專利名稱：甘草色素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種甘草色素的制備方法，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域范疇。
背景技術(shù)：
甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草 G. inflata Bat.、或光果甘草G. glabra L.的根及根莖，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、新疆、甘肅等地。甘草入藥已有悠久歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》就將其列為藥之上乘，古代醫(yī)學(xué)家尊稱其為“國(guó)老”。由于其資源珍貴，被國(guó)家列入國(guó)家二級(jí)保護(hù)野生藥材。甘草化學(xué)成分種類較多，主要含三萜類皂苷類、 黃酮類、色素類、生物堿、多糖等成分。以甘草入藥開發(fā)的制劑很多，臨床上得到了較廣泛的應(yīng)用，主要用于肝病、呼吸道疾病、胃病等方面的治療。近年來(lái)，隨著中藥分離純化水平的提高，甘草酸、甘草黃酮、甘草多糖等成分的相繼被開發(fā)出來(lái)并得到了廣泛的應(yīng)用。甘草色素是一種由甘草中部分多酚類、黃酮類及少量皂苷類成分組成的天然色素，為黃色至棕黃色粉末，味甜。具有良好的著色性。發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量研究表明，甘草色素除了具有良好的著色、調(diào)味的功能之外，還具有顯著的抗菌、消炎抗病毒的功效。同時(shí)，由于甘草色素是天然色素類成分，具有安全、毒副作用極小的優(yōu)點(diǎn)。因此，運(yùn)用現(xiàn)代中藥技術(shù)，開發(fā)生產(chǎn)出甘草色素，在醫(yī)藥保健方面將會(huì)具有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明目的在于運(yùn)用中藥現(xiàn)代化分離純化技術(shù)，從甘草中制備生產(chǎn)出具有顯著藥理活性的甘草色素，并廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品等行業(yè)，擁有很好的應(yīng)用前景，具有很強(qiáng)的實(shí)用性。在已經(jīng)公開的文獻(xiàn)與專利中，還沒(méi)有與本發(fā)明相關(guān)或類似的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明采用中藥現(xiàn)代化提取分離技術(shù)及合成技術(shù)，從中藥甘草中制備生產(chǎn)出具有良好抗菌消炎功效的甘草色素，將原本作為廢棄物的甘草色素類成分開發(fā)成具有很好應(yīng)用前景的新產(chǎn)品，提高了甘草的綜合利用價(jià)值，擴(kuò)大了甘草的應(yīng)用范圍。根據(jù)本發(fā)明的比較優(yōu)選的實(shí)施方案，從甘草中生產(chǎn)制備甘草色素的方法包括如下步驟(1)取甘草藥材，粉碎成粗粉，加入有機(jī)溶劑適量，加熱或浸泡提取數(shù)次，合并提取液，將提取液濃縮至一定體積，得到濃縮液；(2)將濃縮液加熱至一定溫度，在攪拌狀態(tài)下，加入一定濃度的堿性水溶液，保溫反應(yīng)一定時(shí)間，停止攪拌。(3)反應(yīng)液放冷至室溫，分層后，分取有機(jī)溶劑層。有機(jī)溶劑層中加入一定體積的水繼續(xù)萃取幾次，分取有機(jī)溶劑層。(4)取有機(jī)溶劑層，濃縮，干燥，即得甘草色素。上述步驟(1)中所述的“有機(jī)溶劑”是指乙酸乙酯、正丁醇、異丙醚等有機(jī)溶劑。由于甘草色素是一類小極性成分，易溶于有機(jī)溶劑，難溶于水，因此選擇適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑可以將甘草色素充分提取出來(lái)；提取溶劑的用量是甘草重量的4 10倍量，優(yōu)選為8倍量；提取次數(shù)為1到3次，優(yōu)選為2次；提取時(shí)間為每次提取1 3小時(shí)，優(yōu)選為2小時(shí)；提取方法可以采用加熱回流提取或浸泡提取兩種方式，優(yōu)選浸泡提取，提取溫度為30 80°C，優(yōu)選為 60 "C。步驟O)中反應(yīng)液的溫度為35 60°C，優(yōu)選為50°C;所加入堿性水溶液是指氨水溶液、氫氧化鈉水溶液、氫氧化鉀水溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸鉀水溶液，優(yōu)選為氨水溶液; 溶液中堿的濃度為0. 5%，優(yōu)選為0.5%。