌或免疫系疾病 的發(fā)病的步驟。
[0021] < 13 >抗癌劑或抗免疫系疾病藥的藥效評價方法，該方法包括： 步驟(A):使來源于抗癌劑或抗免疫系疾病藥的給藥前和給藥后的受試者的機體試樣 與前述< 3 >?< 5 >中任一項所述的套件的單克隆抗體接觸而形成外來體復(fù)合體，并測 定來源于該復(fù)合體的信號強度的步驟；和 步驟（B):在確認前述來源于抗癌劑或抗免疫系疾病藥的給藥后的受試者的機體試樣 的來源于該復(fù)合體的信號強度較前述來源于抗癌劑或抗免疫系疾病藥的給藥前的受試者 的機體試樣的來源于該復(fù)合體的信號強度弱時，判定抗癌劑或抗免疫系疾病藥顯不藥效的 可能性高的步驟。
[0022] 發(fā)明效果 本發(fā)明的外來體檢測用單克隆抗體能夠以良好的靈敏度和特異性檢測和捕捉機體內(nèi) 外來體上的⑶9、⑶63或⑶81。藉此實現(xiàn)了下述優(yōu)異效果：可以捕捉血液樣本內(nèi)的外來體 的微小變化(除了外來體的量的變化之外，還包括外來體上的膜蛋白的CD9、CD63或CD81的 量的變化)，可以檢測來源于癌等疾病的外來體的變化，可應(yīng)用于診斷作為造成變化的原因 的疾病。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023] [圖1]圖1是示出利用外來體的診斷方法的概念的圖。
[0024] [圖2]圖2是示出四跨膜蛋白家族（⑶9、⑶63和⑶81)的結(jié)構(gòu)的圖（圖A)、和示 出抗體制作中使用的小環(huán)肽綴合物（圖B)和大環(huán)Fc融合蛋白（圖C)的圖。
[0025] [圖3]圖3是用于抗原的⑶9和⑶63的序列信息。
[0026] [圖4]圖4是示出使用單克隆抗體的VLPs(Virus-Like-Particles，病毒樣顆 粒）的評價方法（VLPELISA)。
[0027] [圖5]圖5是進行抗⑶9單克隆抗體的2次評價的圖。
[0028] [圖6]圖6是進行抗⑶63單克隆抗體的2次評價的圖。
[0029] [圖7]圖7是示出⑶9的外來體ELISA的標準曲線的圖。
[0030] [圖8]圖8是示出⑶63的外來體ELISA的標準曲線的圖。
[0031] [圖9]圖9是通過使用市售和本發(fā)明（自制)的抗⑶9抗體或抗⑶63抗體的外來 體ELISA對來自正常人、乳癌患者、和大腸癌患者的血清中的外來體的信號強度進行比較 的圖。
[0032] [圖10]圖10是通過組合本發(fā)明的抗⑶9抗體和抗⑶63抗體的外來體ELISA 對來自正常人、乳癌患者、和大腸癌患者的血清中的外來體的信號強度進行測定的圖。
[0033] [圖11]圖11是通過組合本發(fā)明的抗⑶9抗體或抗⑶63抗體與抗EpCAM抗體的 外來體ELISA對來自正常人、乳癌患者、和大腸癌患者的血清中的外來體的信號強度進行 測定的圖。
[0034] [圖12]圖12是用于抗原的⑶81的序列信息。
[0035] [圖13]圖13是將本發(fā)明的抗CD9抗體與市售的抗CD9抗體進行免疫沉降性能 比較的圖。
[0036] [圖14]圖14是將本發(fā)明的抗CD63抗體與市售的抗CD63抗體進行免疫沉降性 能比較的圖。
[0037] [圖15]圖15是將本發(fā)明的抗CD81抗體與市售的抗CD81抗體進行免疫沉降性 能比較的圖。

【具體實施方式】
[0038] 本發(fā)明的外來體檢測用單克隆抗體具有下述特征：能夠以良好的靈敏度和特異性 檢測或捕捉機體內(nèi)外來體上的CD9、CD63或CD81。所以，有時也將本發(fā)明的單克隆抗體記 載為外來體檢測或捕捉用單克隆抗體。
[0039] 外來體上的⑶9、⑶63、⑶81分別是由SEQIDNO:1所示的氨基酸序列組成的多 肽、由SEQIDNO:2所示的氨基酸序列組成的多肽、由SEQIDNO:3所示的氨基酸序列組成 的多肽。此外，CD9、CD63和CD81均是屬于具有圖2A所示4次穿膜型的結(jié)構(gòu)的四跨膜蛋白 家族的膜蛋白。這些膜蛋白將小環(huán)(記為EC1)和大環(huán)(記為EC2)這2種環(huán)結(jié)構(gòu)提呈至細胞 夕卜，本發(fā)明的單克隆抗體的特征在于，對這些環(huán)表現(xiàn)出特異性的識別。
[0040]以下，對本發(fā)明的外來體檢測或捕捉用單克隆抗體的制備方法、含有該抗體的套 件、利用該抗體或套件的評價方法、和使用該抗體的外來體的捕捉進行詳述。
