專利名稱：一種高品質(zhì)銀杏黃酮的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從從銀杏葉中提取高品質(zhì)銀杏黃酮的制備方法。
背景技術(shù)：
銀杏黃酮主要存在于銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.銀杏的干燥莖葉中，銀杏葉經(jīng)過(guò)溶劑浸提分離、純化等工藝過(guò)程制備的植物提取物，干燥葉中銀杏黃酮的含量可達(dá)到2% _5%，銀杏葉的有效成分包括銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、白果素、槲皮素、山奈酚等，苦味成分為銀杏酸A、B、C、M、J等。 銀杏總黃酮(FG)，在20世紀(jì)60年代已經(jīng)研究其擴(kuò)血管活性，并初步應(yīng)用于臨床獲得較好的療效，后經(jīng)專家多年的研究和開發(fā)，F(xiàn)G不但有擴(kuò)血管作用而且有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗自由基、降血脂、抗腫瘤及抗白血病等作用，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于制藥、保健品、日用品、化妝品等各個(gè)領(lǐng)域。我國(guó)內(nèi)外目前都主要以銀杏葉為原料提取銀杏黃酮。分離純化銀杏黃酮的方法很多，包括溶劑浸提法、超臨界法、超聲波法、微波輔助提法、微波法、高速逆流法、大孔樹脂吸附法法、聚酰胺柱層析法、和酶法等，其中最成熟和最常用的提取工藝是溶劑浸提法，一種精制銀杏黃酮的方法(申請(qǐng)?zhí)?00610038797)，其特征是它基本上由下列步驟組成步驟I.將I份質(zhì)量的銀杏葉提取物溶于200份質(zhì)量的乙醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的乙醇一水中；步驟2.將步驟I中的GBE溶液在O. 05 O. 3MPa壓力和10 50°C溫度下進(jìn)行第一次超濾，超濾膜為截留分子量為5000，10000或30000dalton的超濾膜，收集透過(guò)液；步驟3.將步驟2收集的透過(guò)液減壓濃縮，再將I份質(zhì)量的蒸干后的殘留物溶于50份質(zhì)量的無(wú)水乙醇；步驟4.在步驟3所得的溶液中加入β-環(huán)糊精或改性環(huán)糊精，使溶液中銀杏黃酮與β-環(huán)糊精或改性β-環(huán)糊精的物質(zhì)的量之比為I : 9 I : 1，先在20 90°C水浴中反應(yīng)15min 5h，再在常溫下反應(yīng)30min 24h ;步驟5.將步驟4中反應(yīng)后的產(chǎn)物在O. 05 O. 3MPa壓力和10 50°C溫度下進(jìn)行第二次超濾，超濾膜為截留分子量為5000，10000或30000dalton的超濾膜，收集截留的濃縮后的液體，即得到精制的銀杏黃酮乙醇溶液。高純度銀杏黃酮類化合物高效提取制備方法(申請(qǐng)?zhí)?00610068733)，其特征在于包括以下步驟:A、采用秋天葉未黃時(shí)的銀杏葉，烘干后保存；B.將銀杏葉粉碎，備用；C、用乙醇進(jìn)行提??；D、提取液減壓濃縮回收乙醇；E、將濃縮液稀釋、冷卻沉降；F、清液進(jìn)苯乙烯型大孔樹脂吸附柱進(jìn)行吸附；G、用醇類溶液洗脫；H、洗脫液減壓濃縮，真空干燥，粉碎包裝。

發(fā)明內(nèi)容
故本發(fā)明的目的是為從銀杏葉中制備高品質(zhì)銀杏黃酮制備工藝，以便解決目前市場(chǎng)上生產(chǎn)該產(chǎn)品的技術(shù)中所存在的問(wèn)題，以便得到高回收率和高品質(zhì)的銀杏黃酮產(chǎn)品。本發(fā)明的目的主要通過(guò)以下技術(shù)過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)
