專利名稱：一種應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制備方法，尤其涉及一種中藥有效成分的提取純化方法，具體涉及一種應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法。
背景技術(shù)：
金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、紅腺忍 Lonicerahypoglauca Miq. > ill IB Lonicera confuse DC. 5 ^ tt /
Loniceradasytyla Rehd.的干燥花蕾或帶初開的花，含有有機酸類、三萜皂苷類、黃酮及其苷類、環(huán)烯醚萜苷類、揮發(fā)油等成分。金銀花具有抑菌、抗病毒、解熱、抗炎、保肝、止血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。目前認為金銀花中主要有效成分為綠原酸類化合物。綠原酸其別名咖啡鞣酸，通常以其含量高低來評價金銀花質(zhì)量的優(yōu)劣。金銀花提取、精制工藝多以綠原酸類化合物為考察指標。目前從金銀花中提取有機酸類成分的方法通常采用溫浸法、水煮法、稀醇提取和酸醇提取等，純化方法多采用醇沉法、水醇法、石硫醇法、萃取法、大孔樹脂吸附法等；其中醇沉法和水沉法只能達到初步純化的目的，其收膏量大，有機酸含量低。石硫法、萃取法及大孔樹脂吸附法分別單獨應用對一些要求較高的制劑也還存在著一些不足，比如， 石硫法可能帶入一些金屬離子，萃取法色素較多，提取物粘度大，使制劑顏色較深，大孔樹脂吸附法需要反復處理，操作麻煩，重現(xiàn)性較差，并且還存在有機殘留問題，這些直接影響了制劑的安全性和穩(wěn)定性。中國專利申請文件申請?zhí)?00810043051. 7公開了 “一種應用膜過濾技術(shù)制備金銀花提取物的方法”應用膜過濾技術(shù)提取金銀花中有機酸類成分，提取物中綠原酸含量可達70%，轉(zhuǎn)移率92%，但是膜過濾，存在需多次沖洗膜、處理時間長、膜容易堵等缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法，用于解決目前金銀花提取工藝中工藝成本高、制劑工藝穩(wěn)定性差、加工時間長等技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)本發(fā)明提供一種金銀花提取物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)預提取將金銀花藥材破碎成2_3mm的小段，加入藥材重量6_15倍的水煎煮 1-1. 5小時，濾取藥液，藥渣再加藥材重量4-8水煎煮0. 5-1小時，濾取藥液，棄去藥渣；合并兩次藥液，將藥液濃縮，冷卻至室溫，得金銀花預提液；(2)粗分離將金銀花預提液離心10-20分鐘，轉(zhuǎn)速4000-6000轉(zhuǎn)/分鐘，取上清液，用微濾膜處理，控制流速為5 lOml/min，并用水進行洗濾，合并濾液，得粗提物；(3)精制將粗提物用水進行尺寸排阻層析分離，控制流速1 5ml/min，減壓濃縮，真空干燥，即得金銀花提取物。步驟(1)預提取中將藥材破碎可以提高提取效率，縮短藥材煎煮的時間，煎煮過程中控制溫度，保持溶液微沸即可。
步驟( 中所使用的微濾膜微濾膜規(guī)格為0. 42-0. 65微米，流速為5 lOml/min， 并進行2-5次的蒸餾水或純化水洗濾，保證綠原酸等有效成分盡可能透過膜層。步驟(3)中所使用的層析介質(zhì)為可在分子量1000-4000范圍內(nèi)進行分離的介質(zhì)， 流速為1 5ml/min，收集綠原酸等有效成分。濃縮時采用減壓濃縮，干燥采用真空干燥，溫度均控制在50-70°C，以避免綠原酸等有效成分的受熱分解。本發(fā)明具有以下有益效果將尺寸排阻層析這種高效分離技術(shù)應用于金銀花提取物制備中，利用層析介質(zhì)的多孔性，能夠有效地分離溶液中的各種微粒、膠體以及大分子溶質(zhì)，以達到濃縮或凈化除雜的目的。與通常的分離方法相比，尺寸排阻層析具有不必經(jīng)過相的轉(zhuǎn)換、不需要添加化學試劑、介質(zhì)能多次重復利用等優(yōu)點。采用尺寸排阻層析制備金銀花提取物，金銀花提取物中有效成分的含量、綠原酸的轉(zhuǎn)移率高，同時簡化工業(yè)生產(chǎn)步驟，操作簡單，能夠提供更有利于工業(yè)生產(chǎn)地的工藝條件，并確保工藝的穩(wěn)定性和安全性，使這一傳統(tǒng)中藥盡可能發(fā)揮其功效。