[0041] <單克隆抗體的制備方法> (抗原的制備） 本發(fā)明的單克隆抗體是如下所述設(shè)計抗原而制備的，因而對抗原的靈敏度和特異性優(yōu) 異。
[0042] 依照公知的方法合成外來體的⑶9、⑶63或⑶81的小環(huán)肽，S卩，在⑶9多肽的 Arg36_Asn50、0)63 多膚的Val38_Pro54、0)81 多膚的Arg36_Ala54 的氨基末端添加了半 胱氨酸殘基的肽。對于所得的各肽，使用進行了馬來酰亞胺化的KLH〔KeyholeLimpet HemocyaniruImject(注冊商標)MaleimideActivatedmcKLH、1^。7 7社制〕，經(jīng)由膚的SH 基制備半抗原。圖2B示出前述免疫原的模式圖，圖3A和圖12A示出其肽序列。
[0043] 此外，家兔IgG的Fc區(qū)與⑶9、⑶63或⑶81的大環(huán)肽的融合蛋白（Fe融合蛋白） 也可用作抗原。具體可如下制備：將導(dǎo)入了與在⑶9多肽的Hisll3-Ilel95、⑶63多肽的 Glyl04-Asn202、CD81多肽的Phell3-Lys201的羧基末端添加有Fc的多肽對應(yīng)的多核苷酸 序列的質(zhì)粒載體導(dǎo)入例如Freestyle293-F細胞（Invitrogen公司（4V匕'卜口 '7'工V 社）制)并瞬時表達，然后使用蛋白A柱（MAPSII試劑盒、Bio-RadLaboratoriesInc.) 進行純化，由此制備。圖2C示出前述免疫原的模式圖，圖3B和圖12B示出其肽序列。
[0044](單克隆抗體的制備） 本發(fā)明的外來體檢測用單克隆抗體（以下也簡稱為本發(fā)明的單克隆抗體）并無 特別限定，可依照公知的方法、例如、K.Watanabeetal.，Vasohibinasan endothelium-derivednegativefeedbackregulatorofangiogenesis,J.Clin. Invest. 114 (2004),898-907 中記載的方法制備。
[0045] 具體地，首先使用上述所得的抗原對哺乳動物進行免疫。作為哺乳動物，沒有特別 限制，通常可使用小鼠、大鼠、牛、兔、山羊、綿羊、豚鼠等。其中，優(yōu)選小鼠和大鼠、更優(yōu)選小 鼠、作為所述小鼠，例示有A/J系、BALB/C系、DBA/2系、C57BL/6系小鼠。此外，該哺乳動物 的年齡根據(jù)使用的動物種類而不同，沒有特別限定，在小鼠或大鼠的情形，通常為約4?12 周齡、優(yōu)選為約5?10周齡。應(yīng)予說明，為了制造本發(fā)明的單克隆抗體，可以考慮與進行細 胞融合的轉(zhuǎn)化細胞的適合性來選擇這些哺乳動物。
[0046] 為了增強免疫應(yīng)答，抗原與佐劑混合而作為免疫原使用。作為佐劑，可以沒有特別 限定地使用公知的佐劑。此外，該佐劑與抗原的混合，對于使用的佐劑，可以依照本領(lǐng)域公 知的方法。
[0047] 哺乳動物的免疫依照本領(lǐng)域公知的方法進行。例如，通過將免疫原向哺乳動物的 皮下、皮內(nèi)、靜脈、和/或腹腔內(nèi)注射給藥來進行。此外，免疫原的給藥可以在最初的免疫后 重復(fù)數(shù)次進行，其給藥間隔可適宜調(diào)整。應(yīng)予說明，免疫應(yīng)答根據(jù)被免疫的哺乳動物的種類 和系統(tǒng)而不同，因而免疫計劃和免疫原的給藥量可對應(yīng)于所用動物適宜設(shè)定。
[0048] 如此，可在經(jīng)免疫的哺乳動物體內(nèi)制備所期望的抗體產(chǎn)生細胞。作為所述抗體產(chǎn) 生細胞，優(yōu)選為在免疫原的最終給藥的3?5天后采集的脾細胞。應(yīng)予說明，為了使經(jīng)免疫 的哺乳動物的脾臟肥大化，可以進行加強(免疫原的追加注射)。在加強中所給藥的免疫原 的量理想的是最初給藥的免疫原的量的約4?5倍，可以以此為標準進行適宜增減。
[0049] 接著，將所得抗體產(chǎn)生細胞與來源于骨髓瘤的細胞（骨髓瘤細胞）進行細胞融合， 制備雜交瘤。
[0050] 雜交瘤的增殖能力依賴于細胞融合中所用骨髓瘤細胞的種類，因而作為骨髓瘤細 胞，優(yōu)選為增殖能力優(yōu)異的細胞。此外，骨髓瘤細胞優(yōu)選與產(chǎn)生待融合抗體產(chǎn)生細胞的哺乳 動物具有相容性。作為該實例，例示有小鼠骨髓瘤P3Ul、X63-Ag8. 653等骨髓瘤細胞。
