專利名稱：組合物和方法以及與其相關(guān)的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生命科學(xué)和食品、飼料或制藥エ業(yè)領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及包含由單獨(dú)的鼠李糖乳桿菌(Lactobacillus rhamnosus) LC705或由鼠李糖乳桿菌GG和鼠李糖乳桿菌LC705組成的益生菌的組合物。本發(fā)明還涉及用作藥物的組合物。另外，本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起在制備用于治療和/或預(yù)防呼吸道感染和用于增強(qiáng)個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力的組合物中的用途。另外，本發(fā)明描述 了鼠李糖乳桿菌GG在制備用于治療/或預(yù)防成人呼吸道感染和用于增強(qiáng)成年個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力的組合物中的用途。另外，本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌在制備用于減少、延緩或抑制流感病毒復(fù)制和用于增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體的抗病毒細(xì)胞因子的組合物中的用途。另外，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防個(gè)體或成年個(gè)體中呼吸道感染、增強(qiáng)個(gè)體或成年個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力，減少、延緩或抑制個(gè)體的流感病毒復(fù)制和增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體的抗病毒細(xì)胞因子的方法。
背景技術(shù)：
益生菌已經(jīng)用于預(yù)防和治療不同范圍的障礙，例如動(dòng)脈高血壓、血管疾病、變態(tài)反應(yīng)、癌癥、特應(yīng)性疾病、病毒或感染性疾病、齲齒、IBS、IBD、粘膜炎癥、腸滲透性障礙、肥胖、代謝綜合征、氧化性應(yīng)激和腹痛。基于早期腹瀉研究，已知益生菌減少胃腸道中的感染。該科學(xué)數(shù)據(jù)支持這樣ー種假設(shè)益生菌對(duì)健康以及預(yù)防和治療疾病的功效是基于改變胃腸道中小型生物群和置換病原體的能力。然而，目前特定益生菌還可以降低胃腸道外感染的證據(jù)增多。口腔、胃腸道和呼吸道中粘膜上皮表面不斷抵抗傳染原，例如病毒。這些表面上共生的小型生物群通過(guò)代謝和調(diào)節(jié)物質(zhì)以及通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物和粘膜上可用的粘附位點(diǎn)來(lái)保護(hù)機(jī)體對(duì)抗病原有機(jī)體。在生存期內(nèi)小型生物群發(fā)展和變化，但是通常在健康個(gè)體中它包括多種細(xì)菌菌種。感染上或下呼吸道的急性呼吸道感染是兒童和老年人中最常見的健康問題，盡管發(fā)病率在所有年齡組都很高。這些呼吸道感染導(dǎo)致很多健康保健就診和每年住院治療期以及日間護(hù)理中心和工作的缺席。在多數(shù)烈性病例中，呼吸道感染可以導(dǎo)致老年人過(guò)早死亡。然而，大多數(shù)呼吸道感染是輕的，自限性病毒上呼吸道感染，也稱為普通感冒。多個(gè)臨床研究已經(jīng)考察了益生菌對(duì)基本上健康的兒童或成人的呼吸道感染的作用。例如在學(xué)齡兒童中干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)降低了下呼吸道感染的發(fā)病率(Cobo Sanz JM.等人，2006，Nutr Hosp 21，547-51),同時(shí)相同的益生菌縮短了老年個(gè)體中所有感染的病程(Turchet P.等人，2003，JNutr Health Aging 7,75-7)。另外，在很多患有并發(fā)癥的呼吸道感染和下呼吸道感染的兒童中在乳中的鼠李糖乳桿菌(LGG)顯示出相對(duì)減少17% (Hatakka K.等人，2001，BMJ 322，1_5)，但是在馬拉松運(yùn)動(dòng)員中，以基于乳的果汁飲料或膠囊形式的LGG對(duì)呼吸道感染沒有作用(Kekkonen R.等人，2007，IntJ Sport Nutr Exerc Metab 17,352-363)。而且，LGG、鼠李糖乳桿菌 LC705 (LC705)、短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve) Bb99和費(fèi)氏丙酸桿菌謝氏亞種(Propionibacteriumfreudenreichii ssp shermanii)的組合表現(xiàn)出降低兒童中的呼吸道感染(Hatakka K.等人，2007，Clin Nutr 26，314-321 ;Kukkonen K.等人，2008，Pediatrics 122，8-12)，但是在老年人中沒有作用(Hatakka K.等人，2007，博士論文，http://urn. fi/URN :ISBN :978-952-10-3897-6)。在成人中，例如含有加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri)、長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacterium longum)和兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)以及維生素和礦物質(zhì)的膳食補(bǔ)充劑表現(xiàn)出降低呼吸道感染的發(fā)病率(Winkler P.等人，2005，Int J ClinPharmacol Ther 43，318-26 ;de Vrese Μ.