專利名稱：特應性皮炎預防劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及特應性皮炎預防劑以及含有該特應性皮炎預防劑的食品。
背景技術：
特應性皮炎是反復加重和緩解、以發(fā)癢的濕疹為主要病變的疾病。特應性皮炎的主要病變有皮膚的紅斑或丘疹、耳下裂紋、干皮癥、伴有糠秕狀鱗屑的毛孔一致性角化性丘疹、患者皮膚的抓撓傷痕。根據(jù)近年來的調(diào)查，特應性皮炎的發(fā)病率在4個月兒童中為12.8%，在I歲半兒童中為9.8%，在3歲兒童中為13.2%，在小學一年級學生中為11. 8%，在小學六年級學生中為10. 6%，在大學一年級學生中為8. 2%，在幼兒中高達每10人中I人。病因、惡化因素主要有食物、出汗、環(huán)境因素、細菌真菌、接觸抗原、精神壓カ等，要求對其進行治療，進而要求對其進行預防。特應性皮炎的治療通過以下方法進行1)病因、惡化因素的檢索和應對，2)皮膚護理，3)藥物療法。用方法I)、2)無法減輕癥狀時進行藥物治療。藥物中使用最廣泛的是類固醇外用藥，有多種類固醇外用藥。另ー方面，作為非類固醇類外用藥，免疫調(diào)節(jié)劑普特彼(protopic)的有效性在近年得到了確認。此外，作為ロ服藥，使用抗組胺藥、抗過敏藥等，僅對于重癥患者，有時會暫時使用類固醇的內(nèi)服藥。但是，類固醇在用作外用藥時，可能會伴有皮膚的萎縮、血管擴張、毛囊炎等副作用，根據(jù)由厚生勞動科學研究班制作的指導手冊的指導，在面部應盡可能避免使用類固醇外用藥。此外，對于類固醇藥物，有很多患者擔心其副作用而表現(xiàn)出排斥。另ー方面，普特彼是于1999年11月認可使用的較新的藥劑，對于幼兒只認可低濃度下的使用，對于2歲以下的幼兒，低濃度下的使用也不被認可。作為內(nèi)服藥的抗組胺藥、抗過敏藥可能會引起困倦、乏カ或伴隨抗膽堿作用的痰的咳出困難等副作用。另ー方面，關于特應性皮炎的發(fā)病前的預防，現(xiàn)在幾乎沒有報道。但是，特應性皮炎的患者在不斷増加，迫切希望對其進行預防。從預防的角度來看，重要的是確保安全性且無副作用，因此用于預防的物質(zhì)希望是天然物質(zhì)，甚至是來源于食材的物質(zhì)。膠原是構成動物的結締組織的主要蛋白質(zhì)成分，是明膠和動物膠的原料，自古以來被用作食材。此外，膠原也能在日常生活中從肉的高湯等中攝取，安全性得到廣泛確認。膠原是指以具有膠原三螺旋結構為特征的蛋白質(zhì)，已報道的共有30種以上，分別以I型、II型的方式命名。真皮、韌帶、肌腱、骨骼等中，I型膠原為主要成分，關節(jié)軟骨中，II型膠原為主要成分。此外，作為所有的上皮組織的襯底結構的基底膜中，主要含有IV型膠原。體內(nèi)存在最豐富的是I型膠原。有人用小鼠的特應性皮炎模型掲示了海洋膠原(marine collagen)的涂布或ロ服給藥可抑制發(fā)病后的特應性皮炎(非專利文獻I)。但是，完全未提及發(fā)病前的特應性皮炎的預防?，F(xiàn)有技術文獻非專利文獻
非專利文獻I :財團法人北海道科學技術綜合振興中心平成17年(平成16年度通過)研究開發(fā)資助事業(yè)報告書161-174頁

