專利名稱：崗梅抗流感有效部位的制備及測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明 涉及一種中藥，尤其涉及一種中藥的有效部位的制備方法和含量測定方 法，該有效部位可用于制備防治感冒、流行性感冒的藥物。
背景技術(shù)：
流行性感冒(Influenza，簡稱流感)是流感病毒引起的急性呼吸道感染，是一種 傳染性強、傳播速度快的疾病。主要通過空氣中的飛沫，或接觸傳播。人流感病毒分為甲、乙、丙三型，其抗原性及其致病力極易發(fā)生變異，尤其是甲型 病毒，因此流感極易發(fā)生，具有高度傳染性。我國是流感多發(fā)國，而且自1957年以來的3次 世界性大流行都起源于我國。1917 1919年，歐洲爆發(fā)流感，導(dǎo)致2000萬人死亡，是歷史 上最嚴(yán)重的一次流感爆發(fā)。目前防治流感的最有效手段是接種流感疫苗，但由于流感病毒變異性強，可使現(xiàn) 有疫苗失效，從而加大了防治的難度。數(shù)十年來，世界各國均投入大量的人力物力進行抗流 感病毒的研究，希望能找到更為有效的預(yù)防以及治療流感病毒的方法。抗病毒藥物的研發(fā) 主要針對阻止病毒吸附、阻止病毒核酸的復(fù)制、阻止病毒信使RNA翻譯成病毒蛋白質(zhì)、神經(jīng) 氨酸酶抑制劑等幾個病毒的代謝環(huán)節(jié)。目前開發(fā)的藥物有金剛烷(amantadine)、甲基金剛 烷胺(rematadine)、利巴韋林(tibavirin)、λ-干擾素、扎那米韋(zanamivir)與奧斯米 韋(oseltamivir)。但現(xiàn)有的藥物，不但有副作用，而且存在耐藥性。因此，急需開發(fā)新的可 有效預(yù)防，治療流感，來源更安全，價格低廉的高效抗感冒藥物。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提 供一種用于制備防治感冒、流行性感冒的藥物。在篩選抗流行性感冒藥物的過程中，發(fā)現(xiàn)崗 梅經(jīng)水提取濃縮后萃取所得的正丁醇部位、大孔樹脂吸附溶劑洗脫部位對甲1型流感病毒 具有明顯的體內(nèi)、外抑制及殺滅作用，為此，本發(fā)明提供一種崗梅抗流感有效部位的制備方 法，提供一種崗梅抗流感有效部位的質(zhì)量控制方法，提供本發(fā)明崗梅抗流感有效部位在制 備治療或預(yù)防流感藥物或保健品中的應(yīng)用，其可選自于丸劑、片劑、膠囊劑、噴霧劑以及滴 丸劑當(dāng)中的一種。為達(dá)上述目的，本發(fā)明的崗梅抗流感有效部位的制備方法，包括下述步驟①、首先將干燥的崗梅粉碎，使用水作為溶劑進行提取，濃縮至適當(dāng)體積(每ml含 0. 1 5g生藥)，得崗梅水提濃縮液；②、后續(xù)精制純化采用以下方法中的一種方法A、萃取于崗梅水提濃縮液中，加入水飽和的正丁醇少量(相當(dāng)于崗梅水提 濃縮液0. 1 10倍體積)多次萃取，回收正丁醇，濃縮即得崗梅抗流感有效部位；或方法B、樹脂吸附將前述所得的濃縮液，上大孔樹脂柱，先用3 4個柱體積的 水洗去雜質(zhì)，然后用洗脫溶劑(30% 95%的乙醇)進行洗脫，收集洗脫液，濃縮即得崗梅抗流感有效部位。優(yōu)化為崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水 煎煮0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml，其后續(xù)精制純化采用以下方 法中的一種方法A 將前 述所得的濃縮液，水飽和正丁醇少量多次萃取，回收正丁醇，濃縮得 浸膏，得崗梅抗流感有效部位；或方法B 將前述所得的濃縮液，上預(yù)處理好的D-101大孔樹脂柱，重吸附3次，水 洗三倍柱體積，再30%乙醇洗脫3倍柱體積，最后用70%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至 無醇味，濃縮，即得。本發(fā)明的崗梅抗流感有效部位的質(zhì)量控制方法，包括下述步驟①、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取赪酮甾醇3-0-β-D-葡萄甙對照品約14mg置IOOml容量瓶中，加甲醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0. 