等人，2005，Clin Nutr 24,481-91)。不復(fù)雜的呼吸道感染很大程度上是用抗生素治療的。然而，抗生素對(duì)病毒感染沒有作用。因此，例如普通感冒的治療主要是基于緩解癥狀的藥物治療和退燒藥。某些抗病毒藥物表現(xiàn)出抗流感病毒，但是目前沒有有效的抗其它普通呼吸道病毒的抗病毒藥物。因此，仍需要有效的藥物和治療用于預(yù)防或治療呼吸道感染。另外，很多先前的研究描述了益生菌對(duì)呼吸道感染的作用在不同年齡組之間有差 別(例如，嬰兒、兒童、成人、老年人)。具有有益作用的一種菌株可以被用于治療確定的癥狀，但是包含數(shù)種相同屬或不同屬的益生菌例如通過(guò)協(xié)同作用或相加作用可以提供進(jìn)ー步或不同的益處。因此，針對(duì)患有呼吸道感染的不同年齡組需要最佳的益生菌或它們的組合以及優(yōu)選的劑量和消耗周期。發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供用于預(yù)防或治療呼吸道感染的新產(chǎn)品、方法和用途。事實(shí)上，本發(fā)明提供了用于這些目的的最佳益生菌或其組合。之前從未發(fā)現(xiàn)LC705或LGG和LC705對(duì)呼吸道感染的陽(yáng)性作用，另外，之前從未顯示出LGG對(duì)成人的呼吸道感染具有作用。本發(fā)明涉及包含由單獨(dú)的鼠李糖乳桿菌LC705或由鼠李糖乳桿菌GG和鼠李糖乳桿菌LC705組成的益生菌的組合物。另外，本發(fā)明涉及包含由單獨(dú)的鼠李糖乳桿菌LC705或鼠李糖乳桿菌GG和鼠李糖乳桿菌LC705組成的益生菌的組合物，其用作藥物。另外，本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起在制備用于治療和/或預(yù)防個(gè)體的呼吸道感染的組合物中的用途。而且，本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起在制備用于增強(qiáng)個(gè)體對(duì)弓I起呼吸道感染的病毒的抵抗力的組合物中的用途。而且，本發(fā)明描述了鼠李糖乳桿菌GG在制備用于治療和/或預(yù)防成年個(gè)體的呼吸道感染的組合物中的用途。本發(fā)明還描述了鼠李糖乳桿菌GG在制備用于增強(qiáng)成年個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力的組合物中的用途。本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌在制備用于減少、延緩或抑制個(gè)體中的流感病毒復(fù)制的組合物中的用途。本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌在制備用于增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體中的抗病毒細(xì)胞因子的組合物中的用途。 而且，本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌LC705單獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起用于治療和/或預(yù)防個(gè)體中的呼吸道感染。
本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起用于增強(qiáng)個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力。
而且，本發(fā)明描述了鼠李糖乳桿菌GG用于治療和/或預(yù)防成年個(gè)體中呼吸道感染。本發(fā)明還描述了鼠李糖乳桿菌GG用于增強(qiáng)成年個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力。本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌用于減少、延緩或抑制個(gè)體中的流感病毒復(fù)制。本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌用于增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體中的抗病毒細(xì)胞因子。而且，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防個(gè)體中呼吸道感染的方法，其中該方法包括給個(gè)體施用包含鼠李糖乳桿菌LC705單獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起的組合物。本發(fā)明還描述了治療或預(yù)防成年個(gè)體中呼吸道感染的方法，其中該方法包括給成年個(gè)體施用包含鼠李糖乳桿菌GG的組合物。而且，本發(fā)明涉及增強(qiáng)個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力的方法，其中該方法包括給個(gè)體施用包含鼠李糖乳桿菌LC705單獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起的組合物。而且，本發(fā)明涉及減少、延緩或抑制個(gè)體中流感病毒復(fù)制的方法，其中該方法包括給個(gè)體施用包含鼠李糖乳桿菌的組合物。而且，本發(fā)明涉及增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體中抗病毒細(xì)胞因子的方法，其中該方法包括給個(gè)體施用包含鼠李糖乳桿菌的組合物。本發(fā)明提供了食品、飼料和制藥エ業(yè)中進(jìn)ー步發(fā)展的工具。另外，通過(guò)本發(fā)明，患有呼吸道感染的例如不同年齡組的患者可以獲得更多有效和特異性的治療。LGG、LC705或其組合可以以本身應(yīng)用或作為另ー種產(chǎn)品的一部分應(yīng)用，例如藥物或食品。通過(guò)增加抗病毒蛋白質(zhì)(例如IP- ο和IFN-α (圖I)、Mxl、Mx2和RIG-I (圖2))的表達(dá)以及通過(guò)阻止流感病毒的増殖，本發(fā)明的LGG、LC705或其組合對(duì)人體具有有益的抗病毒作用，這一點(diǎn)可以例如通過(guò)病毒結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)(例如NP和Ml (圖5))的減少來(lái)觀察。依然迫切需要向消費(fèi)者提供對(duì)健康、特別是對(duì)呼吸道感染具有明確作用的新產(chǎn)品，并且以這樣ー種形式生產(chǎn)，所述的形式使得它們易于以本身應(yīng)用或作為另ー種產(chǎn)品的一部分應(yīng)用，所述的產(chǎn)品例如藥物或食品或飼料產(chǎn)品。附圖