[0051] 細胞融合的方法可以使用本領(lǐng)域公知的方法，例如，例示有使用聚乙二醇（PEG)的 方法、使用仙臺病毒的方法、使用電融合裝置的方法等。
[0052] 所得的雜交瘤可以依照公知方法通過用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)來分離。應(yīng)予說明，為了 確認所選擇的雜交瘤是否產(chǎn)生所期望的抗體，可以采集培養(yǎng)上清，基于公知的方法、例如、 后述ELISA法進行抗體效價測定。
[0053] 這樣，可以得到產(chǎn)生所期望的單克隆抗體的雜交瘤。該雜交瘤可以用通常的培養(yǎng) 基傳代培養(yǎng)，還可以在液氮中半永久地保存。
[0054] 所期望的單克隆抗體可以通過體內(nèi)和體外的培養(yǎng)法來大量制備。體外培養(yǎng)法可通 過在適當(dāng)?shù)难迮囵B(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)雜交瘤來實施，所期望的單克隆抗體產(chǎn)生在 培養(yǎng)基中。根據(jù)該培養(yǎng)法，可以以培養(yǎng)上清的形式得到比較高純度的所期望的抗體。此外， 體內(nèi)培養(yǎng)法可以通過將雜交瘤注射接種于與雜交瘤具有相容性的哺乳類動物、例如小鼠等 的腹腔內(nèi)并進行增殖來實施，所期望的抗體可以以小鼠腹水的形式大量回收。
[0055] 所得培養(yǎng)上清和小鼠等的腹水可以直接作為粗制抗體液使用。此外，它們可以依 照常法，例如，通過適宜組合DEAE陰離子交換色譜法、親和色譜法、硫酸銨分級沉淀法、PEG 分級沉淀法、乙醇分級沉淀法等來純化，制為純化抗體。
[0056] 這樣得到的本發(fā)明的單克隆抗體示于表1。本說明書中，各單克隆抗體可通過抗原 蛋白和克隆編號來表示，例如，可表示為CD9-12A12抗體。
[0057] [表 1]

【權(quán)利要求】
1. 外來體檢測或捕捉用單克隆抗體，其選自：能夠檢測或捕捉外來體的、識別SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?195的單克隆抗體或其抗體片段、識別SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列的氨基酸編號104?202的單克隆抗體或其抗體片段、識別SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列的氨基酸編號36?54的單克隆抗體或其抗體片段、和識別SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?201的單克隆抗體或其抗體片段。
2. 外來體檢測或捕捉用單克隆抗體，其選自：作為識別SEQ ID NO :1所示的氨基酸序 列的氨基酸編號113?195的單克隆抗體片段的由以保藏編號FERM ABP-11519保藏的雜 交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（CD9-12A12抗體）或其片段； 作為識別SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列的氨基酸編號104?202的單克隆抗體片段 的由以保藏編號FERM ABP-11520保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶63-8A12抗體)或其 片段； 作為識別SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列的氨基酸編號104?202的單克隆抗體片段 的由以保藏編號FERM ABP-11521保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶63-13C8抗體)或其 片段； 作為識別SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?201的單克隆抗體片段 的由以保藏編號NITE ABP-1480保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶81-4G6抗體)或其片 