專利名稱：氫生理鹽水在制備治療急性神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是氫生理鹽水在制備治療急性神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
馬尾綜合征(Cauda equina syndrome, CES)是馬尾神經(jīng)損害導(dǎo)致下肢疼痛、運(yùn)動(dòng)感覺障礙，大、小便、性功能及鞍區(qū)感覺功能障礙為典型癥狀、體征的一組癥侯群。臨床上描述馬尾受到壓迫后繼發(fā)產(chǎn)生的CES為“全面爆發(fā)綜合征”，早期癥狀比較輕微，可能僅表現(xiàn)為腰腿痛，一旦發(fā)生CES則多種癥狀同時(shí)出現(xiàn)，需急診手術(shù)治療，錯(cuò)過手術(shù)時(shí)機(jī)，即使手術(shù)解除馬尾壓迫，運(yùn)動(dòng)功能大多數(shù)能夠恢復(fù)，但大、小便、性功能及鞍區(qū)感覺障礙難以恢復(fù)，患者往往因?yàn)榫驮\時(shí)間延誤而不能及時(shí)手術(shù)，致殘率非常高。馬尾神經(jīng)具有特殊的解剖位置， 是脊髓和周圍神經(jīng)的橋梁，連接脊髓神經(jīng)元和背根神經(jīng)節(jié)假單極神經(jīng)元，馬尾神經(jīng)受壓迫后，其局部病理改變?nèi)绮荒艿玫郊皶r(shí)改善，則形成惡性循環(huán)，發(fā)生繼發(fā)性的損害，不僅馬尾神經(jīng)自身發(fā)生變性，還可產(chǎn)生順行性背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性、逆行性脊髓神經(jīng)元變性，造成永久性的神經(jīng)功能損害。馬尾神經(jīng)“全面爆發(fā)性”損害的病理生理機(jī)制目前還不明確，但繼發(fā)性氧化應(yīng)激損傷而發(fā)生神經(jīng)元凋亡越來(lái)越引起學(xué)者的重視，氧化應(yīng)激損傷能解釋馬尾綜合征的“全面爆發(fā)”特性。目前臨床上治療急性神經(jīng)損傷最常用藥物為甲強(qiáng)龍，其作用機(jī)制為非特異性抗炎癥反應(yīng)，能夠抑制炎性物質(zhì)的產(chǎn)生和抗氧化應(yīng)激損傷而減輕神經(jīng)繼發(fā)損害，其治療作用得到了較廣泛的認(rèn)可，但它的副作用較大且價(jià)格昂貴也讓人擔(dān)憂。近期，氫氣的選擇性抗氧化效應(yīng)的發(fā)現(xiàn)使人們意識(shí)到氫氣對(duì)氧應(yīng)激損傷具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。在腦、心肌、肝臟、腎、小腸缺血再灌注損傷、化療藥物腎損傷、尿毒癥血液透析等研究中，發(fā)現(xiàn)呼吸氫氣或注射氫生理鹽水都具有抗氧應(yīng)激損傷作用而抑制了這些重要臟器的嚴(yán)重?fù)p傷。氫生理鹽水(溶解有氫氣的生理鹽水)是否對(duì)馬尾壓迫急性損傷后發(fā)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)具有對(duì)抗作用，從而有效抑制急性神經(jīng)損害，目前尚無(wú)報(bào)道。中國(guó)專利公開號(hào)CN101347451A公開了一種具有治療缺血再灌注損傷功能的含氫注射液，該發(fā)明是一種可用于治療腦、心、腎等組織器官缺血再灌注損傷的注射液。制備方法為將醫(yī)用注射液軟包裝袋置于低壓下脫氣處理，抽除氣體后進(jìn)行低溫預(yù)處理，再注入氫氣進(jìn)行加壓助溶，使氫氣溶于注射液，在常壓4°C左右保存?zhèn)溆?，穩(wěn)定M小時(shí)后就可使用。 但是關(guān)于氫生理鹽水在制備治療急性神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用目前還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種氫生理鹽水在制備治療急性神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種含氫口服液在制備治療急性馬尾神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是氫生理鹽水在制備治療急性馬尾神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用。所述的氫生理鹽水在制備治療急性馬尾綜合征疾病藥物中的應(yīng)用。所述的氫生理鹽水中氫氣的含量為0. 6mmol/L-飽和。為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是一種含氫口服液在制備治療急性馬尾神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用。所述的含氫口服液在制備治療急性馬尾綜合征疾病藥物中的應(yīng)用。所述的口服液選自純凈水、生理鹽水或葡萄糖生理鹽水。所述的含氫口服液中氫氣的含量為0. 6mmol/L-飽和。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于
1、本發(fā)明開發(fā)了氫生理鹽水的新用途，發(fā)現(xiàn)了氫生理鹽水具有和甲強(qiáng)龍相似的急性神經(jīng)損傷保護(hù)作用，通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)減少馬尾神經(jīng)纖維變性和神經(jīng)元的凋亡，抑制馬尾綜合征的繼發(fā)損害，對(duì)急性馬尾綜合征具有治療效果；
2、氫生理鹽水制備簡(jiǎn)單、注射濃度高、使用方便且無(wú)爆炸風(fēng)險(xiǎn)，成本很低，且無(wú)副作用， 從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看具有良好的治療優(yōu)勢(shì)，大大減少急性神經(jīng)損傷患者藥物副作用風(fēng)險(xiǎn)，并大大降低醫(yī)療成本；
3、本發(fā)明還開發(fā)了一種含氫口服液在制備治療急性馬尾綜合征的保健品中的新用途， 含氫口服液制備簡(jiǎn)單，方便病人飲用，且無(wú)毒副作用，具有很好的治療急性馬尾綜合征的優(yōu)勢(shì)。