簡(jiǎn)述圖I顯示了在由人單核細(xì)胞獲得的巨噬細(xì)胞中LC705誘導(dǎo)抗病毒IFN-α的產(chǎn)生。該圖中顯示了用LGG或LC705刺激巨噬細(xì)胞6小時(shí)和24小時(shí)。LGG或LC705誘導(dǎo)抗病毒ΙΡ-10的產(chǎn)生，但是與LGG相比，LC705誘導(dǎo)ΙΡ-10的產(chǎn)生更多。圖2顯示了 LGG或LC705活化Mxl、Mx2和RIG-I的產(chǎn)生。但是與LGG相比，LC705活化IFN-α調(diào)節(jié)的抗病毒蛋白質(zhì)(Mxl、Mx2、RIG-I)的產(chǎn)生更多。圖3 顯示了 LGG、LC705 及其組合增加 IL-1 β (圖 3A)，LC705 增加 IFN- α (圖 3Β)，和ぱ705以及11^和^705的組合增加了即-0 (圖3C)的產(chǎn)生。另外，圖3顯示了在A型流感病毒感染過(guò)程中，與LGG相比，LC705以及LGG和LC705的組合增加抗病毒炎性活性(IL-Ιβ和TNF-a (圖3A和3C))更多。在A型流感病毒感染過(guò)程中，與LGG相比，LC705以及LGG和LC705的組合增加抗病毒IFN- a的產(chǎn)生更多(圖3B)。
圖4顯示LGG、LC705或其組合降低A型流感病毒mRNA的合成，即降低或減緩病毒的復(fù)制。圖4A顯示LC705或者LGG和LC705的組合降低或減緩病毒感染過(guò)程中NP mRNA的產(chǎn)生。圖4B顯示LGG、LC705或其組合降低或減緩病毒感染過(guò)程中MlmRNA的產(chǎn)生。圖4C顯示LGG、LC705或其組合降低或減緩病毒感染過(guò)程中NSlmRNA的產(chǎn)生。圖5顯示LGG或LC705減少A型流感病毒的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)(NP、Ml)的產(chǎn)生。發(fā)明詳述益生菌被用于食品和飼料エ業(yè)很長(zhǎng)時(shí)間，但是益生菌對(duì)廣泛癥狀或疾病以及對(duì)特定目標(biāo)群的作用仍然需要確定。本發(fā)明基于LGG和LC705對(duì)呼吸道感染具有有益作用的發(fā)現(xiàn)。同吋，LC705和LGG用作ー種最佳組合，用于增加抗病毒細(xì)胞因子的產(chǎn)生和阻止病毒擴(kuò)增，從而降低呼吸道感染的風(fēng)險(xiǎn)。益生菌 益生菌是活的微生物，優(yōu)選非致病微生物，當(dāng)以足量施用于人或動(dòng)物時(shí)，其促進(jìn)宿主的健康(Fuller R 1989，J Appl Microbiol 66,365-378)。當(dāng)作為食品或食品補(bǔ)充劑以足量食用時(shí)，益生菌將對(duì)宿舍產(chǎn)生有益的健康益處。益生菌在人或動(dòng)物中的健康要求包括多種疾病的可能的預(yù)防和治療。益生菌的促進(jìn)健康作用包括例如平衡和維持腸內(nèi)微生物區(qū)系、刺激免疫系統(tǒng)和抗癌活性。最好的已報(bào)道的益生菌包括鼠李糖乳酸桿菌(L. rhamnosus)GG、約氏乳桿菌(L. johnsonii) LAl、干酪乳桿菌(L. casei) Shirota 和雙歧乳桿菌(Bifidobacteriumlactis)Bbl2。另外，在該文獻(xiàn)中描述了很多其它益生菌，例如鼠李糖乳酸桿菌LC705。鼠李糖乳桿菌GG(LGG，EGG )菌株是最初來(lái)源于USA(US4839281A)的非致病革
蘭氏陽(yáng)性分離群。LGG菌株是從人糞便中分離的，它能在pH 3下生長(zhǎng)良好，并且甚至在更低的PH值以及高膽汁酸含量下存活。該菌株對(duì)粘液和上皮細(xì)胞表現(xiàn)出很好的粘附力，并且寄居GIT。由葡萄糖產(chǎn)生的乳酸產(chǎn)量很好當(dāng)在MRS肉湯中生長(zhǎng)時(shí)，該菌株產(chǎn)生I. 5-2%的乳酸。該菌株不能發(fā)酵乳糖，因此它不能由乳糖產(chǎn)生乳酸。該菌株發(fā)酵下列碳水化合物D-阿拉伯糖、核糖、半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、鼠李糖、半乳糖醇、肌醇、甘露醇、山梨醇、N-こ酰基葡糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七葉苷、水楊苷、纖維素ニ糖、麥芽糖、蔗糖、海藻糖、松三糖、龍膽ニ糖(gentibioSe)、D-塔格糖、L-巖藻糖和葡糖酸鹽。該菌株在15-45°C下生長(zhǎng)良好，最佳溫度為30-37°C。LGG保藏于保藏權(quán)威美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，登錄號(hào)ATCC 53103。鼠李糖乳桿菌LC705(LC705)菌株也是非致病革蘭氏陽(yáng)性分離群，但來(lái)源于芬蘭。芬蘭專利92498，Valio Oy中有更詳細(xì)的LC705描述。LC705是鏈中出現(xiàn)的革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，它是同型發(fā)酵的，弱的蛋白質(zhì)水解，在+15_45°C下生長(zhǎng)良好，不能由精氨酸產(chǎn)生氨，是過(guò)氧化氫酶-陰性的，當(dāng)在MRS肉湯(LAB M)中生長(zhǎng)時(shí)，該菌株產(chǎn)生具有光學(xué)活性L(+)構(gòu)型的I. 6%的乳酸，該菌株分解檸檬酸鹽(O. 169%)，從而產(chǎn)生ニこ?