專利名稱：一種藥物組合物在制備提高ampk酶活性的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥學(xué)領(lǐng)域，涉及一種藥物組合物在提高AMH(酶活性藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
2型糖尿病(T2DM)是嚴(yán)重威脅人類健康的世界性公共衛(wèi)生問題。國際糖尿病聯(lián)合會(IDF) 2006發(fā)表的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，在過去20年，全球糖尿病患者人數(shù)從3000萬劇增到 2. 3億。世界衛(wèi)生組織專家預(yù)計，到2025年全球糖尿病患者將達(dá)到3. 5億。印度、中國、美國依次為全球糖尿病患者數(shù)量最多的三個國家，估計中國糖尿病患者總?cè)藬?shù)近4000萬，僅次于印度，居世界第二位，占世界的四.63%。T2DM的防治在可預(yù)見的相當(dāng)長時期內(nèi)都將是人類面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。2型糖尿病也叫成人發(fā)病型糖尿病，多在35 40歲之后發(fā)病，占糖尿病患者90% 以上。2型糖尿病病友體內(nèi)產(chǎn)生胰島素的能力并非完全喪失，有的患者體內(nèi)胰島素甚至產(chǎn)生過多，但胰島素的作用效果卻大打折扣，因此患者體內(nèi)的胰島素可能處于一種相對缺乏的狀態(tài)?？梢酝ㄟ^某些口服藥物刺激體內(nèi)胰島素的分泌。但到后期仍有部分病人需要像1型糖尿病那樣進(jìn)行胰島素治療。2型糖尿病大致具有以下3個特點第一個特點，2型糖尿病好發(fā)于成年人，尤其以中老年人為多。多次糖尿病流行病學(xué)研究結(jié)果都表明，2型糖尿病發(fā)病的年齡多在40-60歲，從40歲起，患病率逐漸增加，到老年期達(dá)到高峰。青年發(fā)病的成年型糖尿病相對來說，還是十分少見的。第二個特點是病情一般比較緩和、隱蔽，也就是說與1 型糖尿病相比，不那么來勢洶洶。2型糖尿病病人癥狀不明顯，不見得每個患者都有喝得多、 尿得多、吃得多的表現(xiàn)，多數(shù)人也沒有顯著的消瘦，當(dāng)然體力和體重不同程度地下降還是比較常見的。第三個特點就是患者往往不需要靠胰島素治療來維持生命。也就是說，患者不打胰島素也不至于很快就發(fā)生酮癥酸中毒而危及生命。所以，2型糖尿病原來又叫非胰島素依賴型糖尿病。2型糖尿病病人有時也需要使用胰島素治療，但多數(shù)是因為血糖控制不理想， 或者是因為發(fā)生了急性并發(fā)癥或者糖尿病的慢性并發(fā)癥較重，而不像1型糖尿病病人那樣是為了維持生命。2型糖尿病是比1型糖尿病更為復(fù)雜的疾病，特別是在早期體內(nèi)胰島素仍然能自我產(chǎn)生時卻更容易治療。由于早期癥狀輕微(如無酮癥酸中毒和昏迷等)且多散發(fā)，因此 2型糖尿病多在病情進(jìn)展多年后方被診斷。然而，2型糖尿病的控制不當(dāng)會導(dǎo)致諸如腎衰、 失明、傷口愈合慢、動脈病(包括冠狀動脈疾病)等嚴(yán)重的并發(fā)癥。2型糖尿病患者其主要特征為胰島素抵抗，相對胰島素缺乏和高血糖；肝臟葡萄糖產(chǎn)量的增加(如來源于肝糖原的降解)，特別是在不當(dāng)時機的增加(典型的原因是胰島素水平紊亂，而胰島素的作用之一正是調(diào)控肝臟此功能)；肌肉和脂肪組織(主要)中胰島素介導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運的減少(受體和受體后途徑缺陷)；胰島β細(xì)胞功能受損——缺失了高血糖水平刺激時早期胰島素釋放的功能。中醫(yī)藥能在糖尿病治療中起到更積極的作用?！端貑?奇病論》“……此五氣之溢也，名日脾癉。夫五味入口，藏于胃，脾為之行其精氣，津液在脾，故令人口甘也。此肥美之