圖1是各組的脊髓、馬尾和背根神經(jīng)節(jié)HE染色對(duì)比(HE X400)。圖1A.各組的馬尾神經(jīng)HE染色對(duì)比；圖1B.各組的脊髓神經(jīng)HE染色對(duì)比；圖1C.各組的背根神經(jīng)節(jié)HE染色對(duì)比。壓迫組脊髓細(xì)胞周圍間隙擴(kuò)大、大量細(xì)胞核固縮甚至消失形成凋亡小體，馬尾神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)松散、腫脹、脫髓鞘改變，背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核固縮甚至消失形成凋亡小體，神經(jīng)纖維腫脹、脫髓鞘改變。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的脊髓、馬尾、背根神經(jīng)節(jié)形態(tài)均較接近正常組織形態(tài)，少量細(xì)胞出現(xiàn)核偏移、固縮、神經(jīng)纖維腫脹、脫髓鞘改變。圖1-1 假手術(shù)組馬尾神經(jīng)纖維軸突和髓鞘結(jié)構(gòu)良好；
圖1-2 壓迫組馬尾神經(jīng)纖維松散，部分軸突及髓鞘腫脹、脫髓鞘改變； 圖1-3 氫水組馬尾神經(jīng)纖維少部分軸突及髓鞘腫脹、脫髓鞘改變； 圖1-4 甲強(qiáng)龍組馬尾神經(jīng)部分軸突及髓鞘腫脹、脫髓鞘改變； 圖1-5 混合組組馬尾神經(jīng)纖維少部分軸突及髓鞘腫脹、脫髓鞘改變； 圖1-6 假手術(shù)組脊髓神經(jīng)細(xì)胞與周圍組織無(wú)分離，細(xì)胞核位于胞漿中央； 圖1-7 壓迫組脊髓神經(jīng)細(xì)胞與周圍組織空隙增大，細(xì)胞核固縮甚至消失； 圖1-8 氫水組脊髓神經(jīng)細(xì)胞與周圍組織無(wú)分離，部分核偏移，個(gè)別凋亡小體； 圖1-9 甲強(qiáng)龍組脊髓神經(jīng)細(xì)胞與周圍組織無(wú)分離，部分核偏移，未見凋亡小體； 圖1-10 混合組脊髓神經(jīng)細(xì)胞與周圍組織無(wú)分離，部分核收縮，未見凋亡小體； 圖1-11 假手術(shù)組背根神經(jīng)節(jié)無(wú)凋亡小體，神經(jīng)纖維無(wú)髓鞘腫脹、脫髓鞘； 圖1-12 壓迫組背根神經(jīng)節(jié)出現(xiàn)凋亡小體，部分神經(jīng)纖維髓鞘腫脹、脫髓鞘；圖1-13 氫水組背根神經(jīng)節(jié)未見凋亡小體，少量神經(jīng)纖維髓鞘腫脹、脫髓鞘； 圖1-14 甲強(qiáng)龍組背根神經(jīng)節(jié)可見充血，細(xì)胞形態(tài)較好，無(wú)凋亡小體； 圖1-15 混合組背根神經(jīng)節(jié)未見凋亡小體，部分神經(jīng)纖維髓鞘腫脹、脫髓鞘。圖2是各組的脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的Caspase染色對(duì)比(CaSpaSe3 X200)。圖 2A.各組的脊髓的Caspase染色對(duì)比；圖2B.各組的背根神經(jīng)節(jié)的Caspase染色對(duì)比。壓迫組可見大量胞漿棕黃色染色的陽(yáng)性細(xì)胞。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯少于壓迫組。圖2-1 假手術(shù)組脊髓未見陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-2 壓迫組脊髓可見大量陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-3 氫水組脊髓可見少量陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-4 甲強(qiáng)龍組脊髓可見部分陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-5 混合組脊髓可見部分陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞；
圖2-6 假手術(shù)組背根神經(jīng)節(jié)未見陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-7 壓迫組背根神經(jīng)節(jié)可見大量陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-8 氫水組背根神經(jīng)節(jié)可見少量陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-9 甲強(qiáng)龍組背根神經(jīng)節(jié)可見少量陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞； 圖2-10 混合組背根神經(jīng)節(jié)可見部分陽(yáng)性胞漿棕黃色染色細(xì)胞。圖3是各組馬尾神經(jīng)的NF染色對(duì)比(NF X400)。圖3A.假手術(shù)組、壓迫組和氫水組馬尾神經(jīng)的NF染色對(duì)比；圖;3B.甲強(qiáng)龍組和混合組馬尾神經(jīng)的NF染色對(duì)比。壓迫組可見少量神經(jīng)纖維染色為棕黃色強(qiáng)陽(yáng)性，大部分為弱陽(yáng)性和陰性。氫水、甲強(qiáng)龍組和混合組可見大量神經(jīng)纖維為強(qiáng)陽(yáng)性染色。正常組全部為強(qiáng)陽(yáng)性染色。圖3-1 假手術(shù)組馬尾神經(jīng)橫切面可見軸突全部棕黃色陽(yáng)性染色，包裹的鞘膜為藍(lán)角·
JUL，
圖3-2 假手術(shù)組馬尾神經(jīng)縱切面可見軸突全部棕黃色陽(yáng)性染色，夾雜藍(lán)色的鞘膜細(xì)胞核；
圖3-3 壓迫組馬尾神經(jīng)橫切面可見軸突少量棕黃色強(qiáng)陽(yáng)性染色，大量為弱陽(yáng)性或陰性染色；
圖3-4 壓迫組馬尾神經(jīng)縱切面可見軸突少量棕黃色強(qiáng)陽(yáng)性染色，大量為弱陽(yáng)性染色； 圖3-5 氫水組馬尾神經(jīng)橫切面可見軸突大量棕黃色陽(yáng)性染色，少量陰性染色； 圖3-6 氫水組馬尾神經(jīng)縱切面可見軸突大量棕黃色陽(yáng)性染色，少量為陰性染色； 圖3-7 甲強(qiáng)龍組馬尾神經(jīng)橫切面可見軸突大部分棕黃色陽(yáng)性染色； 圖3-8 甲強(qiáng)龍組馬尾神經(jīng)縱切面可見軸突大部分棕黃色陽(yáng)性染色； 圖3-9 混合組馬尾神經(jīng)橫切面可見軸突部分棕黃色陽(yáng)性染色； 圖3-10 混合組馬尾神經(jīng)縱切面可見軸突部分棕黃色陽(yáng)性染色。圖4是各組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的Tunel染色對(duì)比(Tunel X 200)。圖4A.各組脊髓組織的Tunel染色對(duì)比；圖4B.各組背根神經(jīng)節(jié)的Tunel染色對(duì)比。壓迫組可見大量細(xì)胞核棕黃色陽(yáng)性染色。