拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路在抗肝癌治療中的用途技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明屬于生物技術(shù)和醫(yī)藥領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種治療肝癌的新方法，即拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路；同時(shí)證明了該方法與現(xiàn)有肝癌治療藥物合用具有協(xié)同效果。由此，本發(fā)明提供了IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路拮抗劑和/或阻斷劑或其與現(xiàn)有肝癌治療藥物的聯(lián)用在肝癌治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：
原發(fā)性肝癌是全世界范圍內(nèi)最主要的健康威脅之一，它是列全球第五的高發(fā)腫瘤和第三的腫瘤相關(guān)死亡原因，每年增加超過(guò)56萬(wàn)新發(fā)肝癌病例，并引起超過(guò)50萬(wàn)例病人死亡。其中，肝細(xì)胞癌起源于肝細(xì)胞，約占全部原發(fā)性肝癌的80％。目前肝癌的治療方案主要包括：手術(shù)切除、肝臟移植、射頻消融、肝動(dòng)脈化療栓塞和索拉非尼(Sorafenib)治療。由于在高危人群中臨床監(jiān)控措施的不斷發(fā)展完善，通過(guò)常規(guī)的普查和監(jiān)護(hù)，越來(lái)越多的肝癌病人可以在早期得到診斷和治療。通過(guò)手術(shù)切除、肝臟移植或者射頻消融，其中的很多病人可以得到很好的治療效果，甚至部分病人可以治愈。然而，由于肝癌細(xì)胞具有高度增殖的特性，絕大多數(shù)肝癌患者仍是在中晚期才被發(fā)現(xiàn)，而此時(shí)腫瘤已不能采用手術(shù)切除而被迫采取姑息治療。就目前而言，唯一有效的姑息療法就是肝動(dòng)脈化療栓塞。雖然其它治療方案，比如單獨(dú)肝動(dòng)脈栓塞或者內(nèi)放療，可以取得一定的效果，但是對(duì)延長(zhǎng)病人的生存期并沒(méi)有明顯的影響。對(duì)于肝癌患者而言，不管是全身性的化療或者還是局部動(dòng)脈內(nèi)給藥，往往對(duì)患者產(chǎn)生較大的毒副作用，且還不能有效的抑制腫瘤生長(zhǎng)和延長(zhǎng)病人的生存期。因此，在中晚期肝癌病人的治療方案中，一般不建議給予單純的化療。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)多激酶抑制劑索拉非尼可以明顯促進(jìn)晚期肝癌患者的生存，該項(xiàng)研究進(jìn)展是對(duì)于肝癌治療的突破性進(jìn)展，由此證明了分子靶向藥物用于肝癌治療的廣闊應(yīng)用前景。近年來(lái)，腫瘤生物學(xué)研究的積累使得分子靶向治療在臨床治療中得以實(shí)際應(yīng)用，尤其是對(duì)生長(zhǎng)控制和血管發(fā)生信號(hào)通路中關(guān)鍵酶促反應(yīng)步驟的鑒定，有助于開(kāi)發(fā)出針對(duì)參與此過(guò)程的多種激酶的特異性化學(xué)抑制劑和抗體?；谶@些研究成果，目前已經(jīng)發(fā)展出全新的、非化學(xué)治療藥物以用于單獨(dú)或者聯(lián)合常規(guī)化療藥物治療腫瘤，其中還有部分藥物已經(jīng)在二期或三期臨床實(shí)驗(yàn)中顯示出很好的效果。此外，這些分子靶向藥物還可以用于手術(shù)后的輔助化療。并且，越來(lái)越多的研究證據(jù)顯示，即便部分分子靶向藥物并未引起腫瘤體積縮小，卻明顯延長(zhǎng)了腫瘤病人的生存期，這一點(diǎn)顛覆了以前本領(lǐng)域?qū)τ谀[瘤治療的固有認(rèn)知?；谀[瘤分子生物學(xué)開(kāi)發(fā)出的分子靶向藥物針對(duì)腫瘤治療的功能靶向主要包括：腫瘤細(xì)胞增殖、存活、凋亡和血管發(fā)生等。而參與到肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中與肝癌細(xì)胞增殖、存活、凋亡和血管發(fā)生的主要信號(hào)通路包括：RAS/RAF/MAPK/ERK信號(hào)通路、PI3K/AKT/MTOR信號(hào)通路、WNT/β-CATENIN信號(hào)通路和JAK/STAT信號(hào)通路等。目前已經(jīng)進(jìn)入臨床二期和三期實(shí)驗(yàn)的肝癌分子靶向藥物主要包括：可靶向針對(duì)PDGFR和VEGFR的多靶向酪氨酸激酶抑制劑ABT-869、MEK抑制劑AZD-6244、凋亡誘導(dǎo)劑硼替佐米(Bortezomib)、抗VEGF單克隆抗體貝伐單抗(Bevacizumab)、可靶向針對(duì)VEGFR-2V，EGFR-3，F(xiàn)GFR-1，F(xiàn)GFR-2的多靶向酪氨酸激酶抑制劑Brivanib、可靶向針對(duì)VEGFR-1，VEGFR-2，VEGFR-3的多靶向酪氨酸激酶抑制劑Cediranib、抗EGFR單克隆抗體西妥昔單抗(Cetuximab)、針對(duì)BCR/ABL的多靶向激酶抑制劑Dasatinib、針對(duì)EGFR的酪氨酸激酶抑制劑Erlotinib、作為mTOR抑制劑的雷帕霉素類(lèi)似物依維莫司(Everolimus)、針對(duì)EGFR的酪氨酸激酶抑制劑Gefitinib、半胱天冬酶抑制劑IDN-6556、抗VEGFR-2單克隆抗體IMC-1121B、針對(duì)EGFR和HER-2/neu的雙向酪氨酸激酶抑制劑Lapatinib、針對(duì)半胱天冬酶，VEGF和FGF的抑制劑PI-88、針對(duì)Raf，PDGFR-b，VEGFR-2/-3，KIT，F(xiàn)lt-3的多靶向酪氨酸激酶抑制劑索拉非尼、針對(duì)VEGFR-2，PDGFR-b，KIT，F(xiàn)lt-3的多靶向酪氨酸激酶抑制劑Sunitinib、針對(duì)VEGFR，PDGFR，F(xiàn)GFR的多靶向酪氨酸激酶抑制劑TSU-68和針對(duì)VEGFR的酪氨酸激酶抑制劑Vandetanib等。其中，多靶向酪氨酸激酶抑制劑索拉非尼在臨床晚期肝癌治療中已得到廣泛應(yīng)用，能明顯促進(jìn)晚期肝癌病人存活。盡管已有研究證實(shí)IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的異?；罨诙喾N腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用(例如以IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)為治療靶點(diǎn)的分子靶向藥物已經(jīng)用于卵巢癌等惡性腫瘤治療的二期臨床研究)，但是目前尚未開(kāi)發(fā)任何靶向到此信號(hào)通路的肝癌治療藥物。已知的拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的活性成分包括但不限于：抗IL-6中和性單克隆抗體(包括但不限于Siltuximab)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體(包括但不限于Tocilizumab)、抗gp130阻斷性單克隆抗體(包括但不限于RX435)和gp130抑制劑(包括但不限于(+)-MadindolineA)。其中Siltuximab、Tocilizumab和RX435在青少年難治性類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和多發(fā)性骨髓瘤的治療中發(fā)揮著很好的抑制IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的異常活化的作用，起到了緩解癥狀、改善病情的效果。綜上所述，雖然本領(lǐng)域中已有針對(duì)肝癌治療的藥物，但仍然迫切需要開(kāi)發(fā)出效果更佳和/或可與現(xiàn)有治療藥物聯(lián)用的肝癌治療藥物，以產(chǎn)生更佳的治療效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的之一為提供了一種拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路方法在抗肝癌治療中的用途。本發(fā)明的另一主要目的為拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路與現(xiàn)有肝癌治療藥物聯(lián)合使用在抗肝癌治療方面具有協(xié)同療效。