專利名稱：一種口服降鈣素脂質(zhì)體及其凍干制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明設(shè)計(jì)藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及穿膜肽(D-ArgS)修飾N-三甲基殼聚糖包覆降鈣素脂質(zhì)體及其凍干制劑。
背景技術(shù)：
蛋白多肽類藥物非注射給藥途徑的研究與開發(fā)長期以來一直是國內(nèi)外藥劑學(xué)研究者熱衷的領(lǐng)域。其中口服給藥因?yàn)榻?jīng)濟(jì)、方便、給藥劑量準(zhǔn)確，一直是研究者主要努力的方向，但多肽、蛋白質(zhì)藥物的口服遞送存在諸多障礙①胃酸的降解作用。胃酸的PH在I
2.5左右，許多肽類和蛋白質(zhì)類藥物在這種環(huán)境下喪失絕大部分甚至全部生物活性；②酶的降解作用。胃腸道內(nèi)酶的降解作用是導(dǎo)致肽類和蛋白質(zhì)類藥物口服生物利用度較低的重要因素之一。肽類或蛋白質(zhì)類藥物口服后，首先被胃液中的胃蛋白酶降解成短鏈肽。藥物進(jìn)入腸道后進(jìn)一步被胰蛋白酶、彈性蛋白酶、糜蛋白酶及羧肽酶等降解。絕大多數(shù)肽類和蛋白質(zhì)類藥物在胃腸道中被降解成氨基酸或由2 6個(gè)氨基酸組成的小分子肽。③胃腸道黏膜的低透過性。多數(shù)肽類和蛋白質(zhì)類藥物的分子量較大，脂溶性較差，不利于通過生物膜。此外，覆蓋在黏膜上皮細(xì)胞表面的黏液凝膠層也形成了大分子吸收的物理屏障。④肝臟代謝。即使有少數(shù)部分藥物被吸收，仍可遭遇肝臟代謝酶的影響而失活。降鈣素(CT)是由甲狀腺濾泡旁細(xì)胞(C-細(xì)胞)產(chǎn)生的32個(gè)氨基酸組成的多肽類激素藥物，由Hirsh首次發(fā)現(xiàn)并證明它具有鈣-磷代謝調(diào)節(jié)功能[34]。現(xiàn)在臨床使用的CT主要是合成的人降I丐素(human calcitonin, hCT)和鮭魚降I丐素(salmon calcitonin, sCT)。鮭魚降鈣素對(duì)它的受體結(jié)合部位具有很高的親和力(它的受體結(jié)合部位在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的某些區(qū)域也已經(jīng)被證明)，具有十分良好的臨床效果并且比合成的哺乳類(包括人)的降鈣素，作用持續(xù)的時(shí)間更長。降鈣素的臨床應(yīng)用如下1、禁用或不能使用常規(guī)雌激素與鈣制劑聯(lián)合治療的早期和晚期絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥以及老年性骨質(zhì)疏松癥。2、繼發(fā)于乳腺癌、肺癌或腎癌、骨髓瘤和其他惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移所致的高血鈣癥。3、變形性骨炎。4、甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)癥、缺乏活動(dòng)或維生素D中毒(包括急性或慢性中毒)。5、痛性神經(jīng)營養(yǎng)不良癥或Sudeck 氏病。目前上市的降鈣素劑型有注射劑和鼻噴劑，進(jìn)口品種有諾華公司的sCT(商品名 密鈣息，有注射劑和鼻噴劑)，旭化成公司的鰻魚降鈣素(商品名益蓋寧注射劑)。國內(nèi)的生產(chǎn)廠家有上海麗珠集團(tuán)麗寶生物化學(xué)制藥有限公司、山東綠葉制藥有限公司的鰻魚降鈣素(依降鈣素注射劑)，上海太平洋制藥廠、上海第一生化藥業(yè)公司、深圳市九明藥業(yè)有限公司、河北聯(lián)合制藥有限公司、青島國大藥業(yè)有限公司的sCT(鮭魚降鈣素注射劑)等。但是對(duì)于大多數(shù)治療藥物來說，口服給藥使患者最樂于接受和方便的給藥途徑，因此，設(shè)計(jì)一種能克服多肽藥物在胃腸道中的各種屏障，口服生物利用度高的制劑有著重要的現(xiàn)實(shí)意義和填補(bǔ)市場(chǎng)空白
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種口服降鈣素脂質(zhì)體，通過對(duì)脂質(zhì)體表面進(jìn)行修飾，提高了了降鈣素在胃腸道的穩(wěn)定性，增加了腸道滯留時(shí)間并且增加了藥物在腸道的吸收。本發(fā)明的降鈣素脂質(zhì)體以大豆卵磷脂為膜材，膽固醇為膜流動(dòng)性調(diào)節(jié)劑，DSPG為負(fù)電荷調(diào)節(jié)物質(zhì)制備了脂質(zhì)體，并被動(dòng)載入降鈣素形成降鈣素脂質(zhì)體，并用穿膜肽ArgS修飾脂質(zhì)體表面，再用TMC包覆，形成了 ArgS修飾的TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體，并以蔗糖等作為凍干保護(hù)劑制成凍干制劑。本發(fā)明研制的新型降鈣素口服脂質(zhì)體制劑一方面具有粘膜粘附作用，可以提高制劑在腸道的滯留時(shí)間；另一方面其修飾材料Arg8具有攜帶制劑被細(xì)胞快速攝取的作用，同時(shí)TMC具有打開細(xì)胞間緊密連接，使降鈣素通過細(xì)胞旁路通道轉(zhuǎn)運(yùn)，因此可以增加降鈣素的口服吸收。本發(fā)明的目的是通過如下方案實(shí)現(xiàn)本發(fā)明中的口服降鈣素脂質(zhì)體的組成成分如下述 本發(fā)明中的口服降鈣素脂質(zhì)體采用如下材料作為原料大豆卵磷脂，膽固醇，DSPG，降鈣素，Arg8，TMC。