專利名稱：：人乳滲透物組合物及其制備和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本公開內(nèi)容涉及人乳滲透物組合物，例如包含人乳寡糖的組合物，及制備和使用此類組合物的方法。
背景技術(shù)：
：由于人乳的營養(yǎng)組成和免疫學(xué)益處，其一般是為早產(chǎn)和足月嬰兒選擇的食物。人乳的來源可以是例如供體或嬰兒的母親。然而，原料或經(jīng)常規(guī)加工的供體乳的營養(yǎng)價值存在變化，而且在大多數(shù)情況中不足以滿足早產(chǎn)嬰兒的需要。另外，存在對供體原料乳的細菌、病毒和其它污染的可能性。即使母親自身的奶水對于早產(chǎn)嬰兒常常在營養(yǎng)上也是不足夠的。經(jīng)常期望喂養(yǎng)用多種補充劑(例如寡糖)強化的早產(chǎn)嬰兒乳。含有人乳寡糖的組合物也可以作為補充劑用于患有或有風(fēng)險形成多種病癥和疾病，例如感染或免疫缺陷，且需要形成和/或維持適當(dāng)?shù)哪c道菌群的嬰兒、兒童和成人。發(fā)明概述本公開內(nèi)容的特征在于人乳滲透物組合物，例如包含人寡糖、肽、和其它小分子的組合物，及制備和使用此類組合物的方法。滲透物組合物可以含有各種水平的營養(yǎng)組分，而且可以在喂養(yǎng)早產(chǎn)和足月嬰兒，及患有多種病癥和/或疾病的兒童和成人中使用。組合物自人乳的過濾部分等生成。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了，令人驚訝地，滲透物(其已經(jīng)被認為是缺乏重要營養(yǎng)價值的廢產(chǎn)物)含有較高生物學(xué)活性內(nèi)容物，包括人寡糖。發(fā)現(xiàn)了與母乳相比，申請U.S.S.N.11/947，580(2008/0124430)中所描述的滲透物和人乳產(chǎn)物(天然的和濃縮的兩者)的寡糖內(nèi)容物在大小和組成方面基本上沒有差異。因為獲得滲透物的起始材料是合并的人乳，所以滲透物和其它經(jīng)加工的人乳產(chǎn)物(例如那些在申請U.S.S.N.11/947，580中所描述的)可以含有與個體母乳相比種類更多的寡糖。因此，滲透物可以添加到非人(例如牛)和/或人乳以提高其營養(yǎng)和/或免疫學(xué)價值。還可以使用滲透物來對抗感染，治療炎性腸病并幫助形成和維持適當(dāng)?shù)哪c道菌群。所述滲透物還可以進行稀釋或濃縮，并以諸如營養(yǎng)補充劑等形式使用?？梢宰詽B透物獲得相似的益處，其通過加工合并的人乳，并將其對嬰兒，例如早產(chǎn)嬰兒施用(例如申請U.S.S.N.11/947，580中所描述的合并的人乳)來獲得。使用本文中作為特征的方法來加工大體積的供體乳，例如約75-2，000升/批起始材料。在第一個方面，本發(fā)明提供了一種組合物，其包含乳和人乳滲透物。在一個實施方案中，所述乳是人乳。在另一個實施方案中，所述乳是非人乳。在一些實施方案中，所述非人乳是牛乳。在一些實施方案中，所述組合物的滲透物是通過從人乳過濾液體獲得的。在一些實施方案中，所述組合物是通過從人脫脂乳過濾液體獲得的。在一些實施方案中，所述組合物進一步包含維生素和礦物。在第二個方面，本發(fā)明提供了一種營養(yǎng)組合物，其包含濃縮的或稀釋的人乳滲透物。在一個實施方案中，所述滲透物是通過從人乳過濾液體獲得的。在其它實施方案中，所述滲透物是通過從人脫脂乳過濾液體獲得的。在一些實施方案中，所述組合物進一步包含維生素和礦物。在第三個方面，本發(fā)明提供了一種制備濃縮的或稀釋的人乳滲透物的方法，包括(a)獲得人乳；(b)將所述乳分成乳脂和脫脂乳；(C)過濾所述脫脂乳以獲得滲透物；(d)保留所述滲透物；并(e)稀釋、濃縮、或干燥所述滲透物。在一些實施方案中，(e)中的稀釋步驟包含將非人乳添加至所述滲透物。在一些實施方案中，所述非人乳是牛乳。