具體實施例方式實施例1稱取金銀花500g，加水3000ml微沸煎煮1小時，過濾，藥渣加水4000ml微沸煎煮 1.0小時，過濾，合并濾液，得到預提液。取預提液，60°c減壓濃縮至比重為1.05(60°C )， 4500轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘，取上清液，過微濾膜(0. 65微米)，控制流速5ml/min，用蒸餾水洗濾3次，每次IOOml ；合并濾液，得粗提物。將粗提物進料至kphadex LH-20層析柱(CV = 500ml)控制流速為5ml/min，用水沖洗，收集小分子洗脫組分，將其60°C減壓濃縮至比重為1. 2 (600C )，真空干燥，得到金銀花提取物干粉。提取物中綠原酸含量為78%。實施例2稱取金銀花500g，加水7500ml微沸煎煮1小時，過濾，藥渣加6倍水2000ml微沸煎煮0. 5小時，過濾，合并濾液，得到預提液。取預提液，60°C減壓濃縮至比重為1. 05(60°C )， 6000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心10分鐘，取上清液，過微濾膜(0. 45微米)，控制流速lOml/min， 用蒸餾水洗濾3次，每次IOOml ；合并濾液，得粗提物。將粗提物進料至kphacryl S-IOO HR層析柱(CV = 500ml)控制流速為5ml/min，用水沖洗，收集小分子洗脫組分，將其60°C 減壓濃縮至比重為1. 2(60°C )，真空干燥，得到金銀花提取物干粉。提取物中綠原酸含量為 72%。實施例3稱取金銀花500g,加水5000ml微沸煎煮1. 5小時，過濾，藥渣加6倍水3000ml 微沸煎煮0.8小時，過濾，合并濾液，得到預提液。取預提液，60°C減壓濃縮至比重為 1. 05 (60°C)，4000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心20分鐘，取上清液，過微濾膜(0. 65微米)，控制流速 Sml/min，用蒸餾水洗濾3次，每次IOOml ；合并濾液，得粗提物。將粗提物進料至Superose 12 pg層析柱(CV = 500ml)控制流速為5ml/min，用水沖洗，收集小分子洗脫組分，將其 60°C減壓濃縮至比重為1. 2(60°C )，真空干燥，得到金銀花提取物干粉。提取物中綠原酸含量為74%。
權(quán)利要求
1.一種應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法，該方法包括以下步驟(1)預提取將金銀花藥材破碎成2-3mm的小段，加入藥材重量6-15倍的水煎煮1-1.5 小時，濾取藥液，藥渣再加藥材重量4-8水煎煮0. 5-1小時，濾取藥液，棄去藥渣；合并兩次藥液，將藥液濃縮，冷卻至室溫，得金銀花預提液；(2)粗分離將金銀花預提液離心10-20分鐘，轉(zhuǎn)速4000-6000轉(zhuǎn)/分鐘，取上清液，用微濾膜處理，控制流速為5 lOml/min，并用水進行洗濾，合并濾液，得粗提物；(3)精制將粗提物用水進行尺寸排阻層析分離，控制流速1 5ml/min，減壓濃縮，真空干燥，即得金銀花提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法，其特征在于， 步驟O)中所使用的微濾膜規(guī)格為0. 42-0. 65微米，流速為5 lOml/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法，其特征在于， 在步驟O)中，微濾膜分離中用水洗濾2-5次。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法，其特征在于， 步驟(3)中所使用的層析介質(zhì)為可在分子量1000-4000范圍內(nèi)進行分離的介質(zhì)，流速為 1 5ml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中藥制備方法，尤其涉及一種中藥有效成分的提取純化方法，具體涉及一種應用尺寸排阻層析制備金銀花提取物的方法，包括水煮預提取、微濾粗分離和尺寸排阻層析精制等步驟，可以得到綠原酸含量70％以上的金銀花提取物。采用尺寸排阻層析制備金銀花提取物，可顯著提高金銀花提取物中有效成分的含量，提高綠原酸的轉(zhuǎn)移率，不僅可以節(jié)約藥材成本，更能簡化工業(yè)生產(chǎn)步驟，操作簡單，能夠提供更有利于工業(yè)生產(chǎn)地的工藝條件，并確保工藝的穩(wěn)定性和安全性，使這一傳統(tǒng)中藥盡可能發(fā)揮其功效。
文檔編號A61P31/04GK102441021SQ20111037174
公開日2012年5月9日 申請日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者畢云英 申請人:威海天泓農(nóng)業(yè)科技有限公司