本發(fā)明中口服降鈣素脂質(zhì)體的制備具體操作如下I.取處方量的大豆卵磷脂，膽固醇和DSPG溶于有機(jī)溶劑中，水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，真空除去有機(jī)溶劑，形成脂質(zhì)干膜。2.將降鈣素溶液加入脂質(zhì)干膜中，水浴旋轉(zhuǎn)洗脫后探頭超聲，降低粒徑，隨后過微孔濾膜，得未修飾的降鈣素脂質(zhì)體。3.將所得的降鈣素脂質(zhì)體滴加到ArgS溶液中，磁力攪拌，得ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體。4.將所得的ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體滴加到TMC溶液中，磁力攪拌，即得ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體。5.將處方量的凍干保護(hù)劑加入到該脂質(zhì)體中，冷凍干燥制得Arg8修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體的凍干制劑。所述有機(jī)溶劑為氯仿，甲醇及其混合物。所述恒溫除去有機(jī)溶劑的水浴溫度優(yōu)選為20_70°C。所述恒溫水合溫度優(yōu)選為20_70°C。所述探頭超聲功率優(yōu)選為100-400W，次數(shù)優(yōu)選為50-400次。 所述Arg8濃度優(yōu)選為5-80 U g/ml0所述TMC濃度優(yōu)選為0. 2 % -I. 2 %。所述凍干保護(hù)劑優(yōu)選葡萄糖、蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖或其中任意組合形式。凍干保護(hù)劑與制劑質(zhì)量百分比優(yōu)選為3% -15%。取實(shí)驗(yàn)前禁食24h的雄性Wistar大鼠30只，隨機(jī)分成5組，每組6只，禁食期大鼠可自由飲水。分別灌胃給予降鈣素溶液(calcitonin solution)，未包覆的降鈣素脂質(zhì)體(Non-Lip)以及CS包覆的降鈣素脂質(zhì)體(CS-Lip)和TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體(TMC-Lip)劑量為500IU/Kg。分別于給藥后0，0. 5，1，2，4，6，8，12，2處眼底靜脈叢取血0. 5mL，置離心管中，分離血清IOOii L，置-20°C冰箱保存，供測(cè)定血鈣水平變化。結(jié)果見圖2和圖3。本發(fā)明制備的ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體及其凍干制劑，平均粒徑< 180nm,所有例子粒徑< 500nm,zeta電位> 20mV。降I丐素被載入脂質(zhì)體的內(nèi)水相或緊密吸附在脂質(zhì)體表面并用ArgS修飾，TMC包覆后增加了其在胃腸道的穩(wěn)定性，延長了其體內(nèi)滯留時(shí)間，提高了口服生物利用度，實(shí)現(xiàn)了更好的藥效作用；本發(fā)明制備的凍干制劑，可重新水化形成脂質(zhì)體，粒徑，包封率沒有明顯的變化，增加了制劑的穩(wěn)定性和保存運(yùn)輸?shù)谋憷?；本發(fā)明制備ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體采用了薄膜水化法，工藝簡單，重現(xiàn)性強(qiáng)，可用于工業(yè)生產(chǎn)。


圖I是Arg8修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體的原子力顯微鏡照片圖2是ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體灌胃給藥后大鼠血清鈣離子水平變化曲線圖3是Arg8修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體灌胃給藥后大鼠體內(nèi)血清鈣離子水平變化曲線上面積
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I將大豆卵磷脂I. 6g，DSPG 0. 4g，膽固醇0. 3g，溶于氯仿甲醇混合溶液中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，真空干燥器中過夜，加入降鈣素溶液，水化30min，探頭超聲400W，200次，過450nm微孔濾膜后待用，將所得的降鈣素脂質(zhì)體滴加到ArgS溶液中，磁力攪拌，得ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體。將所得的ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體滴加到TMC溶液中，磁力攪拌，即得ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體。實(shí)施例2將大豆卵磷脂2. 0g, DSPG 0. 4g，膽固醇0. 4g，溶于氯仿甲醇混合溶液中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，真空干燥器中過夜，加入降鈣素溶液，水化30min，探頭超聲400W，400次，過450nm微孔濾膜后待用，將所得的降鈣素脂質(zhì)體滴加到ArgS溶液中，磁力攪拌，得ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體。