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的技術問題本發(fā)明的課題是提供特應性皮炎預防劑以及含有該特應性皮炎預防劑的食品。解決技術問題所采用的技術方案本發(fā)明人進行了認真研究，結果發(fā)現(xiàn)，通過ロ服攝取膠原可預防特應性皮炎，從而完成了本發(fā)明。本發(fā)明提供ー種包含膠原的特應性皮炎預防劑以及含有上述特應性皮炎預防劑的飲食品。發(fā)明的效果膠原在哺乳類的生物體內(nèi)的總蛋白質(zhì)中所占的比例高，能以低廉的價格獲得。此夕卜，膠原是明膠和動物膠的原料，自古以來被用作食材，而且也能在日常生活中從肉的高湯等中攝取，安全性得到廣泛確認。附圖
的簡單說明圖I是表示各組的臨床癥狀評分隨時間的變化的圖。圖2是表示各組的抓撓行為次數(shù)的圖。圖3是表示各組的抓撓行為時間的圖。圖4是表示各組的試驗開始前后的血中總IgE值的圖。圖5是表示各組的經(jīng)表皮水分丟失量(TEWL)隨時間的變化的圖。圖6是表示各組的體重隨時間的變化的圖。圖7是表示各組的肉眼觀察結果的圖。圖8是表示各組的頭背部皮膚組織的嗜酸性粒細胞數(shù)和肥大細胞數(shù)的圖。實施發(fā)明的方式下面對本發(fā)明的包含膠原的特應性皮炎預防劑以及含有該特應性皮炎預防劑的飲食品進行說明。本發(fā)明的膠原的來源沒有特別限定，可使用來源于?；蜇i等哺乳類、雞或 鴕鳥等鳥類、鯊魚等魚類等的膠原。來源于牛、豬、雞等家畜的膠原容易大量獲得，因此特別優(yōu)選。此外，膠原的類型沒有特別限定，可使用任ー類型，也可以是多種類型的膠原的混合物。此外，膠原既可以是膠原本身，也可以是明膠，還可以是膠原肽。明膠是指用酸或堿對膠原實施預處理、將其熱水解來使其可溶化而得的物質(zhì)。膠原肽是指用酸、堿、酶等將膠原水解而得的低分子膠原。例如，膠原水解產(chǎn)物可以如下所述獲得將豬、牛和雞等動物的皮膚和關節(jié)或者魚的鱗或皮膚浸潰于酸性或堿性的液體，通過萃取獲得明膠，再用酶或酸對該明膠進行處理。本發(fā)明的特應性皮炎預防劑是ロ服用的，其形態(tài)沒有限制，能以例如片劑、膠囊齊U、飲劑等形態(tài)給藥。本發(fā)明的特應性皮炎預防劑還可以包含在飲食品中來給藥，此時，包含本發(fā)明的特應性皮炎預防劑的飲食品沒有限定，可以包含于例如生鮮食品、肉、魚等動物性食品，谷物、蔬菜等植物性食品，乳制品、面包、速食食品等加工食品，點心類等嗜好食品，甜味劑、調(diào)味劑等烹飪調(diào)味用材料，健康食品，特殊用途食品，水、清涼飲料水、酒精飲料、茶等飲料，食品加工材料，食品添加劑等。實施例
下面例舉本發(fā)明的例子進行說明，但本發(fā)明的范圍不限定于以下的例子。[實施例I]使用NC/NgaTnd小鼠來確認膠原攝取的皮炎預防效果實驗內(nèi)容通過動物試驗來研究膠原的攝取對由過敏引起的皮炎的癥狀改善是否有效果。即，使用特應性皮炎自然發(fā)病模型小鼠NC/NgaTnd小鼠進行試驗。飼料飼料使用膠原混合飼料和對照飼料。膠原混合飼料是在對照飼料中添加了 0. 20%膠原肽而得的飼料。膠原混合飼料以每天的膠原攝取量為200mg/Kg的條件配制。膠原混合飼料中的膠原使用杰樂株式會社(ゼライス株式會社)的豬膠原肽。豬膠原肽是如下所述獲得的膠原肽將豬皮浸潰于酸性或堿性的液體后，通過萃取獲得明膠，再將所得的明膠酶解。該膠原肽主要來源于豬的I型膠原。實驗項目及內(nèi)容準備5周齡的雌性和雄性NC/NgaTnd小鼠，共2組，每組7只。將它們分別作為膠原給藥組和對照飼料給藥組。總共預飼養(yǎng)I周后，分別使小鼠自由攝取膠原混合飼料或?qū)φ诊暳弦约八?周。所有小鼠在開始給予飼料時均未發(fā)生皮炎。在各飼料給予期間及其前后，對各組評價以下7個項目。各項目的實施試驗的時期示于括號內(nèi)。(I)臨床癥狀評分的判定(飼料給予期間2次/周)、(2)抓撓次數(shù)和持續(xù)時間的測定(飼料給予期間的前后)、
