專利名稱：苦丁茶提取物在制備降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及苦丁茶提取物的一種新的藥理用途，尤其涉及苦丁茶提取物在制備降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途，屬于苦丁茶提取物的藥理用途領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
苦丁茶是中國(guó)民間的一種常用植物代用茶，也是一種傳統(tǒng)的藥用植物，其性味苦、甘、性寒。中國(guó)各地所用苦丁茶基原植物有20余種，主要有冬青科枸骨(Zlex.comutaLindl),大葉冬青(Zlex. lati-folia Thumb, ex Muary),苦丁茶冬青(ZlexKudingcha C. J. Tseng)，木禪科粗壯女貞(L. robustum Blume),日本女毛貞(L. japonicumThunb. var. pubescens Koidz)和序梗女貞(L. pedunculare Rhed)等。
張敬杰等報(bào)道了粗壯女貞的醇提取物或水提取物能夠有效降低血中的甘油三酯及總膽固醇含量(張敬杰等.粗壯女貞藥理作用初探.中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志.2004年總第69期.241-243)。高南南等報(bào)道了紫莖女貞能夠有效降低動(dòng)物血清中的甘油三酯及總膽固醇以及肝臟中的丙二醛含量(高南南，楊潤(rùn)梅，賀震旦，屠宴會(huì)，彭勇，肖培根.紫莖女貞總苷對(duì)膳食誘導(dǎo)大鼠高脂血癥的影響.中藥材.第32卷第7期.2009年7月)。迄今為止，尚無(wú)苦丁茶能夠降低肝臟中甘油三酯含量的藥理作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供苦丁茶提取物的一種新的藥理用途。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，苦丁茶醇提取物或水提取物能夠有效降低高血脂癥模型動(dòng)物肝臟中的甘油三酯含量，從而可將苦丁茶醇提取物或水提取物制備成治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物。文獻(xiàn)中雖然報(bào)道了粗壯女貞醇提取物能夠有效降低血中甘油三酯含量，但是不能由此推測(cè)粗壯女貞醇提取物就一定能夠降低肝臟甘油三酯含量，因?yàn)樗幬锝档脱懈视腿ズ颗c降低肝臟甘油三酯含量沒(méi)有必然的相關(guān)性禁食狀態(tài)下動(dòng)物體內(nèi)血中甘油三酯主要存在于由肝臟合成分泌的極低密度脂蛋白中，由附著在外周組織血管內(nèi)皮的脂蛋白脂肪酶水解而被清除，藥物可通過(guò)影響肝臟甘油三酯合成、極低密度脂蛋白合成及分泌或其清除過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮降低血中甘油三酯含量的作用。而肝臟甘油三酯含量取決于肝臟甘油三酯合成、極低密度脂蛋白合成及分泌情況，因此能夠降低血清中甘油三酯含量的藥物如果不是作用于肝臟甘油三酯合成、極低密度脂蛋白合成及分泌環(huán)節(jié)，就對(duì)肝臟中甘油三酯含量影響不大。本發(fā)明通過(guò)大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)最終才發(fā)現(xiàn)苦丁茶醇提取物或水提取物具有確切的降低高血脂癥模型動(dòng)物肝臟中的甘油三酯含量的藥理作用。本發(fā)明中所述的苦丁茶可以是冬青科枸骨(Zlex. comuta Lindl),大葉冬青(Zlex. lati-folia Thumb, ex Muary),苦丁茶冬青(Zlex KudingchaC. J. Tseng),木禪科粗壯女貞(L. robustum Blume)，日本女毛貞(L. japonicumThunb. var. pubescens Koidz)或序梗女貞(L. pedunculare Rhed)等，更優(yōu)選為粗壯女貞(L. robustum B Iume)。其中，所述的苦丁茶醇提取物可以通過(guò)商業(yè)途徑購(gòu)買得到，也可參考以下方法制備得到將苦丁茶用60-95%乙醇回流提?。惶崛∫簼饪s，加入水混懸，靜置；取上清液過(guò)濾，濾液濃縮，干燥，即得。本發(fā)明人通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用下述方式提取得到苦丁茶醇提取物具有最優(yōu)的降低肝臟中甘油三酯含量的藥理功效將苦丁茶葉以95%乙醇加熱回流提取3次，第一次回流時(shí)間為2小時(shí)，第二次和第三次回流時(shí)間為I. 5小時(shí)，合并提取液，并經(jīng)減壓濃縮得乙醇提取物；取乙醇提取物加入水混懸，靜置，取上清液過(guò)濾，濾液減壓濃縮，取濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得。所述的苦丁茶醇水提取物可以通過(guò)商業(yè)途徑購(gòu)買得到，也可以參考以下方法提取 得到將苦丁茶葉用水煎煮提??；提取液濃縮成稠膏，干燥，即得。