在本發(fā)明的第一方面中，提供了白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑在制備抗肝癌的藥物組合物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物組合物包含：(a)白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑；(b)藥學(xué)上或免疫學(xué)上可接受的載體或賦形劑；和(c)任選的，其它抗肝癌藥物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物組合物與其它抗肝癌藥物聯(lián)合使用或包含其它抗肝癌藥物。在一個(gè)優(yōu)選例中，當(dāng)所述藥物組合物與其它抗肝癌藥物聯(lián)合使用時(shí)，在給予所述藥物組合物之前、同時(shí)或之后給予所述其它抗肝癌藥物。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述拮抗劑和/或阻斷劑與所述其它抗肝癌藥物的摩爾比為1∶10～10∶1，優(yōu)選1∶4～4∶1，更優(yōu)選1∶2～2∶1，進(jìn)一步優(yōu)選為1∶1。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述拮抗劑和/或阻斷劑與所述其它抗肝癌藥物的重量比為1∶10～10∶1，優(yōu)選1∶4～4∶1，更優(yōu)選1∶2～2∶1，進(jìn)一步優(yōu)選為1∶1。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述拮抗劑和/或阻斷劑選自：抗白介素-6的抗體、抗白介素-6受體的抗體、抗白介素-6-白介素-6受體復(fù)合物的抗體、抗gp130的抗體、白介素-6抑制劑、白介素-6受體抑制劑或gp130抑制劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗體選自：?jiǎn)慰寺】贵w、多克隆抗體、人源化抗體、人抗體、嵌合抗體、雙特異抗體、線性抗體、抗體活性片段；或保留至少10-7、10-8或10-9或更高結(jié)合親和力的這些抗體中任一種的突變蛋白。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述抗體活性片段選自：Fv、Fab、Fab’或F(ab’)2。在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述抗體選自：中和抗體或阻斷性抗體。在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述拮抗劑和/或阻斷劑選自：抗白介素-6中和性單克隆抗體、抗白介素-6受體阻斷性單克隆抗體、抗gp130阻斷性單克隆抗體和gp130抑制劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述拮抗劑和/或阻斷劑選自：Siltuximab、Tocilizumab、RX435、(+)-MadindolineA、或它們藥學(xué)上可接受的鹽或酯或其它衍生物。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述鹽或酯選自：(+)-MadindolineA的鹽和酯。在另一個(gè)優(yōu)選例中，所述的其它衍生物選自：(+)-MadindolineA的蘋(píng)果酸鹽、(+)-MadindolineA的檸檬酸鹽、(+)-MadindolineA的乙酸酯等。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述的其它抗肝癌藥物選自：DNA損傷類(lèi)化療藥、多靶向酪氨酸激酶抑制劑、細(xì)胞增殖抑制劑、血管增生抑制劑、烷化劑、抗代謝藥、抗腫瘤抗生素、植物類(lèi)抗癌藥、激素、或免疫抑制劑。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述的其它抗肝癌藥物選自：順鉑、多柔比星和索拉非尼。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述藥物組合物包含：選自下組的一種或多種拮抗劑和/或阻斷劑：Siltuximab、Tocilizumab、RX435、(+)-MadindolineA、或它們藥學(xué)上可接受的鹽或酯或其它衍生物；選自下組的一種或多種其它抗肝癌藥物：順鉑、多柔比星和索拉非尼；以及藥學(xué)上或免疫學(xué)上可接受的載體或賦形劑。在本發(fā)明的第二方面中，提供了一種藥物組合物，其包含：(a)白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑；(b)藥學(xué)上或免疫學(xué)上可接受的載體；和(c)其它抗肝癌藥物。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組分(a)和組分(c)如上文中所定義。在本發(fā)明的第三方面中，提供了一種藥盒，其包含：(i)容納有白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑的容器；(ii)容納其它抗肝癌藥物的容器；和任選的(iii)使用說(shuō)明書(shū)。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述藥盒還包含稀釋劑、溶劑、緩沖液、藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑、佐劑。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組分(a)和組分(c)如上文中所定義。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，還提供了一種治療肝癌的方法，所述方法包括將本發(fā)明的藥物組合物或藥盒給予需要該治療的對(duì)象，或?qū)捉樗?6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑與其它抗肝癌藥物聯(lián)合給予需要該治療的對(duì)象。在一個(gè)優(yōu)選例中，所述組分(a)和組分(c)如上文中所定義。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開(kāi)，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。附圖說(shuō)明以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡述。圖1：IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的示意圖。圖2：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用。其中：圖2A為抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用；圖2B為抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用；圖2C為抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用；圖2D為gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用。圖3：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用。其中：圖3A為抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用；圖3B為抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用；圖3C為抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用；圖3D為gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用。圖4：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤的抑制作用。其中：圖4A為抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab對(duì)裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤的抑制作用；圖4B為抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab對(duì)裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤的抑制作用；圖4C為抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435對(duì)裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤的抑制作用；圖4D為gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA對(duì)裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤的抑制作用。