專利名稱：具有外來體和皮質(zhì)類固醇的組合制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與皮質(zhì)類固醇和外來體一起用于聯(lián)合治療的藥物組合物。用該聯(lián)合治療可以治療疾病例如骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎和/或退行性脊柱疾病，其中優(yōu)選地所述治療是局部進行的。
背景技術(shù)：
在德國，骨關(guān)節(jié)炎(Arthrose)描述的是超出年齡應(yīng)有程度的“關(guān)節(jié)磨損”。它伴隨有受影響關(guān)節(jié)中的軟骨缺損，由此產(chǎn)生疼痛和功能衰退。負荷過量、先天性或創(chuàng)傷引起的原因例如關(guān)節(jié)錯位，或者由于骨疾病例如骨質(zhì)疏松癥引起的骨變形被看做是原因。它還可以導(dǎo)致其他疾病例如骨炎癥發(fā)生或伴隨有過度負載引起的滲出。 原則上，所有關(guān)節(jié)都可能受骨關(guān)節(jié)炎變化影響。在德國，該疾病通常定位于膝關(guān)節(jié)。骨關(guān)節(jié)炎是普通醫(yī)院事務(wù)中最經(jīng)常的咨詢原因。西方國家中大約10%的居民罹患骨關(guān)節(jié)炎。如果此外算上小椎骨關(guān)節(jié)炎和退行性椎間盤疾病的話，那么受影響人口甚至為大約15%-20%。骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病的危險隨著增長的年齡而增加。大約三分之二的超過65歲的人患有該疾病，然而并非所有受影響的人都遭受其癥狀。對于骨關(guān)節(jié)炎的治療，已經(jīng)知道幾種治療方式。保守(例如藥物的)療法和外科干預(yù)直至用假肢代替完整的關(guān)節(jié)均屬于此。為了避免這樣的大規(guī)模和不可逆的干預(yù)，原則上更希望有效的藥物治療，以便盡可能地拖延完全關(guān)節(jié)代替的時間點。然而，許多藥物治療也具有缺點。一方面，這是由于藥物本身的副作用，但是也由于其效果部分地也只是有限提供的。用于治療骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的常用藥物物質(zhì)是可的松(也是局部應(yīng)用的)和相關(guān)的皮質(zhì)類固醇。這在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎情況下是全身性地而在骨關(guān)節(jié)炎的情況下是局部地作為注射劑在受影響的關(guān)節(jié)中施用。然而，在此，無論是在骨關(guān)節(jié)炎的情況下還是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的情況下，皮質(zhì)類固醇施用的陽性效果在僅一周后就明顯地降低。這根據(jù)隨機研究和臨床經(jīng)驗從臨床上得到確證。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的情況下，嘗試通過連續(xù)施用可的松使全身效果水平處于高水平，然而，由于副作用的加強和在持久施用的情況下治療效果的降低，這是非常成問題的。外來體是小的、由脂質(zhì)膜包圍起來的囊泡，其發(fā)現(xiàn)于例如人體的細胞外空間。它們通過從細胞質(zhì)膜分離而從細胞形成和分泌。通常，這些外來體也包含蛋白質(zhì)，它們從其來源細胞接收這些蛋白質(zhì)。用于獲得和施用外來體的方法例如描述于專利申請WO2006/007529A2中。在體外誘導(dǎo)預(yù)防或治療有效的蛋白質(zhì)例如IL-I Ra的情況下，通過在合適的容器例如注射器中培養(yǎng)血液樣品來形成外來體。因此例如Orthokin包含外來體?？梢酝ㄟ^添加促進外來體形成的添加劑來增加外來體的形成?？梢岳缤ㄟ^在高的離心加速度下離心來增加外來體的濃度。在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中使用外來體是本身已知的?？梢杂糜谥委煿顷P(guān)節(jié)炎的另一種藥物是內(nèi)源的蛋白質(zhì)IL-I Ra或其具有相似活性的亞型(isoform)或片段。如白介素-I (IL-I)那樣，白介素_1受體拮抗劑(IL-1 Ra)與細胞表面上同樣的受體結(jié)合，但在那里不觸發(fā)通常由于IL-I結(jié)合所引起的信號級聯(lián)。通過與IL-I-受體結(jié)合，IL-I Ra阻斷了 IL-I的結(jié)合并且如此阻止了信號轉(zhuǎn)導(dǎo)并因此阻止IL-I對靶細胞的促炎效果。
用其中富集IL-I Ra的內(nèi)源血清治療患者是現(xiàn)有技術(shù)中已知的。如此使用的IL-IRa也叫做Orthokin。與此相反，與安慰劑處理相比，一種重組的IL-I Ra片段，阿那白滯素(Anakinra)，在治療骨關(guān)節(jié)炎中不顯示絲毫的效果。阿那白滯素是人白介素_1受體拮抗劑的縮短至氨基酸26-177并在末端L-甲硫氨?；膩喰筒⑶揖哂?53個氨基酸的序列長度。該制備例如用重組方法通過大腸桿菌(Escherichia coli)菌株來進行。鑒于現(xiàn)有技術(shù)，產(chǎn)生了這樣的任務(wù)，即提供骨關(guān)節(jié)炎的藥物治療，其具有更好的效力，和特別是具有良好的長時效力。此外，優(yōu)選地，所述治療應(yīng)當(dāng)在關(guān)節(jié)炎，特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的情況下具有良好的效力，優(yōu)選地長時效力。