具體步驟如下I)從銀杏葉中提取銀杏黃酮將銀杏葉子粉碎過(guò)10目，加其重量5-8倍量的去離子水加熱回流提取三次，每次提取I. 5小時(shí)，過(guò)濾提取液，用去離子水洗滌提取渣，合并提取液及洗滌液，減壓濃縮至一定的比重，就得到銀杏黃酮的粗提液；2)醇沉除雜將過(guò)程I)中得到的粗提液經(jīng)過(guò)濾后，加入無(wú)水有機(jī)溶劑(I )，調(diào)節(jié)液體中有機(jī)溶劑含量到30-80%，充分?jǐn)嚢?、靜置，沉降沉淀，過(guò)濾，清夜?jié)饪s到無(wú)醇，待用；上述過(guò)程中有機(jī)溶劑(I )包括甲醇、乙醇、丙酮；3)澄清劑除雜將2)中待用的濃縮液，加熱到30°C加入經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)的澄清劑(II )，充分?jǐn)嚢?，沉?2H，每隔2H攪拌一次，沉降完全后，過(guò)濾，清夜待用；上述過(guò)程中澄清劑(II )包括殼聚糖、甲殼素、ZTC1+1 ；4)富集銀杏黃酮和內(nèi)酯利用極性、弱極性的大孔樹脂進(jìn)行初分離。將非離子型的極性、弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹脂置于乙醇中浸泡24小時(shí)，然后用乙醇、去離子水依次沖·洗樹脂；將經(jīng)過(guò)上述過(guò)程活化過(guò)的樹脂，用重力沉降法裝柱；將3)中得到的清夜，上樣于處理好、裝填好的層析柱，在采用含水有機(jī)溶劑(III)對(duì)大孔樹脂進(jìn)行洗脫，分段收集，減壓濃縮收集的含有銀杏黃酮和內(nèi)酯部分，得到富含銀杏黃酮和內(nèi)酯的濃縮液；上述含水有機(jī)溶劑(III)中有機(jī)溶劑的含量為10-90v% ;上述含水有機(jī)溶劑(III)中的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇。5)樹脂脫除銀杏酸利用極性或者弱極性的大孔樹脂進(jìn)行初分離。將非離子型的極性或者弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹脂置于乙醇中浸泡24小時(shí)，然后用乙醇、去離子水依次沖洗樹脂；將經(jīng)過(guò)上述過(guò)程活化過(guò)的樹脂，用重力沉降法裝柱；將4)中得到的濃縮液，上樣于處理好、裝填好的層析柱，收集流出液，減壓濃縮，干燥，等到最終銀杏提取物產(chǎn)品；所述步驟3)中所用的澄清劑是通過(guò)規(guī)范要求經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)的。所述步驟4)、5)中所用的大孔網(wǎng)狀吸附樹脂包括聚丙乙烯樹脂、聚苯乙烯樹脂、聚甲基丙烯酸酯樹脂、丙烯酰胺與苯乙烯共聚物樹脂。該發(fā)明所述說(shuō)的一種從銀杏葉中制備高品質(zhì)銀杏黃酮的技術(shù)優(yōu)勢(shì)在于a)聯(lián)合使用不同性能的大孔樹脂來(lái)富集銀杏黃酮和內(nèi)酯、脫出銀杏酸，使產(chǎn)品品質(zhì)明顯提高，保證了產(chǎn)品。b)簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝，縮短生產(chǎn)周期，使生產(chǎn)成本有所降低。c)使用了無(wú)毒無(wú)害的有機(jī)溶劑及天然澄清劑，大大降低了產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)的殘留量，提聞了廣品的品質(zhì)。