14mg/ml的赪酮留醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取赪酮留醇標(biāo) 準(zhǔn)溶0. 3,0. 4,0. 5,0. 6,0. 7,0. 8ml分別置IOml具塞試管中，揮干甲醇，分別加入新配制的 5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml、高氯酸0. 8ml，密塞，搖勻，置60°C水浴中加熱15min后取出， 立即用冷水冷卻至室溫，分別精密加入冰醋酸5ml，搖勻，作為供試品溶液。另精密量取甲醇 溶液0. 8，按照上述操作至加入冰醋酸5ml搖勻為止，作為空白溶液。取供試品溶液和空白 溶液，照分光光度法試驗，在550nm波長處分別測定吸收度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；②、崗梅抗流感有效部位總皂苷的含量測定取崗梅抗流感有效部位樣品適量，精密稱定，稀釋成約0. 15mg/ml的溶液，精密吸 取1ml，置IOml具塞試管中，揮干甲醇，分別加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml、高 氯酸0. 8ml，密塞，搖勻，置60°C水浴中加熱15min后取出，立即用冷水冷卻至室溫，分別精 密加入冰醋酸5ml，搖勻，作為供試品溶液，另精密量取甲醇溶液適量，按照上述操作至加 入冰醋酸5ml搖勻為止，作為空白溶液。取供試品溶液和空白溶液，照分光光度法試驗，在 550nm波長處測定吸收度，根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總皂苷含量。崗梅抗流感有效部位總皂苷 含量應(yīng)不低于50%。崗梅，來源為冬青科冬青屬植物梅葉冬青(llexasprella (Hook. etArn. ) Champ, ex Benth)，原植物又名秤星樹、假秤星等，以根、葉人藥。崗梅為廣東、廣西等嶺南地區(qū)習(xí)用中 藥，味苦、甘、性涼，清熱解毒、生津止渴。用于感冒、高熱煩渴、扁桃體炎、咽喉炎、氣管炎、百 日咳等，有增加豚鼠冠脈流量、加強心肌收縮力等作用。崗梅根還為王老吉涼茶、沙溪涼茶 等的主要原料，嶺南民間也廣泛用崗梅自制涼茶。目前崗梅主要以中藥復(fù)方的形式用于流 感的臨床防治，其有效成分(有效部位)尚不明確，藥物質(zhì)量難以控制。本發(fā)明的制備防治感冒、流行性感冒的藥物，上述崗梅抗流感有效部位可以加入 常規(guī)輔料或賦形劑，制成臨床可接受的劑型，如丸劑、片劑、膠囊劑、滴丸劑以及噴霧劑等。


圖1是赪酮甾醇3-0-β -D-葡萄糖苷的分子結(jié)構(gòu)圖； 圖2是赪酮甾醇3-0-β -D-葡萄甙的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實施例方式為能進一步了解本發(fā)明的特征、技術(shù)手段以及所達(dá)到的具體目的、功能，下面將結(jié)合本發(fā)明崗梅抗流感有效部位的藥理實驗及結(jié)果來說明其在制備抗流感藥物中的作用。實驗例一、崗梅水提取物不同部位在MDCK細(xì)胞上抗FMl作用1、實驗?zāi)康脑u價崗梅水提物不同部位的抗FMl作用。2、實驗材料2.1 細(xì)胞MDCK 細(xì)胞2. 2 病毒:FM1, TclD50 = 4. 52. 3 培養(yǎng)基DMEM (GIBco)，牛血清2. 4藥物崗梅，病毒唑，結(jié)晶粉(稱40mg加2% DMEM完全溶解，過濾除菌，20mg/ml分裝備用)。3、實驗方法3. 1溶液的制備3. 1. 1崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎 煮0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml，上預(yù)處理好的D-101大孔樹脂 柱，重吸附3次，水洗三倍柱體積，收集水洗液，濃縮，體積680ml為溶液I (生藥量1. 5g/ ml) ο30%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮至生藥量lg/ml為溶液II (生 藥量 lg/ml)。70%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮，體積400ml，作為溶液III (生 藥量 2. 