圖5：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路與順鉑在抑制肝癌細(xì)胞增殖中的協(xié)同作用。其中：圖5A為抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab與順鉑抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖5B為抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab與順鉑抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖5C為抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435與順鉑抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖5D為gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA與順鉑抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用。圖6：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路與多柔比星在抑制肝癌細(xì)胞增殖中的協(xié)同作用。其中：圖6A為抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab與多柔比星抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖6B為抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab與多柔比星抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖6C為抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435與多柔比星抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖6D為gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA與多柔比星抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用。圖7：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路與索拉非尼在抑制肝癌細(xì)胞增殖中的協(xié)同作用。其中：圖7A為抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab與索拉非尼抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖7B為抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab與索拉非尼抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖7C為抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435與索拉非尼抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用；圖7D為gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA與索拉非尼抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的協(xié)同作用。圖2～7中的“*”表示與對(duì)照組相比具有顯著性差異(p＜0.05)。具體實(shí)施方式本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期而深入的研究，發(fā)現(xiàn)拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的活性成分(例如抗IL-6中和性單克隆抗體(包括但不限于Siltuximab)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體(包括但不限于Tocilizumab)、抗gp130阻斷性單克隆抗體(包括但不限于RX435)和gp130抑制劑(包括但不限于(+)-MadindolineA))具有抗肝癌治療的作用，其可明顯抑制肝癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到治療肝癌的效果，并發(fā)現(xiàn)該類(lèi)藥物與現(xiàn)有肝癌治療藥物合用具有顯著的協(xié)同治療肝癌的效果。在此基礎(chǔ)上，發(fā)明人完成了本發(fā)明。白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑如本文所用，術(shù)語(yǔ)“白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑”或“IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)途徑”是指細(xì)胞因子IL-6通過(guò)由IL-6R和gp130組成的受體復(fù)合物向細(xì)胞內(nèi)傳遞信號(hào)的途徑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑”、“IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)途徑拮抗劑和/或阻斷劑”或“本發(fā)明的拮抗劑和/或阻斷劑”可互換使用，均是指可用于拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)途徑的活性物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”是指通過(guò)空間位阻、構(gòu)型改變或其它生物化學(xué)機(jī)制以干擾一種分子與另一種分子的結(jié)合或干擾另一種細(xì)胞對(duì)一種細(xì)胞的刺激的特性的物質(zhì)(如分子、化合物或藥物)，例如通過(guò)不同受體產(chǎn)生相反效應(yīng)的功能性拮抗或生理性拮抗、通過(guò)與激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合、與受體相關(guān)的中間體結(jié)合等方式。術(shù)語(yǔ)“阻斷劑”是指部分或全部阻止或抑制某一作用的物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“拮抗劑”和“阻斷劑”不局限于任何具體的作用機(jī)制，而是泛泛地指本文所述的功能特性。本發(fā)明的拮抗劑和/或阻斷劑可為本領(lǐng)域中已知的活性物質(zhì)，包括但不限于：抗IL-6、IL-6R、gp130或它們的任意復(fù)合物的抗體；IL-6、IL-6R、gp130基因轉(zhuǎn)錄、翻譯和/或表達(dá)的抑制劑(如siRNA、反義寡核苷酸)；IL-6、IL-6R、gp130結(jié)合和/或功能抑制劑等(如與IL-6競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合IL-6R的結(jié)合抑制劑)。例如，中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)200480031888.x、200680049195.2、200880025053.1中所記載的活性物質(zhì)等，這些文獻(xiàn)以其全文納入本文作為參考。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述拮抗劑和/或阻斷劑優(yōu)選為抗體，更優(yōu)選為單克隆抗體、多克隆抗體、人源化抗體、人抗體、嵌合抗體、抗體活性片段(如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2)。