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯少于壓迫組。圖4-1 假手術(shù)組脊髓可見個(gè)別陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞； 圖4-2 壓迫組脊髓可見大量陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞；圖4-3 氫水組脊髓可見少量陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞； 圖4-4 甲強(qiáng)龍組脊髓可見少數(shù)陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞； 圖4-5 混合組脊髓可見部分陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞； 圖4-6 假手術(shù)組背根神經(jīng)節(jié)未見陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞； 圖4-7 壓迫組背根神經(jīng)節(jié)可見大量陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞； 圖4-8 氫水組背根神經(jīng)節(jié)可見少量陽(yáng)性胞核棕黃色染色神經(jīng)細(xì)胞； 圖4-9 甲強(qiáng)龍組背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞可見部分陽(yáng)性胞核棕黃色染色； 圖4-10 混合組背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞可見部分陽(yáng)性胞核棕黃色染色。圖5是各組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的Bax染色對(duì)比(Bax X 400)。圖5A.各組脊髓組織的Bax染色對(duì)比；圖5B.各組背根神經(jīng)節(jié)的Bax染色對(duì)比。壓迫組可見大量胞漿棕黃色陽(yáng)性染色細(xì)胞。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯少于壓迫組。圖5-1 假手術(shù)組脊髓組織可見少量細(xì)胞胞漿染色為棕黃色； 圖5-2 壓迫組脊髓組織可見大量細(xì)胞胞漿染色為棕黃色；
圖5-3 氫水組脊髓組織可見少量細(xì)胞胞漿染色為棕黃色； 圖5-4 甲強(qiáng)龍組脊髓組織可見少量細(xì)胞胞漿染色為棕黃色； 圖5-5 混合組脊髓組織可見少量細(xì)胞胞漿染色為棕黃色； 圖5-6 假手術(shù)組背根神經(jīng)節(jié)未見胞漿棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞； 圖5-7 壓迫組背根神經(jīng)節(jié)可見大量胞漿棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞； 圖5-8 氫水組背根神經(jīng)節(jié)可見部分胞漿棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞； 圖5-9 甲強(qiáng)龍組背根神經(jīng)節(jié)可見部分胞漿棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞； 圖5-10 混合組背根神經(jīng)節(jié)可見部分胞漿棕黃色的陽(yáng)性細(xì)胞。圖6是各組BBB評(píng)分變化對(duì)比(Oh為正常組和假手術(shù)組)。圖7是各組熱板實(shí)驗(yàn)大鼠縮足潛伏期時(shí)間對(duì)比(Oh為正常組和假手術(shù)組)。圖8 各組脊髓、馬尾和背根神經(jīng)節(jié)MDA水平變化對(duì)比。圖8-1 各組脊髓MDA含量變化(Oh為正常組)； 圖8-2 各組馬尾MDA含量變化(Oh為正常組)；
圖8-3 各組背根神經(jīng)節(jié)MDA含量變化(Oh為正常組)。圖9是各組脊髓、馬尾和背根神經(jīng)節(jié)GSH水平變化對(duì)比。圖9-1 各組脊髓GSH含量變化(Oh為正常組)； 圖9-2 各組馬尾GSH含量變化(Oh為正常組)；
圖9-3 各組背根神經(jīng)節(jié)GSH含量變化(Oh為正常組)。圖10是各組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的Caspase 3陽(yáng)性指數(shù)對(duì)比。圖11是各組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的Bax陽(yáng)性指數(shù)對(duì)比。圖12是各組馬尾神經(jīng)的NF陽(yáng)性纖維率(NF染色陽(yáng)性率)對(duì)比。圖13是各組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的Tunel凋亡指數(shù)對(duì)比。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例11.材料和方法 (1)動(dòng)物
健康雄性SD大鼠，年齡為8-9周，體重為200-250g。動(dòng)物飼養(yǎng)于鼠籠中，飼養(yǎng)條件自由飲食，光/暗周期為12h/12h，背景噪音小于(40士 10)db，飼養(yǎng)溫度為(22士4) °C。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物先予一周的時(shí)間適應(yīng)環(huán)境，手術(shù)前12小時(shí)禁食水。(2)氫生理鹽水的制作
將氫氣在6小時(shí)0. 4 MPa氣壓下溶解于生理鹽水中，而后常壓儲(chǔ)存于無(wú)空腔的鋁包中，置于4°C冰箱保存，氫生理鹽水采用Y射線消毒。為保證氫生理鹽水中氫的含量略高于0. 6 mmol/L,氫生理鹽水每周配置一次，并通過Ohsawa等作者的檢測(cè)方法用氣體光譜分析對(duì)氫鹽水的氫含量進(jìn)行檢測(cè)(詳見0hsawa I，Nishimaki K, Yamagata K, et al. Consumption of hydrogen water prevents atherosclerosis in apolipoprotein E knockout mice[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2008, 377(4):1195-1198.)