(3)血中總IgE值的測定(飼料給予期間的前后)、(4)經(jīng)表皮水分丟失量(TEWL)的測定(飼料給予期間I次/2周)、(5)體重測定(飼料給予期間I次/2周)、(6)皮膚病變的肉眼觀察(飼料給予期間結束吋)和(7)組織學檢查(飼料給予期間結束后)。各評價項目的試驗方法(I)臨床癥狀評分的判定在開始喂食試驗食物的前一天及從開始喂食當天起到最后一次喂食的后一天為止，每周2次對“撓癢癥狀”、“紅斑/出血”、“浮腫”、“擦傷/糜爛”、“落屑/干燥”這5個項目進行判定，判定分為“0 :無”、“I :輕度”、“ 2 :中度”、“ 3 :重度” 4級，以各項目的總評分表示。另外，判定人員和喂食人員在試驗期間由不同人員進行，判定人員不知道動物屬于哪ー組。(2)抓撓次數(shù)和持續(xù)時間的測定為了使小鼠適應測定環(huán)境，自開始喂食試驗食物3天前起，使小鼠在抓撓次數(shù)測定裝置(SCLABA (注冊商標)-Real，諾華泰克公司(ノベルテツク))內(nèi)進行適應，頻率為I天I次，共進行2天，毎次30分鐘。開始給予飼料前的抓撓次數(shù)和持續(xù)時間的測定中，在開始喂食的前一天使小鼠適應30分鐘后，進行30分鐘的拍攝和記錄。飼料給予期間結束后次日，用同樣的方法使小鼠適應后，進行30分鐘的抓撓次數(shù)和持續(xù)時間的拍攝和記錄。另夕卜，拍攝中記錄拍攝日期和個體編號，在12:00 18:00間進彳丁拍攝。(3)血中總IgE值測定
在開始給予飼料前從尾靜脈采血，在飼料給予期間結束后的次日，進行抓撓次數(shù)和持續(xù)時間的拍攝和記錄后，在こ醚麻醉下用經(jīng)肝素處理的注射器從腹大動脈采集約ImL血液。所采集的血液通過離心分離(4°C )而分離出血漿，凍存(_20°C )。用所保存的血漿來測定IgE濃度。IgE的測定采用識別2種不同的表位的抗小鼠IgE抗體(雅瑪山公司(YAMASA)，ME-Ol-DE 及 ME-02-B)通過三明治 ELISA 法進行。
(4) TEWL 測定開始給予飼料前和飼料給予期間結束后進行2次測定，并且在此期間每2周進行I次測定。在測定前一天將小鼠背部剃毛，用多探頭皮膚測試系統(tǒng)(Multi Probe Adapter)(CK電子公司(CK electronic GmbH社)制)測定背部的TEWL。每次對ー個個體進行3次測定，將其平均值作為TEWL。(5)體重測定自開始給予飼料的前一天起每隔2周進行。測定使用電子天平(艾恩斯特漢森公司(ァーンス卜ンハンセン社)，HL-320)。(6)皮膚病變的肉眼觀察拍攝飼料給予期間結束時的各組小鼠的頭背部和面部的照片。(7)組織學檢查飼料給予期間結束后，采集背部的皮膚，用10%緩沖福爾馬林固定，進行石蠟包埋后，制作薄切片標本。組織標本進行剛果紅染色和甲苯胺藍染色后，在顯微鏡下大幅放大(400倍)，分別計數(shù)嗜酸性粒細胞數(shù)(剛果紅染色標本)和肥大細胞數(shù)(甲苯胺藍染色標本)。將各標本中4個視野的平均值作為個體數(shù)據(jù)，將整個組集中在一起計算。實驗期間平成19年I月17日 平成19年5月25日結果(I)臨床癥狀評分的判定結果示于表I及圖I。圖I中，各組的臨床癥狀評分的平均值土標準差分別用〇(對照飼料組)和▲(膠原給藥組)表示。[表 I]表I各組的臨床癥狀評分的平均值和標準差