；?-羥基丁酮，該菌株至少使得下列碳水化合物(糖、糖醇)發(fā)酵核糖、半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、L-山梨糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇、甲基-D-葡糖苷、N-こ?；咸前?、苦杏仁苷、熊果苷、七葉苷、水楊苷、纖維素ニ糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、松三糖、龍膽ニ糖、D-松ニ糖和D-塔格糖。LC705對(duì)粘液細(xì)胞吸附很弱，但是對(duì)上皮細(xì)胞中度吸附。該菌株在低pH值和高膽汁酸含量下活力良好。該菌株在5%鹽度下存活良好，并且在10%鹽度下存活非常好。LC705 由 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSM)保藏，登錄號(hào)DSM7061。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，鼠李糖乳桿菌是LGG。在本發(fā)明的另ー個(gè)實(shí)施方案中，鼠李糖乳桿菌是LC705。在本發(fā)明的特別的實(shí)施方案中，鼠李糖乳桿菌是LGG和LC705。組合物 本發(fā)明的組合物包含LGG和LC705益生菌。組合物中僅包含益生菌LGG和LC705。本發(fā)明的組合物可以選自但不限于食品、動(dòng)物飼料、營(yíng)養(yǎng)品、食物補(bǔ)充劑、食物成分、健康食物、藥品和化妝品。組合物還可用作例如毎日膳食或藥物的適合部分或補(bǔ)充劑。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物是藥物、食物或飼料產(chǎn)品。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物是功能食物，即具有任何促進(jìn)健康和/或預(yù)防或治療疾病性質(zhì)的食物。優(yōu)選地，本發(fā)明的食品選自乳制品、焙烤食品、巧克カ和糖果、糖和膠質(zhì)糖果、谷物產(chǎn)品、零食、以漿果或水果為基礎(chǔ)的產(chǎn)品和飲品/飲料。乳制品包括但不限于乳、酸乳、酸奶和其它發(fā)酵的乳制品例如乳酪和涂味品、乳粉、兒童食品、嬰兒食品、幼兒食品、嬰兒配方、果汁和湯。本發(fā)明的組合物可以是藥物組合物并且可以例如以固體、半固體或液體形式應(yīng)用，例如片劑、丸剤、小丸、膠囊劑、溶液劑、乳劑或混懸劑形式。優(yōu)選地，組合物是用于ロ服施用或用于腸內(nèi)、吸入或靜脈內(nèi)應(yīng)用。另外，它可以在個(gè)體已經(jīng)感染呼吸道感染之前或之后施用于個(gè)體。除了益生菌之外，組合物還可以包含藥物或營(yíng)養(yǎng)可接受的和/或技術(shù)上需要的載體(例如水、葡萄糖或乳糖)、佐劑、賦形劑、輔助的賦形劑、殺菌劑、穩(wěn)定劑、增稠劑或著色劑、香料、粘合劑、填充劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、甜味劑、矯味劑、膠凝劑、抗氧化劑、防腐剤、緩沖劑、PH調(diào)節(jié)劑、潤(rùn)濕劑、啟動(dòng)劑或相應(yīng)組合物中常規(guī)存在的組分。任何不是益生菌的試劑可以例如選自上面提及的組。組合物的試劑，例如成分或組分，或是商購(gòu)獲得的或是通過(guò)本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)制備的。在本發(fā)明的特別的實(shí)施方案中，組合物包含由LGG和LC705組成的益生菌試劑和任選的非益生菌試劑?！胺且嫔噭币庵覆皇且嫔娜魏卧噭?。本發(fā)明的組合物包含足夠量的LGG和/或LC705，以產(chǎn)生所需的作用。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，LGG和LC705的比例(細(xì)菌數(shù))等于I : I。在本發(fā)明的另ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，LGG與LC705的比例(細(xì)菌數(shù))是2 1、3 1、4 1、5 1、6 1、7 I、
8 1、9 : I或10 : I。在本發(fā)明的另ー個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，LC705與LGG的比例(細(xì)菌數(shù))是 2 1、3 1、4 1、5 1、6 1、7 1、8 : 1、9 : I 或 10 : I。除了鼠李糖乳桿菌益生菌之外，用于治療和/或預(yù)防呼吸道感染，用于增強(qiáng)對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力，用于減少、延緩或抑制流感病毒復(fù)制或者用于增加抗病毒細(xì)胞因子的組合物還可以包含其它益生菌或相應(yīng)組合物中常規(guī)存在的任何其它試劑。組合物可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何常規(guī)方法制備。LGG和/或LC705可以例如加入至任何產(chǎn)品中，或者在完成最終產(chǎn)品過(guò)程中在制備之前或之后與任何試劑混合。呼吸道感染和治療呼吸道感染包括上呼吸道和下呼吸道的感染。上呼吸道感染包括從鼻子到下呼吸樹的呼吸道粘膜(除肺泡)的炎癥。因此，上呼吸道感染包括鼻腔(鼻子、鼻竇)、咽和喉。上呼吸道感染選自但不限于普通感冒、鼻竇炎、耳部感染、耳炎、乳突炎、咽炎、扁桃體炎、會(huì)厭炎、氣管炎、喉炎和支氣管炎。上呼吸道感染的癥狀包括鼻充血、咳嗽、鼻炎、鼻塞、鼻漏、咽喉痛、發(fā)燒、面部壓力、頭痛、食欲減退和/或打噴嚏。下呼吸道感染包括氣管、主支氣管和肺。侵襲下呼吸道的感染可以選自但不限于肺炎、胸膜炎、支氣管炎、細(xì)支氣管炎和肺氣腫，并且癥狀包括例如呼吸短促、虛弱、高燒、咳嗽和/或疲勞。大量細(xì)菌菌種寄生在上呼吸道，而下呼吸道通?；旧蠜]有微生物。當(dāng)暴露于病原體并經(jīng)歷數(shù)小時(shí)至數(shù)天(例如1-7天)的潛伏期后，出現(xiàn)上或下呼吸道感染的癥狀，并且可能持續(xù)例如3至10天，或甚至更長(zhǎng)(數(shù)周)。癥狀的性質(zhì)和持續(xù)時(shí)間取決于病原體、病原體數(shù)量以及個(gè)體的年齡和免疫情況。除了急性感染之外，病原體還可以引起慢性感染。慢性感染通常由急性感染引起，并且可以持續(xù)數(shù)天至終生。