3所發(fā)也，此人必數(shù)食甘美而多肥也，肥者令人內(nèi)熱，甘者令人中滿，故其氣上溢，轉(zhuǎn)為消渴”。 仝小林教授結(jié)合臨床流行病學(xué)研究，提出由土壅木郁所致中滿內(nèi)熱為(肥胖)T2DM基本病機，開郁清熱為其基本治法，經(jīng)過長期臨床確立開郁清熱方藥并確認(rèn)了開郁清熱法的臨床療效，在整體水平、組織細(xì)胞水平和分子水平初步闡述了其作用機理，包括減輕甘油三酯的異位沉積，提高受體數(shù)目和結(jié)合力，影響胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)等。開郁清熱方藥的糖敏靈是一種治療糖尿病的中藥復(fù)方藥物，由天花粉、柴胡、枳實、生大黃等中藥制成。經(jīng)與安慰劑對照發(fā)現(xiàn)，糖敏靈降低糖化血紅蛋白明顯優(yōu)于安慰劑， 糖敏靈不僅能顯著改善胰島素抵抗，還有明顯的修復(fù)和保護胰島細(xì)胞功能的作用。此外，糖敏靈對糖尿病患者有很好的降糖降脂效果，對于脂質(zhì)代謝紊亂有較好的調(diào)節(jié)作用。一磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)在能量平衡的調(diào)節(jié)中起重作用。AMH(能感受細(xì)胞的能量狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)AMP/ATP比率升高時AMH(被激活，通過磷酸化效應(yīng)蛋白或調(diào)控各種基因的表達(dá)調(diào)節(jié)能量代謝，關(guān)閉消耗能量的合成代謝途徑(如膽固醇、脂肪合成)，激活產(chǎn)生ATP的分解代謝途徑(如脂肪酸氧化)，調(diào)節(jié)SERBP-I等下游系列因子限速酶活性，降低脂質(zhì)在外周組織的沉積，改善脂質(zhì)代謝。同時，AMPK活性降低是肥胖和2型糖尿病易感人群發(fā)生胰島素抵抗的原發(fā)因素，而下丘腦的AMPK酶途徑也參與攝食行為，因此，AMPK是治療脂毒性、肥胖和2型糖尿病的關(guān)鍵靶點。本發(fā)明對糖敏靈作了更加深入的研究，意外的發(fā)現(xiàn)糖敏靈能夠提高AMH(酶活性， 為糖敏靈新的治療用途提供了依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種藥物組合物在制備提高AMPK酶活性的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的藥物組合物(又稱為糖敏靈制劑，開郁清熱制劑)，由下列重量份的中藥原料藥為組方配制而成天花粉5-40份、柴胡10-30份、枳實3-15份、生大黃1_6份， 半夏1-12份、黃芩3-15份、黃連1-12份、白芍3-15份、烏梅5-20份。上述組方中還可以加入中藥山楂，得到的配方為天花粉10-30份、柴胡10-30份、 枳實3-15份、生大黃1-6份，半夏1-12份、黃芩3-15份、黃連1_12份、白芍3-15份、烏梅 5-20份、山楂3-15份。上述組方中還可以加入中藥山楂，黃精，人參和苦瓜，得到的配方為天花粉 10-30份、柴胡10-30份、枳實3-15份、生大黃，1-6份，半夏1-12份、黃芩3-15份、黃連1_12 份、白芍3-15份、烏梅5-20份、山楂3-15份、黃精3_15份、人參3_15份、苦瓜3_15份。優(yōu)選的本發(fā)明的配方為天花粉9份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份，半夏6份、 黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅9份?；蛱旎ǚ?0份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份，半夏6份、黃芩9份、黃連6份、 白芍9份、烏梅15份、山楂9份?；蛱旎ǚ?0份、柴胡12份、枳實9份、生大黃3份，半夏6份、黃芩9份、黃連6份、 白芍9份、烏梅15份、山楂9份、黃精9份、人參9份、苦瓜9份。以上組成中，重量是以生藥計算的，份為重量份，若以克為單位，以上組成可制成藥物制劑5-50個制劑單位，所述制劑單位指，制成的成品藥物制劑，如制成固體制劑5-50 單位，口服液5-50ml等。以上組成可制成1-6次服用劑量的制劑，如作為片劑，制成18片，每次服用劑量可以是3-18片，共可服用1-6次。如作為顆粒劑，制成6袋，每次服用1-2袋，共可服用3-6次。以上組成是按重量份作為配比的，在生產(chǎn)時可按照相應(yīng)比例增大或減少，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以公斤為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以毫克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間的生藥材重量配比的比例不變。以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對于特殊病人，如重癥或輕癥，肥胖或瘦小的病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的量的配比，增加或減少不超過300%，藥效不變。