酒定 Pl (試驗天數(shù)) 0 4 8 11 15 18 22 25 29 32 36 39 43
平均
則照 Wfl 0.0 0.3 0. 6 0.7 1.7 1.9 2. 4 2.9 ) 4. 7 5.0 5.6 5.9_B4原_0. 0 _0.1 _ 0.7 —I. 4 —I, 7 —I. 9 _2. 3 _ 2, 3 _b _ 3, 0 _ 3. 4 _3, 4 _3. 6
SE
對照 W 料 0 0 0.2 0.2 0.3 0.8 0.9 LO 0.9 1.4 1.4 1.9 1.8 1.7_膠原_u U _ 0.1 _ 0. 3 _ 0. 5 —0. 5 —0, 5 _0. 5 _ 0, 4 _ 0. 3 _ 0, 6 _ 0. 7 —(). 9 _0. 8兩組中，開始給予飼料時的臨床癥狀評分為0 (未發(fā)病)。對照飼料給藥組中，自開始給予飼料3天后起可觀察到臨床癥狀評分隨時間上升，飼料給予期間結束時的臨床癥狀評分為5. 9±1. 7。膠原給藥組中，直至開始給予飼料后第25天為止皮炎評分都與對照飼料給藥組大致同樣地增加，但開始給予飼料25天以后，皮炎癥狀未表現(xiàn)出明顯的惡化，飼料給予期間結束后(第43天)的臨床癥狀評分為3. 6±0. 8，保持輕度狀態(tài)。膠原給藥組中，從開始給予飼料25天以后到飼料給予期間結束為止，雖然未見統(tǒng)計學上的顯著差異，但存在顯示出比對照飼料組更低的臨床癥狀評分的傾向。
(2)抓撓次數(shù)和持續(xù)時間的測定圖2所示為各組在飼料給予期間前后的抓撓行為次數(shù)(30分鐘)。開始給予飼料前(第0天)和飼料給予期間結束后(第43天)的數(shù)據(jù)用平均值土標準差(各組7只)表不。圖3所示為各組在飼料給予期間前后的抓撓行為時間(秒/30分鐘)。開始給予飼料前(第0天)和飼料給予期間結束后(第43天)的數(shù)據(jù)用平均值土標準差(各組7只)表示。兩組中，開始給予飼料前(試驗第0天)的抓撓行為次數(shù)(ScratchingFrequency)和抓撓行為時間(Scratching Duration)(秒)在30分鐘的拍攝時間內(nèi)分別為10次和10秒左右。兩組在飼料給予期間結束后(第43天)與開始給予飼料前相比均顯示出抓撓行為次數(shù)和抓撓行為時間增加的傾向，雖然未見顯著差異，但膠原給藥組與對照飼料給藥組相比，抓撓行為次數(shù)和抓撓行為時間的值均更低。(3)血中總IgE值測定圖4所示為各組在飼料給予期間前后的血中總IgE值。開始給予飼料前(第0天)和飼料給予期間結束后(第43天)的數(shù)據(jù)用平均值土標準差(各組7只)表示。開始給予飼料前(第0天)的血中總IgE值(ng/ml)為500ng/ml左右，組間未見統(tǒng)計學上的顯著差異。試驗結束后(第43天)，血中總IgE值均有所増加，雖然未見統(tǒng)計學上的顯著差異，但膠原給藥組的血中總IgE值比對照飼料組低。(4) TEWL 測定圖5所示為各組的TEWL隨時間的變化。