在本發(fā)明的其它方面，(e)中的稀釋步驟包括將水或緩沖液添加至所述滲透物。在一些實施方案中，(e)中的濃縮步驟包括反滲透。在一些實施方案中，制備濃縮的或稀釋的人乳滲透物的方法進一步包括將維生素和礦物添加至步驟(d)后的滲透物。在一些實施方案中，步驟(C)中的過濾包括超濾。在一些實施方案中，制備濃縮的或稀釋的人乳滲透物的方法進一步包括(f)降低生物負荷(bioburden)。在一些實施方案中，降低生物負荷包括巴氏消毒或無菌過濾。在第四個方面，本發(fā)明提供了一種對受試者施用包含人乳寡糖的滲透物組合物的方法，包括(a)獲得人乳；(b)將所述乳分成乳脂和脫脂乳；(c)過濾所述脫脂乳以獲得滲透物；(d)保留所述滲透物；并(e)對所述受試者施用所述滲透物。在一些實施方案中，所述受試者是人早產(chǎn)或足月嬰兒。在一些實施方案中，口服或表面(topically)施用所述組合物。在一些實施方案中，經(jīng)由飼管口服施用所述組合物。在第五個方面，本發(fā)明提供了一種在受試者中建立有益的腸道菌群的方法，包括對受試者施用包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物。在一些實施方案中，所述受試者是人。在一些實施方案中，所述受試者是人早產(chǎn)或足月嬰兒。在一些實施方案中，所述人早產(chǎn)或足月嬰兒在出生后喂養(yǎng)配方食品(formula)。在一些實施方案中，在可用于建立有益的腸道菌群的其它組合物之前、同時、或之后施用所述組合物。在一些實施方案中，可用于建立有益的腸道菌群的其它組合物是益生細菌或植物多糖。在一些實施方案中，與非人乳配制劑一起施用所述組合物。在一些實施方案中，所述組合物在與非人乳配制劑的混合物中。在一些實施方案中，所述組合物是人乳超濾滲透物。在一些實施方案中，所述滲透物是通過過濾人乳獲得的。在一些實施方案中，所述滲透物是通過過濾人脫脂乳獲得的。在一些實施方案中，建立有益的腸道菌群包括使雙歧桿菌或乳桿菌或兩者在腸道建群。在第六個方面，本發(fā)明提供了一種治療具有感染或有風(fēng)險形成感染的受試者的方法，包括對所述受試者施用包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物。在一些實施方案中，所述感染的癥狀是由細菌、細菌毒素、或病毒引起的。在一些實施方案中，所述受試者是人。在一些實施方案中，所述受試者是人新生兒、嬰兒、兒童、或成人。在一些實施方案中，治療包括改善所述感染的至少一種癥狀。在一些實施方案中，治療包括促進有益的腸細菌的形成。在一些實施方案中，所述有益的腸細菌是雙歧桿菌或乳桿菌或兩者。在第七個方面，本發(fā)明提供了一種治療患有炎性腸病的受試者的方法，該方法包括對所述受試者施用包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物。在一些實施方案中，所述炎性腸病是下列中的一種或多種克羅恩氏病(Crohn’sdisease)、刺激性腸病(irritableboweldisease)、潰瘍性結(jié)腸炎(UC)、未確定型結(jié)腸炎(indeterminatecolitis)、顯微6鏡下結(jié)腸炎(microscopiccolitis)、膠原性結(jié)腸炎和偽膜性結(jié)腸炎(pseudomembrenouscolitis)。在一些實施方案中，所述受試者是人。在一些實施方案中，所述受試者是人新生兒、嬰兒、兒童、或成人。在一些實施方案中，治療包括改善炎性腸病的至少一種癥狀。在一些實施方案中，治療包括促進有益的腸細菌的形成。在一些實施方案中，所述有益的腸細菌是雙歧桿菌或乳桿菌或兩者。在第八個方面，本發(fā)明提供了一種制備營養(yǎng)補充劑的方法，包括獲得包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物，并用所述組合物補充非人乳配制劑。