以上組成中的單味中藥，尤其是臣藥和佐藥，也可以被適當(dāng)?shù)木哂邢嗤幮缘闹兴幪鎿Q，替換后的中藥制劑其藥物作用不變。本發(fā)明的中藥組合物，是通過將上述配方組成的中藥原料經(jīng)過提取或其他方式加工，制成藥物活性物質(zhì)，隨后，以該物質(zhì)為原料，需要時加入藥物可接受的載體，按照制劑學(xué)的常規(guī)技術(shù)制成的。所述活性物質(zhì)可以通過分別提取中藥原料得到，也可以通過共同提取中藥原料得到，也可以通過其他方式得到，如通過粉碎、壓榨、煅燒、研磨、過篩、滲漉、萃取、水提、醇提、酯提、酮提、層析等方法得到、這些活性物質(zhì)可以是浸膏形式的物質(zhì)，可以是干浸膏也可以是流浸膏，根據(jù)制劑的不同需要決定制成不同的濃度。本發(fā)明的中藥組合物中的藥物活性物質(zhì)，其在制劑中所占重量百分比可以是 0. 1-99.9%，其余為藥物可接受的載體。本發(fā)明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指制劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每衣寸。本發(fā)明的中藥組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、貼劑。本發(fā)明的制劑，優(yōu)選的是口服劑型，如膠囊劑、片劑、口服液、顆粒劑、丸劑、散劑、
丹劑、膏劑等。本發(fā)明的中藥組合物，其口服給藥的制劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調(diào)味劑和濕潤劑，必要時可對片劑進(jìn)行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羥基乙酸淀粉鈉。適宜的潤滑劑包括，例如硬脂酸鎂。適宜的藥物可接受的濕潤劑包括十二烷基硫酸鈉?？赏ㄟ^混合，填充，壓片等常用的方法制備固體口服組合物。進(jìn)行反復(fù)混合可使活性物質(zhì)分布在整個使用大量填充劑的那些組合物中。口服液體制劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑， 或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復(fù)配的干燥產(chǎn)品。這種液體制劑可含有常規(guī)的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇一油酸酯或阿拉伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常規(guī)的香味劑或著色劑。對于注射劑，制備的液體單位劑型含有本發(fā)明的活性物質(zhì)和無菌載體。根據(jù)載體和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的制備通常是通過將活性物質(zhì)溶解在一種載體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然后密封。輔料例如一種局部麻醉齊U、防腐劑和緩沖劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩(wěn)定性，可在裝入小瓶以后將這種組合物冰凍，并在真空下將水除去。本發(fā)明的中藥組合物，在制備成藥劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA 二鈉、EDTA鈣鈉，一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、 麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β -環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的組合物在使用時根據(jù)病人的情況確定用法用量，可每日服三次，每次 1-20劑，如1-20袋或?；蚱?。本發(fā)明的組合物是經(jīng)過以下方法制備，具體步驟如下本發(fā)明所述糖敏靈制劑的制備方法為(1)按比例取上述原料，( 加入4倍量 70-90%的乙醇，50-80°C減壓回收乙醇，70-90°C真空干燥，粉碎過80目篩，得藥物提取物； 加入輔料制成任意種藥劑學(xué)上可以接受的劑型。