發(fā)明概述令人吃驚地，現(xiàn)在確定，在骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎和退行性脊柱疾病的情況下，可以通過額外施用外來體而顯著或協(xié)同地改善皮質(zhì)類固醇例如可的松的效力，特別是長時效力和起效的迅速性。這特別是在將治療劑直接地局部施用于待治療的關(guān)節(jié)時顯示出。一個令人吃驚的認識是例如，與外來體(其例如由血液樣品在Orthokin注射器中獲得)相組合的皮質(zhì)類固醇(例如，皮質(zhì)類固醇與Orthokin—起)的使用，就在骨關(guān)節(jié)炎情況下起效的迅速性而言，看來優(yōu)于不包含活性物質(zhì)外來體的治療。如果向已經(jīng)有效的骨關(guān)節(jié)炎治療(例如皮質(zhì)類固醇與阿那白滯素一起)添加外來體作為額外的活性物質(zhì)，還能夠觀察到快速起效的效果。即使在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療中，皮質(zhì)類固醇與外來體的組合也顯示引人注目的良好效力，不僅就起效的迅速性，而且就長時效力而言。本發(fā)明顯示特別有利的效果取決于令人吃驚地高的效力(取決于不同的病理生理學(xué)出發(fā)點)，及其對患者特別有利的副作用特性。該有利的副作用特性是特別重要的，這是因為長期的皮質(zhì)類固醇施用與很大的副作用例如新陳代謝紊亂、骨質(zhì)疏松癥以及其他副作用有關(guān)。通過外來體與皮質(zhì)類固醇例如可的松的組合，降低了皮質(zhì)類固醇(可的松)的不利效果并且提高了治療的效力。不依賴于適應(yīng)癥，可以觀察到，在一些患者中，外來體與皮質(zhì)類固醇組合顯示治療效果，其超過外來體和皮質(zhì)類固醇兩種活性物質(zhì)的單個治療效果的總和，特別是在兩種活性物質(zhì)單獨施用不都治療有效的情況下。因此，在第一個方面，本發(fā)明提供了在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含皮質(zhì)類固醇以及外來體的藥物組合物。表述“沒有細胞因子拮抗劑”，在本發(fā)明的范圍內(nèi)意味著，沒有一種細胞因子拮抗劑存在。相應(yīng)地，這也針對生長因子。根據(jù)第一個方面，所述藥物組合物因此在每個情況下包含皮質(zhì)類固醇和外來體。而且，給出了細胞因子拮抗劑存在的選擇或不存在的選擇；此外，給出了生長因子存在的選擇或不存在的選擇。同樣，治療劑也可以在兩種不同的藥物組合物中同時或在時間上相繼地進行施用。相應(yīng)地，在第二和第三個方面中，本發(fā)明提供了在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含外來體的藥物組合物，用于與皮質(zhì)類固醇一起在聯(lián)合治療中使用；以及在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含皮質(zhì)類固醇的藥物組合物，用于與外來體一起在聯(lián)合治療中使用在第四個方面中，本發(fā)明提供了包含細胞因子拮抗劑和/或生長因子的藥物組合物，用于與皮質(zhì)類固醇和外來體一起在聯(lián)合治療中使用。在根據(jù)本發(fā)明的第五個方面中，提供試劑盒，其包括(i)在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含外來體的藥物組合物，和(ii)在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含皮質(zhì)類固醇的藥物組合物。此外，在第六個方面中，本發(fā)明涉及在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下的外來體用于制備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于與皮質(zhì)類固醇一起在聯(lián)合治療中使用；并且，在第七個方面中，涉及在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下的皮質(zhì)類固醇用于制備藥物組合物的用途，所述藥物組合物用于與外來體一起在聯(lián)合治療中使用。上面關(guān)于第二、第三、第四、第六和第七個方面提到的聯(lián)合治療優(yōu)選地是具有細胞因子拮抗劑和/或生長因子的聯(lián)合治療，特別是在這樣的情況下，其中所述藥物組合物本身沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在。在第八個方面，本發(fā)明涉及用于制備包含皮質(zhì)類固醇和外來體的藥物組合物的方法，其包括步驟提供包含外來體的血液樣品，優(yōu)選地濃縮該外來體，并且與皮質(zhì)類固醇混
口 o本發(fā)明的其他實施方案在下面的詳細描述中和在權(quán)利要求書中進行陳述。發(fā)明描述本發(fā)明基于令人吃驚的認識，即關(guān)節(jié)和脊柱疾病例如骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎和退行性脊柱疾病，以及在自身免疫性疾病例如神經(jīng)性皮炎和斑禿的情況下借助皮質(zhì)類固醇的治療，通過額外施用外來體，可以明顯地得到改善。因此，本發(fā)明集中于此類疾病的用皮質(zhì)類固醇以及外來體的聯(lián)合治療。這可以在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下來進行。細胞因子拮抗劑和/或生長因子的存在是優(yōu)選的。在此，這些不同的活性物質(zhì)可以同時地-以相同的制劑或以不同的制劑-或者也可以相繼地進行施用。因此，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物(其僅包含兩種活性物質(zhì)外來體和皮質(zhì)類固醇中的一種)，以及根據(jù)本發(fā)明的試劑盒，可以被指定一方面用于外來體和皮質(zhì)類固醇的同時施用，和另一方面用于它們的相繼施用。