本文所用的“感染”意指病原微生物在細(xì)胞或組織中侵襲和繁殖，S卩“感染”還意指由感染引起的狀態(tài)。感染可以引起損傷并且通過(guò)多種細(xì)胞或毒性機(jī)制發(fā)展成疾病。然而，不是所有的感染都會(huì)導(dǎo)致臨床疾??；已知75%的受感染的人發(fā)展成癥狀性疾病(GwaltneyJM 和 Hayden FG, 1992，NEngl J Med 326，644-5)。引起呼吸道感染的病原體可以是細(xì)菌或病毒。在某些情況下，感染是這兩者的結(jié)果。引起呼吸道感染(即上和/或下呼吸道感染)的細(xì)菌或病毒選自流感嗜血菌(Haemopnilus influenzae)、月市炎鏈球囷(Streptococcus pneumoniae)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhal i s)、釀胺鏈球菌(Streptococcus pyogenes)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae)、肺炎衣原體(Chlamydiae pneumoniae)、普通感冒(流行性感冒)病毒、鼻病毒、腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腸道病毒、冠狀病毒和Epstein-Barr病毒。上述組還可以包括侵襲呼吸道的任何其它細(xì)菌或病毒。引起呼吸道感染的病毒(可以用本發(fā)明的組合物預(yù)防或治療的)可以選自但不限于普通感冒(流行性感冒)病毒、鼻病毒、腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病韋、腸道病韋、冠狀病韋和Epstein-Barr病韋。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，呼吸道感染是流感病毒感染。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，流感病毒選自A型流感病毒和B型流感病毒。A型和B型流感病毒屬于單鏈RNA病毒和正粘病毒科家族。A型流感病毒寄生于禽類并且引起“禽流感”，其還稱為禽流感(birdflu or avian flu)。所有已知的病毒亞型是在禽類中地方流行的。然而，A型流感病毒還可以感染動(dòng)物，并且在人類中已經(jīng)至少檢測(cè)出稱為H1N1、H2N2、H3N2和H5N1的亞型。僅已知B型流感病毒感染人和海豹，不同于A型流感病毒，B型流感病毒不會(huì)引起流感流行。病毒顆粒不會(huì)自己生長(zhǎng)或繁殖，并且它們也缺少蛋白質(zhì)合成和能量產(chǎn)生的基因信息。這就是為什么它們依賴于宿主細(xì)胞。不同呼吸道病毒的致病機(jī)制在不同病毒之間有差異。致病機(jī)理事件的理解主要是基于鼻病毒感染。鼻病毒主要通過(guò)細(xì)小的氣溶膠粒子以及通過(guò)與受感染的分泌物直接或間接接觸來(lái)傳播。在感染初期，鼻病毒通過(guò)結(jié)合主要位于鼻咽中的ICAM-I受體(細(xì)胞間粘附受體分子I)來(lái)侵襲宿主。細(xì)胞內(nèi)侵襲和復(fù)制后，病毒鼻內(nèi)傳播至咽部。復(fù)制引起宿主的炎性和免疫響應(yīng),通過(guò)釋放炎性介質(zhì)導(dǎo)致血管擴(kuò)張,增加血管通透性和細(xì)胞浸潤(rùn)。促炎細(xì)胞因子的濃度升高導(dǎo)致消滅或中和病毒所需的炎性反應(yīng)的級(jí)聯(lián)(van Kempen Μ.等人,1999, Rhinology37, 97-103)。
流感病毒通過(guò)ー種主要的病毒表面糖蛋白(血凝素(HA))結(jié)合到細(xì)胞表面受體上來(lái)感染宿主上皮細(xì)胞。宿主呼吸道不僅是流感病毒感染的部位，而且也是防御病毒感染的部位?？沽鞲胁《靖腥镜姆烙鶛C(jī)制包括數(shù)種效應(yīng)細(xì)胞和分子。病毒被先天免疫機(jī)制最初發(fā)現(xiàn)并且非特異性破壞，所述的先天免疫機(jī)制不是抗原特異性的，并且不需要延長(zhǎng)的誘導(dǎo)周期。數(shù)種組分，例如粘液、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞(DCs)、天然殺傷(NK)細(xì)胞、干擾素(IFN) α、β和其它細(xì)胞因子，以及補(bǔ)體組分參與先天免疫系統(tǒng)。上皮細(xì)胞中存在的病毒誘導(dǎo)IFN-α和IFN-β產(chǎn)生。另夕卜，巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子例如IL-l、IL-6、TNF-a和IL-12活化NK細(xì)胞。NK細(xì)胞釋放IFN-Y，IFN-Y影響感染細(xì)胞的溶胞作用。干擾素與細(xì)胞表面受體的結(jié)合増加了很多基因的轉(zhuǎn)錄，其進(jìn)ー步加快例如細(xì)胞因子的產(chǎn)生。干擾素還可以活化核糖核酸酶，其降解病毒RNA，并且干擾素可以中斷蛋白質(zhì)合成，間接抑制病毒復(fù)制(Tamura S.和Kurata T. ,2004, Jpn J Infect Dis 57 :236-247 ；Tamura S.等人，2005, Jpn J InfectDis, 58 :195-207)。