本發(fā)明涉及N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制N-甲基-D-天冬氨酸受體，減輕抑郁癥狀的多肽。

背景技術(shù)：

抑郁癥是近年來(lái)最受人們關(guān)注的精神疾病。盡管抑郁癥就在我們的身邊，但病人接受治療的比例并不高，中國(guó)的抑郁癥治療率不到10％，即使在發(fā)達(dá)國(guó)家，也還不到一半。很多人把抑郁癥僅僅當(dāng)作是一種精神狀態(tài)，而這種想法也往往導(dǎo)致患者錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)機(jī)。由于現(xiàn)代社會(huì)的壓力和生活方式改變，在20歲以上的成人中，抑郁癥的發(fā)病率正以每年11.3％的速度增長(zhǎng)。而在青少年當(dāng)中，抑郁癥也呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢(shì)。抑郁癥將僅次于缺血性心臟病，成為人類殘疾和死亡的第二大原因。

最新研究提出，抑郁癥的谷氨酸受體異常假說(shuō)，并認(rèn)為藥物治療新靶點(diǎn)。離子型谷氨酸受體N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體和α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑丙酸(AMPA)受體是與抑郁癥發(fā)生最為相關(guān)的兩種谷氨酸受體，該類受體在激活時(shí)可允許Na+、Ca2+等陽(yáng)離子通過(guò)。此外，NMDA受體的膜外側(cè)端存在甘氨酸(glycine)的結(jié)合位點(diǎn)，通道內(nèi)則有Mg2+結(jié)合位點(diǎn)，這些都是NMDA受體功能調(diào)節(jié)的關(guān)鍵位點(diǎn)。在生理?xiàng)l件下，突觸后膜的AMPA受體和NMDA受體(主要為NR2A受體亞型)的激活是突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶能力增強(qiáng)的重要電生理機(jī)制；而在谷氨酸興奮性毒性損傷等病理過(guò)程中，突觸外NMDA受體(主要為NR2B受體亞型)的激活則會(huì)導(dǎo)致Ca2+超載、氧化應(yīng)激損傷和細(xì)胞凋亡或退行性變等抑郁癥狀。因此，NMDA受體抑制劑成為抑郁癥治療的新靶點(diǎn)和研究的熱點(diǎn)。

但是，現(xiàn)階段的NMDA受體抑制劑有氯胺酮、苯環(huán)利定，未用于治療抑郁癥。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的

本發(fā)明提供全新的序列，該序列N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽，對(duì)抑郁癥具有很好的療效。

技術(shù)方案

N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽，其特征在于其序列為SEQ ID NO：1。

N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽在治療抑郁癥藥物中的應(yīng)用。

有益效果

利用固相合成法化學(xué)合成N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可用于治療抑郁癥。分子結(jié)果顯示，N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽能顯著抑制大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞NMDA受體電流，其IC50值為3.81±0.72μM。在體藥理結(jié)果顯示，本發(fā)明的多肽能夠減少小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)中應(yīng)激絕望模型小鼠的懸尾時(shí)間；也能減少小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中應(yīng)激絕望模型小鼠的強(qiáng)迫游泳時(shí)間；同時(shí)，本發(fā)明多肽能夠減少慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型大鼠的覓食潛伏期，提高其在糖水實(shí)驗(yàn)中對(duì)糖水的攝取，與模型組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。覓食潛伏期主要檢測(cè)的是大鼠焦慮樣行為，大鼠糖水偏好表明了大鼠的興趣缺失傾向。由此可見，本發(fā)明多肽能改善急性和慢性抑郁癥模型動(dòng)物的抑郁癥狀。可作為臨床抑郁癥有效的候選治療方法。

具體實(shí)施方式

多肽由上海生工吉爾合成。

實(shí)施例1

N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元N-甲基-D-天冬氨酸受體電流抑制作用。

采用全細(xì)胞膜片技術(shù)記錄培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元NMDA受體電流。從生24h內(nèi)的SD大鼠腦內(nèi)提取、培養(yǎng)海馬神經(jīng)元，37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)8-13天進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗(yàn)。