然而，同時施用是優(yōu)選的，特別是僅以一種制劑。這樣，可以例如在向患者施用之前，以合適的比例混合本發(fā)明試劑盒的兩種藥物組合物，然后作為一種制劑進行施用。在相繼施用外來體和皮質(zhì)類固醇的情況下，在一周的時期內(nèi)，優(yōu)選地在5天、3天、I天內(nèi)或在12小時內(nèi)施用各種活性成分。在包含外來體和/或皮質(zhì)類固醇的本發(fā)明藥物組合物中，可以有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在。細胞因子拮抗劑和/或生長因子的存在是優(yōu)選的。因為在關(guān)節(jié)和脊柱疾病的情況下，如果額外施用細胞因子拮抗劑例如Orthokin (天然的IL-I Ra)和阿那白滯素(重組的IL-IRa)，特別是在直接將治療劑局部施用于待治療的關(guān)節(jié)的情況下，那么它對皮質(zhì)類固醇的效力，特別是長時效力產(chǎn)生明顯有利的影響。對于自身免疫性疾病，也觀察到這些活性物質(zhì)組合的相似的、令人吃驚的良好效力，其中特別是抗炎效果發(fā)揮了作用。在關(guān)節(jié)和脊柱疾病例如骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎和退行性脊柱疾病的情況下，用皮質(zhì)類固醇和外來體的聯(lián)合治療的效力通過額外施用細胞因子拮抗劑同樣得到很大改善。在用重組的IL-I Ra，阿那白滯素治療的情況下，令人吃驚地，只有通過與皮質(zhì)類固醇的組合才產(chǎn)生效力。在天然的IL-I Ra,Orthokin的情況下,效力的明顯改善恰好在炎性疾病的情況下觀察到。對于這種情況的一種可能解釋是，細胞因子拮抗劑具有合成代謝效果并且可能抵消或甚至于逆轉(zhuǎn)皮質(zhì)類固醇的分解代謝效果。因此，在治療例如骨關(guān)節(jié)炎中，除了細胞因子拮抗劑外，還將皮質(zhì)類固醇備選地或額外地與合成代謝生長因子相組合，以取得相似的效果。通常，可以用生長因子代替細胞因子拮抗劑或者與生長因子相組合。包含與皮質(zhì)類固醇和外來體一起在聯(lián)合治療中使用的細胞因子拮抗劑和/或生長因子的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物(根據(jù)本發(fā)明的第四個方面)，可以被指定一方面用于細胞因子拮抗劑和/或生長因子、皮質(zhì)類固醇和外來體的同時施用和另一方面用于它們的相繼施用。同時施用是優(yōu)選地，特別是僅以一種制劑。如此可以例如在向患者施用之前，以 合適的比例將細胞因子拮抗劑和/或生長因子與皮質(zhì)類固醇和外來體相混合，然后作為一種制劑進行施用。備選地，在同時施用的情況下，可以將細胞因子拮抗劑和/或生長因子、外來體或者皮質(zhì)類固醇分開施用，而將其他成分作為一種制劑混合。然而，也可以將細胞因子拮抗劑和/或生長因子、外來體和皮質(zhì)類固醇以任何順序相繼施用，或者在與其他兩種不同的時間點施用這些活性物質(zhì)中的一種。在相繼施用的情況下，優(yōu)選地在一周的時期內(nèi)，優(yōu)選地在5天、3天、I天內(nèi)或在12小時內(nèi)施用這些不同的活性物質(zhì)。在其他根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的情況下以及在根據(jù)本發(fā)明的試劑盒和根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用(本發(fā)明的第一、第二、第三、第五、第六和第七方面)的情況下，細胞因子拮抗劑在藥物組合物中的存在或不存在是可能的。細胞因子拮抗劑的存在是優(yōu)選的。此外，根據(jù)本發(fā)明的聯(lián)合治療優(yōu)選地是用一種細胞因子拮抗劑的聯(lián)合治療，特別是在所述藥物組合物本身沒有細胞因子拮抗劑(參見上面)的情況下。根據(jù)本發(fā)明使用的細胞因子拮抗劑可以是這樣的每種物質(zhì)或每種物質(zhì)混合物，其在患者的體內(nèi)降低或抑制一種或多種細胞因子的至少一種，優(yōu)選地基本上所有的生物學(xué)活性。在此，拮抗效果可以通過拮抗劑直接地實現(xiàn)或間接地實現(xiàn)，例如通過激活或抑制其他信號途徑，其在它那方面對細胞因子的生物學(xué)活性產(chǎn)生影響。優(yōu)選地，細胞因子的生物學(xué)活性通過阻止其與一個或多個它可以與其結(jié)合的受體的相互作用被抑制。這可以例如通過拮抗劑與相應(yīng)的受體競爭性結(jié)合或通過拮抗劑與細胞因子本身結(jié)合來達到。優(yōu)選地，所述細胞因子拮抗劑抑制細胞因子IL-I的效果。所述細胞因子拮抗劑可以例如是蛋白質(zhì)、肽、核酸、脂質(zhì)或有機化合物。所述細胞因子拮抗劑也可以由本文中所描述的兩種或多種細胞因子拮抗劑的混合物組成。特別地，細胞因子拮抗劑可以是天然存在的肽或蛋白質(zhì)，或也可以是重組制備的肽或蛋白質(zhì)。此外，細胞因子拮抗劑可以是抗體或抗體的抗原結(jié)合片段，或者包含抗體或抗體的抗原結(jié)合片段，其可以結(jié)合所涉及的細胞因子或細胞因子受體。適合于細胞因子拮抗劑的例子為白介素拮抗劑，特別是IL-I拮抗劑例如IL-I Ra，腫瘤壞死因子(TNF)拮抗劑，特別是TNF- a -拮抗劑例如抗-TNF- a -抗體，干擾素拮抗劑，和趨化因子拮抗劑。特別優(yōu)選的是天然存在的或重組的IL-IRa蛋白，優(yōu)選人IL-I Ra。IL-I Ra優(yōu)選地包含下述的氨基酸序列或由其構(gòu)成根據(jù)SEQ ID N0s:l、2、3、4或5的人的IL-I Ra的亞型或同源物、根據(jù)SEQ IDNOs:6或7的馬的IL-I Ra的亞型，或根據(jù)SEQ ID NO:8的狗的IL-I Ra。