所述抗體可通過(guò)本領(lǐng)域中已知的方法獲得，例如可參考Harlow和Lane，《抗體：實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(Antibodies：ALaboratoryManual)，冷泉港實(shí)驗(yàn)室(ColdSpringHarborLaboratory)(1988))等。優(yōu)選采用單克隆抗體，其制備可采用最先由Kohler等(Nature，256：495(1975))描述的雜交瘤方法或重組DNA法完成。本發(fā)明中優(yōu)選采用選自下組的拮抗劑和/或阻斷劑：抗IL-6中和性單克隆抗體、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體(Tocilizumab)、抗gp130阻斷性單克隆抗體和gp130抑制劑((+)-MadindolineA)。本發(fā)明的拮抗劑和/或阻斷劑能明顯發(fā)揮的抑制肝癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡的作用，與現(xiàn)有肝癌治療藥物合用具有顯著的協(xié)同效果。其它抗肝癌藥物本發(fā)明的拮抗劑和/或阻斷劑不僅本身能明顯發(fā)揮的抑制肝癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡的作用，其還可與現(xiàn)有抗肝癌藥物合用產(chǎn)生顯著的協(xié)同效果。所述其它抗肝癌藥物包括但不限于：烷化劑，例如碳鉑或順鉑；氮芥烷化劑；亞硝基脲烷化劑，例如卡莫司汀(BCNU)；抗代謝物，例如氨甲蝶呤；亞葉酸；嘌呤類(lèi)似物抗代謝物、巰基嘌呤；嘧啶類(lèi)似物抗代謝物，例如氟尿嘧啶(5-FU)和吉西他濱激素抗瘤劑，例如戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林和他莫昔芬；天然抗瘤劑，例如阿地白介素、白介素-2、多西它賽(docetaxel)、依托泊苷(VP-16)、干擾素α、紫杉醇和維甲酸(ATRA)；抗生素性天然抗瘤劑，例如博萊霉素、放線菌素、柔紅霉素、阿霉素、道諾霉素和絲裂霉素；和長(zhǎng)春花生物堿天然抗瘤劑，例如長(zhǎng)春花堿、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春地辛；羥基脲；乙酰葡醛酸內(nèi)酯、阿霉素、異磷酰胺、依諾他濱、表硫雄醇、阿柔比星、安西他濱、尼莫司汀、鹽酸丙卡巴肼、卡波醌、碳鉑、卡莫氟、色霉素A3、抗腫瘤多糖、抗腫瘤血小板因子、環(huán)磷酰胺裂殖菌多糖、阿糖胞苷(阿拉伯糖胞苷)、達(dá)卡巴嗪、硫代肌苷、塞替派、替加氟、多拉司他汀、多拉司他汀類(lèi)似物，例如奧里斯他汀(auristatin)、CPT-11(依立替康)、米托蒽醌、長(zhǎng)春瑞濱、替尼泊苷、氨基蝶呤、洋紅霉素、埃斯泊拉米星(esperamicin)(參見(jiàn)，例如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,675,187)、新制癌菌素、OK-432、博萊霉素、氟鐵龍、溴尿苷、白消安、二磷酸己烯雌酚四鈉、培洛霉素、貝他定干擾素-β、美雄烷、二溴甘露醇、美法蘭、層粘連蛋白肽、磨茹多糖、雜色革蓋菌提取物、替加氟/尿嘧啶、雌莫司汀(雌激素/氮芥)。此外，用作癌癥患者治療劑的其它藥劑包括：EPO；G-CSF；更昔洛韋；抗生素；醋酸亮丙瑞林；哌替啶；齊多夫定(AZT)；白介素1-18，包括突變體和類(lèi)似物；干擾素或細(xì)胞因子，例如干擾素α、β和γ；激素，例如促黃體激素釋放激素(LHRH)和類(lèi)似物及促性腺激素釋放激素(GnRH)；生長(zhǎng)因子，例如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)、生長(zhǎng)激素釋放因子(GHRF)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子同源因子(FGFHF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)和胰島素生長(zhǎng)因子(IGF)；腫瘤壞死因子-α和β(TNF-α和β)；侵襲抑制因子-2(IIF-2)；骨形成蛋白1-7(BMP1-7)；生長(zhǎng)激素抑制素；胸腺素-α-1；γ-球蛋白；超氧化物歧化酶(SOD)；補(bǔ)體因子；抗血管生成因子；抗原性物質(zhì)；和前藥。前藥指藥學(xué)活性物質(zhì)的前體或衍生形式，與親代藥物相比，其對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性較低或無(wú)細(xì)胞毒性，但能經(jīng)酶活化或轉(zhuǎn)化成活性或更具活性的親代形式。前藥包括但不限于：含磷酸鹽的前藥、含硫代磷酸鹽的前藥、含硫酸鹽的前藥、含肽的前藥、D-氨基酸修飾的前藥、糖基化前藥、含β-內(nèi)酰胺的前藥、任選取代的含苯氧基乙酰胺前藥或任選親代的含苯基乙酰胺前藥、5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿嘧啶，這些前藥可轉(zhuǎn)化成更具活性的細(xì)胞毒性游離藥物?？裳苌杀疚乃们八幮问降募?xì)胞毒性藥物的實(shí)例包括但不限于：上述那些化療劑。藥物組合物或藥盒本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含：(a)白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑；(b)藥學(xué)上或免疫學(xué)上可接受的載體；和(c)任選的，其它抗肝癌藥物。該藥物組合物可有效用于肝癌的治療。如組合物中存在其它抗肝癌藥物，則其與白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑的摩爾比為1∶10～10∶1，優(yōu)選1∶4～4∶1，更優(yōu)選1∶2～2∶1，進(jìn)一步優(yōu)選為1∶1，從而相互間起到協(xié)同作用。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上(或免疫學(xué)上)可接受的載體”指用于保健品或藥物制劑的載體，包括各種賦形劑和稀釋劑，它們本身并不是必要的活性成分，且施用后沒(méi)有或沒(méi)有過(guò)分的毒性。合適的載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。例如，藥學(xué)上可接受的載體詳細(xì)記載于《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington’sPharmaceuticalSciences，MackPub.Co.，N.J.1991)。在組合物中藥學(xué)上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、泡騰劑、潤(rùn)濕劑或乳化劑、矯味劑、pH緩沖物質(zhì)等。通常，可將這些物質(zhì)配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通常約為5-8，較佳地，pH約為6-8。本發(fā)明的組合物中活性物質(zhì)(a)和(b)占組合物總重量的0.001-99.9wt％；優(yōu)選為組合物總重量的1-95wt％，較優(yōu)選為5-90wt％，更優(yōu)選10-80wt％。余量為載體以及其它添加劑等物質(zhì)。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述組合物為單位劑型或多劑型。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“單位劑型”是指為了服用或使用方便，將本發(fā)明的組合物制備成單次服用或使用所需的劑型，包括但不限于各種固體劑(如片劑)、液體劑、膠囊劑、緩釋劑。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選例中，每天施用1-6劑本發(fā)明的組合物，優(yōu)選施用1-3劑；在高劑量時(shí)優(yōu)選每天服用1劑。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，每天給對(duì)象施用0.001-10mg/kg體重的本發(fā)明組合物，優(yōu)選0.01-5mg/kg體重，更優(yōu)選0.01-1mg/kg體重。應(yīng)理解，所用活性物質(zhì)的有效劑量可隨需預(yù)防或治療的對(duì)象的個(gè)體情況(例如對(duì)象體重、年齡、身體狀況、所需達(dá)到的效果)來(lái)決定，這在熟練醫(yī)師或營(yíng)養(yǎng)師可以判斷的范圍內(nèi)。本發(fā)明的組合物，可以為固態(tài)(如顆粒劑、片劑、凍干粉、栓劑、膠囊、舌下含片)或液態(tài)(如口服液、溶液劑或糖漿劑)或其它合適的形式。