全細(xì)胞膜片鉗記錄所用儀器為CEZ-2400膜片鉗放大器(日本Nihon Kohden)，玻璃微電極所充內(nèi)液成分(mmol/L)：KCl 140，CaCl2 1，MgCl2 2，HEPES 10，EGTA 11，ATP 4，用1M KOH將pH值調(diào)至7.2，用蔗糖將滲透壓調(diào)至310mOsm/L，電極電阻3-5MΩ。灌流用外液成分(mmol/L)：NaCl 150，KCl 5，CaCl2 2.5，HEPES 10，D-葡萄糖10，河鲀毒素0.0002，用1M NaOH將pH值調(diào)至7.4，用蔗糖將滲透壓調(diào)至340mOsm/L。將微電極在細(xì)胞膜上，在電極與細(xì)胞膜之間形成高阻(1-5GΩ)封接后，進(jìn)一步將膜吸穿，調(diào)節(jié)電容和串聯(lián)電阻補(bǔ)償，膜電位鉗制于-50mV，膜電流應(yīng)用低通濾波(1Hz，-3dB)，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

本發(fā)明多肽用細(xì)胞外液配制不同梯度濃度的終溶液，pH調(diào)至7.4。給藥方式通過(guò)微操縱器移動(dòng)自制的快速換液裝置的排管給藥，每管的直徑(O.D/I.D)為500/200μm，管口距離記錄細(xì)胞約100μm。實(shí)驗(yàn)在室溫22-25℃范圍內(nèi)進(jìn)行。記錄不同梯度濃度多肽對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元NMDA受體電流數(shù)據(jù)。

在大鼠海馬神經(jīng)元NMDA受體電流結(jié)果顯示，本發(fā)明多肽可以抑制陽(yáng)離子內(nèi)流，其IC50值為3.81±0.72μM。

實(shí)施例2

N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型的影響。

采用ICR小鼠作為受試動(dòng)物，取50只小鼠，雌雄各半，體重為18-22g，隨機(jī)分為5組：高劑量組、中劑量組、低劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組，空白組，每組l0只。治療組皮下注射本發(fā)明多肽，劑量分別為20、10、5mg/Kg，對(duì)照組氟西汀，劑量為10mg/Kg，空白組給予生理鹽水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1h，小鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，小鼠在20-25℃水中強(qiáng)迫游泳6min，記錄后4min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間，不動(dòng)時(shí)間，即為小鼠在水中停止掙扎，僅將頭露出水面漂浮的時(shí)間，以此評(píng)價(jià)本發(fā)明多肽對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型的影響。

表1本發(fā)明多肽對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型的影響

*p<0.05，**p<0.01與空白組相比

本發(fā)明多肽對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳應(yīng)激絕望模型結(jié)果如表1顯示：本發(fā)明多肽能夠減少小鼠強(qiáng)迫游泳時(shí)間，在劑量在5-20mg/Kg時(shí)呈劑量依賴性，與空白組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

實(shí)施例3

N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽對(duì)小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型的影響。

采用ICR小鼠作為受試動(dòng)物，取50只小鼠，雌雄各半，體重為18-22g，隨機(jī)分為5組：高劑量組、中劑量組、低劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組，空白組，每組l0只。治療組皮下注射本發(fā)明多肽，劑量分別為20、10、5mg/Kg，對(duì)照組氟西汀，劑量為10mg/Kg，空白組給予生理鹽水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1h，小鼠進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)，將小鼠用膠帶固定在其尾部距末端約1cm處，使小鼠保持懸掛狀態(tài)6min，記錄后4min的不動(dòng)時(shí)間，以此評(píng)價(jià)本發(fā)明多肽對(duì)小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型的影響。