此外，根據(jù)本發(fā)明，可以使用IL-I Ra的片段或衍生物作為細胞因子拮抗劑，只要其可以產(chǎn)生所希望的功能，即降低或抑制IL-I的一種或多種生物學(xué)功能。優(yōu)選地，IL-I Ra的片段包含天然IL-I Ra序列的至少20個，更優(yōu)選地40、60、80或100個氨基酸。優(yōu)選地，該片段為IL-I Ra的天然存在的分泌型片段。在一個實施方案中，IL-I Ra包含人IL-I Ra的氨基酸26-177，優(yōu)選地，根據(jù)SEQ ID NO: I的序列的氨基酸26-177。IL-I Ra的衍生物優(yōu)選地與天然IL-I Ra同源，并且優(yōu)選地在IL-I Ra的至少20個連續(xù)氨基酸，優(yōu)選地至少40、60、80或至少100個連續(xù)氨基酸的范圍內(nèi)，最優(yōu)選地在IL-I Ra的整個長度內(nèi)，具有與天然IL-I Ra至少60%，更優(yōu)選地至少70%、75%、80%、85%、90%、95%和最優(yōu)選地至少98%的同源性或同一性。特別優(yōu)選的是從天然生物樣品例如血液分離IL-I Ra(也稱為Orthokin)，以及具有人IL-IRa的氨基酸26-177的IL-I Ra片段(也稱為阿那白滯素)。Orthokin的獲得尤其在專利申請WO 00/46249 Al和WO 03/080122 Al中作了描述?？梢詰?yīng)用于本發(fā)明中的阿那白滯素以及其他IL-I拮抗劑，尤其在專利申請EP 0 343 684 Al中作了描述。在從天然生物樣品例如血液中獲得IL-I Ra的情況下，例如在Orthokin的情況下，所獲得的IL-I Ra溶液優(yōu)選地也包含生長因子。因此，根據(jù)本發(fā)明，細胞因子拮抗劑也與一種或多種生長因子相組合地存在或者被一種或多種生長因子代替。根據(jù)本發(fā)明，所述生長因子優(yōu)選地具有合成代謝效果。適合于生長因子的例子為TGF-P、IGF、BMP、HGF和VEGF。也包括這些生長因子的類似物、衍生物和片段，只要其具有所希望的效果，即特別是作為生長因子的效果。根據(jù)本發(fā)明使用的皮質(zhì)類固醇可以是任何天然存在的以及合成制備的皮質(zhì)類固醇。特別地，它可以是糖皮質(zhì)激素、鹽皮質(zhì)激素或雄激素，其中優(yōu)選地使用糖皮質(zhì)激素。同樣地，也可以使用由如本文中所描述的兩種或多種皮質(zhì)類固醇所組成的混合物。適合于糖皮質(zhì)激素的例子為可的松、氫化可的松、潑尼松、潑尼松龍、氯潑尼醇、地夫可特、氟可丁、曲安西龍、地塞米松、甲基潑尼松龍、氟潑尼松龍、氯可托龍、氯倍他松、阿氯米松、氟米松、氟潑尼定、氟氫縮松、倍他米松、倍氯米松、氟可龍、莫米松、氟替卡松、齒米松、氟輕松(Fluocinolon)、二氟拉松、去輕米松、氟西奈德、安西奈德、哈西奈德、二氟可龍、氯倍他索和帕拉米松。適用于鹽皮質(zhì)激素的例子為醛固酮、去氧皮質(zhì)酮和氟氫可的松，和適合于雄激素的例子為脫氫表雄酮(DHEA)和雌激素。皮質(zhì)類固醇可以以自由的化合物或以鹽、酯或前藥的形式來使用。在優(yōu)選的實施方案中，所使用的皮質(zhì)類固醇為曲安西龍、可的松、氫化可的松、潑尼松龍或潑尼松。優(yōu)選地，在包含根據(jù)本發(fā)明的外來體的藥物組合物或在根據(jù)本發(fā)明的試劑盒中的外來體是通過包括下述步驟的方法可制備的提供包含外來體的血液樣品和優(yōu)選地濃縮該外來體。所述濃縮優(yōu)選地通過以至少100 OOOg的離心步驟來進行，這是因為這樣的高離心加速度特別適合于濃縮外來體。該步驟優(yōu)選地進行至少30分鐘，特別地，至少60分鐘，這是因為此后濃縮就是特別有效的。提供包含外來體的血液樣品的步驟優(yōu)選地包括下述步驟提供從患者獲得的血液樣品，任選地添加促進外來體形成的添加劑，并將該血液樣品在適合于外來體制備的容器中進行溫育。該溫育導(dǎo)致經(jīng)處理的血液組合物。適合于外來體制備的容器為例如注射器、 小試管例如真空小試管，微滴定板和輸液袋。用于與血液樣品接觸的表面，在適合于外來體制備的容器的情況下，優(yōu)選地包括玻璃、合成材料(例如聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚乙烯和聚丙烯)、剛玉和石英，并且優(yōu)選地由這些材料之一組成。優(yōu)選地，為了外來體制備，在這些容器中添加由玻璃、合成材料、剛玉或石英組成的擴大表面的添加劑，例如球粒、凝膠、羊毛、磨粉、顆?；蛭⒘?。促進外來體形成的添加劑優(yōu)選地為IL-I Ra。促進外來體形成的添加劑優(yōu)選地以1-20 ii g/ml全血的量進行使用。在與外來體一起用于在聯(lián)合治療中使用的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的情況下，適合的是所述外來體從血液樣品中獲得。該外來體優(yōu)選地對于待治療患者是自體的或外源的。關(guān)于外來體的獲得，參閱上面所做的制備外來體的論述。優(yōu)選地，上面所描述的具有至少100 OOOg (優(yōu)選地，至少30分鐘，特別地至少60分鐘)的離心步驟在有理由提高外來體濃度的疾病治療中進行，優(yōu)選地在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療中。特別優(yōu)選地，這樣的離心步驟通常針對這樣的情況進行，即聯(lián)合治療涉及從患者的血液樣品獲得的外來體。因此，上面所做的制備外來體的詳細論述被看做是根據(jù)本發(fā)明的用于制備包含皮 質(zhì)類固醇和外來體的藥物組合物的方法，其包括步驟提供包含外來體的血液樣品，優(yōu)選地濃縮該外來體，并且與皮質(zhì)類固醇混合。該混合可以以專業(yè)人員常用的任何方式來進行。