本發(fā)明還提供了一種用于肝癌治療的藥盒，其中含有：(i)容納有白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑的容器；(ii)容納其它抗肝癌藥物的容器；和任選的(iii)使用說(shuō)明書(shū)。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，在給予白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑之前、之后或同時(shí)給予其它抗肝癌藥物，以產(chǎn)生協(xié)同治療效果。施用方式可通過(guò)任何合適的方式給予本發(fā)明的藥物組合物或藥盒中的活性成分，包括但不限于：胃腸外、皮下、腹膜內(nèi)、肺內(nèi)、鼻內(nèi)、瘤內(nèi)、局部給藥。胃腸外輸注包括靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)或皮下給藥。優(yōu)選通過(guò)注射、口服、瘤內(nèi)給藥等方式給藥。本發(fā)明組合物的相應(yīng)形式可以是，例如粒劑、粉末、片劑、膠囊、糖漿、栓劑、注射液、乳劑、酏劑、懸液或溶液。組合物形式應(yīng)與施用方式相匹配。本發(fā)明組合物的施用量，按活性物質(zhì)重量計(jì)，通常為每天約0.001-5mg拮抗劑和/或阻斷劑/kg體重，較佳地約0.01-1/kg體重，優(yōu)選0.01-0.5mg/kg體重。本發(fā)明的藥物組合物或藥盒還可與除藥物治療外的其它常用于肝癌治療的方法或手段相結(jié)合。這些方法或手段包括但不限于：手術(shù)切除、肝臟移植、射頻消融、肝動(dòng)脈化療栓塞等。當(dāng)兩種或兩種以上的物質(zhì)或方法組合或聯(lián)合治療時(shí)，優(yōu)選具有優(yōu)于分別單獨(dú)給予這些物質(zhì)或采用所述方法的效果。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明具有如下的優(yōu)點(diǎn)：(a)首次揭示了白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑可用于肝癌的治療，且其效果顯著優(yōu)于現(xiàn)有的常規(guī)抗肝癌藥物；(b)首次揭示了白介素-6/白介素-6受體/gp130信號(hào)途徑的拮抗劑和/或阻斷劑與常規(guī)的抗肝癌藥物聯(lián)合用藥可產(chǎn)生協(xié)同效果；(c)為臨床用藥和肝癌防治提供了新的有效途徑。實(shí)施例下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說(shuō)明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。除非另行定義，文中所使用的所有專(zhuān)業(yè)與科學(xué)用語(yǔ)與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實(shí)施方法與材料僅作示范之用。實(shí)施例1：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖的抑制作用實(shí)驗(yàn)材料肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞(購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù))；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用人IgG(使用濃度為與相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組抗體濃度一致)(購(gòu)自R&D公司)；抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(使用濃度為5μg/ml)(購(gòu)自R&D公司)；抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(使用濃度為5μg/ml)(購(gòu)自R&D公司)；抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(使用濃度為5μg/ml)(購(gòu)自R&D公司)；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用DMSO(使用濃度與(+)-MadindolineA使用濃度一致)(購(gòu)自Sigma公司)；gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(使用濃度為10μg/ml)(購(gòu)自Enzolifescience公司)。實(shí)驗(yàn)方法采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CellCountingKit-8，CCK-8試劑盒，日本同仁化學(xué)研究所)，在通用微孔板讀板儀(UniversalMicroplateReader，BIO-TEKInstruments，美國(guó)MN)上檢測(cè)450nm吸收度以進(jìn)行細(xì)胞增殖分析，具體操作步驟如下：1)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，以2×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)12h，細(xì)胞密度約70-80％時(shí)加藥處理；2)分別于加藥后0h，12h，24h，48h后用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中；3)加入10μl的CCK-8試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育1h；4)取出96孔細(xì)胞培養(yǎng)板于通用微孔板讀板酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)的光吸收度并記錄數(shù)據(jù)；5)分析數(shù)據(jù)并做相應(yīng)圖表。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。圖中結(jié)果顯示：與相應(yīng)的對(duì)照相比，抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(圖2A)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(圖2B)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(圖2C)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(圖2D)均能顯著抑制體外培養(yǎng)的肝癌細(xì)胞的增殖。該結(jié)果表明：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用。實(shí)施例2：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用實(shí)驗(yàn)材料(材料來(lái)源同實(shí)施例1)肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用人IgG(使用濃度為與相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組抗體濃度一致)；抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(使用濃度為5μg/ml)；抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(使用濃度為5μg/ml)；抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(使用濃度為5μg/ml)；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用DMSO(使用濃度與(+)-MadindolineA使用濃度一致)；gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(使用濃度為10μg/ml)。