專利名稱：一種多肽復(fù)合物、藥物組合物、其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及糖尿病相關(guān)的藥物領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種多肽復(fù)合物，該復(fù)合物具有延長的Exendin-4的體內(nèi)半衰期。本發(fā)明還涉及該多肽復(fù)合物的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種遺傳因素和多種環(huán)境因素相關(guān)聯(lián)的以慢性高血糖為特征的代謝紊亂綜合癥。由于糖尿病還伴隨著諸多并發(fā)癥，現(xiàn)已成為僅次于惡性腫瘤和心血管疾病之后的第三大健康殺手。1984年，胰升血糖素肽-I(GLP-I)類藥物被發(fā)現(xiàn)，它是一種具有30個氨基酸的腸降血糖素。GLP-I作為降血糖藥物受到限制的主要原因是GLP-I的體內(nèi)半衰期僅為3-5分鐘。Exendin-4是一條39個氨基酸組成的直鏈多肽，最初由南美巨蜥的唾液分離提取獲得。它的氨基酸殘基與哺乳動物GLP-I序列有52%的同源性，其與GLP-I的最大不同之處在于N端第2位的甘氨酸耐血液中二肽基肽酶(DPP-IV)的酶切作用，而GLP-I的相同位置則為極易被DPP-IV切斷的丙氨酸，故Exendin-4被吸收入血后的半衰期較長(t1/2 = 2.4 小時)。Exendin-4是一種強效GLP-I受體激動劑，能模擬GLP-I這種內(nèi)源性多肽的糖調(diào)控作用，降低空腹和餐后血糖。Exendin-4的活性主要通過與人體胰臟GLP-I受體結(jié)合而介導(dǎo)，由環(huán)腺苷酸(cAMP)依賴和β細胞分化機制引發(fā)葡萄糖依賴的胰島素合成和分泌。因為Exendin-4的氨基酸結(jié)構(gòu)及生物活性與GLP-I均具有相關(guān)性，故通常它也被視為腸促胰島素的一種。由于Exendin-4的降糖作用時間較GLP-I長，延緩胃排空和抑制攝食沖動，對肥胖病人體重的有益作用又有別于傳統(tǒng)的降糖藥物，因此其作為2型糖尿病治療藥物的開發(fā)潛力巨大。隨著Exendin-4為活性單體的藥物(英文通用名為Exenatide，艾塞那肽，Lily) 于2005年在美國上市，Exendin-4作為GLP-I家族中的一員在治療糖尿病方面引起了廣泛的關(guān)注。但是，現(xiàn)在上市的Exendin-4藥物依然存在著半衰期短的問題，藥用的 Exenatide (艾塞那肽)為每日注射兩次，極大地增加的患者的痛苦。因此，目前存在對解決 Exendin-4藥物體內(nèi)半衰期短的方法的需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是針對臨床上Exendin-4類似物在體內(nèi)存留時間較短，需要每天注射給藥的缺限，提供了一種半衰期較長的包含載體多肽與Exendin-4的多肽復(fù)合物。本發(fā)明的另一個目的是提供上述多肽復(fù)合物的制備方法，此外，還提供上述多肽復(fù)合物在制備治療糖尿病和肥胖癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的又一個目的是提供一種以Exendin-4與載體多肽的多肽復(fù)合物作為有效成分的藥用組合物。
用于實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下一方面，本發(fā)明提供一種多肽復(fù)合物，其包含Exendin-4和載體多肽。其中，所述載體多肽優(yōu)選為如序列SEQ ID NO 1所示的載體多肽A或如序列SEQ ID NO 2所示的載體多肽B。在所述多肽復(fù)合物中，Exendin-4和載體多肽的摩爾比為10 1-1 50，優(yōu)選 1 2.5-1 25，更優(yōu)選 1 10-1 25。另一方面，本發(fā)明提供上述多肽復(fù)合物的制備方法，該方法包括按照摩爾比例， 分別稱取Exendin-4和載體多肽A或B，溶于適量的生理鹽水、純水或PBS緩沖液中，在 0_5°C溫度下，超聲混合1-15分鐘，或者攪拌1-3小時，或者放置過夜。再一方面，本發(fā)明還提供上述多肽復(fù)合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用，以及該多肽復(fù)合物在制備治療和/或預(yù)防肥胖癥的藥物中的應(yīng)用。又一方面，本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包含上述多肽復(fù)合物。其中，所述的藥物組合物還包含一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料，其中所述藥物組合物中多肽復(fù)合物和輔料的重量比優(yōu)選為5 1-1 50，進一步優(yōu)選1 1-1 25。并且，所述藥物組合物優(yōu)選為注射劑，進一步優(yōu)選為凍干粉針或溶液注射劑?，F(xiàn)結(jié)合本發(fā)明的目的對本發(fā)明逐一加以描述。