具體實(shí)例實(shí)例II)提取將200g銀杏黃酮含量為2.0%銀杏葉原料經(jīng)過(guò)粉碎，放入2000ml三角瓶中，加入IOOOml去離子水熱回流提取，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，減壓濃縮至d = I. 05 (比重)，約400ml，經(jīng)UV檢測(cè)，濃縮液中銀杏黃酮的濃度為9. 8mg/ml，有效成分回收率為98%。2)醇沉將過(guò)程I)中得到的濃縮液400ml，加入無(wú)水乙醇，調(diào)節(jié)液體中乙醇含量達(dá)50%，充分?jǐn)嚢?、靜置，沉降沉淀，過(guò)濾，清夜?jié)饪s到無(wú)醇，得到醇沉濃縮液380ml，經(jīng)過(guò)UV檢測(cè)，醇沉濃縮液中銀杏黃酮的濃度為10. lmg/ml，有效成分回收率為95%。
3)澄清劑除雜將2)中待用的醇沉濃縮液380ml，加熱到30°C后，加入液體量O. 5%經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)的澄清劑ZTC1+1，充分?jǐn)嚢瑁两?2H，每隔2H攪拌一次，沉降完全后，過(guò)濾得到360ml清夜待用，經(jīng)UV檢測(cè)，清夜中銀杏黃酮的濃度為10. 6mg/ml，有效成分回收率為95%。4)富集銀杏黃酮和內(nèi)酯將3)中得到的清夜，上樣于處理好、裝填好的LS-46D層析柱，在采用含水乙醇對(duì)大孔樹脂進(jìn)行洗脫，收集40-70%乙醇洗脫液，減壓濃縮收集的含有銀杏黃酮和內(nèi)酯部分，得到富含銀杏黃酮和內(nèi)酯的濃縮液280ml，經(jīng)UV檢測(cè)，濃縮液中銀杏黃酮的濃度為12. 9mg/ml，有效成分回收率為90%。5)樹脂脫出銀杏酸將4)中得到的濃縮液，上樣于處理好、裝填好的HPD-5000層析柱，收集流出液，減壓濃縮，干燥，等到最終銀杏提取物產(chǎn)品12. 3g，經(jīng)UV檢測(cè)，最終產(chǎn)品中銀杏黃酮的含量達(dá)到26.3%，HPLC檢測(cè)銀杏內(nèi)酯含量大于6%，銀杏酸含量小于O. 005ppm,有效成分回收率為80 %。 實(shí)例2I)提取將200g銀杏黃酮含量為2.0%銀杏葉原料經(jīng)過(guò)粉碎，放入2000ml三角瓶中，加入IOOOml去離子水熱回流提取，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，減壓濃縮至d = I. 08 (比重)，約375ml，經(jīng)UV檢測(cè)，濃縮液中銀杏黃酮的濃度為10. 45mg/ml，有效成分回收率為98%。2)醇沉將過(guò)程I)中得到的濃縮液375ml，加入無(wú)水乙醇，調(diào)節(jié)液體中乙醇含量達(dá)65%，充分?jǐn)嚢?、靜置，沉降沉淀，過(guò)濾，清夜?jié)饪s到無(wú)醇，得到醇沉濃縮液500ml，經(jīng)過(guò)UV檢測(cè)，醇沉濃縮液中銀杏黃酮的濃度為7. 7mg/ml，有效成分回收率為96. 3%。3)澄清劑除雜將2)中待用的醇沉濃縮液500ml，加熱到30°C后，加入液體量O. 3%經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)的澄清劑ZTC1+1，充分?jǐn)嚢?，沉?2H，每隔2H攪拌一次，沉降完全后，過(guò)濾得到485ml清夜待用，經(jīng)UV檢測(cè)，清夜中銀杏黃酮的濃度為7. 92mg/ml，有效成分回收率為96%。