實(shí)驗(yàn)方法采用膜聯(lián)蛋白V-FITC凋亡檢測(cè)試劑盒(AnnexinV-FITCApoptosisDetectionKit，BDbiosciences，Rockville，MD)，在流式細(xì)胞儀BDFACSCaliburTM上檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)目，具體操作步驟如下：1)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，以2×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，無(wú)血清培養(yǎng)12h，細(xì)胞密度約70-80％時(shí)加藥處理；2)加藥處理24h后用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，按照膜聯(lián)蛋白V-FITC凋亡檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行膜聯(lián)蛋白V-FITC染色；3)于流式細(xì)胞儀BDFACSCaliburTM上檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)目，分析數(shù)據(jù)并做相應(yīng)圖表。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。圖中結(jié)果顯示：與相應(yīng)的對(duì)照相比，抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(圖3A)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(圖3B)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(圖3C)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(圖3D)均能顯著促進(jìn)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞的凋亡。該結(jié)果表明：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞凋亡有明顯的促進(jìn)作用。實(shí)施例3：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤的抑制作用實(shí)驗(yàn)材料(除小鼠外，材料來(lái)源同實(shí)施例1)肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用人IgG(使用濃度為與相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組抗體濃度一致)；抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(使用濃度為每天10mg/kg體重)；抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(使用濃度為每天10mg/kg體重)；抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(使用濃度為每天10mg/kg體重)；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用DMSO(使用濃度與(+)-MadindolineA使用濃度一致)；gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(使用濃度為每天20mg/kg體重)；4-5周齡雄性胸腺缺失裸小鼠(Foxn1nu/nu，BALB/c背景，購(gòu)自中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。實(shí)驗(yàn)方法1)4-5周齡雄性胸腺缺失裸小鼠購(gòu)回后在恒溫恒濕無(wú)菌動(dòng)物房飼養(yǎng)1周，以使裸鼠適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境；2)按照對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各3只裸鼠、每只裸鼠左右脅腹部皮下各注射1×107個(gè)細(xì)胞的數(shù)量計(jì)算所需細(xì)胞數(shù)目，對(duì)于100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿細(xì)胞融合度在90％以上時(shí)細(xì)胞數(shù)量大約為1×107個(gè)來(lái)計(jì)算；3)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞，用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成細(xì)胞懸液，以4×105個(gè)細(xì)胞/皿接種于100mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)至所需細(xì)胞數(shù)量；4)當(dāng)肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞培養(yǎng)至所需數(shù)量后，用0.25％胰蛋白酶消化，并用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成細(xì)胞懸液并分別收集細(xì)胞于兩個(gè)20ml離心管，800rpm離心5min；5)吸去培養(yǎng)液后，每管加入10ml無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基洗滌一次，800rpm離心5min；6)吸去培養(yǎng)液后，加入適量的滅菌PBS(pH＝7.4)，混勻細(xì)胞后將細(xì)胞濃度調(diào)整至1×107個(gè)細(xì)胞/200μl；7)按照每側(cè)注射1×107個(gè)細(xì)胞(即200μl細(xì)胞懸液)的比例注射相應(yīng)肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞至裸鼠左右脅腹部皮下；8)成瘤一周后開(kāi)始瘤內(nèi)注射用藥，連續(xù)三周(給藥頻率為每日一次)給藥；9)每日觀察并測(cè)量所形成腫瘤的大小，腫瘤體積按照如下公式計(jì)算：體積＝(L×W2)/2，其中L是指腫瘤最寬徑，W是指與L相垂直的最大徑；10)四周后(即成瘤1周+給藥3周)處死裸鼠并取皮下腫瘤組織，分析數(shù)據(jù)并做相應(yīng)圖表。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示。圖中結(jié)果顯示：與相應(yīng)的對(duì)照相比，抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(圖4A)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(圖4B)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(圖4C)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(圖4D)均能顯著抑制裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤。該結(jié)果表明：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路對(duì)裸鼠皮下肝癌細(xì)胞成瘤有明顯的抑制作用。