本發(fā)明的藥物組合物及其制備方法可參考中國專利CN1M6929。本發(fā)明其他最優(yōu)選的制備方法在實施例中。通過以下實驗進(jìn)一步說明本發(fā)明的藥物組合物的治療效果。實驗一糖敏靈對自發(fā)2型糖尿病大鼠糖、脂代謝的影響1.材料與方法1.1實驗動物以自發(fā)性2型糖尿病大鼠模型OLETF鼠和其同系非糖尿病對照鼠LETO鼠為實驗對象。大鼠皆為雄性，OLETF 40只，LETO大鼠10只，四周齡，由日本大冢制藥株式會社德島研究所引進(jìn)。大鼠在無特定病原體級(SPF級，specific pathogen-free)條件下單籠飼養(yǎng)，飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料。環(huán)境溫度控制在22-25°C，濕度為55士5%，12/12小時光照黑暗循環(huán)(光照時間7:00-19:00)，自由獲取食物和飲水。飼養(yǎng)地點中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實驗動物中心SPF級動物飼養(yǎng)房。1. 2分組及給藥1. 2. 10LETF糖尿病診斷分組標(biāo)準(zhǔn)大鼠定期行口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)。試驗前隔夜禁食15小時、不禁水，按2g/ kg予30 %葡萄糖溶液灌胃(取葡萄糖粉82. 5g，加蒸餾水定容至250ml，加熱溶解為清亮液體，得到濃度為30%葡萄糖溶液)。于空腹及糖負(fù)荷后30、60、90和120min取血，以德國內(nèi)卡BI0SEN5030快速葡萄糖分析儀測定血糖值。血糖峰值> 16. 7mmol/L和負(fù)荷后120min血糖> 11. lmmol/L診為糖尿病，具備上述一條者為糖耐量減低。1.2.2實驗動物分組及給藥至30周時，共有成模OLETF鼠27只，隨機分為模型組、羅格列酮組、糖敏靈組， LETO為空白對照組。羅格列酮組羅格列酮(文迪雅)史克必成天津有限公司產(chǎn)品每片含馬來酸羅格列酮細(xì)g，購自由美國葛蘭素史克(中國)投資有限公司，臨用前攪拌至完全溶解，以蒸餾水稀釋，給藥劑量為ang/kg/cf1。糖敏靈組(即開郁清熱組)，采用本發(fā)明實施例1的配方配制成浸膏，4°C冰箱保存，以蒸餾水稀釋，灌胃劑量為tog/kg/cf1 (按所含原藥材量計算)。模型組與空白組以等量蒸餾水灌胃，各組均灌胃給藥12周，每日1次。1. 3實驗方法1.3. 1實驗動物攝食量每周稱量大鼠攝食量1次。每周給大鼠預(yù)投足量飼料，一周后稱取余量(飼料余量稱量時間為周一上午8點)。1.3.2實驗動物體質(zhì)量體質(zhì)量每周用電子計重器稱鼠體質(zhì)量并記錄，稱取時間為周一上午9:00。1.3. 3 口服糖耐量試驗大鼠給藥前及給藥后每4周進(jìn)行口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)。試驗前隔夜禁食 15小時、不禁水，按2g/kg予30%葡萄糖溶液灌胃，空腹及糖負(fù)荷后30、60、90和120min剪尾取血，測定血糖。32周口服糖耐量實驗時，同步目內(nèi)眥取血，測定胰島素。血糖由德國內(nèi)卡BI0SEN5030快速葡萄糖分析儀測定。胰島素測定用放免法(用Linco公司大鼠胰島素專用藥盒，專人同批測定)。胰島素、血糖曲線下面積計算(AUC)采用近似梯形的計算公式，0-120min血糖 AUC = 1/2 (Omin 值 +120min 值)+30min 值 +60min 值 +90min 值。1. 3. 4血脂四項、血清游離脂肪酸、糖化血清蛋白檢測灌胃結(jié)束后，大鼠隔夜禁食12小時，次晨大鼠頸靜脈取血2. 5ml，離心取血清，-70°C保存?zhèn)錅y。甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。TC、LDL-C、HDL-C采用酶法，TG采用乙酰丙酮顯色法，轉(zhuǎn)氨酶，在日立-7150全自動生化分析儀上進(jìn)行，由廣安門醫(yī)院檢驗科檢測；糖化血清蛋白BecKmanCX-5全自動生化分析儀進(jìn)行測定，樣本為同一批測定。1. 3. 5高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗大鼠隔夜禁食，不禁水，稱重后以2%的戊巴比妥鈉進(jìn)行腹腔注射麻醉，仰臥位固定，麻醉顯效后，切開頸部皮膚，鈍性分離皮下組織及肌肉，分離暴露右側(cè)頸總動脈和左側(cè)頸內(nèi)或頸外靜脈，進(jìn)行右側(cè)頸總動脈和左側(cè)頸內(nèi)或頸外靜脈插管，穿線結(jié)扎，固定(美國產(chǎn)硬膜外麻醉用硅膠導(dǎo)管，內(nèi)徑0. 