在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物或根據(jù)本發(fā)明的試劑盒指定用于關(guān)節(jié)疾病例如骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)發(fā)炎以及炎性軟骨缺損、退行性脊柱疾病、關(guān)節(jié)疼痛以及自身免疫性疾病的治療。待治療的骨關(guān)節(jié)炎可以由于過量負荷而產(chǎn)生，具有先天性或創(chuàng)傷性原因或者是其他疾病例如炎癥的結(jié)果。待治療的骨關(guān)節(jié)炎優(yōu)選地是發(fā)作中的骨關(guān)節(jié)炎或炎性骨關(guān)節(jié)炎。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以用于每個任何關(guān)節(jié)例如膝關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)、踝關(guān)節(jié)、肩根據(jù)、脊柱關(guān)節(jié)、指關(guān)節(jié)、肘關(guān)節(jié)、趾關(guān)節(jié)、頜關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)處的骨關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)炎的治療。待治療的關(guān)節(jié)炎可以是感染引起的關(guān)節(jié)炎例如細菌性關(guān)節(jié)炎或非感染引起的關(guān)節(jié)炎例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。備選地，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物和/或根據(jù)本發(fā)明的試劑盒也指定用于與所提及的一種或多種疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)不同的疾病的治療。待治療的退行性脊柱疾病可以例如是椎間盤突出。自身免疫性疾病尤其包括關(guān)節(jié)的自身免疫疾病例如白赫鐵列夫癥(Morbus Bechterew)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡，以及其他自身免疫性疾病例如特別是神經(jīng)性皮炎和斑禿(環(huán)形脫發(fā))。
根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物或根據(jù)本發(fā)明的試劑盒優(yōu)選地適合于局部施用。優(yōu)選地指定它們用于局部施用。因此，在優(yōu)選的實施方案中，指定它們用于注射，特別地用于注射入待治療的身體區(qū)域，特別是注射入受影響的關(guān)節(jié)，注射入受影響的神經(jīng)根處或受影響的椎間盤中，或其局部環(huán)境中。因此，指定所述藥物組合物特別地用于關(guān)節(jié)內(nèi)和/或根周注射。備選地，可以將根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物特別配制為霜劑或凝膠劑用于局部施用，或配制為片劑、膠囊劑或錠劑的形式用于全身施用。因此施用方式尤其取決于待治療的疾病。因此，在局部骨關(guān)節(jié)炎或退行性脊柱疾病的情況下，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的局部施用是優(yōu)選的。在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物或根據(jù)本發(fā)明的試劑盒僅指定用于或適合于與全身施用不同的施用。總是以專業(yè)人員已知的方式，為不同的施用途徑適當(dāng)?shù)嘏渲聘鶕?jù)本發(fā)明的藥物組合物。因此，適合于注射的藥物組合物優(yōu)選地作為溶液或分散體存在，或者甚至作為干燥的形式例如粉劑或凍干物存在，其在注射之前，必須溶解在合適的溶劑例如水中。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包含治療有效量的外來體和/或皮質(zhì)類固醇。所述皮質(zhì)類固醇優(yōu)選地以l-80mg/劑，更優(yōu)選地5-40mg/劑的濃度存在于包含皮質(zhì)類固醇的藥物組合物中。如果需要，所存在的細胞因子拮抗劑優(yōu)選地以0. 5-150mg/劑的濃度存在于包含細胞因子拮抗劑的藥物組合物中，但是也可以以非常小的濃度例如Ing/劑或更多，例如I-IOOOng/劑存在。小的劑濃度可以特別地在與生長因子組合的情況下使用和/或在天然IL-I Ra制備物例如具有Orthokin的組合物的情況下使用。高的劑濃度例如在重組制備的細胞因子拮抗劑例如阿那白滯素的情況下是優(yōu)選的。此外，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物還可以包含一種或多種載體物質(zhì)和/或一種或多種賦形劑。也可以指定本發(fā)明的藥物組合物用于這樣的患者的治療，其已經(jīng)經(jīng)歷了相關(guān)疾病，即例如骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎和/或退行性脊柱疾病的其他治療，特別是如果該其他治療沒有成效或者盡管治療開頭有成效但疾病癥狀至少部分復(fù)發(fā)。在優(yōu)選的實施方案中，該其他治療是用外來體、但不用皮質(zhì)類固醇的治療；或者是用皮質(zhì)類固醇，特別是例如上面所描述的皮質(zhì)類固醇，但不用外來體的治療。 在根據(jù)本發(fā)明的范圍內(nèi)，患者可以是患有本文中所描述疾病的人或動物。因此，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以適合于人和/或動物，例如狗、貓、馬、牛、豬、山羊、駱駝等的治療。附圖