5g/ml)。95%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮，體積200ml作為溶液IV (生 藥量 5g/ml)。3. 1. 2崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎 煮0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml (V)。乙酸乙酯少量多次萃取，回收乙酸乙酯，濃縮得浸膏ΥΠ (3. 2g)(生藥量312. 5g/ g)，稱0. 170g,加入2mlPBS溶解，母液濃度為0. 085g/ml。水飽和正丁醇少量多次萃取，回收正丁醇，濃縮得浸膏VDI (43g)(生藥量23g/ml)， 稱0. 5336g，加入200 μ 1DMS0溶解，取5 μ 1該藥加入lmlDMEM，藥物析出，加熱后仍不溶解， 藥物母液濃度為13. 34mg/ml。萃取后水部濃縮得溶液VI (1. 25g)(生藥量800g/ml)。以上I VDI號及復(fù)方野菊花抗感滴丸溶液，配于青霉素瓶內(nèi)，隔水煮半個小時，備用。根據(jù)藥物顏色以及母液濃度，以上各藥分別取適量加入2% DMEM稀釋成合適的濃
度作為第一個實驗濃度，具體如下 各藥的具體實驗濃度如下 3. 2抗病毒實驗將長滿的MDCK細(xì)胞常規(guī)消化制成單個細(xì)胞懸液，以500個/孔接種于96孔板 中，0. Iml/孔，待長成單層后，拋掉原有培養(yǎng)基，在96孔板中設(shè)計好上藥次序，以上I VDI 號藥設(shè)4個濃度，加入100TclD50病毒，0. Iml/孔，共2孔，藥物毒性對照孔兩孔，補充2% DMEMO. Iml/孔，兩小時后，拋棄板內(nèi)上清液，加入不同濃度藥物，0. Iml/孔，37°C，5% C02培 養(yǎng)5天，病變達(dá)100TclD50則終止。4、實驗結(jié)果 注“@ ”藥物毒性，“_”無毒有效，“ + ”不能抑制，“ 士 ” 50%抑制，“ X ” 20%抑制5、結(jié)論III號藥在無毒濃度46. 9mg/ml、滴丸在無毒濃度0. 16mg/ml能完全抑制FMl ；VDI號 藥在無毒濃度0. 25mg/ml能50%抑制FMl。崗梅水提物大孔樹脂70%醇洗脫液、水體物正丁醇萃取物均有抗FMl的作用。實驗例二、崗梅水提物體內(nèi)抗流感病毒作用材料和方法1. 1實驗材料1.1.1 藥物崗梅。
1. 1. 2動物=NIH小鼠，單一性別，SPF級別，體重13 15g。小鼠飼料為富含多種 成分的配方。飼養(yǎng)環(huán)境室溫23 士 2 °C，相對濕度75 士 10%。
1. 1. 3病毒甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株，給小鼠增強毒力后，于雞胚尿囊腔傳代2 次。并測定其半數(shù)致死量LD50 = 5. 52，放冰水中保存。2、實驗方法2.1樣品的制備2. 1. 1崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎 煮0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml，為溶液A，上預(yù)處理好的D-101 大孔樹脂柱，重吸附3次，水洗三倍柱體積，收集水洗液，濃縮，體積680ml為溶液B (生藥量 1. 5g/ml) ο30%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮至生藥量lg/ml為溶液C(生 藥量 lg/ml)。70%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮，體積400ml，作為溶液D (生藥 量 2. 5g/ml)。95%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮，體積200ml作為溶液E (生藥 量 5g/ml)。2. 1. 2崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎 煮0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml。乙酸乙酯少量多次萃取，回收乙酸乙酯，濃縮得浸膏F(3. 