本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供一種治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物組合物，該藥物組合物由有效量的苦丁茶醇或水提取物與藥學(xué)上可接受的載體、賦型劑或稀釋劑配合而成。根據(jù)不同的給藥方法，本發(fā)明藥物組合物可以含有O. 1% -99%重量，優(yōu)選10-60%重量的苦丁茶醇或水提取物。其中，可以向苦丁茶醇或水提取物中加入制備不同劑型時(shí)所需的各種輔料和藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑后，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種適宜的臨床制劑，例如可以是注射劑(粉針、凍干粉針、水針、輸液等)、口服制劑(片劑、口服液、顆粒齊U、膠囊劑、軟膠囊或滴丸)等；其中，所述的輔料可以是抗氧絡(luò)合劑、填充劑、骨架材料等；所述的藥學(xué)上可接受的載體是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋糖酐、氯化鈉、葡萄糖酸鈣或磷酸鈣中的一種或幾種。


圖I粗壯女貞醇提取物(總苷)給藥劑量與肝細(xì)胞脂肪變?cè)u(píng)分相關(guān)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)驗(yàn)例I一、實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物=Wistar大鼠，3 ,體重160_180g，SPF級(jí)，60只，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào)SCXK (京)2006-0009。受試藥品粗壯女貞醇提取物(總苷)，為淡黃色干粉狀，易溶于水。4°C冰箱保存，用時(shí)用蒸餾水配至所需濃度。粗壯女貞醇提取物(總苷)的制備取粗壯女貞干葉lOOOg，以95%乙醇加熱回流提取3次，第一次回流時(shí)間為2小時(shí)，第二次和第三次回流時(shí)間為I. 5小時(shí)，合并提取液，并經(jīng)減壓濃縮得乙醇提取物540g。取乙醇提取物加入水混懸，靜置2小時(shí)，取上清液過(guò)濾，如此進(jìn)行三次，合并上清濾液，經(jīng)減壓濃縮，取濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得粗壯女貞總苷(得率8% )。二、實(shí)驗(yàn)方法Wistar大鼠，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、高脂模型組、陽(yáng)性對(duì)照貝特組(O. 3g/kg)、粗壯女貞醇提取物(總苷)I. 2、0. 6及O. 3g/kg劑量組。正常對(duì)照組飼以基礎(chǔ)飼料，高脂模型組及各給藥組飼以高脂飼料[配方為1%膽固醇，0.3%豬膽鹽，10%豬油，余為基礎(chǔ)飼料]。造模一周后開(kāi)始給藥，陽(yáng)性對(duì)照貝特組ig. 10ml/kg濃度為3%的吉非羅齊，粗壯女貞醇提取物(總苷)I. 2,0. 6及O. 3g/kg劑量組分別ig. 10ml/kg濃度分別為12%、6%及3%的粗壯女貞醇提取物(總苷)，連續(xù)3周。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果I、肝脂結(jié)果 模型組大鼠肝臟CHO及TG含量都較正常對(duì)照組大鼠有所升高，差異有顯著性意義。陽(yáng)性藥吉非羅齊對(duì)肝臟CH0、TG都有明顯的降低作用，與模型組大鼠比較差異有顯著性意義。粗壯女貞醇提取物(總苷)各劑量對(duì)肝臟TG含量也有明顯的降低作用，與模型組大鼠比較差異有顯著性意義。表I粗壯女貞醇提取物(總苷)對(duì)高脂血癥大鼠肝脂的影響η = 10)
肝 CHO (mg/g) 肝 TG (mg/g)
正常16.57±5.688.43±1.37
模型96.33 ±21.04aa28.86±9.04aa陽(yáng)性藥 0.3g/kg30.94±3.33**16.64±6.00**
粗壯女貞醇提取物 1.2g/kg97.24±14.7720.58 + 4.82*
粗壯女貞醇提取物 0.6g/kg89.12 + 27.0021.25±5.55*
粗壯女貞醇提取物 0.3g/kg85.95±26.4518.22±5.21**2、病理結(jié)果觀察結(jié)果(I)大體形態(tài)肉眼觀察大體標(biāo)本的正常形態(tài)及其病變特征(表I)。以肉眼觀察病灶的大小、顏色、質(zhì)地、形狀、表面光澤、切面紋理等大體特征。肝脂肪變性肝臟出現(xiàn)以混濁腫脹為主的損傷性病變，肝體積腫大，色淡黃或紅黃相間，包膜緊張，邊緣鈍，切面有油膩感。表2各組給藥大體病理變化匯總表
Μη肝脂肪變
_性
正常組10O高臟組10 10
陽(yáng)性藥物組10 10
粗壯女貞醇提取物0.3g/kg 10 10粗壯女貞醇提取物0.6g/kg 10 10粗壯女貞醇提取物1.2g/kg 10 10