簡述圖IA至圖IC顯示神經(jīng)性皮炎患者的腳的照片，其病例在下文中作為病例IX進行描述(實施例4)。圖IA再次給出了緊臨近用外來體和曲安西龍治療之前雙腳的皮膚病學(xué)改變。圖IB顯示對于右腳在治療后一周的狀況。圖IC顯示對于左腳在治療后一周的狀況。
實施例下面描述了具有晚期骨關(guān)節(jié)炎的患者的各種不同的病理研究。用細胞因子拮抗劑(例如，重組IL-I Ra或從自體血液樣品獲得的IL-I Ra)和皮質(zhì)類固醇對其進行治療。縮寫re 右邊Ii 左邊bds 雙側(cè)IRO內(nèi)旋轉(zhuǎn)ARO外旋轉(zhuǎn)VAS痛覺的視覺模擬評分(0至10)WOMAC對骨關(guān)節(jié)炎的患者調(diào)查表CRP C-反應(yīng)蛋白，在血液中可檢測到的炎癥標志物OSG髖骨關(guān)節(jié)在骨關(guān)節(jié)炎情況下用Orthokin和可的松的治療患者人數(shù)N=129平均復(fù)查時間3個月平均疼痛降低71%(即從治療前的100%疼痛降低至治療后的29%)引人注目的快速起效
I.阿那白滯素和可的松和外來體的局部施用病例I:T.，56歲，女性診斷臨床上通過放射學(xué)方法，存在中間和髕后左膝關(guān)節(jié)炎，IV度。從外部看，已經(jīng)計劃整個左膝置換；治療在左膝蓋中注射3次組合阿那白滯素和IOmg曲安西龍的外來體(2x每周)，以避免膝蓋手術(shù)。結(jié)果在第三個注射時間點，100%疼痛改善。明顯的功能改善。宣布取消手術(shù)約期，治療結(jié)束后5個月患者仍無疼痛。2.阿那白滯素和可的松和Orthokin的局部施用病例II:L.，57歲，男性診斷自6個月起，強烈的左肩疼痛(VAS 8);自此明顯地干擾睡眠?；颊咴谧罱?個月中幾乎不能睡眠，由此也干擾了一般健康。在左肩中注射可的松多次沒有成效。已商議好左肩手術(shù)約期。在此應(yīng)當(dāng)進行嘗試以避免手術(shù)。放射學(xué)和臨床上顯示部分旋轉(zhuǎn)套囊斷裂和肩峰下狹窄，完全的左肩僵硬；左臂感覺不舒適，手及左前臂力量不足，4度。治療在左肩中從腹面和側(cè)面應(yīng)用注射。在左肩中，與IOmg阿那白滯留素和IOmg曲安西龍一起通過注射器應(yīng)用2ml Orthokin。治療進行連續(xù)4天。結(jié)果在第二個治療日，患者已經(jīng)產(chǎn)生極度的疼痛好轉(zhuǎn)，具有大約90%的疼痛降低。VAS從8降落到1，肩部自由了并且可正?；顒??；颊咦?個月以來第一次可以連續(xù)睡眠。由此患者在其一般健康方面得到明顯改善。治療繼續(xù)到第4個治療日。在治療后6個月的復(fù)查給出未改變的陽性檢查結(jié)果的情況下，仍然顯示如在第2個治療日那樣的未改變的明顯改善。手術(shù)被取消，活動性是自由的，患者可以重新沒問題地將箱子和書舉過肩高。病例III:F.，45 歲，女性診斷自大約8個月起，完全的右肩僵硬。所有迄今的治療都沒有效果，計劃進行手術(shù)?；颊咴敢鈬L試另一種保守治療。自幾周以來，夜間睡眠不再可能。左側(cè)開始肩疼，但主要檢查結(jié)果是右肩，那里VAS為9，嚴重急性發(fā)作時直至10，由此一般健康狀況總體下降。治療在6個連續(xù)日，以分開應(yīng)用的2ml的Orthokin與另一注射器相組合來治療右肩，所述另一注射器由150mg阿那白滯素和5mg曲安西龍的組合組成。結(jié)果從第5天，85%疼痛改善。自第2次治療開始，整夜連續(xù)睡眠是可能的，由此顯著地改善了一般健康狀況。在治療末期，治療后8個月的第I次復(fù)查中，VAS繼續(xù)顯示非常好的未改變的結(jié)果；手術(shù)被取消。3.與IL-I Ra和曲安西龍/潑尼松一起溫育的外來體病例IV: S.，25歲，男性診斷自大約15歲起，嚴重的青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。用25mg Enbrel (2次/周)、10mg密都錠、5mg去氧皮質(zhì)酮和萘普生(2x1/天) 進行治療。兩個OSG和雙肩嚴重的滑膜炎和疼痛。治療前雙肩60度的外展。實驗室CRP值5.35(至0.511^是正常的)；白細胞增多。治療抽取血液以在6ml注射器(Orthokin注射器)中制備外來體。然后在37度下進行24小時溫育，其中在注射器中應(yīng)用Img阿那白滯素(IL-1 Ra)和2mg潑尼松之前，用血液充滿注射器。在不同的離心步驟(直至100 OOOg)后，將混合物在OSG和肩處應(yīng)用給患者。結(jié)果3天后關(guān)節(jié)開始明顯消腫。9天后臨床和實驗室檢查80%的疼痛改善，OSG正常，無腫脹。CRP值現(xiàn)在至I. 93。也在未經(jīng)局部注射的其他受影響的關(guān)節(jié)中得到改善。一般生活質(zhì)量顯著改善。在3個月后的檢查中顯示未改變的穩(wěn)定狀況。治療前VAS 9，自注射后第一周起VAS 3。患者非常滿意，可以重新工作了。4.在注射中用外來體和額外的曲安西龍的注射病例V :M.，64歲，女性嚴重的抵抗治療的RA,盡管用潑尼松15mg(每天)、Lantarel 20mg(每周)、 Humira(每2周)的基礎(chǔ)治療。腕關(guān)節(jié)中的放射性滑I旲切除術(shù)僅顯不最小的影響，以IOmg至40mg曲安西龍劑量的關(guān)節(jié)內(nèi)注射僅顯示非常弱的(一周后20%的疼痛改善)對疼痛以及對炎癥參數(shù)的影響。在自薦進行外來體治療的情況下，盡管有上面所描述的基礎(chǔ)治療CRP為120mg/l，手和雙肩中仍有劇烈疼痛。在雙側(cè)和雙肩注射外來體(在與IL-I Ra —起溫育后)并在MCP2-5中混入20mg總量的曲安西龍。之后，在2天后開始臨床上強烈的改善(I周后，80%的疼痛減輕)，其持續(xù)保持超過3個月。