在一些實施方案中，所述組合物是濃縮的或稀釋的人乳滲透物組合物。在一些實施方案中，所述滲透物組合物是通過從人乳過濾液體獲得的。在一些實施方案中，所述滲透物組合物是通過從人乳的脫脂乳部分過濾液體獲得的。在第九個方面，本發(fā)明提供了一種制備濃縮的或稀釋的人乳滲透物的方法，包括(a)獲得人乳；(b)將所述乳分成乳脂和脫脂乳；(c)過濾所述脫脂乳以獲得滲透物；(d)保留所述滲透物；并(e)稀釋、濃縮、或干燥所述滲透物。在一些實施方案中，(e)中的稀釋步驟包括將非人乳組合物添加至所述滲透物。在一些實施方案中，所述非人乳組合物是牛乳。在一些實施方案中，(e)中的稀釋步驟包括添加去離子水或緩沖液。在一些實施方案中，(e)中的濃縮步驟包括反滲透。在一些實施方案中，所述方法進一步包括將維生素和礦物添加至步驟(d)后的所述滲透物。在一些實施方案中，步驟(c)中的過濾包括超濾。在一些實施方案中，方法進一步包括(f)降低生物負荷。在一些實施方案中，降低生物負荷包括巴氏消毒或無菌過濾。通過提及而將本文中所提及的所有專利、專利申請、和參考文獻完整收錄。附圖簡述圖1是制備人乳滲透物的方法的實施方案的圖。圖2是顯示樣品42、48、49、53、和M的寡糖組成的概要的圖。圖3是人乳和樣品42、48、M(均為成批終產(chǎn)物(bulkfinalproduct))、53(超濾滲透物)、和49(供體乳的初始集合)中找到的共同的人乳寡糖的柱狀圖。圖4是顯示人乳中的游離寡糖的典型質(zhì)譜概況的圖。圓點表示人乳寡糖。圖5是顯示對樣品42(PR0LACT+H2MF)(參見U.S.S.N.11/947，580)獲得的質(zhì)譜圖概況的圖。圓點表示人乳寡糖。圖6是顯示對樣品53(PR0LACT+H2MF方法副產(chǎn)物或滲透物)(參見U.S.S.N.11/947，580)獲得的質(zhì)譜圖概況的圖。圓點表示人乳寡糖。圖7是自所收集的人全乳分離滲透物的方法的圖示。發(fā)明詳述本公開內(nèi)容的特征在于人乳滲透物組合物，例如包含人寡糖、肽、和其它小分子的組合物及制備和使用此類組合物的方法。所述組合物含有各種水平的營養(yǎng)組分，而且可以在喂養(yǎng)或施用于早產(chǎn)和足月嬰兒，及患有多種病癥和/或疾病的兒童和成人中使用。所述組合物自人脫脂乳的過濾部分等生成。本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了，令人驚訝地，滲透物(其已經(jīng)被認為是缺乏重要營養(yǎng)價值的廢產(chǎn)物)含有高生物學(xué)活性內(nèi)容物，包括人寡糖。因為獲得滲透物的起始材料是合并的人乳，所以滲透物可以含有比個體母乳更離散的分子形式或類型的寡糖。滲透物可以添加到非人或人乳以提高其營養(yǎng)價值。例如，滲透物可以添加到人乳強化劑(fortifier)和標(biāo)準化的乳組合物，其記載于2007年11月四日提交的申請U.S.S.N.11/947，580，通過提及而將其內(nèi)容完整收入本文。滲透物還可以添加到非人乳配方食品，例如牛乳配制劑或人和非人乳配制劑的混合物。不限于理論，本發(fā)明人認為可以使用包含人乳寡糖、肽、和其它小分子的滲透物組合物來促進早產(chǎn)嬰兒或新生兒中的有益腸道菌群的形成，并維持兒童和成人中的適當(dāng)?shù)哪c道菌落。滲透物也可以作為補充劑用于患有或有風(fēng)險形成多種病癥和疾病，例如感染或免疫缺陷的嬰兒、兒童和成人。滲透物可以進行稀釋或濃縮和/或用維生素和礦物強化，并且以諸如營養(yǎng)補充劑等形式使用。使用本文中作為特征的方法來加工大體積的供體乳，例如約75-2，000升/批起始材料。本公開內(nèi)容的組合物自人供體乳，例如合并的乳(其經(jīng)歷嚴格的遺傳篩選和加工(例如以降低生物負荷))生成?！