4)富集銀杏黃酮和內(nèi)酯將3)中得到的清夜，上樣于處理好、裝填好的LS-46D層析柱，在采用含水乙醇對(duì)大孔樹脂進(jìn)行洗脫，收集40-70%乙醇洗脫液，減壓濃縮收集的含有銀杏黃酮和內(nèi)酯部分，得到富含銀杏黃酮和內(nèi)酯的濃縮液350ml，經(jīng)UV檢測(cè)，濃縮液中銀杏黃酮的濃度為9. 9mg/ml，有效成分回收率為94%。5)樹脂脫出銀杏酸將4)中得到的濃縮液，上樣于處理好、裝填好的HPD-5000層析柱，收集流出液，減壓濃縮，干燥，等到最終銀杏提取物產(chǎn)品12. 76g，經(jīng)UV檢測(cè)，最終產(chǎn)品中銀杏黃酮的含量達(dá)到29.3%，HPLC檢測(cè)銀杏內(nèi)酯含量大于6%，銀杏酸含量小于O. 005ppm，有效成分回收率為93. 5%。實(shí)例3I)提取將200g銀杏黃酮含量為2.0%銀杏葉原料經(jīng)過(guò)粉碎，放入2000ml三角瓶中，加入IOOOml去離子水熱回流提取，提取三次，一次I. 5H/次，合并三次提取液，減壓濃縮至d = I. 08 (比重)，約375ml，經(jīng)UV檢測(cè)，濃縮液中銀杏黃酮的濃度為10. 45mg/ml，有效成分回收率為98%。2)醇沉將過(guò)程I)中得到的濃縮液375ml，加入無(wú)水乙醇，調(diào)節(jié)液體中乙醇含量達(dá)80%，充分?jǐn)嚢?、靜置，沉降沉淀，過(guò)濾，清夜?jié)饪s到無(wú)醇，得到醇沉濃縮液355ml，經(jīng)過(guò)UV檢測(cè)，醇沉濃縮液中銀杏黃酮的濃度為10. 8mg/ml，有效成分回收率為95. 4%。3)澄清劑除雜將2)中待用的醇沉濃縮液355ml，加熱到30°C后，加入液體量O. 5%經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)的澄清劑ZTC1+1，充分?jǐn)嚢?，沉?2H，每隔2H攪拌一次，沉降完全后，過(guò)濾得到342ml清夜待用，經(jīng)UV檢測(cè)，清夜中銀杏黃酮的濃度為11. 06mg/ml，有效成分回收率為94. 6%04)富集銀杏黃酮和內(nèi)酯將3)中得到的清夜，上樣于處理好、裝填好的LS-46D層析柱，在采用含水乙醇對(duì)大孔樹脂進(jìn)行洗脫，收集40-70%乙醇洗脫液，減壓濃縮收集的含有銀杏黃酮和內(nèi)酯部分，得到富含銀杏黃酮和內(nèi)酯的濃縮液273ml，經(jīng)UV檢測(cè)，濃縮液中銀杏黃酮的濃度為13. 3mg/ml，有效成分回收率為90. 8%。5)樹脂脫出銀杏酸將4)中得到的濃縮液，上樣于處理好、裝填好的HPD-5000層析柱，收集流出液，減壓濃縮，干燥，等到最終銀杏提取物產(chǎn)品11. 99g，經(jīng)UV檢測(cè)，最終產(chǎn)品中銀杏黃酮的含量達(dá)到28.5%，HPLC檢測(cè)銀杏內(nèi)酯含量大于6%，銀杏酸含量小于 O. 005ppm，有效成分回收率為85. 7%。
權(quán)利要求
1.一種高品質(zhì)銀杏黃酮的制備方法，其特征在于 1)從銀杏葉中提取銀杏黃酮將銀杏葉子粉碎過(guò)10目，加其重量5-8倍量的去離子水加熱回流提取三次，每次提取I. 5小時(shí)，過(guò)濾提取液，用去離子水洗滌提取渣，合并提取液及洗滌液，減壓濃縮至一定的比重，就得到銀杏黃酮的粗提液； 2)醇沉除雜將過(guò)程I)中得到的粗提液經(jīng)過(guò)濾后，加入無(wú)水有機(jī)溶劑(I)，調(diào)節(jié)液體中有機(jī)溶劑含量到30-80%，充分?jǐn)嚢?