然而，如果病毒避免了早期防御機(jī)制，它們被適應(yīng)性免疫機(jī)制發(fā)現(xiàn)并且特異性消除，所述的適應(yīng)性免疫機(jī)制可以被流感病毒組分通過(guò)呼吸道中巨噬細(xì)胞和DCs上的Toll-樣受體(TLRs)強(qiáng)化。識(shí)別病毒的巨噬細(xì)胞和DCs通過(guò)MHC-I (人類中HLA-I和 HLA-II)和MHC-2蛋白質(zhì)向T-和B-淋巴細(xì)胞呈遞病毒抗原。這系列事件啟動(dòng)了適應(yīng)性免疫響應(yīng)。激活了抗體的產(chǎn)生，以中和病毒(Tamura S.和Kurata T. , 2004, Jpn J Infect Dis57 :236-247 ；Tamura S.等人，2005，Jpn J Infect Dis, 58 :195-207)。免疫響應(yīng)的改變可以通過(guò)任何適合的醫(yī)學(xué)、生理學(xué)或生物學(xué)試驗(yàn)來(lái)監(jiān)測(cè)，例如任何生物樣品或個(gè)體的體外、離體或體內(nèi)試驗(yàn)?？梢岳缭诩?xì)胞培養(yǎng)物(體外)中利用例如外周血單核細(xì)胞(PBMC)、人單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞研究益生菌菌株的性質(zhì)。離體試驗(yàn)的實(shí)例包括測(cè)定嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的吞噬作用、突發(fā)性氧化作用即嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的過(guò)氧化物產(chǎn)生、天然殺傷(NK)細(xì)胞活性、淋巴細(xì)胞增殖和通過(guò)PBMC、組織巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞或淋巴細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子。體內(nèi)試驗(yàn)包括但不限于測(cè)定對(duì)疫苗的響應(yīng)(例如疫苗特異性抗體或疫苗特異性抗體形成細(xì)胞)、遲發(fā)型超敏反應(yīng)和對(duì)衰減的病原體的響應(yīng)。保護(hù)宿主抵抗病原體侵襲的主要細(xì)胞是巨噬細(xì)胞，其吃棹，即吞噬病原體或產(chǎn)生細(xì)胞因子。細(xì)胞因子補(bǔ)養(yǎng)其它免疫細(xì)胞并且介導(dǎo)炎癥。巨噬細(xì)胞是組織內(nèi)的白血細(xì)胞，并且通過(guò)單核細(xì)胞分化可以體外培養(yǎng)。在本發(fā)明中，在體外模型中應(yīng)用來(lái)自健康成人的巨噬細(xì)胞用于研究益生菌對(duì)人個(gè)體的作用。用LGG和/或LC705刺激巨噬細(xì)胞并且用流感病毒感染巨噬細(xì)胞。為了活化免疫響應(yīng)，巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子、趨化因子和抗微生物物質(zhì)。細(xì)胞因子是細(xì)胞通訊中應(yīng)用的信號(hào)傳導(dǎo)分子(即蛋白質(zhì)、多肽或糖蛋白)。它們通常由遭遇病原體的免疫細(xì)胞分泌，從而活化并且補(bǔ)養(yǎng)進(jìn)一歩的免疫細(xì)胞，以增加對(duì)病原體的系統(tǒng)響應(yīng)。每種細(xì)胞因子具有匹配細(xì)胞表面的受體，因此，隨后的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的級(jí)聯(lián)改變了細(xì)胞功能。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)可能導(dǎo)致例如數(shù)種基因和它們的轉(zhuǎn)錄因子的上調(diào)和/或下調(diào)，引起其它細(xì)胞因子的產(chǎn)生，針對(duì)其它分子的表面受體的數(shù)量増加或通過(guò)反饋抑制作用抑制它們自身的作用。細(xì)胞因子可以分成兩組類型1，增強(qiáng)細(xì)胞因子響應(yīng)的那些(例如IFN-Y、TGF-β)，和類型2，有利于抗體響應(yīng)(例如IL-4、IL-10、IL-13)。促炎細(xì)胞因子腫瘤壞死因子a (TNF- α )、白介素-I β (IL-1 β )和IL-6以及干擾素(IFNs)是對(duì)微生物感染響應(yīng)產(chǎn)生的首批細(xì)胞因子。微生物感染過(guò)程后期產(chǎn)生的細(xì)胞因子直接對(duì)細(xì)胞-介導(dǎo)的輔助T細(xì)胞I型(Thl)或體液Th2型免疫的響應(yīng)。趨化因子是小細(xì)胞因子家族(約8-10千道爾頓大小，在保守區(qū)有4個(gè)半胱氨酸殘基)，其誘導(dǎo)附近敏感細(xì)胞的定向的趨化性。某些趨化因子(例如IP-10)被認(rèn)為是炎性的。這些蛋白質(zhì)通過(guò)與G蛋白-偶聯(lián)的跨膜受體的相互作用發(fā)揮它們的生物學(xué)作用。檢測(cè)免疫響應(yīng)變化的試驗(yàn)包括但不限于基于檢測(cè)信號(hào)傳導(dǎo)通路活化以及檢測(cè)標(biāo)志物基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯水平或蛋白質(zhì)(例如抗體或受體)量的那些。目前單個(gè)標(biāo)志物不用