(2)組織結(jié)構(gòu)低倍顯微鏡下，肝臟有肝小葉和匯管區(qū)組成。(3)病理改變肝脂肪變性為肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)脂肪滴，早期為微小的脂肪空泡(小滴脂變)，且常常因大量脂滴的積聚把肝細(xì)胞核壓向一側(cè)成半月形(大滴脂變)。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)脂肪變性程度，分為①輕度脂肪變⑴肝細(xì)胞脂肪變性占肝小葉的比例> 1/3，病變?cè)u(píng)分為I分。②中度脂肪變(++):肝細(xì)胞脂肪變性占肝小葉的比例> 1/2，病變?cè)u(píng)分為2分?？ǚ綑z驗(yàn)比較發(fā)生率的組間差別，以P < O. 05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。給藥劑量和病變?cè)u(píng)分進(jìn)行線性回歸。a.正常組HE染色肝細(xì)胞索排列有序，中央靜脈區(qū)、匯管區(qū)組織結(jié)構(gòu)正常；未見(jiàn)肝 細(xì)胞水腫、脂肪變性和壞死。b.高脂模型組HE染色肝細(xì)胞索排列紊亂，肝細(xì)胞及細(xì)胞核大小不一致，見(jiàn)廣泛肝細(xì)胞水腫和彌漫性小滴脂變；并可見(jiàn)脂肪空泡。匯管區(qū)多見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)灶。c.陽(yáng)性藥物組5例動(dòng)物與模型組病變相似，改善不明顯。5例動(dòng)物肝細(xì)胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍有所減少；d.粗壯女貞醇提取物(總苷)O. 3g/kg 5例動(dòng)物與模型組病變相似，改善不明顯。肝細(xì)胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍有所減少。e.粗壯女貞醇提取物(總苷)O. 6g/kg 4例動(dòng)物與模型組病變相似，改善較明顯。肝細(xì)胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍減少。f.粗壯女貞醇提取物(總苷)1.2g/kg:3例動(dòng)物與模型組病變相似，改善明顯。肝細(xì)胞水腫較模型組減輕，小滴脂變范圍減少明顯。表3各組給藥組織病變匯總表
權(quán)利要求
1.苦丁茶提取物在制備治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途。
2.按照權(quán)利要求I所述的用途，其特征在干所述苦丁茶包括冬青科枸骨(Zlex.comuta Lindl),大葉冬青(Zlex. lati-folia Thumb, ex Muary),苦丁 茶冬青(ZlexKudingcha C. J. Tseng)，木禪科粗壯女貞(L. robustum Blume),日本女毛貞(L. japonicumThunb. var. pubescens Koidz)或序梗女貝(L. pedunculare Rhed)。
3.按照權(quán)利要求I或2所述的用途,其特征在于所述苦丁茶是粗壯女貞(L.robustumB 丄ume)ο
4.按照權(quán)利要求I所述的用途，其特征在于所述的苦丁茶提取物是苦丁茶醇提取物或水提取物。
5.按照權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述苦丁茶醇提取物的制備方法包括將苦丁茶葉用60-95%こ醇回流提?。惶崛∫簼饪s，加入水混懸，靜置；取上清液過(guò)濾，濾液濃縮，干燥，即得。
6.按照權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，苦丁茶醇提取物的制備方法包括將苦丁茶葉以95%こ醇加熱回流提取3次，第一次回流時(shí)間為2小時(shí)，第二次和第三次回流時(shí)間為I. 5小時(shí)，合并提取液，并經(jīng)減壓濃縮得こ醇提取物；取こ醇提取物加入水混懸，靜置，取上清液過(guò)濾，濾液減壓濃縮，取濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，即得。
7.按照權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于，所述苦丁茶水提取物的制備方法包括將苦丁茶葉用水煎煮提??；提取液濃縮成稠膏，干燥，即得。
8.一種治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物組合物，其特征在于由治療上有效量的苦丁茶醇或水提取物與藥學(xué)上可接受的載體組成。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了苦丁茶提取物在制備降低肝臟甘油三酯含量的藥物中的用途。本發(fā)明通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，苦丁茶醇提取物或水提取物能夠有效降低高脂血癥模型動(dòng)物肝臟中的甘油三酯含量，從而可將苦丁茶醇提取物或水提取物制備成治療脂肪肝或降低肝臟甘油三酯含量的藥物。
文檔編號(hào)A61K127/00GK102670672SQ20111005978
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月11日
發(fā)明者彭勇, 楊潤(rùn)梅, 肖培根, 高南南 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所