實(shí)施例4：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路與順鉑在抑制肝癌細(xì)胞增殖中的效果比較及協(xié)同作用實(shí)驗(yàn)材料(除順鉑外，材料來(lái)源同實(shí)施例1)肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)照用人IgG(使用濃度為與相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組抗體濃度一致)(抗體的對(duì)照應(yīng)該是IgG，抑制劑的對(duì)照是DMSO，下同)抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(使用濃度為5μg/ml)抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(使用濃度為5μg/ml)抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(使用濃度為5μg/ml)實(shí)驗(yàn)對(duì)照用DMSO(使用濃度與(+)-MadindolineA使用濃度一致)gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(使用濃度為10μg/ml)抗腫瘤藥物順鉑(Cisplatin)(使用濃度為50μM，購(gòu)自Sigma公司)實(shí)驗(yàn)方法采用CCK-8試劑盒(CellCountingKit-8，日本同仁化學(xué)研究所)，在通用微孔板讀板儀(BIO-TEKInstruments，Minneapolis，MN)上檢測(cè)450nm吸收度以進(jìn)行細(xì)胞增殖分析，具體操作步驟如下：1)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，以2×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)12h，細(xì)胞密度約70-80％時(shí)加藥處理；2)分別于加藥后0h，12h，24h，48h后用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中；3)加入10μl的CCK-8試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育1h；4)取出96孔細(xì)胞培養(yǎng)板于通用微孔板讀板酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)的光吸收度并記錄數(shù)據(jù)；5)分析數(shù)據(jù)并做相應(yīng)圖和表。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。圖中結(jié)果顯示：與相應(yīng)的對(duì)照相比，順鉑、抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(圖5A)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(圖5B)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(圖5C)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(圖5D)均能顯著抑制體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖，且Siltuximab(圖5A)、Tocilizumab(圖5B)、RX435(圖5C)以及(+)-MadindolineA(圖5D)的抑制作用與順鉑相似，甚至優(yōu)于順鉑。而當(dāng)順鉑與Siltuximab(圖5A)、Tocilizumab(圖5B)、RX435(圖5C)以及(+)-MadindolineA(圖5D)分別聯(lián)用時(shí)，可顯著增強(qiáng)抑制作用。按照如下所示的金氏公式(金正均，合并用藥中的相加。中國(guó)藥理學(xué)報(bào)1980；1：70-76)計(jì)算藥物之間的協(xié)同作用：q值＝EA+B/(EA+EB-EA×EB)其中，EA表示藥物A的效果；EB表示藥物B的效果；EA+B表示藥物A和B聯(lián)用所產(chǎn)生的效果；當(dāng)q值＞1.15時(shí)，表明兩藥有協(xié)同作用。金氏公式計(jì)算結(jié)果如表1.1～1.4所示(“＊”表示具有協(xié)同作用)：表1.1抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab與順鉑合用的協(xié)同效果計(jì)算方法示例：以12小時(shí)為例將每組的數(shù)據(jù)減去0h的本底水平，用于計(jì)算抑制率ECIS＝[(1.4-0.8)-(1.2-0.8)]/(1.4-0.8)＝0.33EmAb＝[(1.4-0.8)-(1.1-0.8)]/(1.4-0.8)＝0.5ECIS+mAb＝[(1.4-0.8)-(0.9-0.8)]/(1.4-0.8)＝0.83E＝ECIS+mAb/[ECIS+EmAb-ECIs×EmAb]＝0.83/(0.33+0.5-0.33×0.5)＝1.25＞1.15因此，順鉑與抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab具有協(xié)同增效作用。表1.2抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab與順鉑合用的協(xié)同效果表1.3抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435與順鉑合用的協(xié)同效果表1.4gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA與順鉑合用的協(xié)同效果表1.1～1.4的結(jié)果表明：抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(表1.1)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(表1.2)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(表1.3)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(表1.4)分別與順鉑聯(lián)合使用，均可產(chǎn)生協(xié)同抑制肝癌細(xì)胞增殖的效果。以上結(jié)果證明：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的藥物單獨(dú)使用可與常規(guī)癌癥治療藥物順鉑具有相似的或甚至更佳的抑制肝癌細(xì)胞增殖效果，而其與順鉑共同使用還可產(chǎn)生協(xié)同抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用。實(shí)施例5：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路與多柔比星在抑制肝癌細(xì)胞增殖中的效果比較及協(xié)同作用實(shí)驗(yàn)材料(除多柔比星外，材料來(lái)源同實(shí)施例1)肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用人IgG(使用濃度為與相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組抗體濃度一致)；抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(使用濃度為5μg/ml)；抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(使用濃度為5μg/ml)；抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(使用濃度為5μg/ml)；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用DMSO(使用濃度與(+)-MadindolineA使用濃度一致)；gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(使用濃度為10μg/ml)；抗腫瘤藥物多柔比星(Doxorubicin)(使用濃度為1μM，購(gòu)自Sigma公司)。實(shí)驗(yàn)方法采用CCK-8試劑盒(CellCountingKit-8，日本同仁化學(xué)研究所)，在通用微孔板讀板儀(BIO-TEKInstruments，Minneapolis，MN)上檢測(cè)450nm吸收度以進(jìn)行細(xì)胞增殖分析，具體操作步驟如下：1)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，以2×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)12h，細(xì)胞密度約70-80％時(shí)加藥處理；2)分別于加藥后0h，12h，24h，48h后用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中；3)加入10μl的CCK-8試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育1h；4)取出96孔細(xì)胞培養(yǎng)板于通用微孔板讀板酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)的光吸收度并記錄數(shù)據(jù)；5)分析數(shù)據(jù)并做相應(yīng)圖和表。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。