6mm，外徑Imm)，并用含肝素50U/ml的生理鹽水充滿導(dǎo)管， 保持其通暢。動脈插管以取血測血糖，靜脈插管連接小三通管，出口端與靜脈相連，兩進(jìn)口端分別與微電腦數(shù)字式微量注射泵連接以輸注胰島素及葡萄糖。插管完畢后，將大鼠靜置30分鐘后測定血糖。并同時對其進(jìn)行保溫。胰島素、20%葡萄糖分別用2個微電腦數(shù)字式微量注射泵由頸靜脈泵入，血液標(biāo)本由頸動脈導(dǎo)管獲取。將靜置30分鐘的插管大鼠頸動脈導(dǎo)管所接的注射器取下，取血一滴，用微型血糖儀在30s內(nèi)測定基礎(chǔ)血糖值。開始時先恒定輸注短效豬胰島素(輸注速率為8mU/kg · mirT1，臨用時胰島素用 0. 5%牛血清白蛋白稀釋)。每10分鐘測定血糖一次，當(dāng)血糖值超出基礎(chǔ)值士0. 5mmol/L的范圍時，即開始輸注濃度為20%葡萄糖，調(diào)整葡萄糖輸注速度(即葡萄糖輸注率，GIR)，使血糖值控制在基礎(chǔ)值士0. 5mmol/L的范圍左右，如果血糖值超出基礎(chǔ)值士0. 5mmol/L的范圍，即可繼續(xù)輸注葡萄糖。輸注葡萄糖后仍每10分鐘測一次血糖，并根據(jù)血糖值在最短的時間內(nèi)調(diào)整葡萄糖輸注率，使血糖恢復(fù)到基礎(chǔ)值士0. 5mmol/L的范圍內(nèi)。如此反復(fù)進(jìn)行，當(dāng)連續(xù)三次血糖值均穩(wěn)定在上述范圍內(nèi)，即達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。將鉗夾的處于穩(wěn)態(tài)的三個(HR值 (單位為mg · kg"1 · mirT1)求平均值。該指標(biāo)用于判斷是否存在頂及頂?shù)某潭取?. 3. 6大鼠胰腺組織的采集和處理高胰島素正葡萄糖鉗夾試驗結(jié)束后，即處死大鼠，打開腹腔，在脾、胃之間和十二指腸彎處游離胰腺，濾紙吸干水份后稱重，沿胰腺縱軸切開，取胰尾部分組織置于冰盤上， 迅速切成Imm3小塊，40C戊二醛固定，用于電子顯微鏡檢測。部分新鮮胰腺組織放入Bouins液固定，用于形態(tài)學(xué)檢測；部分新鮮胰腺組織迅速置于凍存管內(nèi)，液氮保存，用于分子生物學(xué)檢測。1. 3. 7大鼠肝臟組織的采集和處理部分新鮮肝臟組織放入10%中性福爾馬林溶液固定，用于形態(tài)學(xué)檢測；部分新鮮肝臟組織迅速置于凍存管內(nèi)，液氮保存，用于分子生物學(xué)檢測。1. 3. 8大鼠腹內(nèi)脂肪的采集和處理處死大鼠，取附睪、腸系膜、返折腹膜脂肪稱重，計為內(nèi)臟脂肪重量，并計算內(nèi)臟脂肪重量占體重百分比；部分新鮮睪周脂肪放入10%中性福爾馬林溶液固定，用于形態(tài)學(xué)檢測。1. 3. 9大鼠骨骼肌的采集和處理部分新鮮腓腸肌組織放入10%中性福爾馬林溶液固定，用于形態(tài)學(xué)檢測；部分新鮮腓腸肌組織迅速置于凍存管內(nèi)，液氮保存，用于分子生物學(xué)檢測。1. 3. 10大鼠骨骼肌及肝臟AMPK檢測前期處理分別取出實驗動物肝臟、肌肉組織，并稱重500毫克組織重量放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管加入GENMED 清理液(Reagent Α)清洗抽去清理液移入到一個液氮凍存管即刻放進(jìn)液氮罐過夜次日從液氮罐里取出，即刻用研磨棒碾碎組織成粉末狀放進(jìn)一個15毫升錐形離心管加入置于冰槽里的GENMED裂解液(Reagent B)強力渦旋震蕩30秒，充分混勻
8
放進(jìn)冰槽里孵育30分鐘，期間每10分鐘強力渦旋震蕩30秒
即刻放進(jìn)4°C臺式離心機離心10分鐘
小心移取上清液到新的無菌的1. 5毫升離心管，_80°C保存
1.3. 11胰腺及肝臟HE染色步驟
石蠟切脫蠟至水。
蒸餾水沖洗5分鐘。
切片入Harris蘇木素15分鐘。
流水沖洗5分鐘。
0. 5%鹽酸酒精分化30秒
流水沖洗10分鐘。
伊紅染色10分鐘。換兩遍自來水。
梯度酒精脫水，二甲苯I、II透明封片
1. 3. 12統(tǒng)計方法
采用SPSS16.0軟件作統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)計量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(I土S)表