由于在步驟(1)的有機(jī)溶劑提取過(guò)程中，不但可以將甘草色素充分提取出來(lái)，而且可以將部分甘草酸類成分提取出來(lái)，因此本步驟通過(guò)加入一定的濃度的堿性溶液將溶液中的甘草酸反應(yīng)生成甘草酸鹽類成分，不但可以將甘草酸類等成分單獨(dú)分離出來(lái)，而且同時(shí)也是對(duì)甘草色素類成分進(jìn)行純化。根據(jù)甘草酸的性質(zhì)，對(duì)其反應(yīng)成鹽的溫度時(shí)間及溫度進(jìn)行了考察研究，結(jié)果表明適合的反應(yīng)溫度為為35 60°C，最佳的反應(yīng)溫度為50°C ；反應(yīng)時(shí)間為0. 5 4小時(shí)，優(yōu)選1. 5小時(shí)。步驟C3)中加入水的量為有機(jī)溶劑體積的0.2 2倍量，優(yōu)選為1倍量，萃取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次。本步驟是運(yùn)用萃取的原理，將有機(jī)層中的甘草酸鹽等大極性水溶性成分充分萃取分離，達(dá)到對(duì)甘草色素進(jìn)一步的純化目的。步驟(4)中，濃縮的方式可以是減壓濃縮或常壓濃縮，優(yōu)選為減壓濃縮；干燥的方式可以是減壓干燥、噴霧干燥或沸騰干燥，優(yōu)選為沸騰干燥。根據(jù)上述技術(shù)方案，采用科學(xué)可行的方法將中藥甘草經(jīng)提取、反應(yīng)除雜、萃取吸附除雜、干燥等一系列步驟，制成了脂溶性好、純度高的甘草色素，含量范圍為75% 95%。 以本發(fā)明所制備的甘草色素為原料，可以進(jìn)一步加入適當(dāng)?shù)妮o料，將本品制成各種適合于臨床應(yīng)用的制劑，包括片劑、膠囊、滴丸、軟膠囊，也可以用于保健食品或食品添加劑等。本發(fā)明提供的技術(shù)方案經(jīng)多批工業(yè)化生產(chǎn)驗(yàn)證，工藝穩(wěn)定性、重復(fù)性好，質(zhì)量可控，具有很強(qiáng)的實(shí)用性。以下通過(guò)本發(fā)明提供的甘草色素的在抗菌、消炎、抗病毒等方面的藥理作用研究， 來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)用性1、甘草色素對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用。取18_22g ICR種小鼠120只隨機(jī)分組，每組只，早$兼用。(1)正常對(duì)照組等量 0. 5% CMC-Na 20ml/kg(2)模型對(duì)照組等量 0. 5% CMC-Na 20ml/kg。(3)甘草色素 I 組 0. 0625g/kg。(4)甘草色素II組0. 125g/kg。(5)甘草色素III組0. 25g/kg。以上各組小鼠均灌胃給藥，給藥容量20ml/kg，1次/天X5天，第3天給藥1小時(shí)后，腹腔注射肺炎雙球菌培養(yǎng)液0. 5ml/只鼠(除正常對(duì)照組)，繼續(xù)給藥2天，觀察各組動(dòng)物7日內(nèi)死亡情況結(jié)果見(jiàn)表1表1甘草色素對(duì)肺炎雙球菌感染小數(shù)死亡的保護(hù)作用組別動(dòng)物數(shù)劑量死亡數(shù)存活率存活天數(shù)(只)(g/kg)(只)(%)(；土S) P 值正常對(duì)照組20—0100.0模型對(duì)照組20一1820.02.35 ±1.31原料I組200.06251240.03.80±1.54p<0. 05原料II組200.125955.04.10±1.48p<0. 05原料III組200.25765.05.10 土 1.82p<0. 05 與模型組比較*P < 0. 05實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示甘草色素對(duì)肺炎雙球菌感染小鼠可延長(zhǎng)感染小鼠的存活天數(shù)，可減少肺炎雙球菌感染小鼠的死亡數(shù)，與模型組比較具有顯著性差異(P < 0. 05)。2、甘草色素對(duì)甲型流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用(1)血凝試驗(yàn)取36孔微孔板，每孔加入生理鹽水0. 25ml。第一孔加入10—1病毒尿囊液0. 25ml， 混勻后，依次取0.25ml置第二孔，稀釋至第9孔。第十孔不加病毒尿囊液，作對(duì)照。每孔加入0. 5%雞紅細(xì)胞0. 25ml，輕輕搖勻后于室溫放置2小時(shí)觀察結(jié)果，記錄結(jié)果，血凝試驗(yàn) (HA)為 640。(2)甲型流感病毒感染小鼠半數(shù)致死量(LD5tl)滴定。