于測(cè)定細(xì)胞或有機(jī)體的免疫響應(yīng)。然而，優(yōu)選的標(biāo)志物可以選自但不限于TNF-α、IL-12、IL-10、IL-Iβ、IFN-α 、IL-Iα 、IL-6,IL-18、IFN-y,IL_4、TGF_P 和 IP-IO0已知益生菌刺激誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中IL-I β、IL_6和TNF-α的產(chǎn)生(Miettinen Μ.等人，2008，J Leukoc Biol. 84 :1092-1100)，但是巨噬細(xì)胞中從沒有顯示出在流感病毒感染中LGG或LC705誘導(dǎo)的作用。在本發(fā)明中，LGG和/或LC705增加了抗病毒蛋白質(zhì)(IP-10、TNF-a、IL-1 β、IFN-a和IFN-β (圖I和3))和IFN-α可誘導(dǎo)的細(xì)胞因子或蛋白質(zhì)(Mxl、Mx2和RIG-I (圖2))，從而減弱病毒功能。病毒功能減弱還通過(guò)病毒結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)量減少來(lái)檢測(cè)(圖4和5)。在本發(fā)明中，LGG和/或LC705増加了抗病毒細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而參與滅活病毒。該現(xiàn)象也稱為“增強(qiáng)抗病毒抵抗力”。“抗病毒細(xì)胞因子”意指有助于破壞或中和病毒的細(xì)胞因子。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，抗病毒細(xì)胞因子選自IFN-α、IFN-β、IL-I β、TNF-a和IP-10。I型干擾素(IFN-a/β)例如在抵抗流感病毒感染中是必需的。IFN-α可誘導(dǎo)的細(xì)胞因子或蛋白質(zhì)包括但不限于Mxl、Mx2、RIG-l和IP-10。Mxl蛋白是粘液病毒(流感病毒)抵抗I蛋白(干擾素可誘導(dǎo)蛋白p78(小鼠))，其在人類中也稱為MxA。細(xì)胞質(zhì)蛋白Mxl是發(fā)動(dòng)蛋白家族和大GTP酶家族的成員。干擾素可誘導(dǎo)的Mxl蛋白通過(guò)干擾病毒復(fù)制中病毒核殼(NP)的作用表現(xiàn)出抗流感病毒活性。Mx基因表達(dá)主要由I型IFNs調(diào)節(jié)。來(lái)自IFNs的信號(hào)傳導(dǎo)通路誘導(dǎo)Mx基因的IFN-刺激的應(yīng)答元件(ISRE)上游的活化(Hug H.等人，1988. Mol Cell Biol8,3065-3079)。另外，病毒感染或施用雙鏈RNA (dsRNA)本身能產(chǎn)生快速和有效的Mx基因活化(Hug H.等人，1988. Mol Cell Biol 8, 3065-3079 ；Ronni T.等人，1995. J Immunol154,2764-2774)。在所有情況下，Mx誘導(dǎo)是對(duì)病毒真正的初級(jí)應(yīng)答，而不是對(duì)病毒誘導(dǎo)的IFN的次級(jí)應(yīng)答。細(xì)胞通過(guò)同時(shí)合成Mx蛋白(其留在細(xì)胞內(nèi))和IFNs(其釋放進(jìn)入細(xì)胞環(huán)境)能夠快速對(duì)感染反應(yīng)。該干擾素誘導(dǎo)鄰近未感染細(xì)胞中Mx蛋白的表達(dá)，從而最初感染的細(xì)胞很快被病毒保護(hù)的細(xì)胞屏障分開。因此，病毒無(wú)法有效擴(kuò)散，給予免疫系統(tǒng)足夠時(shí)間來(lái)鞏固其特有的防御線并且消除病毒。細(xì)胞質(zhì)蛋白Mx2(粘液病毒(流感病毒)抵抗2)，在人類中稱為MxB，是發(fā)動(dòng)蛋白家族和大GTP酶家族的成員。該蛋白質(zhì)還具有核形，其位于核被膜下異染色質(zhì)區(qū)中的顆粒型。核定位信號(hào)(NLS)出現(xiàn)在核形的氨基末端。該蛋白質(zhì)是通過(guò)IFN-a上調(diào)的。RIG-1(DDX58，視黃酸可誘導(dǎo)的基因I蛋白，DEAD-盒蛋白58)是IFN-a可誘導(dǎo)的RNA解螺旋酶。RIG-I包含2個(gè)CARD域，ー個(gè)解螺旋酶ATP-結(jié)合域和ー個(gè)解螺旋酶C-端域。RIG-I具有在防止病毒復(fù)制中雙鏈RNA-誘導(dǎo)的先天抗病毒響應(yīng)的必需功能。在A型流感病毒感染的情況中，還已知RIG-I是通過(guò)單鏈RNA活化的。A型流感病毒NSl蛋白結(jié)合RIG-I，其防止 RIG-I 的抗病毒作用(Pichlmair A.等人，2006，Science, 314 (5801) :997-1001)。干擾素(IFN)-可誘導(dǎo)的蛋白IO(IP-IO)是細(xì)胞因子的趨化因子家族成員，并且在對(duì)IFN-Y、IFN-α和脂多糖響應(yīng)的多種細(xì)胞中被誘導(dǎo)。已經(jīng)在包括內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞和造血細(xì)胞的多種細(xì)胞上檢測(cè)到IP-10結(jié)合位點(diǎn)。已經(jīng)顯示A型流感病毒升高了 IP-10基因表達(dá)。在本發(fā)明方法和用途中，鼠李糖乳桿菌施用于個(gè)體，用于減少、延緩或抑制流感病毒復(fù)制。可以通過(guò)測(cè)定病毒mRNA或結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的量來(lái)研究病毒的復(fù)制效率。LGG和/或LC705減少、延緩或抑制流感病毒復(fù)制，因此，減輕或預(yù)防感染通常引起的癥狀。用于測(cè)定病毒復(fù)制效率的適合的流感病毒蛋白質(zhì)可以例如包括但不限于NP (核蛋白)、NSl (非結(jié)構(gòu)蛋白I)、聚合酶蛋白PB1、PB2或PA、外部糖蛋白HA (血凝素)或NA (神經(jīng)氨酸酶)、Ml (基質(zhì)蛋白)、M2或NS2。在本發(fā)明中，研究了 LGG和/或LC705對(duì)mRNA或NP、NSl和Ml蛋白質(zhì)的作用，并且LGG和/或LC705減少或減緩它們所有的產(chǎn)生。NSl是非結(jié)構(gòu)蛋白1，其阻止細(xì)胞核的宿主mRNA的轉(zhuǎn)運(yùn)、妨礙RIG-I介導(dǎo)的IFN-響應(yīng)，并且抑制抗病毒條件。例如，NP是核蛋白，其連接每個(gè)基因片段并且調(diào)節(jié)向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)運(yùn)。Ml是基質(zhì)蛋白質(zhì)，其位于病毒脂膜的內(nèi)部基質(zhì)中。Ml的積累是病毒芽殖所需要的。