2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
(1)實(shí)驗(yàn)分組
①假手術(shù)組(即對(duì)照組，僅行L5棘突和L5/6間隙黃韌帶的切除后關(guān)閉傷口，預(yù)前實(shí)驗(yàn)中和正常對(duì)照組無(wú)差異)；②壓迫組；③氫生理鹽水治療組(簡(jiǎn)稱氫水組)；④甲強(qiáng)龍治療組 (簡(jiǎn)稱甲強(qiáng)龍組);⑤氫生理鹽水和甲強(qiáng)龍混合治療組(簡(jiǎn)稱混合組)。每組只。假手術(shù)組和壓迫組予以生理鹽水腹腔注射；氫生理鹽水治療組予以氫生理鹽水5ml/kg腹腔注射， 3次/日；甲強(qiáng)龍治療組采用30mg/Kg甲強(qiáng)龍一次性腹腔注射；混合治療組為氫生理鹽水和甲強(qiáng)龍共同使用。每隔他行膀胱按摩一次。術(shù)后每日青霉素4萬(wàn)單位腹腔內(nèi)注射預(yù)防感
^fe ο馬尾神經(jīng)壓迫模型建立方法10%水合氯醛(0. 3ml/100g)腹腔注射麻醉，顯露大鼠L5-L6的棘突和椎板，切除L5的棘突，尖嘴鉗擴(kuò)大L5/6椎間隙，并切除L5/6間隙的黃韌帶，向頭端塞入10. OX 1.0X 1.3mm硅膠條1根，手術(shù)過程注意不損傷硬膜囊。假手術(shù)組僅行L5棘突和L5/6間隙黃韌帶的切除后關(guān)閉傷口。(詳見Jekiguchi M, Kikuchi S, Myers R R. Experimental spinal stenosis relationship between degree of cauda equina compression, neuropathology, and pain[J]. Spine (Phila Pa 1976)，2004，29(10):1105-1111.和Watanabe K, Konno S, Sekiguchi Μ, et al. Spinal stenosis: assessment of motor function, VEGF expression and angiogenesis in an experimental model in the rat[J]. Eur Spine J, 2007, 16(11):1913-1918.)
(2)組織取材
分別于術(shù)后:3h、6h、12h、Mh、48h、7a!將行為學(xué)評(píng)價(jià)后的大鼠每組抽取4只，麻醉后行手術(shù)切除椎板，暴露椎管，截取T13-L1段脊髓、L4-L6段馬尾神經(jīng)及L5、L6雙側(cè)背根神經(jīng)節(jié)， 清洗干凈后，立刻放入液氮中保存，以備MDA (丙二醛)和GSH檢測(cè)。另于4 每組抽取4 只大鼠，麻醉后，經(jīng)左心室-升主動(dòng)脈插管，先注射肝素生理鹽水后，室溫生理鹽水約100ml 沖洗血管，剪開右心耳，使靜脈積血流出，至流出液變清，繼而加壓灌注4%多聚甲醛溶液約 300ml，待皮膚粘膜變白、肢體僵硬后，手術(shù)后路切除椎板，暴露椎管，截取T13-L1段脊髓、 L4-L6段馬尾神經(jīng)及L5、L6雙側(cè)背根神經(jīng)節(jié)，放入4%多聚甲醛固定Mh，石蠟包埋，脊髓行垂直于長(zhǎng)軸橫向切片，馬尾和背根神經(jīng)節(jié)分別行橫向和縱向切片，片厚4 μ m,備行HE、NF、Caspases 3、Bax 及 Tunel Ife0(3)行為學(xué)觀察
分別于術(shù)后Μι、1 ι、24Κ4 ι、7 ι行BBB評(píng)分和熱板實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。BBB評(píng)分中觀察者為非本組實(shí)驗(yàn)人員，且對(duì)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)十分熟悉。評(píng)價(jià)前所有動(dòng)物應(yīng)檢查膀胱是否充盈，以免因膀胱充盈而影響活動(dòng)。大鼠置于開闊場(chǎng)地觀察5分鐘，采用雙人獨(dú)立觀察記錄，每只大鼠的后肢，評(píng)分為雙側(cè)后肢的平均值，最后取雙人的平均值為準(zhǔn)。熱板實(shí)驗(yàn)根據(jù)Eddy和Leimbach確立的方法進(jìn)行。(詳見Eddy N B, Leimbach D. Synthetic analgesics. II. Dithienylbutenyl and dithienylbutylamines[J]. J Pharmacol Exp Ther, 1953，107 (3) : 385-393.)將熱板儀溫度調(diào)節(jié)于(55. 0士0. 5) °C，選取基礎(chǔ)痛閾5-20s的大鼠，記錄自大鼠放在熱板儀至其舔咬后爪的時(shí)間，即縮足潛伏期(PWL， paw-withdrawal latency),以此時(shí)間為痛閾指標(biāo)。術(shù)前測(cè)量3次，取均值作為基礎(chǔ)痛閾。經(jīng)過熱板實(shí)驗(yàn)的篩選，反應(yīng)異常鼠被剔除。每只大鼠均行3次，每次至少相隔5 min以上，取其平均值作為基礎(chǔ)PffL值。為防止大鼠后爪被燙傷，確定30s為中斷時(shí)間(Cut-off值)，超過30s按30s計(jì)算。測(cè)試時(shí)力求保持熱板表面清潔干燥，遇有大鼠糞便和尿液污染時(shí)則及時(shí)清除。(4)生化檢測(cè)分析
MDA的水平可以反應(yīng)脂質(zhì)氧化的程度。MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)反應(yīng)產(chǎn)生紅色產(chǎn)物的顯色反應(yīng)，MDA-TBA加合物在535nm處有最大吸收，隨后通過比色法進(jìn)行定量檢測(cè)。檢測(cè)嚴(yán)格按照“脂質(zhì)氧化(MDA)檢測(cè)試劑盒”(中國(guó)上海碧云天生物科技有限公司，編號(hào)S0131)說(shuō)明書的操作規(guī)程進(jìn)行。GSH是重要的抗氧化物，在對(duì)抗氧自由基過氧化中發(fā)揮著重要作用。GSH含量是用 DTNB法測(cè)定。檢測(cè)嚴(yán)格按照“GSH/GSSG檢測(cè)試劑盒”(中國(guó)上海碧云天生物科技有限公司， 編號(hào)S0053)說(shuō)明書的操作規(guī)程進(jìn)行。( 5)組織學(xué)和免疫組化