取ICR小鼠48只，體重13_15g，雌雄兼用，隨機(jī)分6組，每組8只，取增毒4次的病毒尿囊液，以10倍稀釋，每組滴一個(gè)病毒濃度，各組小鼠在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液 30ul滴鼻，觀察14天內(nèi)死亡數(shù)，按Reed-Muench法計(jì)算，結(jié)果LD5tl為IO181(3)甘草色素對(duì)甲型流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用取ICR小鼠126只，體重13_16g，雌雄各半，隨機(jī)分7組，每組18只(1)正常對(duì)照組等量0. 5% CMC-Na 10ml/kg(2)模型對(duì)照組等量0. 5% CMC-Na 10ml/kg(3)利巴韋林組0. 75g/kg(4)甘草色素I組0. 0625g/kg(5)甘草色素II組0. 125g/kg(6)甘草色素 III組0. 25g/kg，以上各組小鼠均灌胃給藥，給藥容量10ml/kg，1次/天X5天，給藥Ih 后，在乙醚淺麻醉下，以血凝試驗(yàn)640以上的尿囊液，給小鼠滴鼻感染，每鼠30ul，(20個(gè)LD5tl 致死量)，觀察動(dòng)物感染后發(fā)病及死亡情況，結(jié)果見(jiàn)表2。表2.甘草色素對(duì)甲型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用
權(quán)利要求
1.一種甘草色素的制備方法，由以下幾步組成(1)取甘草藥材，粉碎成粗粉，加入有機(jī)溶劑適量，加熱或浸泡提取數(shù)次，合并提取液， 將提取液濃縮至一定體積，得到濃縮液。(2)將濃縮液加熱至一定溫度，在攪拌狀態(tài)下，加入一定濃度的堿性水溶液，保溫反應(yīng)一定時(shí)間，停止攪拌。(3)反應(yīng)液放冷至室溫，分層后，分取有機(jī)溶劑層。有機(jī)溶劑層中加入一定體積的水繼續(xù)萃取幾次，分取有機(jī)溶劑層。(4)取有機(jī)溶劑層，濃縮，干燥，即得甘草色素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟(1)中“有機(jī)溶劑”是指乙酸乙酯、正丁醇、異丙醚等有機(jī)溶劑。提取溶劑的用量是甘草重量的4 10倍量，優(yōu)選為8倍量；提取次數(shù)為1到3次，優(yōu)選為2次；提取時(shí)間為每次提取1 3小時(shí)，優(yōu)選為 2小時(shí)；提取方法可以采用加熱回流提取或浸泡提取兩種方式，優(yōu)選浸泡提取，提取溫度為 30 80°C，優(yōu)選為60°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟O)反應(yīng)的溫度為 35 60°C，優(yōu)選為50°C ；反應(yīng)時(shí)間為0. 5 4小時(shí)，優(yōu)選1. 5小時(shí)。所加入堿性水溶液是指氨水溶液、氫氧化鈉水溶液、氫氧化鉀水溶液、碳酸鈉水溶液、碳酸鉀水溶液，優(yōu)選為氨水溶液；堿溶液的濃度為0. 5%，優(yōu)選為0. 5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟(3)中加入水的量為有機(jī)溶劑體積的0. 2 2倍量，優(yōu)選為1倍量，萃取次數(shù)為1 3次，優(yōu)選2次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘草色素的制備方法，其特征在于步驟(4)濃縮的方式可以是減壓濃縮或常壓濃縮，優(yōu)選為減壓濃縮；干燥的方式可以是減壓干燥、噴霧干燥或沸騰干燥，優(yōu)選為沸騰干燥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，所制備得到的甘草色素可以加入適當(dāng)?shù)妮o料或食品中，應(yīng)用于藥品和食品行業(yè)，具有抗菌、消炎、抗病毒的作用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種甘草色素及其制備方法，本制備方法以中藥甘草為原料，經(jīng)提取、堿化反應(yīng)除雜、萃取、濃縮干燥等一系列步驟組成。制得的甘草色素含量高、脂溶性好。以甘草色素為原料，可以進(jìn)一步將本品制成藥物制劑、功能性食品添加劑等，具有抗菌消炎、抗病毒的功效。本發(fā)明提供的甘草色素制備方法的工藝新穎，穩(wěn)定性好，適合工業(yè)化生產(chǎn)，具有很強(qiáng)的實(shí)用性。
文檔編號(hào)A61P31/12GK102337042SQ20111021006
公開日2012年2月1日 申請(qǐng)日期2011年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月26日
發(fā)明者季浩, 易銘, 楊永安, 金顯友, 鐘慧, 陳月紅 申請(qǐng)人:江蘇天晟藥業(yè)有限公司