權(quán)利要求
1.鼠李糖乳桿菌LC705單獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG—起在制備在個(gè)體中具有抗病毒作用的組合物中的用途。
2.權(quán)利要求I的用途，其中組合物是藥物、食品或飼料產(chǎn)品。
3.權(quán)利要求2的用途，其中組合物是藥物組合物。
4.權(quán)利要求I至3中任意ー項(xiàng)的用途，其中組合物用于治療和/或預(yù)防個(gè)體的呼吸道感染。
5.治療和/或預(yù)防個(gè)體呼吸道感染的方法，其中該方法包括給個(gè)體施用包含鼠李糖乳桿菌LC705單獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG —起的組合物，該組合物在個(gè)體中具有抗病毒作用。
6.權(quán)利要求I至5中任意ー項(xiàng)的用途或方法，其中組合物用于增強(qiáng)個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力。
7.權(quán)利要求I至6中任意ー項(xiàng)的用途或方法，其中組合物增加抗病毒蛋白質(zhì)的表達(dá)。
8.權(quán)利要求I至6中任意ー項(xiàng)的用途或方法，其中組合物用于增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體中的抗病毒細(xì)胞因子。
9.權(quán)利要求8的用途或方法，其中抗病毒細(xì)胞因子選自IFN-α、IFN-β、IL-Iβ ,TNF-α 和 IP-10。
10.權(quán)利要求4至9中任意ー項(xiàng)的用途或方法，其中呼吸道感染是由病毒引起的，所述的病毒選自普通感冒(流行性感冒)病毒、鼻病毒、腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腸道病韋、冠狀病韋和Epstein-Barr病韋。
11.權(quán)利要求10的用途或方法，其中呼吸道感染是流感病毒感染。
12.權(quán)利要求11的用途或方法，其中流感病毒選自A型流感病毒和B型流感病毒。
13.權(quán)利要求10至12中任意ー項(xiàng)的用途或方法，其中組合物用于阻止流感病毒的増殖和/或減少、延緩或抑制個(gè)體中流感病毒復(fù)制。
14.權(quán)利要求I至13中任意ー項(xiàng)的用途或方法，其中個(gè)體是嬰兒、兒童或成人。
15.包含鼠李糖乳桿菌LC705作為益生菌的抗病毒組合物。
16.包含由鼠李糖乳桿菌LC705和鼠李糖乳桿菌GG組成的益生菌的抗病毒組合物。
17.鼠李糖乳桿菌LC705單獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG—起用于治療和/或預(yù)防個(gè)體的呼吸道感染。
18.鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG—起用于增強(qiáng)個(gè)體對(duì)弓I起呼吸道感染的病毒的抵抗力。
19.鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG—起用于增加抗病毒蛋白質(zhì)的表達(dá)。
20.鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG—起用于增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體的抗病毒細(xì)胞因子。
21.鼠李糖乳桿菌LC705単獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG—起用于阻止流感病毒的増殖和/或用于減少、延緩或抑制個(gè)體中流感病毒復(fù)制。
全文摘要
本發(fā)明涉及生命科學(xué)和食品、飼料或制藥工業(yè)領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及包含由單獨(dú)的鼠李糖乳桿菌LC70或由鼠李糖乳桿菌GG和鼠李糖乳桿菌LC705組成的益生菌的組合物。本發(fā)明還涉及用作藥物的組合物。另外，本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌LC705單獨(dú)或與鼠李糖乳桿菌GG一起在制備用于治療和/或預(yù)防呼吸道感染和用于增強(qiáng)個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力的組合物中的用途。另外，本發(fā)明描述了鼠李糖乳桿菌GG在制備用于治療/或預(yù)防成人呼吸道感染和用于增強(qiáng)成年個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力的組合物中的用途。另外，本發(fā)明涉及鼠李糖乳桿菌在制備用于減少、延緩或抑制流感病毒復(fù)制和用于增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體的抗病毒細(xì)胞因子的組合物中的用途。另外，本發(fā)明涉及治療或預(yù)防個(gè)體或成年個(gè)體中呼吸道感染、增強(qiáng)個(gè)體或成年個(gè)體對(duì)引起呼吸道感染的病毒的抵抗力，減少、延緩或抑制個(gè)體的流感病毒復(fù)制和增加預(yù)感染或正感染呼吸道感染的個(gè)體的抗病毒細(xì)胞因子的方法。
文檔編號(hào)A61P11/00GK102665740SQ201080056554
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2010年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月13日
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