皾B透物”(在本文中又稱為“滲透物組合物”或“乳加工副產(chǎn)物”或“乳副產(chǎn)物”)意為已經(jīng)通過過濾(例如超濾)人乳(例如脫脂乳)來加工的乳部分。通常，超濾中所使用的篩號的大小是lKda-1，OOOKda。通過過濾的液體含有顯著量的寡糖，并且稱為滲透物。“全乳”意為尚未除去脂肪的乳。“脫脂乳”意為已經(jīng)除去至少75%的脂肪的乳。術(shù)語“未成熟的”、“早產(chǎn)的”和“低出生重量(LBW)”嬰兒可互換使用，指小于37周孕齡出生和/或具有小于2500gm出生重量的嬰兒。術(shù)語“足月，，嬰兒用于指在37周孕齡后出生和/或具有大于2500gm的出生重量的嬰兒。“生物負荷(bioburden)”意為可能存在于乳中的微生物學(xué)污染物和病原體(一般為活的)，例如病毒、細菌、霉菌、真菌等。滲透物組合物和獲得所述組合物的方法本文中作為特征的滲透物組合物自人乳，例如合并的供體乳獲得。獲得和篩選人供體乳(包括證明供體合格)的方法記載于申請U.S.S.N.11/947，580和U.S.S.N.11/526，127(2007/0098863)，通過提及而將其內(nèi)容完整收入本文。圖1顯示了獲得人乳滲透物的方法的一個實施方案。如上文所討論的，為了這兩個鑒定目的并避免污染，對供體乳仔細地分析。將供體乳冷凍，并在期望時融化，并合并。然后，對其進行篩選(圖1的步驟1)，例如遺傳篩選，例如通過聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)進行。完成遺傳篩選以鑒定任何污染物，例如病毒，例如HIV-1、HBVJP/或HCV。然后，乳經(jīng)歷過濾，例如通過約200微米濾器(步驟2)，和熱處理(步驟3)。例如，可以于約63°C或更高處理所述組合物達約30分鐘或更久。在步驟4中，將乳轉(zhuǎn)移到分離器，例如離心機，以分開乳脂與脫脂乳?？梢詫⒚撝檗D(zhuǎn)移到第二加工罐中，在那里它保持于約2至8°C，直至過濾步驟(步驟幻。任選地，在步驟4中與脫脂乳分開的乳脂可以再次經(jīng)歷分離以產(chǎn)生更多脫脂乳。在分開乳脂和脫脂乳(步驟4)后，可以將期望量的乳脂添加至脫脂乳，并且組合物經(jīng)歷進一步過濾(步驟5)，例如超濾，例如用I-IOOOKda之間的孔徑。此方法通過濾出先前認為一般是水或稱為滲透物的東西來濃縮脫脂乳中的營養(yǎng)物。然而，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了滲透物保留顯著量的寡糖，而且自身可以用作例如營養(yǎng)補充劑或以本文中所描述的其它方式使用。脫脂乳可以經(jīng)歷進一步加工，用于人乳強化劑或標(biāo)準化的人乳組合物，如記載于例如U.S.S.N.11/947，580的。例如，可以將脫脂乳與乳脂混合以獲得成批終產(chǎn)物，對于生物負荷進行巴氏消毒并加工。保留滲透物(步驟6)，并可以用作營養(yǎng)補充劑。圖7還描繪了“滲透物”和“第二滲透物”的生成，后一種是通過再次過濾“滲透物”生成的?？梢詫B透物進一步加工，例如濃縮或稀釋和/或巴氏消毒?？梢詫B透物冷凍，并貯存，供未來使用?？梢酝ㄟ^反滲透來濃縮或者使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的技術(shù)來干燥滲透物。然后，可以對所得的液體產(chǎn)物進行巴氏消毒，無菌過濾，或者進行其它生物負荷降低步驟。然后，會將產(chǎn)物裝到終產(chǎn)物容器中。還可以給滲透物補充維生素和/或礦物，例如，鈣、氯化物、鋅、銅、鐵、錳、鎂、磷、鉀、鈉、硒、鉻、鉬、碘、?；撬?、肉堿、膽堿、維生素A、維生素Bi、維生素B2、維生素B6、維生素B12、維生素C、維生素D、維生素E、維生素K、生物素、葉酸、泛酸、煙酸、和肌醇。維生素和礦物對于例如嬰兒的適當(dāng)營養(yǎng)和發(fā)育是重要的。痕量礦物與細胞分裂、免疫功能和生長有關(guān)。