通過HE染色可以觀察馬尾、脊髓及背根神經(jīng)節(jié)的病理改變。NF染色即神經(jīng)纖維蛋白染色，可以觀察馬尾神經(jīng)纖維的形態(tài)及數(shù)量，正常神經(jīng)纖維為陽(yáng)性染色，神經(jīng)纖維受損害后，神經(jīng)纖維蛋白發(fā)生變性而染色為陰性。NF染色方法采用 ELPS 法(Enhance Labelled Polymer System)，也稱 EnVision 法，是利用一種多聚化合物，將HRP或AP和第二抗體(抗鼠或抗兔IgG)同時(shí)標(biāo)記在一個(gè)多聚化合物上，即形成酶-多聚化合物-第二抗體巨大復(fù)合物，而后采用DAB顯色。染色操作規(guī)程按照“NF抗體試劑盒” (丹麥DAKO公司，編號(hào)M0762))的說(shuō)明書進(jìn)行。Caspase 3是細(xì)胞凋亡過程中的一個(gè)關(guān)鍵酶，在細(xì)胞核凋亡過程中具有關(guān)鍵作用。 Caspase 3的活性觀察也采用ELPS法免疫組化染色。染色操作規(guī)程按照“caspase 3抗體試劑盒”(美國(guó)santa cruz公司，編號(hào)SC-623))的說(shuō)明書進(jìn)行。Bax可以激活caspase系統(tǒng)，促使細(xì)胞發(fā)生凋亡。Bax檢測(cè)采用“ABC”染色法，又稱卵白素-生物素-酶復(fù)合物染色法。將特異性一抗與組織細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，通過生物素花橋與一抗結(jié)合，借助卵白素與生物素的天然親和性將生物素化辣根過氧化物酶鏈接為復(fù)合物，通過酶促反應(yīng)，顯示組織細(xì)胞相應(yīng)的抗原。染色操作規(guī)程按照“Bax抗體試劑盒” (英國(guó)ABCAM公司，編號(hào)ab5714)的說(shuō)明書進(jìn)行。
細(xì)胞凋亡采用Timel法檢測(cè)，即末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記 (TdT-mediatedX-dUTP nick end labeling)，細(xì)胞凋亡時(shí)雙鏈DNA會(huì)出現(xiàn)許多不對(duì)稱的斷裂點(diǎn)，暴露出3’ -0H,末端轉(zhuǎn)移酶(TDT)，可催化地高辛，生物素或熒光素等標(biāo)記的脫氧核苷酸加到3’ -OH末端，再通過免疫組化方法進(jìn)行檢測(cè)。染色操作規(guī)程按照“Timel試劑盒” (美國(guó)Trevigen公司，編號(hào)cat#4^8-30_DK)的說(shuō)明書進(jìn)行。(6)細(xì)胞計(jì)數(shù)
NF染色用陽(yáng)性神經(jīng)纖維率進(jìn)行評(píng)價(jià)在40倍光鏡下每張馬尾組織橫切面切片分別隨機(jī)選5個(gè)視野，計(jì)算陽(yáng)性神經(jīng)纖維數(shù)目和陰性神經(jīng)纖維數(shù)目，陽(yáng)性神經(jīng)纖維率=陽(yáng)性神經(jīng)纖維數(shù)/ (陽(yáng)性神經(jīng)纖維數(shù)+陰性神經(jīng)纖維數(shù))X 100%。Caspase3和Bax用陽(yáng)性指數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)以細(xì)胞棕黃色染色為陽(yáng)性，藍(lán)色或不著色為陰性。應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像管理分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集與分析，將免疫組化染色結(jié)果先轉(zhuǎn)化為灰度值，再轉(zhuǎn)換為陽(yáng)性指數(shù)進(jìn)行半定量分析。陽(yáng)性指數(shù)越大，代表陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)程度越強(qiáng)。Tunel評(píng)價(jià)指標(biāo)為凋亡指數(shù)(apoptosis index, Al)在光鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，除以該視野總細(xì)胞數(shù)，即得到凋亡指數(shù)(AI=視野內(nèi)凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)/ 視野內(nèi)所有神經(jīng)細(xì)胞X 100%)。(7)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
所有數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS處理，多組數(shù)據(jù)用ANOVA 分析；若方差不齊，采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。/Y0. 05視為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著，/YO. 01為統(tǒng)計(jì)學(xué)差異非常顯著。實(shí)驗(yàn)結(jié)果
(1)氫生理鹽水和甲強(qiáng)龍均能改善急性馬尾壓迫造成的運(yùn)動(dòng)感覺障礙。BBB評(píng)分反映了大鼠馬尾神經(jīng)受壓后的運(yùn)動(dòng)功能變化，正常組、假手術(shù)組和術(shù)前各治療組BBB評(píng)分均為21分(0h)，6h-24h壓迫組明顯低于正常對(duì)照組，氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組明顯高于壓迫組Gd <0.01) ；6h時(shí)氫水組和混合組明顯高于甲強(qiáng)龍組Gd < 0. 05)， 24h甲強(qiáng)龍組評(píng)分稍高于氫水組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；1池-7池甲強(qiáng)龍組、氫水組、混合組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(/^)0.05)(見圖6)。熱板實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了大鼠馬尾神經(jīng)受壓后的感覺功能變化，正常組、假手術(shù)組和術(shù)前各治療組的縮足潛伏期時(shí)間(Oh)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，他-7池壓迫組明顯高于正常對(duì)照組，氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組明顯低于壓迫組(P < 0. 