3個月后CRP檢查CRP 42.6mg/l，基礎(chǔ)治療未改變，因而該效果與外來體與曲安西龍的組合有關(guān)。如上面所描述的單獨曲安西龍的高劑量則無可比較的效果。病例VI:M.，25歲，男性已知的牛皮癬關(guān)節(jié)炎；基礎(chǔ)治療5mg潑尼松和IOmg MTX;基礎(chǔ)治療下的主要問題還是具有滑膜炎的明顯左膝腫脹，和與對側(cè)相比2cm的腫脹。腕關(guān)節(jié)范圍內(nèi)額外的腫脹，盡管進行基礎(chǔ)治療。以20_40mg劑量的膝和腕關(guān)節(jié)內(nèi)的關(guān)節(jié)內(nèi)可的松注射僅顯不在幾天內(nèi)非常弱的效果，具有10-30%的疼痛降低。施行外來體治療。在緊臨近注射前CRP5.6mg/l。在完成外來體后，在左膝(外來體+曲安西龍IOmg)中和在MCP2+3雙側(cè)(各自外來體與2mg曲安西龍/關(guān)節(jié))中應(yīng)用外來體(如上文所述溫育IL-I Ra之后制得)。不復(fù)雜的過程，幾天后,90%的明顯的疼痛緩解；3個月后CRP 3. Omg/1; I周后膝蓋完全消腫,沒有雙側(cè)區(qū)別在基礎(chǔ)治療的背景下，5mg潑尼松可以完全停止，這是因為外來體和曲安西龍的關(guān)節(jié)內(nèi)注射的效果是持久的。病例VII: R.，32 歲，男性已知數(shù)年的完全脫發(fā)，全部治療嘗試包括以高的全身和局部劑量(IO-SOmg潑尼松)的全身和局部可的松應(yīng)用，無效果施行用外來體的治療。以上面所描述的技術(shù)來制備外來體，外來體與IOmg曲安西龍一次性肌內(nèi)注射。正常的進程檢查，3個月后，在患病前長頭發(fā)的面積的大約一半中檢測到頭發(fā)生長。病例VIII: H.，47 歲，男性:右側(cè)膝關(guān)節(jié)炎,具有軟骨缺損，在Outerbridge后，關(guān)節(jié)鏡下驗證2-4度?；颊呦Ｍ蜂NOP和關(guān)節(jié)置換。既往病史的以10_40mg劑量的曲安西龍關(guān)節(jié)內(nèi)注射毫無效果。注射以如所描述的技術(shù)那樣在與IL-IRa —起溫育后所制備得的外來體1ml。一次性關(guān)節(jié)內(nèi)注射2ml外來體，4周后，患者對就疼痛和功能而目的臨床效果不丨兩意。隨后，決定在右膝中關(guān)節(jié)內(nèi)注射IOmg曲安西龍。不復(fù)雜的過程，I周后，95%的疼痛改善，功能重又完全恢復(fù)，患者幾年來第一次可以重又參加網(wǎng)球比賽。病例IX: J.，27 歲，男性
嚴重的皮膚學(xué)上驗證的神經(jīng)性皮炎，具有特別是在手和腳范圍內(nèi)的強烈改變。全部已知的皮膚病學(xué)治療顯示無持續(xù)改善，特別是在以80mg的劑量肌內(nèi)局部應(yīng)用皮質(zhì)類固醇類和全身應(yīng)用潑尼松和曲安西龍后，只觀察到I周的短期效果。以所描述的技術(shù)來制備外來體，肌內(nèi)應(yīng)用；3周后，對皮膚改變和疾病沒有令人滿意的效果。隨后，嘗試肌內(nèi)應(yīng)用2ml外來體，結(jié)合20mg曲安西龍。2周內(nèi)明顯改善，其保持不變超過6個月。因此，雖有輕的惡化，但與檢查結(jié)果相比有進一步的改善。圖IA描繪了緊臨近治療前雙腳的皮膚學(xué)改變，圖IB和圖IC是右或左腳治療后一周。

病例X :B.，69歲，女性嚴重的白赫鐵列夫關(guān)節(jié)炎，具有左眼虹膜睫狀體炎。作為基礎(chǔ)治療，患者得到交替劑量的潑尼松和MTX。CRP 20. 3mg/l ;相對于另一側(cè)，左邊OSG明顯腫脹+2cm ;左邊MCP和第I左手指末端指節(jié)明顯腫脹和疼痛，右肩腫脹、疼痛，相對于正常情況下外展降低至30度。隨后，以已知技術(shù)在受影響的關(guān)節(jié)中注射外來體，無疼痛緩解和CRP降低，隨后在所有受影響的關(guān)節(jié)中以40mg的總劑量注射曲安西龍，I周內(nèi)20%的輕微改善。4周后20mg總劑量的外來體和曲安西龍注射，隨后肩膀80%的改善，手指50%的改善，具有左拇指環(huán)MCP關(guān)節(jié)從8. 2cm消腫至6. 6cm。踝尚無明顯效果。I周內(nèi)CRP從20. 3mg/l降低至2. 9mg/l。
權(quán)利要求
1.藥物組合物，其在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含皮質(zhì)類固醇以及外來體。
2.在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含外來體的藥物組合物，用于與皮質(zhì)類固醇一起在聯(lián)合治療中使用。
3.在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含皮質(zhì)類固醇的藥物組合物，用干與外來體一起在聯(lián)合治療中使用。
4.包含細胞因子拮抗劑和/或生長因子的藥物組合物，用干與皮質(zhì)類固醇和外來體一起在聯(lián)合治療中使用。