⑴載體多肽本發(fā)明所述的載體多肽的序列如下序列A或B :序列A (SEQ ID NO 1) GLffffKAffffKAffffKSLffffRKRKRKA序列B (SEQ ID NO 2) GLffffKVffffKLffffKSLffffRKRLRKA(2) Exendin-4Exendin-4 為天然產(chǎn)物，序列為 SEQ ID NO 9 HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(3) Exendin-4與載體多肽的復(fù)合物Exendin-4與載體多肽的比例Exendin_4(麗4188)能與載體多肽A (MW :3329) 或載體多肽B(MW :3384)形成的不同比例的復(fù)合物，以摩爾計算，從10 1到1 100，不同的比例得到的復(fù)合物具有不同的釋放特性，從1 1到1 50之間的比例形成的復(fù)合物具有更強的作為藥用的實用性，更優(yōu)先的范圍為1 2.5到1 25。本發(fā)明的復(fù)合物的制備方法按照摩爾比例，稱取適量的Exendin-4凍干粉，溶于適量的生理鹽水、純水或PBS緩沖液中，稱取適量的載體多肽A或B，溶于適量的生理鹽水 (或PBSdK )中，在0-5°C溫度下，超聲混合1-15分鐘，或者攪拌1-3小時，或者放置過夜。 所制備得到的溶液可以直接加輔料做成制劑，也可以冷凍干燥后再與其他輔料一起制成制劑。注PBS為磷酸鹽。(4)本發(fā)明的藥用組合物本發(fā)明的含有Exendin-4及載體多肽的復(fù)合物可以與一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料共同制成藥用組合物，這些輔料包括水溶性填充劑、PH調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、注射用水、 滲透壓調(diào)節(jié)劑等等。本發(fā)明所述的水溶性填充劑輔料為選自以下的一種或幾種甘露醇、低分子右旋糖苷、山梨醇、聚乙二醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖等。
PH調(diào)節(jié)劑為選自以下的一種或幾種枸櫞酸、磷酸、乳酸、酒石酸、鹽酸等非揮發(fā)性的酸以及氫氧化鉀、氫氧化鈉或氫氧化鉀或氫氧化銨、碳酸鈉或碳酸鉀或碳酸銨鹽、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀或碳酸氫銨鹽等生理可接受的有機或無機酸和堿及鹽等。穩(wěn)定劑為選自以下的一種或幾種EDTA_2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、 磷酸氫二鉀、碳酸氫鈉、碳酸鈉、精氨酸、谷氨酸、聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、十二烷基硫酸鈉或三羥甲基氨基甲烷等。優(yōu)選焦亞硫酸鈉、磷酸氫二鉀、精氨酸、聚乙二醇6000、三羥甲基氨基甲烷。滲透壓調(diào)節(jié)劑是氯化鈉、氯化鉀的一種或兩種的組合。(5)注射劑的制備方法本發(fā)明的藥用組合物可以通過肌肉、靜脈內(nèi)、皮下注射途經(jīng)進行給藥，優(yōu)選的劑型為凍干粉或溶液注射劑。冷凍干燥注射劑的制備方法取Exendin-4和載體多肽溶液適量，加入水溶性填充劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等，加入注射用水適量，調(diào)節(jié)PH值至4-8使其溶解，加水稀釋至適當(dāng)濃度，加入0. 1-0.5%活性炭，在0-10°C下攪拌10-20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過濾除菌，濾液進行分裝，采用冷凍干燥法，制得白色疏松塊狀物，封口即得，每個規(guī)格含有 Exendin-4 在 5 μ g 至Ij Img 之間。注射液的制備方法取Exendin-4和載體多肽溶液或凍干粉適量，加入水溶性填充劑、穩(wěn)定劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑等，加入注射用水適量，調(diào)節(jié)PH值至4-8使其溶解，加水稀釋至適當(dāng)濃度，加入0. 1-0. 5%活性炭，在0-10°C下攪拌10-20分鐘，脫碳，采用微孔濾膜過濾除菌，濾液進行分裝，封口即得，每個規(guī)格含有Exendin-4在5 μ g到Img之間。(6)藥用組合物的用途本發(fā)明的藥用組合物可以用在制備糖尿病治療藥物方面。具體地，本發(fā)明的組合物可以靜脈、肌肉或皮下注射劑形式給藥。雖然劑量依治療對象、給藥方式、癥狀及其它因素而改變，本發(fā)明的組合物在相當(dāng)寬的劑量范圍內(nèi)是有效的。在成人的治療中，劑量范圍在 5μ g/人一Img/人，每日一次或每幾日一次給藥。實際劑量應(yīng)該由醫(yī)生根據(jù)有關(guān)的情況來決定，這些情況包括被治療者的身體狀態(tài)、給藥途徑、年齡、體重、患者對藥物的個體反應(yīng)， 患者癥狀的嚴重程度等等，因此上述劑量范圍并不是以任何方式限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明采用多肽組合藥物技術(shù)克服了 Exendin-4半衰期短的問題，所提供的多肽復(fù)合物中，由于載體多肽的存在使得^^11肚11-4在體內(nèi)的半衰期可達到對小時以上，較單獨給藥的Exendin-4的半衰期明顯延長，極大地便利了 Exendin-4 (半衰期僅為2. 4小時) 的臨床推廣和應(yīng)用。