05)。他-7池甲強(qiáng)龍組、混合組及氫水組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異0°〉0.05)(見圖7)。(2)氫生理鹽水和甲強(qiáng)龍均降低了 MDA的水平。脊髓、馬尾和背根神經(jīng)節(jié)的MDA檢測(cè)結(jié)果示(圖中Oh為正常組)3h-72h壓迫組明顯高于正常組，氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組MDA含量明顯低于壓迫組(/Y0. 01)；氫水組、 甲強(qiáng)龍組和混合組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異Gd〉0. 05)(見圖8-1、圖8-2和圖8-3)。(3)氫生理鹽水和甲強(qiáng)龍均提高了 GSH水平
GSH檢測(cè)結(jié)果示(圖中Oh為正常組)池-7池壓迫組明顯低于正常組，3h-24h氫水組、 甲強(qiáng)龍組和混合組脊髓GSH含量明顯高于壓迫組(/Y0. 05 )，48h和72h間無(wú)明顯差異〉 0. 05)，池-7池氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的馬尾和背根神經(jīng)節(jié)GSH含量明顯高于壓迫組 (/Y0. 05);汕-7濁氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異0°〉0. 05)(見圖9-1、圖9-2和圖9-3)。(4)氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的病理變化比壓迫組更好
HE染色光鏡下見正常組馬尾神經(jīng)纖維致密有序，軸突無(wú)腫脹，雪旺氏細(xì)胞核整齊有序， 髓鞘完整，中間夾雜少量結(jié)締組織和血管。壓迫組馬尾神經(jīng)纖維松散，部分軸突及髓鞘腫脹、脫髓鞘改變。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組馬尾神經(jīng)纖維緊密，少量軸突腫脹、脫髓鞘改變。正常組脊髓組織神經(jīng)元細(xì)胞與周圍膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)緊密有序，細(xì)胞未見收縮，細(xì)胞核及胞漿形態(tài)正常。壓迫組脊髓組織神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)收縮，周圍間隙明顯擴(kuò)大， 細(xì)胞核固縮甚至消失，可見部分凋亡小體。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的脊髓組織絕大部分神經(jīng)元細(xì)胞未見明顯收縮，細(xì)胞核清晰，但部分細(xì)胞核偏移，可見個(gè)別凋亡小體。正常組背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)緊密有序，未見節(jié)內(nèi)神經(jīng)纖維軸突腫脹、 髓鞘腫脹、脫髓鞘等改變。壓迫組背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞松散，個(gè)別出現(xiàn)凋亡小體，部分神經(jīng)纖維髓鞘腫脹、脫髓鞘。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞緊密，未出現(xiàn)凋亡小體，偶可見紅細(xì)胞積聚，少部分神經(jīng)纖維髓鞘腫脹、脫髓鞘(見圖1-1至圖1-15)。(5)氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的Caspases 3陽(yáng)性指數(shù)比壓迫組更低
光鏡下觀察，Caspase 3染色陽(yáng)性典型表現(xiàn)為胞漿棕黃色，細(xì)胞核為藍(lán)色，鏡下散在的棕黃色小圓點(diǎn)也是陽(yáng)性表現(xiàn)。在正常組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織中，未見陽(yáng)性的胞漿棕黃色染色細(xì)胞。壓迫組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織可見大量棕黃色陽(yáng)性染色。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織可見少量陽(yáng)性的棕黃色染色(見圖2-1至圖2-10)。壓迫組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的陽(yáng)性指數(shù)均明顯大于正常組(P < 0.01)；氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的陽(yáng)性指數(shù)均明顯小于壓迫組(P < 0. 05)；氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P > 0. 05)(見圖10)。(6)氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的Bax陽(yáng)性指數(shù)比壓迫組更低
光鏡下觀察，Bax染色陽(yáng)性為胞漿棕黃色，部分細(xì)胞核也可染色。在正常組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織中，可見少量陽(yáng)性的胞漿棕黃色染色細(xì)胞。壓迫組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織可見大量陽(yáng)性的胞漿棕黃色染色細(xì)胞。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織可見部分陽(yáng)性的棕黃色染色(見圖5-1至圖5-10)。壓迫組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的陽(yáng)性指數(shù)均明顯大于正常組，P <0.01 ；氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的陽(yáng)性指數(shù)均明顯小于壓迫組(P <0.01)；氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組和之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P > 0. 05)(見圖11)。(7)氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的NF陽(yáng)性率比壓迫組更高