2g)(生藥量312. 5g/g)， 稱0. 170g，加入2mlPBS溶解，母液濃度為0. 085g/ml。水飽和正丁醇少量多次萃取，回收正丁醇，濃縮得浸膏G(43g)(生藥量23g/ml)， 稱0. 5336g，加入200 μ 1DMS0溶解，取5 μ 1該藥加入lmlDMEM，藥物析出，加熱后仍不溶解， 藥物母液濃度為13. 34mg/ml。萃取后水部濃縮得溶液H (1. 25g)(生藥量800g/ml)。3、實驗方法與結(jié)果3. 1對小鼠流感病毒性肺炎的影響將小鼠隨機分成正常對照組、陽性藥物組(病毒唑)、病毒對照組(即模型組)、A 組(崗梅水提液組)、B組(崗梅水洗脫液)、C組(崗梅30%乙醇洗脫液)、D組(崗梅70% 乙醇洗脫液)、E組(崗梅95%乙醇洗脫液)、F組(水提物乙酸乙酯萃取部位)、G組(水 提物正丁醇萃取部位)、H組(萃取后的水部)、，每組12只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉，選 用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株15個LD50病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0. 05ml。 從感染前Id開始按0. lml/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4d，病毒感染對照組以等 體積蒸餾水灌胃。第6天稱取小鼠體重后解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實變的程 度，摘取全肺稱重，與體重計算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)與抑制率，結(jié)果見表1。肺指數(shù)=小鼠肺重(g) X 100% /小鼠體重(g)肺指數(shù)抑制率=(對照組平均肺指數(shù)-實驗組平均肺指數(shù))X 100% /對照組平均 肺指數(shù)表1崗梅不同水體提取物部位對小鼠流感病毒性肺炎的影響 (與正常對照組比較，##:Ρ<0.01；與病毒對照組比較=P < 0.01, * =P < 0. 05)小鼠感染流感病毒4d后被處死，解剖發(fā)現(xiàn)病毒對照組小鼠的肺部病變明顯，其肺 指數(shù)與正常對照組比較具有顯著性差別(P <0.01)，表明此模型成立。病毒唑、崗梅70% 乙醇洗脫液對于流感病毒所致小鼠肺炎病變均有明顯的抑制作用，與病毒對照組相比，肺 指數(shù)有明顯好轉(zhuǎn)(P <0.01)。崗梅水提物、水提物正丁醇部位與病毒對照相比，肺指數(shù)低于 病毒對照組(P < 0. 05)。3. 2死亡保護實驗將小鼠隨機分成正常對照組、陽性藥物組(病毒唑)、病毒對照組(即模型組)、 A組(崗梅水提液組)、B組(崗梅水洗脫液)、C組(崗梅30%乙醇洗脫液)、D組(崗梅 70%乙醇洗脫液)、E組(崗梅95%乙醇洗脫液)、F組(水提物乙酸乙酯萃取部位)、G組 (水提物正丁醇萃取部位)、H組(萃取后的水部)，每組15只。各組小鼠用乙醚輕度麻醉， 選用甲1型流感病毒鼠肺適應(yīng)株5個LD50病毒濃度，滴鼻感染小鼠，每只4滴，約0. 05ml。 從感染前Id開始按0. lml/10g的劑量灌胃給藥，每天1次，連續(xù)12d，病毒感染對照組以等 體積蒸餾水灌胃。逐日觀察動物發(fā)病癥狀與死亡數(shù)，共觀察15d。計算死亡率、保護率、平均 存活天數(shù)及生命延長率。死亡保護率=(病毒感染對照組死亡率-試驗組死亡率)/病毒感染對照組死亡生命延長率=(試驗組平均存活天數(shù)_病毒感染對照組平均存活天數(shù))/病毒感 染對照組平均存活天數(shù)X 100%小鼠感染流感病毒后，大多發(fā)病在4d以后，小鼠出現(xiàn)聳毛、活動減少、體重減輕、體溫下降等癥狀，從第6日開始出現(xiàn)死亡。野菊花全極性提取物組，小鼠癥狀嚴(yán)重，死亡率 高達(dá)100 %，至實驗第10天，小鼠全部死亡。其余各組動物癥狀減輕，少數(shù)癥狀重，甚至死 亡。各組死亡情況見表2。表2崗梅不同水體提取物部位對流感病毒致小鼠死亡的保護作用
^梅水 先脫 96 10.27±4.18**6030.77 45.28
液
SH2i 123 9.26士3.37**807.69 31.13