表2本發(fā)明多肽對(duì)小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型的影響

*p<0.05，**p<0.01與空白組相比

本發(fā)明多肽對(duì)小鼠懸尾應(yīng)激絕望模型結(jié)果如表2顯示：本發(fā)明多肽能夠減少小鼠懸尾時(shí)間，在劑量在5-20mg/Kg時(shí)呈劑量依賴性，與空白組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

實(shí)施例4

N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽對(duì)大鼠慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型的影響。

采用SD大鼠作為受試動(dòng)物，取60只大鼠，雌雄各半，體重為180-220g，隨機(jī)分為6組，高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組、模型組、空白組，每組l0只。建立大鼠慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型：應(yīng)激內(nèi)容為：束縛4h；濕墊料過(guò)夜；搖晃1h(160r/min)；禁食12h；冰水游泳4℃，10min；飼養(yǎng)籠傾斜45°過(guò)夜；夾尾1min；擁擠過(guò)夜(8只/籠)。白天使用兩種應(yīng)激，夜晚使用一種應(yīng)激，連續(xù)應(yīng)激4周。最后一次刺激后給藥。給藥方案：治療組皮下注射本發(fā)明多肽，劑量分別為20、10、5mg/Kg，對(duì)照組氟西汀，劑量為10mg/Kg，空白組給予生理鹽水，連續(xù)給藥7天。第7天給藥后1h，大鼠進(jìn)行新奇覓食潛伏期實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)，以此評(píng)價(jià)本發(fā)明多肽對(duì)大鼠慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型的影響。新奇覓食潛伏期實(shí)驗(yàn)即：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在進(jìn)行24h禁食后，將動(dòng)物置于一個(gè)長(zhǎng)×寬×高為76.5cm×76.5cm×40cm的曠場(chǎng)中，曠場(chǎng)中間放有一定量的食物，動(dòng)物從曠場(chǎng)的一角放入，觀察動(dòng)物在5min內(nèi)成功覓食所花費(fèi)的時(shí)間。同時(shí)試驗(yàn)后測(cè)量動(dòng)物在5min內(nèi)消耗的食物總重量，以此作為參考來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物饑餓程度是否一致。糖水偏好實(shí)驗(yàn)即：在糖水檢測(cè)前用1％的糖水讓動(dòng)物適應(yīng)48h，禁水4h后將動(dòng)物置于放有兩個(gè)相同水瓶的飼養(yǎng)籠中。這兩只水瓶一只盛有1％的糖水，另一只裝有自來(lái)水。記錄1h內(nèi)每只大鼠分別飲用糖水和自來(lái)水的體積。糖水偏好＝飲用的糖水體積/(飲用的糖水體積+自來(lái)水總體積)×100％。

表3本發(fā)明多肽對(duì)大鼠慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型的影響

*p<0.05，**p<0.01與模型組相比

本發(fā)明多肽對(duì)大鼠慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型結(jié)果如表3顯示：本發(fā)明多肽能夠減少模型組大鼠的覓食潛伏期，提高慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型大鼠糖水實(shí)驗(yàn)中對(duì)糖水的攝取，與模型組相比，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。覓食潛伏期主要檢測(cè)的是大鼠焦慮樣行為，大鼠糖水偏好表明了大鼠的興趣缺失傾向。由此可見，本發(fā)明多肽能改善慢性不可預(yù)測(cè)應(yīng)激模型大鼠的抑郁癥狀。

SEQUENCE LISTING

<110> 蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司

<120> N-甲基-D-天冬氨酸受體拮抗劑多肽及其應(yīng)用

<130>

<160> 1

<170> Patent In version 3.3

<210> 1

<211> 45

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Gln Tyr Ile Glu Phe Ser Lys Pro Phe Lys Tyr Gln Gly Leu Thr Ile

1 5 10 15

Leu Val Lys Lys Gly Thr Arg Ile Thr Gly Ile Asn Asp Pro Arg Leu

20 25 30

Arg Asn Pro Ser Asp Lys Phe Ile Tyr Ala Thr Val Lys

35 40 45