示，服從正態(tài)分布的兩組間均數(shù)比較用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計，同批次多組間比較采用單因素方差分析(One-wayANOVA)，兩兩比較采用最小顯著差法(LSD)。2.結(jié)果2. 1實驗動物一般情況OLETF大鼠較LETO肥胖，活動遲緩、懶動、毛色干枯無光澤。實驗期間取血意外死亡動物5只，其中OLETF 3只，LETO 2只。2. 2大鼠攝食量比較實驗周期內(nèi)，模型組、開郁清熱組、羅格列酮組攝食量比較無明顯差異，三組攝食量均高于LETO組(P < 0. 05)。表1實驗大鼠攝食量比較(I 土 S)
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物在制備提高AMH(酶活性的藥物中的應(yīng)用，其中所述藥物組合物由下列重量份的中藥原料藥為組方配制而成天花粉5-40份、柴胡10-30份、枳實3-15份、生大黃1-6份，半夏1-12份、黃芩3-15份、黃連1-12份、白芍3_15份、烏梅5_20份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，藥物組合物組方中還可以加入中藥山楂， 得到的配方為天花粉10-30份、柴胡10-30份、枳實3-15份、生大黃1_6份，半夏1_12份、 黃芩3-15份、黃連1-12份、白芍3-15份、烏梅5_20份、山楂3_15份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，藥物組合物組方中還可以加入中藥山楂， 黃精，人參和苦瓜，得到的配方為天花粉10-30份、柴胡10-30份、枳實3-15份、生大黃， 1-6份，半夏1-12份、黃芩3-15份、黃連1-12份、白芍3_15份、烏梅5_20份、山楂3_15份、 黃精3-15份、人參3-15份、苦瓜3-15份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，藥物組合物組方為天花粉9份、柴胡12 份、枳實9份、生大黃3份，半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅9份。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，藥物組合物組方為天花粉30份、柴胡12 份、枳實9份、生大黃3份，半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅15份、山楂9份。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，藥物組合物組方為天花粉30份、柴胡12 份、枳實9份、生大黃3份，半夏6份、黃芩9份、黃連6份、白芍9份、烏梅15份、山楂9份、 黃精9份、人參9份、苦瓜9份。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物通過調(diào)節(jié)肝臟AMPK酶活性，從而改善2型糖尿病人脂代謝水平。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物通過調(diào)節(jié)肝臟AMPK酶活性，從而降低脂質(zhì)在外周組織的沉積。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物通過調(diào)節(jié)下丘腦的AMPK酶活性，從而控制攝食行為。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物組合物通過調(diào)節(jié) AMPK酶活性，治療和預(yù)防2型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥學(xué)領(lǐng)域，涉及一種藥物組合物在制備提高AMPK酶活性的藥物中的應(yīng)用，其中所述藥物組合物由下列重量份的中藥原料藥為組方配制而成天花粉5-40份、柴胡10-30份、枳實3-15份、生大黃1-6份，半夏1-12份、黃芩3-15份、黃連1-12份、白芍3-15份、烏梅5-20份。
文檔編號A61K36/8888GK102233077SQ20101015633
公開日2011年11月9日 申請日期2010年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月27日
發(fā)明者仝小林, 周水平, 甄重 申請人:天津天士力制藥股份有限公司