光鏡下觀察，可見正常組馬尾組織中，神經(jīng)軸突全部為強(qiáng)陽(yáng)性的棕黃色染色，雪旺氏細(xì)胞、髓鞘和血管結(jié)締組織則為陰性的藍(lán)色。壓迫組的馬尾神經(jīng)軸突只有少量的強(qiáng)陽(yáng)性的棕黃色染色，大量為黃色的弱陽(yáng)性染色或藍(lán)色的陰性染色。氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組可見大量強(qiáng)陽(yáng)性的棕黃色染色和弱陽(yáng)性的黃色染色，只有少量的陰性染色(見圖3-1至圖3-10)。正常組的陽(yáng)性纖維率100%，壓迫組陽(yáng)性纖維率為(21. 35士2. 38) %，氫水組陽(yáng)性纖維率為(59. 08士6. 25)%，甲強(qiáng)龍組陽(yáng)性纖維率為(64. 41 士3. 97) %，混合組陽(yáng)性纖維率為 (55. 06士4. 74)%，與壓迫組相比統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P < 0. 01);氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組之間相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P >0.05)(見圖12)。
(8)氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組的Tunel凋亡指數(shù)比壓迫組更低
光鏡下觀察，Tunel染色陽(yáng)性典型表現(xiàn)為胞核棕黃色。在正常組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織中可見個(gè)別陽(yáng)性細(xì)胞；壓迫組的脊髓和背根神經(jīng)節(jié)中可見大量陽(yáng)性細(xì)胞；氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)組織可見少量陽(yáng)性細(xì)胞(見圖4-1至圖4-10)。壓迫組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的凋亡指數(shù)均明顯大于正常組，P <0.01 ；氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組脊髓和背根神經(jīng)節(jié)的凋亡指數(shù)均小于壓迫組，P <0.01 ；氫水組、甲強(qiáng)龍組和混合組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P > 0. 05)(見圖13)。討論
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激指標(biāo)在池即迅速增強(qiáng)，4 達(dá)到高峰，并與動(dòng)物行為學(xué)、神經(jīng)纖維損傷和細(xì)胞凋亡的改變一致。氫生理鹽水、甲強(qiáng)龍或兩者混合治療后，均能在48h內(nèi)明顯改善大鼠的行為學(xué)評(píng)分，降低脂質(zhì)氧化水平，具有較好的脊髓、馬尾及背根神經(jīng)節(jié)的組織形態(tài)，減少了馬尾神經(jīng)纖維變性，減少了神經(jīng)元凋亡。氫生理鹽水和甲強(qiáng)龍?jiān)隈R尾綜合征中均具有抗氧化應(yīng)激、抑制神經(jīng)纖維變性及抗神經(jīng)元凋亡作用，氫生理鹽水具有和甲強(qiáng)龍相似的急性神經(jīng)損傷保護(hù)作用。馬尾綜合征的繼發(fā)性損害和氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。臨床上由于腰椎間盤突出、腰椎管狹窄等馬尾神經(jīng)受到壓迫原因而導(dǎo)致發(fā)生CES的發(fā)病率為1.6-8%，馬尾受壓并不都出現(xiàn)CES，但鞍區(qū)感覺障礙和大小便、性功能障礙一旦出現(xiàn)就難以恢復(fù)，說(shuō)明短期內(nèi)發(fā)生了不可逆的神經(jīng)細(xì)胞損害。馬尾神經(jīng)受壓后病理生理變化達(dá)到一定程度時(shí)，逆行性、順行性和跨細(xì)胞性凋亡在很短時(shí)間內(nèi)發(fā)生并迅速擴(kuò)散可以合理解釋“全面爆發(fā)綜合征”，而跨細(xì)胞的神經(jīng)元凋亡與馬尾受壓迫后產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，炎癥反應(yīng)造成損傷的重要機(jī)制之一就是氧化應(yīng)激損害。本發(fā)明中急性馬尾綜合征大鼠的氧化應(yīng)激指標(biāo)在池即迅速增強(qiáng)，4 達(dá)到高峰，并與動(dòng)物行為學(xué)、神經(jīng)纖維損傷和細(xì)胞凋亡的改變一致，說(shuō)明了急性馬尾綜合征的繼發(fā)損害與氧化應(yīng)激有直接的關(guān)聯(lián)，也為臨床對(duì)于CES采取急診手術(shù)治療提供了理論依據(jù)。氫生理鹽水和甲強(qiáng)龍通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)而減少了馬尾神經(jīng)纖維變性和神經(jīng)元的凋亡，抑制了馬尾綜合征的繼發(fā)損害，對(duì)急性馬尾綜合征具有治療效果，也說(shuō)明了氧化應(yīng)激反應(yīng)在急性馬尾綜合征的繼發(fā)損害中發(fā)揮著重要作用。氫生理鹽水與甲強(qiáng)龍相比，應(yīng)該具有更好的治療優(yōu)勢(shì)。甲強(qiáng)龍是目前臨床廣泛應(yīng)用的急性神經(jīng)損害保護(hù)藥物，屬于糖皮質(zhì)激素，其作用機(jī)制為非特異性抗炎癥反應(yīng)，能夠抑制炎性物質(zhì)的產(chǎn)生、降低脂質(zhì)氧化水平而減輕神經(jīng)繼發(fā)損害，其治療作用得到廣泛認(rèn)可，但不足之處是副作用較大且價(jià)格昂貴。甲強(qiáng)龍大劑量沖擊可能造成心律失常甚至心臟驟停死亡，即使普通劑量也可能造成精神異常、消化道潰瘍、感染、高血糖、高血壓、眼壓升高、電解質(zhì)紊亂、內(nèi)分泌紊亂、股骨頭壞死等并發(fā)癥。