87 11.73±4.23**53.3338.46* 65.91
醇洗脫液
96 10.32±2.56**6030.77 45.97
醇洗脫液 水提物乙酸
乙酯萃取部 150 5.40士2.67*100--
位
J 更HT 96 11.30±3.87**6030.77 59.83
醇卒取部&
i 取后的水 105 9.88±2.75**66.6723.07 39.75
_(與病毒對照組比較**=P < 0.01,* =P < 0. 05)從表2可看出，病毒唑組能明顯提高存活率和延長生命存活時間(P < 0. 01)，崗 梅70%的乙醇洗脫液亦能提高存活率(P < 0. 05)和延長生命存活時間(P < 0. 01)，其余 各組，除水體物乙酸乙酯部位外，均能延長生命存活時間(P < 0. 01)，并有提高其存活率的趨勢。4、討論由以上實驗結(jié)果可看出，崗梅70%乙醇洗脫液對流感病毒致小鼠肺部炎癥有明顯 抑制作用，并能明顯降低流感病毒感染小鼠的死亡率和延長其存活時間，表明崗梅70%乙 醇洗脫液在體內(nèi)具有明顯抗流感病毒的作用。水提物正丁醇萃取部位對流感病毒致小鼠肺 部炎癥有抑制作用，能延長其存活時間，并有提高存活率的趨勢。從以上實驗可以推斷，崗梅發(fā)揮抗流感病毒作用的主要是其70%乙醇洗脫部位和水提物正丁醇萃取部位。實驗例三、
崗梅抗流感有效部位質(zhì)量控制實驗1、材料與儀器1. 1 材料崗梅藥材，赪酮甾醇3-0-β-D-葡萄甙。1. 2 儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；紫外_可見分光光度儀；ΑΒ-8大孔吸附樹脂1.3樣品的制備1.3. 1崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎 煮0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml，上預(yù)處理好的D-101大孔樹脂 柱，重吸附3次，水洗三倍柱體積，收集水洗液，濃縮，體積680ml為溶液I (生藥量1. 5g/ ml) ο30%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮至生藥量lg/ml為溶液II (生 藥量 lg/ml)。70%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮，體積400ml，作為溶液III (生 藥量2. 5g/ml)，取10ml，干燥后得浸膏1. 25g。95%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃縮，體積200ml作為溶液IV (生 藥量 5g/ml)。1. 3. 2崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎 煮0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml (V)。乙酸乙酯少量多次萃取，回收乙酸乙酯，濃縮得浸膏ΥΠ (3. 2g)(生藥量312. 5g/ g) °水飽和正丁醇少量多次萃取，回收正丁醇，濃縮得浸膏VDI (43g)(生藥量23g/ ml),。萃取后水部800ml。1.3.3崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量50%乙醇回流提取1小時，過濾，濾渣加 6倍量50%乙醇回流提取0. 5小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml (IX )2、方法2.1對照品的選擇選擇崗梅水提取物大孔樹脂70%乙醇洗脫液分離得到的皂苷單體赪酮甾醇 3-0-β-D-葡萄甙(clerosterol 3-0-β-D-glucoside)為對照品，測定崗梅總皂苷，并對 崗梅總皂苷與赪酮留醇3-0-β-D-葡萄甙顯色后紫外-可見吸收曲線進行比較，兩者基本 一致，表明赪酮留醇3-0-β -D-葡萄甙可以作為崗梅特征性皂苷。赪酮甾醇3-0-β-D-葡萄糖苷分子結(jié)構(gòu)圖如附圖1所示。2. 2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取赪酮甾醇3-0-β-D-葡萄甙對照品13. 