段； 作為識別SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列的氨基酸編號113?201的單克隆抗體片段 的由以保藏編號NITE ABP-1481保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶81-6D12抗體）或其 片段；和 作為識別SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列的氨基酸編號36?54的單克隆抗體片段的 由以保藏編號NITE ABP-1482保藏的雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體（⑶81-12C4抗體）或其片 段。
3. 單克隆抗體或其抗體片段的套件，其包含選自下述的同一或二種抗體或其抗體片 段的組合：⑶9-12A12抗體或其抗體片段、⑶63-8A12抗體或其抗體片段、和⑶63-13C8抗體 或其抗體片段。
4. 權(quán)利要求3所述的套件，其選自：固相抗體為CD9-12A12抗體或其抗體片段、標記抗 體為CD9-12A12抗體或其抗體片段的套件； 固相抗體為CD9-12A12抗體或其抗體片段、標記抗體為CD63-13C8抗體或其抗體片段 的套件； 固相抗體為CD63-8A12抗體或其抗體片段、標記抗體為CD9-12A12抗體或其抗體片段 的套件；和 固相抗體為CD63-8A12抗體或其抗體片段、標記抗體為CD63-13C8抗體或其抗體片段 的套件。
5. 權(quán)利要求3或4所述的套件，其用于檢測外來體。
6. 疾病特異性的外來體檢測用單克隆抗體的套件，其包含選自CD9-12A12抗體或其 抗體片段、CD63-8A12抗體或其抗體片段、和CD63-13C8抗體或其抗體片段中的抗體或其抗 體片段、與疾病特異性膜蛋白抗體或其抗體片段的組合。
7. 癌或免疫系疾病的診斷試劑盒，其含有權(quán)利要求3?5中任一項所述的套件的單克 隆抗體或其抗體片段。
8. 癌或免疫系疾病的診斷試劑盒，其含有權(quán)利要求6所述的套件的單克隆抗體或其 抗體片段。
9. 癌或免疫系疾病的診斷試劑盒，其含有權(quán)利要求6所述的套件。
10. 檢測外來體的miRNA的方法，該方法包括：使來源于受試者的機體試樣與權(quán)利要 求1或2所述的單克隆抗體接觸而捕捉該外來體。
11. 測定來源于外來體復(fù)合體的信號強度的方法，該方法包括：使來源于受試者的機 體試樣與權(quán)利要求3?5中任一項所述的套件的單克隆抗體接觸而形成所述外來體復(fù)合 體。
12. 癌或免疫系疾病的判定方法，其是用于判定受試者是否具有癌或免疫系疾病的發(fā) 病的方法，該方法包括： 步驟（I):使來源于受試者的機體試樣與權(quán)利要求3?5中任一項所述的套件的單克 隆抗體接觸而形成外來體復(fù)合體，并測定來源于該復(fù)合體的信號強度的步驟；和 步驟（II):將前述步驟（I)中測定得到的信號強度與對照者的信號強度進行對比，在確 認前述受試者的信號強度較對照者的信號強度強時，判定前述受試者具有癌或免疫系疾病 的發(fā)病的步驟。
13. 抗癌劑或抗免疫系疾病藥的藥效評價方法，該方法包括： 步驟(A):使來源于抗癌劑或抗免疫系疾病藥的給藥前和給藥后的受試者的機體試樣 與權(quán)利要求3?5中任一項所述的套件的單克隆抗體接觸而形成外來體復(fù)合體，并測定來 源于該復(fù)合體的信號強度的步驟；和 步驟（B):在確認前述來源于抗癌劑或抗免疫系疾病藥的給藥后的受試者的機體試樣 的來源于該復(fù)合體的信號強度較前述來源于抗癌劑或抗免疫系疾病藥的給藥前的受試者 的機體試樣的來源于該復(fù)合體的信號強度弱時，判定抗癌劑或抗免疫系疾病藥顯不藥效的 可能性高的步驟。
【文檔編號】C07K16/18GK104302667SQ201280064577
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2012年12月26日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月26日
【發(fā)明者】太田英樹, C.岡田, 村上登美, 岡本博之, 園田光 申請人:鹽野義制藥株式會社