將所得的ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體滴加到TMC溶液中，磁力攪拌，即得ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體。實(shí)施例3將大豆卵磷脂2. 0g, DSPG 0. 5g，膽固醇0. 3g，溶于氯仿甲醇混合溶液中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，真空干燥器中過夜，加入降鈣素溶液，水化30min，探頭超聲200W，400次，過450nm微孔濾膜后待用，將所得的降鈣素脂質(zhì)體滴加到ArgS溶液中，磁力攪拌，得ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體。將所得的ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體滴加到TMC溶液中，磁力攪拌，即得Arg8修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制劑中，_70°C預(yù)凍4h，冷凍干燥48h，即得ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體。實(shí)施例4將大豆卵磷脂4. 0g，DSPG 1.2g，膽固醇I. 0g，溶于氯仿甲醇混合溶液中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，真空干燥器中過夜，加入降鈣素溶液，水化30min，探頭超聲200W，400次，過450nm微孔濾膜后待用，將所得的降鈣素脂質(zhì)體滴加到ArgS溶液中，磁力攪拌，得ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體。將所得的ArgS修飾的降鈣素脂質(zhì)體滴加到TMC溶液中，磁力攪拌，即得Arg8修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體。將凍干保護(hù)劑加入制劑中，_70°C預(yù)凍4h，冷凍干燥48h，即得ArgS修飾TMC包覆的降鈣素脂質(zhì)體，用純水重新水合分散后，取適量稀釋后 制備樣品，用原子力顯微鏡觀察粒子表面形態(tài)，結(jié)果見圖I。
權(quán)利要求
1 一種含降鈣素的口服脂質(zhì)體，其特征是由大豆卵磷脂，DSPG和膽固醇組成膜材，用Arg8和TMC修飾脂質(zhì)體表面。
1.權(quán)利要求I的脂質(zhì)體，其中大豆卵磷脂，DSPG和膽固醇的質(zhì)量比為 大豆卵磷脂 4-8份 DSPG1-4 份 膽固醇I份
2.權(quán)利要求I的脂質(zhì)體，其中TMC是用低分子量的殼聚糖合成制得，季銨化度特征為20% -80%。
3.權(quán)利要求3中的殼聚糖分子量范圍在50kDa-100kDa?！?br> 4.權(quán)利要求I的脂質(zhì)體，其中Arg8特征為右手螺旋構(gòu)象。
5.權(quán)利要求I的脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟采用薄膜水化法，先制得脂質(zhì)干膜，用含藥水溶液水合后，超聲制得粒徑較小且均勻的載藥脂質(zhì)體，將載藥脂質(zhì)體先滴加到ArgS溶液中攪拌，再將制劑滴加到TMC溶液中攪拌，將制得的脂質(zhì)體加入凍干保護(hù)劑溶解后分裝進(jìn)容器，凍干即得。
6.權(quán)利要求5的方法中，探頭超聲的功率選擇在100-400W，次數(shù)在50-400次。
7.權(quán)利要求5的方法中水合時(shí)間為10-60min，水合溫度為30_60°C。
8.權(quán)利要求5的方法中Arg8修飾溫度為4-25°C，時(shí)間為0.5_2h。
9.權(quán)利要求5的方法中TMC包覆的溫度為4-25°C，時(shí)間為0.5_2h。
10.權(quán)利要求I的脂質(zhì)體還含有凍干保護(hù)劑。
11.權(quán)利要求7中的凍干保護(hù)劑選自葡萄糖，蔗糖，海藻糖，乳糖，甘露醇中的一種或幾種組合。
12.權(quán)利要求7中的凍干保護(hù)劑與制劑的質(zhì)量百分比為3%-15%。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種口服降鈣素脂質(zhì)體及其凍干制劑，其特征是將水溶性多肽類藥物降鈣素包載入脂質(zhì)體的內(nèi)水相或緊密吸附在脂質(zhì)體膜表面，依次用穿膜肽Arg8和高分子聚合物TMC修飾脂質(zhì)體表面，制備成具有粘膜粘附性質(zhì)的口服降鈣素脂質(zhì)體，再冷凍干燥制成凍干制劑，該制劑平均粒徑＜180nm，大鼠體內(nèi)藥效結(jié)果較降鈣素口服溶液增加了103倍。
文檔編號(hào)A61K47/42GK102784106SQ201110126049
公開日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2011年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月17日
發(fā)明者孫敏捷, 平其能, 李賽, 肖衍宇, 黃愛文 申請(qǐng)人:中國藥科大學(xué)