圖中結(jié)果顯示：與相應(yīng)的對(duì)照相比，多柔比星、抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(圖6A)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(圖6B)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(圖6C)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(圖6D)均能顯著抑制肝癌細(xì)胞增殖，且Siltuximab、Tocilizumab、RX435以及(+)-MadindolineA的抑制作用與多柔比星相似，甚至優(yōu)于多柔比星。并且，當(dāng)多柔比星與Siltuximab(圖6A)、Tocilizumab(圖6B)、RX435(圖6C)以及(+)-MadindolineA(圖6D)分別聯(lián)用時(shí)，可顯著增強(qiáng)抑制作用。按照實(shí)施例4中所示的金氏公式計(jì)算藥物之間的協(xié)同作用，結(jié)果如表2.1～2.4中所示(“＊”表示具有協(xié)同作用)：表2.1抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab與多柔比星合用的協(xié)同效果表2.2抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab與多柔比星合用的協(xié)同效果表2.3抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435與多柔比星合用的協(xié)同效果表2.4gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA與多柔比星合用的協(xié)同效果表2.1～2.4的結(jié)果表明：抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(表2.1)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(表2.2)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(表2.3)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(表2.4)分別與多柔比星聯(lián)合使用，均可產(chǎn)生協(xié)同抑制肝癌細(xì)胞增殖的效果。以上結(jié)果證明：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的藥物單獨(dú)使用可與常規(guī)癌癥治療藥物多柔比星具有相似的或甚至更佳的抑制肝癌細(xì)胞增殖效果，而其與多柔比星共同使用還可產(chǎn)生協(xié)同抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用。實(shí)施例6：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路與索拉非尼在抑制肝癌細(xì)胞增殖中的效果比較及協(xié)同作用實(shí)驗(yàn)材料(除索拉非尼外，材料來(lái)源同實(shí)施例1)實(shí)驗(yàn)對(duì)照用HumanIgG(使用濃度為與相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組抗體濃度一致)；抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(使用濃度為5μg/ml)；抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(使用濃度為5μg/ml)；抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(使用濃度為5μg/ml)；實(shí)驗(yàn)對(duì)照用DMSO(使用濃度與(+)-MadindolineA使用濃度一致)；gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(使用濃度為10μg/ml)；抗腫瘤藥物索拉非尼(sorafenib)(使用濃度為5μM，購(gòu)自Tocris公司)。實(shí)驗(yàn)方法采用CCK-8試劑盒(CellCountingKit-8，日本同仁化學(xué)研究所)，在通用微孔板讀板儀(BIO-TEKInstruments，Minneapolis，MN)上檢測(cè)450nm吸收度以進(jìn)行細(xì)胞增殖分析，具體操作步驟如下：1)將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，以2×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)12h，細(xì)胞密度約70-80％時(shí)加藥處理；2)分別于加藥后0h，12h，24h，48h后用0.25％胰蛋白酶消化后，用相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液吹打成單細(xì)胞懸液，將細(xì)胞接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中；3)加入10μl的CCK-8試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育1h；4)取出96孔細(xì)胞培養(yǎng)板于通用微孔板讀板酶標(biāo)儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)的光吸收度并記錄數(shù)據(jù)；5)分析數(shù)據(jù)并做相應(yīng)圖和表。實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示。圖中結(jié)果顯示：與相應(yīng)的對(duì)照相比，索拉非尼、抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(圖7A)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(圖7B)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(圖7C)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(圖7D)均能顯著抑制肝癌細(xì)胞增殖，且Siltuximab、Tocilizumab、RX435以及(+)-MadindolineA的抑制作用與索拉非尼相似，甚至優(yōu)于索拉非尼。并且，當(dāng)索拉非尼與Siltuximab(圖7A)、Tocilizumab(圖7B)、RX435(圖7C)以及(+)-MadindolineA(圖7D)分別聯(lián)用時(shí)，可顯著增強(qiáng)抑制作用。按照實(shí)施例4中所示的金氏公式計(jì)算藥物之間的協(xié)同作用，結(jié)果如表3.1～3.4中所示(“＊”表示具有協(xié)同作用)：表3.1抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab與索拉非尼合用的協(xié)同效果表3.2抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab與索拉非尼合用的協(xié)同效果表3.3抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435與索拉非尼合用的協(xié)同效果表3.4gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA與索拉非尼合用的協(xié)同效果表3.1～3.4的結(jié)果表明：抗IL-6中和性單克隆抗體Siltuximab(表3.1)、抗IL-6R阻斷性單克隆抗體Tocilizumab(表3.2)、抗gp130阻斷性單克隆抗體RX435(表3.3)以及gp130特異性抑制劑(+)-MadindolineA(表3.4)分別與索拉非尼聯(lián)合使用，均可產(chǎn)生協(xié)同抑制肝癌細(xì)胞增殖的效果。以上結(jié)果證明：拮抗和/或阻斷IL-6/IL-6R/gp130信號(hào)通路的藥物單獨(dú)使用可與常規(guī)癌癥治療藥物索拉非尼具有相似的或甚至更佳的抑制肝癌細(xì)胞增殖效果，而其與索拉非尼共同使用還可產(chǎn)生協(xié)同抑制肝癌細(xì)胞增殖的作用。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。