以下，結(jié)合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施例，其中圖1為實施例18中幾種含Exendin-4和載體多肽的多肽復(fù)合物的降血糖實驗，其中Exendin-4 天然 Exendin-4 ；Exendin-4+2. 5A :Exendin_4與載體多肽以摩爾比例1 2. 5的復(fù)合物；Exendin-4+5A :Exendin_4與載體多肽以摩爾比例1 5的復(fù)合物；
Exendin-4+10A :Exendin_4與載體多肽以摩爾比例1 10的復(fù)合物；Exendin-4+25A :Exendin_4與載體多肽以摩爾比例1 25的復(fù)合物；Exendin-4+2. 5B :Exendin-4與載體多肽以摩爾比例1 2. 5的復(fù)合物;Exendin-4+5B :Exendin-4與載體多肽以摩爾比例1 5的復(fù)合物；Exendin-4+10B :Exendin-4與載體多肽以摩爾比例1 10的復(fù)合物；Exendin-4+25B :Exendin-4與載體多肽以摩爾比例1 25的復(fù)合物。圖2為Exendin-4與不同比例的載體多肽復(fù)合物的液相分離結(jié)果，其中圖2A為Exendin-4，圖2B為載體多肽A，圖2C為載體多肽B，圖2D為Exendin-4+ 載體多肽A，圖2E為Exendin-4+載體多肽B。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法。實施例1 載體多肽A的制備按照大腸桿菌的優(yōu)選密碼子(但不限于優(yōu)選密碼子)，利用全基因合成的方法合成含有多肽A的堿基序列，DNA序列如下SEQ ID NO 3 5tatgattgaaggccgtggcctgtggtggaaagcgtggtggaaagcgtggtggaaatccctgtggtggc
gtaaacgtaaacgtaaagcgtaataag3SEQ ID NO 4
權(quán)利要求
1.一種多肽復(fù)合物，其中，所述多肽復(fù)合物包含Exendin-4和載體多肽。
2.如權(quán)利要求1所述的多肽復(fù)合物，其中，所述載體多肽為如序列SEQIDNO 1所示的載體多肽A或如序列SEQ ID NO 2所示的載體多肽B。
3.如權(quán)利要求1或2所述的多肽復(fù)合物，其中，所述Exendin-4和載體多肽的摩爾比為 10 1-1 50，進一步優(yōu)選 1 2.5-1 25，更優(yōu)選 1 10-1 25。
4.如權(quán)利要求1-3任一項所述的多肽復(fù)合物的制備方法，其中，所述方法包括按照摩爾比例，分別稱取Exendin-4和載體多肽A或B，溶于適量的生理鹽水、純水或PBS緩沖液中，在0-5°C溫度下，超聲混合1-15分鐘，或者攪拌1-3小時，或者放置過夜。
5.如權(quán)利要求1-3任一項所述的多肽復(fù)合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求1-3任一項所述的多肽復(fù)合物在制備治療和/或預(yù)防肥胖癥的藥物中的應(yīng)用。
7.—種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1-3任一項所述的多肽復(fù)合物。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物還包含一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料。
9.如權(quán)利要求7或8所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物中多肽復(fù)合物和輔料的重量比為5 1-1 50，優(yōu)選1 1-1 25。
10.如權(quán)利要求7-9中任一項所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物為注射劑，優(yōu)選為凍干粉針或溶液注射劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多肽復(fù)合物，其包含Exendin-4和載體多肽。所述載體多肽能夠有效延長Exendin-4的血液半衰期，克服其因為半衰期短而無法在臨床上使用的現(xiàn)狀，在糖尿病、肥胖癥治療藥物領(lǐng)域較有應(yīng)用前景。本發(fā)明還公開了所述多肽復(fù)合物的制備方法及其應(yīng)用。此外，本發(fā)明進一步公開了包含所述多肽復(fù)合物的藥物組合物。
文檔編號A61K38/22GK102552883SQ20101058132
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者付剛, 任曉文, 徐為人, 湯立達, 王玉麗, 鄭學(xué)敏, 龔珉 申請人:天津藥物研究院