96mg置IOOml容量瓶中，加甲醇 溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0. 1396mg/ml的賴酮甾醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取赪酮甾醇標(biāo)準(zhǔn)溶0. 3,0. 4,0. 5,0. 6,0. 7,0. 8ml分別置IOml具塞試管中，揮干甲醇，分別加入新配 制的5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml、高氯酸0. 8ml，密塞，搖勻，置60°C水浴中加熱15min后 取出，立即用冷水冷卻至室溫，分別精密加入冰醋酸5ml，搖勻，作為供試品溶液。另精密量 取甲醇溶液適量，按照上述操作至加入冰醋酸5ml搖勻為止，作為空白溶液。取供試品溶液 和空白溶液，照分光光度法[《中華人民共和國藥典》(一部)附錄VIIA]試驗，在550nm波 長處分別測定吸收度，結(jié)果如表3，參考線一。表3標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果 參考線一赪酮留醇3-0- β -D-葡萄甙的標(biāo)準(zhǔn)曲線如附圖2所示。由此得回歸方程y = 0. 0265x-0. 0295，其線性范圍為6.98 18. 61mg/ml，R2 = 0. 9978。結(jié)果顯示，崗梅皂苷在5%香草醛冰醋酸溶液顯色后在6. 98 18. 61mg/ml范圍 內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系。2. 3崗梅抗流感有效部位總皂苷的含量測定取Iml溶液III三份按照2. 2項的方法測定；取IOg浸膏VI甲醇溶解并定容到50ml， 取Iml三份按照2. 2項的方法測定，結(jié)果如下 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進行詳細(xì)的描述，但是，本發(fā)明并不局限于所給的這些 實施例。實施例1一種崗梅的有效部位，通過以下方法制備取崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎煮0. 5 小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml，加入水飽和正丁醇少量多次萃取，回 收正丁醇，濃縮得浸膏，得崗梅抗流感有效部位。
實施例2一種崗 梅的有效部位，通過以下方法制備 取崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎煮0. 5 小時，過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml，上預(yù)處理好的D-101大孔樹脂柱，重 吸附3次，水洗三倍柱體積，再30%乙醇洗脫3倍柱體積，最后用70%乙醇洗脫3倍柱體積， 回收乙醇至無醇味，濃縮，即得。實施例3制成硬膠囊取崗梅抗流感有效部位100g，加淀粉至370g，混勻，制成顆粒，60°C以下干燥，過 篩，裝入1號膠囊，制成硬膠囊1000粒(0. 37g/粒)。服用劑量為每天2次，每次2粒。實施例4制成片劑取崗梅抗流感有效部位100g，加淀粉至250g，混勻，制成顆粒，60°C以下干燥，壓 制成1000片(0.25g/片)，包薄膜衣，即得。服用劑量為每天2次，每次2片。以上所舉實施例僅用為方便舉例說明本發(fā)明，僅為本發(fā)明之較佳實施例而已，并 非對本發(fā)明作實施任何形式上的限制，任何所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者，若在不脫離 本發(fā)明所提技術(shù)特征的范圍內(nèi)，利用本發(fā)明所揭示技術(shù)內(nèi)容做出局部更改均等變化、或修 飾的等效實施例，并且未脫離本發(fā)明的技術(shù)特征內(nèi)容，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)特征的涵蓋范 圍內(nèi)。
權(quán)利要求