開始給予飼料前(第0天)、第15天、第29天和飼料給予期間結束后(第43天)的數(shù)據(jù)用平均值土標準差(各組7只)表示。兩組中，開始給予飼料時的TEWL為5g/hr/m2以下，處于正常范圍內(nèi)。開始給予飼料第15天以后，TEffL顯示出上升的傾向，特別是對照飼料給藥組中，TEffL隨時間上升，在飼料給予期間結束時(第43天)顯示出25. 97 ±3. 85g/hr/m2的高值。膠原給藥組中，雖然TEWL也上升，但在飼料給予期間結束時為23. 72±9. 38g/hr/m2，雖然未見顯著差異，但值略低。(5)體重測定圖6所示為各組的體重隨時間的變化。開始給予飼料前(第0天)、第15天、第29天和飼料給予期間結束后(第43天)的數(shù)據(jù)用平均值土標準差(各組7只)表示。開始給予飼料時的體重為18. 7 20. Sg。然后，兩組均隨時間而增加，増加率無組間差異。(6)皮膚病變的肉眼觀察圖7所示為各組的肉眼觀察結果。這些微距照片是在對飼料給予期間結束后的各組小鼠實施(7)組織學檢查的試樣采集之前拍攝的。B :膠原；D :對照飼料如果將試驗結束時的各組小鼠的頭背部和面部的肉眼觀察結果進行比較，則可以觀察到在對照飼料給藥組中，各部位的皮炎不斷加重。但是，膠原給藥組中，雖然有皮炎發(fā)作，但程度輕。(7)組織學檢查圖8所示為各組的頭背部皮膚組織的嗜酸性粒細胞數(shù)和肥大細胞數(shù)。其中，針對、飼料給予期間結束后(第43天)采集的皮膚組織進行計數(shù)，結果用平均值土標準差(各組7只)表示。膠原給藥組與對照飼料組相比，雖然未見顯著差異，但嗜酸性粒細胞數(shù)、月巴大細胞數(shù)均更少。實施例I的總結開始給予飼料時，兩組在任一試驗中均未見皮炎。各組中，雖然之后都發(fā)生了皮炎，但給予膠原混合飼料的NC/NgaTnd小鼠在臨床癥狀評分、抓撓次數(shù)和持續(xù)時間 、血中總IgE值、TEWL、病變的肉眼觀察及組織學檢查中，與對照組相比均可見值的下降。綜上所述，通過自發(fā)病之前起給予膠原，具有預防特應性皮炎的效果。另ー方面，膠原給藥組中，體重増加與對照飼料給藥組沒有差別，可以確認膠原給藥的安全性。根據(jù)以下配方制造飲料、散剤、片劑、ロ香糖、糖果、壓片糖。[實施例2]飲料的配方
膠原肽5. 0重量份
果糖葡萄糖液體糖8. 0重量份
砂糖4. 0重量份
香料0. 5重量份
錐生素C5. 0重量份使用酸味劑調(diào)制至pH3. 8后，用精制水定容為100容量份。[實施例3]飲料的配方
膠原肽5. 0重量份
三氯蔗糖0.005重量份
甜菊苷0. 008重量份
萊鮑迪苷0. 008重量份
乙?；前匪徕?.01重量份
桃香料0. 5重量份
維生素C0. 5重量份使用酸味劑調(diào)制至pH3. 8后，用精制水定容為100容量份。[實施例4]飲料的配方膠原肽5. O重量份
酸性奶類飲料5. O重量份
果糖葡萄糖液體糖10. 0重量份
香料0. 5重量份
維生素C5. 0重量份使用酸味劑調(diào)制至pH3. 8后，用精制水定容為100容量份。[實施例5]飲料的配方
膠原肽5. 0重量份
果糖葡萄糖液體糖10. 0重量份
蜂蜜5. 0重量份
香料0. 5重量份
錐生紊C5.0重量份使用酸味劑調(diào)制至pH3. 8后，用精制水定容為100容量份。[實施例6]果凍飲料的配方
膠原肽5. 0重量份
三氯蔗糖0.005重量份