5.試劑盒，其包含(i)在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含外來體的藥物組合物，和(ii)在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下包含皮質(zhì)類固醇的藥物組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3的藥物組合物或根據(jù)權(quán)利要求書5的試劑盒，其中所述藥物組合物被指定用于外來體和皮質(zhì)類固醇的同時或相繼施用。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至6之一的藥物組合物或試劑盒，其中所述皮質(zhì)類固醇為 (a)糖皮質(zhì)激素例如可的松、氫化可的松、潑尼松、潑尼松龍、氯潑尼醇、地夫可特、氟可丁、曲安西龍、地塞米松、甲基潑尼松龍、氟潑尼松龍、氯可托龍、氯倍他松、阿氯米松、氟米松、氟潑尼定、氟氫縮松、倍他米松、倍氯米松、氟可龍、莫米松、氟替卡松、南米松、氟輕松、ニ氟拉松、去羥米松、氟西奈德、安西奈德、哈西奈德、ニ氟可龍、氯倍他索和帕拉米松； (b)鹽皮質(zhì)激素例如醛固酮、去氧皮質(zhì)酮和氟氫可的松；或 (c)雄激素例如脫氫表雄酮(DHEA)和雌激素； 或其鹽、酷或前藥。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、3、5、6或7之一的藥物組合物或試劑盒，其中所述皮質(zhì)類固醇以l-80mg/劑的濃度存在于含皮質(zhì)類固醇的藥物組合物中。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、5、6、7或8之一的藥物組合物或試劑盒，其中所述外來體通過包括下述步驟的方法來制備提供包含外來體的血液樣品并優(yōu)選地濃縮該外來體。
10.根據(jù)權(quán)利要求3、4、6、7或8之一的藥物組合物，其用于與在外來體一起在聯(lián)合治療中使用，其中所述外來體從血液樣品獲得。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的藥物組合物或試劑盒，其中所述外來體對于待治療的患者是自體的或外源的。
12.根據(jù)權(quán)利要求I至11之一的藥物組合物或試劑盒，用于在關(guān)節(jié)疾病例如骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)發(fā)炎和炎性軟骨缺損、退行性脊柱病和/或關(guān)節(jié)疼痛的治療中使用。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的藥物組合物或試劑盒，其中所述骨關(guān)節(jié)炎是發(fā)作中的骨關(guān)節(jié)炎或炎性骨關(guān)節(jié)炎。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的藥物組合物或試劑盒，其中所述關(guān)節(jié)炎是感染引起的關(guān)節(jié)炎例如細菌性關(guān)節(jié)炎，或非感染引起的關(guān)節(jié)炎例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎或痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的藥物組合物或試劑盒，其中所述退行性脊柱疾病為椎間盤突出。
16.根據(jù)權(quán)利要求I至11之一的藥物組合物或試劑盒，用于在自身免疫性疾病的治療中使用。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的藥物組合物或試劑盒，其中所述自身免疫性疾病為神經(jīng)性皮炎或斑禿。
18.根據(jù)權(quán)利要求I至17之一的藥物組合物或試劑盒，其中所述藥物組合物適合于局部施用。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的藥物組合物或試劑盒，其中所述局部施用選自在受影響的身 體區(qū)域，特別是在受影響的關(guān)節(jié)中、在受影響的神經(jīng)根上或在受影響的椎間盤中或在其局部環(huán)境中注射；關(guān)節(jié)內(nèi)注射；和外部施用。
20.根據(jù)權(quán)利要求I至19之一的藥物組合物或試劑盒，其中所述藥物組合物進ー步包含載體和/或賦形劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求I至20之一的藥物組合物或試劑盒，其中存在細胞因子拮抗劑，且所述細胞因子拮抗劑選自白介素拮抗劑，特別是IL-I拮抗劑例如IL-I Ra,腫瘤壞死因子(TNF)拮抗劑，特別是TNF- a -拮抗劑例如抗TNF- a -抗體，干擾素拮抗劑和趨化因子拮抗齊U。
22.根據(jù)權(quán)利要求21的藥物組合物或試劑盒，其中所述細胞因子拮抗劑是天然存在的或重組的IL-I Ra-蛋白，特別是Orthokin或阿那白滯素。
23.根據(jù)權(quán)利要求21或22的藥物組合物或試劑盒，其中所述細胞因子拮抗劑以0.5-150mg/劑的濃度存在于含細胞因子拮抗劑的藥物組合物中。
24.根據(jù)權(quán)利要求I至23之一的藥物組合物或試劑盒，其中存在生長因子，且所述生長因子選自TGF- P、IGF、BMP、HGF 和 VEGF。
25.在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下的外來體用于制備藥物組合物用途，所述藥物組合物與皮質(zhì)類固醇一起在聯(lián)合治療中使用。
26.在有或沒有細胞因子拮抗劑和/或生長因子存在下的皮質(zhì)類固醇用于制備藥物組合物用途，所述藥物組合物與外來體一起在聯(lián)合治療中使用。
27.用于制備包含皮質(zhì)類固醇和外來體的藥物組合物的方法，其包括下述步驟提供包含外來體的血液樣品，優(yōu)選地濃縮外來體，并且與皮質(zhì)類固醇混合。
全文摘要
本發(fā)明涉及與皮質(zhì)類固醇和外來體一起用于聯(lián)合治療的藥物組合物。通過該聯(lián)合治療可以治療疾病例如骨關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)炎和/或退行性脊柱疾病。
文檔編號A61P19/02GK102652020SQ201080055617
公開日2012年8月29日 申請日期2010年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月10日
發(fā)明者J·賴內(nèi)克, P·韋林 申請人:奧索根股份公司