一種崗梅抗流感有效部位的制備方法，其特征在于，包括下述步驟①、首先將干燥的崗梅粉碎，使用水作為溶劑進行提取，濃縮至每毫升含0.1～5g生藥，得崗梅水提濃縮液；②、其后采用以下方法中的一種，繼續(xù)精制純化方法A、萃取于崗梅水提濃縮液中，加入水飽和的正丁醇，用量為崗梅水提濃縮液0.1～10倍體積，多次萃取，回收正丁醇，濃縮即得崗梅抗流感有效部位；或方法B、樹脂吸附將前述所得的濃縮液，上大孔樹脂柱，先用3～4個柱體積的水洗去雜質(zhì)，然后用洗脫溶劑進行洗脫，收集洗脫液，濃縮即得崗梅抗流感有效部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的崗梅抗流感有效部位的制備方法，其特征在于所述洗脫溶 劑是30% 95%的乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的崗梅抗流感有效部位的制備方法，其特征在于崗梅藥材1kg，粉碎，第一次8倍量水煎煮1小時，過濾，濾渣加6倍量水煎煮0. 5小時， 過濾，棄渣，兩次濾液合并濃縮至生藥量lg/ml，其后續(xù)精制純化采用以下方法中的一種方法A 將前述所得的濃縮液，水飽和正丁醇少量多次萃取，回收正丁醇，濃縮得浸膏， 得崗梅抗流感有效部位；或方法B 將前述所得的濃縮液，上預(yù)處理好的大孔樹脂柱，重吸附3次，水洗三倍柱體 積，再30%乙醇洗脫3倍柱體積，最后用70%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇至無醇味，濃 縮，即得。
4.一種崗梅抗流感有效部位的測定方法，其特征在于，包括下述步驟①、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取赪酮留醇3-0- β -D-葡萄甙對照品約14mg置IOOml容量瓶中，加甲醇溶解并 稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為0. 14mg/ml的赪酮留醇標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密吸取赪酮留醇標(biāo)準(zhǔn)溶0. 3,0. 4,0. 5,0. 6,0. 7,0. 8ml分別置IOml具塞試管中，揮干 甲醇，分別加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml、高氯酸0. 8ml，密塞，搖勻，置60°C水 浴中加熱15min后取出，立即用冷水冷卻至室溫，分別精密加入冰醋酸5ml，搖勻，作為供試 品溶液；另精密量取甲醇溶液0. 8ml，按照上述操作至加入冰醋酸5ml搖勻為止，作為空白溶 液；取供試品溶液和空白溶液，照分光光度法試驗，在550nm波長處分別測定吸收度，繪制 標(biāo)準(zhǔn)曲線；②、崗梅抗流感有效部位總皂苷的含量測定取崗梅抗流感有效部位樣品適量，精密稱定，稀釋成約0. 15mg/ml的溶液，精密吸取 lml，置IOml具塞試管中，揮干甲醇，分別加入新配制的5%香草醛冰醋酸溶液0. 2ml、高氯 酸0. 8ml，密塞，搖勻，置60°C水浴中加熱15min后取出，立即用冷水冷卻至室溫，分別精密 加入冰醋酸5ml，搖勻，作為供試品溶液，另精密量取甲醇溶液適量，按照上述操作至加入冰 醋酸5ml搖勻為止，作為空白溶液；取供試品溶液和空白溶液，照分光光度法試驗，在550nm波長處測定吸收度，根據(jù)上述 標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總皂苷含量，崗梅抗流感有效部位總皂苷含量應(yīng)不低于50%。
全文摘要
本發(fā)明提供一種崗梅抗流感有效部位在制備治療或預(yù)防流感藥物或保健品中的應(yīng)用，其可選自于丸劑、片劑、膠囊劑、噴霧劑以及滴丸劑當(dāng)中的一種。本發(fā)明首先將干燥的崗梅粉碎，使用水作為溶劑進行提取，得崗梅水提濃縮液；其后續(xù)精制純化，采用萃取或樹脂吸附，濃縮即得崗梅抗流感有效部位。本發(fā)明的制備防治感冒、流行性感冒的藥物，上述崗梅抗流感有效部位可以加入常規(guī)輔料或賦形劑，制成臨床可接受的劑型。
文檔編號A61P31/00GK101879200SQ20101019164
公開日2010年11月10日 申請日期2010年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者李耿, 蘇子仁, 賴小平 申請人:東莞廣州中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥數(shù)理工程研究院