甜菊苷0.008重量份
萊鮑迪苷0. 008重量份
乙酰磺胺酸鉀0.01重量份
桃香料0.5重量份
維生素C5.0重量份
凝膠化用穩(wěn)定劑0.5重量份使用酸味劑調(diào)制至pH3. 8后，用精制水定容為100容量份。[實施例7]果凍飲料的配方膠原肽5. O重量份
果糖葡萄糖液體糖8. O重量份
砂糖4. O重量份
香料0. 5重量份
維生素C5. 0重量份
凝膠化用穩(wěn)定劑0.5重量份使用酸味劑調(diào)制至pH3. 8后，用精制水定容為100容量份。 [實施例8]咖啡飲料的配方
膠原肽5.0重量份
咖啡提取物5.0重量份
砂糖4. 0重量份
香料0. 5重量份
錐生素C0. 5重量份使用碳酸氫鈉調(diào)制至pH6. 5后，用精制水定容為100容量份。[實施例9]綠茶飲料的配方
膠原肽5. 0重量份
綠茶提取液10. 0重量份
香料0.5重量份
維生素C0. 5重量份使用碳酸氫鈉調(diào)制至pH6. 5后,用精制水定容為100容量份。[實施例10]散劑的配方
膠原肽90. 0重量份
乳糖5. 0重量份
糊精4.0重量份
維生素C1.0重量份[實施例11]片劑的配方膠原肽5. O重量份
D-甘露糖醇40. 0重量份
乳糖40. 0重量份
結晶纖維素10.0重量份
羥丙基纖維素5. 0重量份[實施例12]ロ香糖的配方
膠原肽5. 0重量份
膠基20. 0重量份
砂糖55. 0重量份
葡萄糖10. 5重量份
糖稀9. 0重量份
香料0. 5重量份[實施例13]糖果的配方
膠原肽5. 0重量份
砂糖50. 0重量份
糖稀29. 5重量份
香料0. 5重量份
水15. 0重量份[實施例14]壓片糖的配方
膠原肽5. 0重量份
砂糖73. 5重量份
葡萄糖17.0重量份
蔗糖脂肪酸酯0. 2重量份
香料0. 2重量份
水4. I重量份[實施例15]軟糖的配方膠原肽5. O重量份
明膠55. O重量份
糖稀23. O重量份
砂糖8. 5重量份
植物油脂4. 5重量份 甘露糖醇3. O重量份
檸檬果汁I. O重量份[實施例16]巧克カ的配方
膠原肽5. 0重量份
糖粉36. 8重量份 可可苦料(日語カカオビター)20. 0重量份
全脂奶粉20. 0重量份
可可脂17. 0重量份
甘露糖醇1.0重量份
香料0. 2重量份[實施例17]果子露冰激淋的配方
膠原肽5. 0重量份
香橙果汁25. 0重量份
砂糖23. 0重量份
蛋白9.0重量份
水38. 0重量份本申請要求基于2009年12月10日提出申請的日本專利申請?zhí)?009-280606的優(yōu)先權，引用其內(nèi)容作為本申請的一部分。
權利要求
1.一種特應性皮炎預防劑，其特征在于，包含膠原。
2.一種飲食品，其特征在于，含有權利要求I所述的預防劑。
全文摘要
本發(fā)明的課題是提供特應性皮炎預防劑以及含有該特應性皮炎預防劑的食品。本發(fā)明人進行了認真研究，結果發(fā)現(xiàn)，通過口服攝取膠原可預防特應性皮炎。本發(fā)明提供一種包含膠原的特應性皮炎預防劑以及含有上述特應性皮炎預防劑的飲食品。
文檔編號A61K38/17GK102652021SQ20108005584
公開日2012年8月29日 申請日期2010年12月7日 優(yōu)先權日2009年12月10日
發(fā)明者伊藤雅范, 大澤謙二, 成瀨敦, 樋口裕明, 清水和正 申請人:羅蒂株式會社