甲強(qiáng)龍的使用每年產(chǎn)生了高額的醫(yī)療費(fèi)用，在中國(guó)，一位60kg體重患者M(jìn)h甲強(qiáng)龍大劑量沖擊治療花費(fèi)約為400美元，4 約為700美元，并且要使用普通劑量維持一周或者更久并逐漸減量才能停藥。氫氣過去被認(rèn)為是爆炸性的危險(xiǎn)氣體，但被發(fā)現(xiàn)具有選擇性清除羥自由基和過氧化硝酸鹽能力后被作為吸入性治療氣體得到了學(xué)者們的關(guān)注。呼吸氫氣存在設(shè)備使用的困難、人體吸收濃度低及可能發(fā)生爆炸風(fēng)險(xiǎn)，然而氫生理鹽水制備簡(jiǎn)單、注射濃度高、使用方便且無(wú)爆炸風(fēng)險(xiǎn)，每袋氫生理鹽水的成本在幾美元，且目前動(dòng)物研究中報(bào)道氫生理鹽水大劑量口服20ml/kg/day連續(xù)應(yīng)用 28天也無(wú)副作用。從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看氫生理鹽水具有良好的治療優(yōu)勢(shì)，即使其療效類似于甲強(qiáng)龍，也將大大減少急性神經(jīng)損傷患者藥物副作用風(fēng)險(xiǎn)，并大大降低醫(yī)療成本。中國(guó)專利公開號(hào)CN101347451A公開了一種具有治療缺血再灌注損傷功能的含氫注射液，該發(fā)明是一種可用于治療腦、心、腎等組織器官缺血再灌注損傷的注射液。該發(fā)明提出氫生理鹽水注射液可減少大鼠局灶性腦缺血后腦梗死的體積、減少神經(jīng)細(xì)胞損傷、減少細(xì)胞凋亡數(shù)量、降低皮層和海馬中的凋亡酶活性，可用作治療腦、心、腎等重要器官缺血再灌注損傷的藥物。上述文獻(xiàn)雖然也提到氫生理鹽水可以減少神經(jīng)細(xì)胞損傷，但大腦神經(jīng)元細(xì)胞屬于高級(jí)中樞神經(jīng)元，而馬尾神經(jīng)屬于周圍神經(jīng)，氫生理鹽水雖然能夠減少大腦神經(jīng)細(xì)胞損傷， 但并不能證明其對(duì)馬尾神經(jīng)損傷也有很好的治療效果，例如利魯唑，該藥能夠調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有神經(jīng)保護(hù)作用，但其對(duì)馬尾神經(jīng)損傷卻沒有治療作用。綜上所述，雖然該發(fā)明提出氫生理鹽水能夠減少大腦神經(jīng)細(xì)胞損傷，但并不能由此顯而易見的推導(dǎo)出氫生理鹽水對(duì)急性馬尾神經(jīng)損害具有治療作用。實(shí)施例2含氫口服液的制備
將氫氣在6小時(shí)0. 4 MPa氣壓下溶解于純凈水中，保證口服液中氫的含量略高于0. 6 mmol/L,消毒，常壓儲(chǔ)存于無(wú)空腔的鋁包或鋁罐中，置于4°C冰箱保存。實(shí)施例3含氫口服液的制備
將氫氣在6小時(shí)0. 4 MI^a氣壓下溶解于生理鹽水中，保證口服液中氫的含量略高于0. 6 mmol/L,消毒，常壓儲(chǔ)存于無(wú)空腔的鋁包或鋁罐中，置于4°C冰箱保存。實(shí)施例4含氫口服液的制備
將氫氣在6小時(shí)0. 4 MPa氣壓下溶解于葡萄糖生理鹽水中，保證口服液中氫的含量略高于0. 6 mmol/L，消毒，常壓儲(chǔ)存于無(wú)空腔的鋁包或鋁罐中，置于4°C冰箱保存。實(shí)施例5含氫口服液的臨床試驗(yàn)
材料含氫口服液根據(jù)實(shí)施例3所述的方法制備；
符合馬尾綜合征疾病特征的病人30例，隨機(jī)分成對(duì)照組、生理鹽水組和含氫口服液組 3組，每組10人。含氫口服液組每日口服含氫口服液1L，純凈水組每日口服生理鹽水1L，對(duì)照組不給予藥物治療。連續(xù)服藥8周，療程結(jié)束后進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。療效評(píng)價(jià)結(jié)果見下表1，由表1數(shù)據(jù)可見，服用含氫口服液8周后，馬尾綜合征病人的總有效率達(dá)到90%，證明含氫口服液具有很好的治療急性馬尾神經(jīng)損傷的作用，在臨床上具有很好的應(yīng)用價(jià)值。
權(quán)利要求
1.氫生理鹽水在制備治療急性馬尾神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的氫生理鹽水在制備治療急性馬尾綜合征疾病藥物中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的氫生理鹽水中氫氣的含量為 0. 6mmol/L-飽和。
4.一種含氫口服液在制備治療急性馬尾神經(jīng)損害疾病保健品中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的含氫口服液在制備治療急性馬尾綜合征疾病保健品中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的口服液選自純凈水、生理鹽水或葡萄糖生理鹽水。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的含氫口服液中氫氣的含量為 0. 6mmol/L-飽和。
全文摘要
本發(fā)明涉及氫生理鹽水在制備治療急性馬尾神經(jīng)損害疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供一種含氫口服液在制備治療急性馬尾神經(jīng)損害疾病保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于開發(fā)了氫生理鹽水的新用途，發(fā)現(xiàn)了氫生理鹽水具有和甲強(qiáng)龍相似的急性神經(jīng)損傷保護(hù)作用，對(duì)急性馬尾綜合征具有治療效果；氫生理鹽水制備簡(jiǎn)單、注射濃度高、使用方便且無(wú)爆炸風(fēng)險(xiǎn)，成本很低，且無(wú)副作用，具有良好的治療優(yōu)勢(shì)，大大減少急性神經(jīng)損傷患者藥物副作用風(fēng)險(xiǎn)，并大大降低醫(yī)療成本；本發(fā)明還開發(fā)了一種含氫口服液的新用途，含氫口服液制備簡(jiǎn)單，方便病人飲用，且無(wú)毒副作用，具有很好的治療急性馬尾綜合征的優(yōu)勢(shì)。
文檔編號(hào)A61K33/00GK102228467SQ20111017123
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月23日
發(fā)明者史建剛, 官正茂, 王元 申請(qǐng)人:上海長(zhǎng)征醫(yī)院