、靜置，沉降沉淀，過(guò)濾，清夜?jié)饪s到無(wú)醇，待用；上述過(guò)程中有機(jī)溶劑(I )包括甲醇、乙醇、丙酮； 3)澄清劑除雜將2)中待用的濃縮液，加熱到30°C加入經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)的澄清劑(II)，充分?jǐn)嚢瑁两?2H，每隔2H攪拌一次，沉降完全后，過(guò)濾，清夜待用；上述過(guò)程中澄清劑(II )包括殼聚糖、甲殼素、ZTC1+1 ； 4)富集銀杏黃酮和內(nèi)酯利用極性、弱極性的大孔樹脂進(jìn)行初分離，將非離子型的極性、弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹脂置于乙醇中浸泡24小時(shí)，然后用乙醇、去離子水依次沖洗樹月旨；將經(jīng)過(guò)上述過(guò)程活化過(guò)的樹脂，用重力沉降法裝柱；將3)中得到的清夜，上樣于處理好、裝填好的層析柱，在采用含水有機(jī)溶劑(III)對(duì)大孔樹脂進(jìn)行洗脫，分段收集，減壓濃縮收集的含有銀杏黃酮和內(nèi)酯部分，得到富含銀杏黃酮和內(nèi)酯的濃縮液；上述含水有機(jī)溶劑(III)中有機(jī)溶劑的含量為10-90v% ;上述含水有機(jī)溶劑(III)中的有機(jī)溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇。
5)樹脂脫除銀杏酸利用極性或者弱極性的大孔樹脂進(jìn)行初分離，將非離子型的極性或者弱極性大孔網(wǎng)狀吸附樹脂置于乙醇中浸泡24小時(shí)，然后用乙醇、去離子水依次沖洗樹脂；將經(jīng)過(guò)上述過(guò)程活化過(guò)的樹脂，用重力沉降法裝柱；將4)中得到的濃縮液，上樣于處理好、裝填好的層析柱，收集流出液，減壓濃縮，干燥，等到最終銀杏提取物產(chǎn)品。
2.按權(quán)利要求I所述的一種高品質(zhì)銀杏黃酮的制備方法，其特征在于所述步驟3)中所用的澄清劑是通過(guò)規(guī)范要求經(jīng)過(guò)預(yù)處理過(guò)的。
3.按權(quán)利要求I所述的一種高品質(zhì)銀杏黃酮的制備方法，其特征在于所述步驟4)、5)中所用的大孔網(wǎng)狀吸附樹脂包括聚丙乙烯樹脂、聚苯乙烯樹脂、聚甲基丙烯酸酯樹脂、丙烯酰胺與苯乙烯共聚物樹脂。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從從銀杏葉中提取高品質(zhì)銀杏黃酮的制備方法。用去離子水從銀杏葉中提取粗提液，經(jīng)過(guò)濾后醇沉除雜、澄清劑除雜、富集銀杏黃酮和內(nèi)酯，利用極性、弱極性的大孔樹脂進(jìn)行初分離。樹脂脫除銀杏酸最終銀杏提取物產(chǎn)品。該發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢(shì)在于a)聯(lián)合使用不同性能的大孔樹脂來(lái)富集銀杏黃酮和內(nèi)酯、脫出銀杏酸，使產(chǎn)品品質(zhì)明顯提高，保證了產(chǎn)品。b)簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝，縮短生產(chǎn)周期，使生產(chǎn)成本有所降低。c)使用了無(wú)毒無(wú)害的有機(jī)溶劑及天然澄清劑，大大降低了產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)的殘留量，提高了產(chǎn)品的品質(zhì)。
文檔編號(hào)A61P9/10GK102805755SQ20111015294
公開日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2011年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月2日
發(fā)明者王平, 李雪松, 任曉峰, 李建, 盧義德, 苗志宏 申請(qǐng)人:漢中天然谷生物科技有限公司