一些關(guān)鍵的痕量礦物包括銅、鎂、和鐵(其對于例如合成血紅蛋白、肌紅蛋白和含鐵的酶是重要的)。鋅是例如生長、許多酶的活性、和DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成所需要的。銅是例如數(shù)種酶的活性所必需的。錳是例如骨和軟骨的發(fā)育所需要的，而且在多糖和糖蛋白的合成中是重要的。維生素A是一種對于例如生長、細胞分化、視力和免疫系統(tǒng)的適當(dāng)運行至關(guān)重要的脂溶性維生素。維生素D對于例如鈣和(程度較低)磷的吸收，及對于骨的發(fā)育是重要的。維生素E(生育酚)阻止細胞中的多不飽和脂肪酸的過氧化，如此阻止組織損傷。葉酸在例如氨基酸和核苷酸代謝中發(fā)揮作用。如此，可以根據(jù)需要給滲透物組合物補充各種礦物和/或維生素。應(yīng)用本公開內(nèi)容的特征在于包含人乳滲透物的組合物和使用此類組合物的方法?？梢岳缛缟衔乃枋鐾ㄟ^從過濾脫脂乳過濾液體來獲得滲透物組合物。所述組合物含有顯著數(shù)量的如下文實施例1中所描述的那樣巖藻糖基化和/或唾液酸化的人寡糖。人乳還含有肽和其它小分子，其也可以存在于滲透物中，例如可以通過在超濾過程中改變孔徑來獲得。因為滲透物源自合并的人乳，所以它可以含有比在個體母乳中找到的形式更多形式的寡糖。所述滲透物組合物可以單獨使用或者與其它乳組合物，例如U.S.S.N.11/947，580中所描述的人乳組合物和非人乳配方食品一起使用?？梢詫υ绠a(chǎn)或足月嬰兒施用滲透物或補充有滲透物的人和非人乳配方食品，以例如促進適當(dāng)腸道菌群的形成，治療以免疫缺陷為特征的狀況，并治療或預(yù)防感染。還可以對兒童和成人單獨地或與益生菌劑一起施用滲透物以促進有益的腸道菌落，治療以免疫缺陷為特征的狀況，并治療或預(yù)防感染。可以例如口服或表面施用滲透物組合物以治療皮膚狀況。人乳寡糖許多因素可以影響新生的，例如過早出生的嬰兒的臨床結(jié)果。早產(chǎn)嬰兒具有脆弱的免疫系統(tǒng)、不成熟的消化系統(tǒng)、和增加的總熱量和特定營養(yǎng)需要(在與足月嬰兒在大體上比較時)。如此，向此類嬰兒提供的營養(yǎng)在其生長和發(fā)育中是一項重要的因素。人乳由于其營養(yǎng)組成和免疫學(xué)益處而一直被公認為早產(chǎn)和足月嬰兒的理想食物。然而，不是每位母親都能或會母乳喂養(yǎng)她的嬰兒(或者使用吸奶器，并貯存她的奶水)。例如，患有某些疾病，例如活動性結(jié)核，或者正在接受放射性同位素、抗代謝物、或化學(xué)療法施用的母親不可母乳喂養(yǎng)其嬰兒。另外，母親自身的奶水可能不含足以維持早產(chǎn)嬰兒的營養(yǎng)含量。供體乳的使用也可以是有問題的，因為此類乳可能不含對于早產(chǎn)嬰兒足夠的營養(yǎng)。本公開內(nèi)容的特征在于包含來自合并的人乳的寡糖的滲透物組合物，和使用此類組合物以有益于例如未成熟人嬰兒、足月嬰兒、兒童、和成人的用途。人乳寡糖是含有在還原端的乳糖和通常在非還原端的巖藻糖或唾液酸的碳水化合物。(Morrow等，J.Nutrit.1351304-07，200。這些末端糖是最強烈影響細菌的選擇性生長和寡糖與其它分子或細胞，包括腸腔中的細菌病原體的相互作用的殘基。例如，唾液酸是腦神經(jīng)節(jié)苷脂的結(jié)構(gòu)和功能組分，而且已經(jīng)牽涉嬰兒的神經(jīng)發(fā)育。寡糖可以是游離的或者以糖蛋白、糖脂等形式綴合，并且分類為聚糖。它們在乳糖和脂質(zhì)之后構(gòu)成人乳的第三多的固體組分(Morrow等)。然而，大多數(shù)這些乳寡糖不是嬰兒可以消化的，而且可以在嬰兒糞便中基本上完整發(fā)現(xiàn)。本公開內(nèi)容描述了人乳滲透物(其實際上含有極其多種寡糖，因為其源自捐贈乳的集合)中存在的這些寡糖的各種用途，所述人乳滲透物先前被認為是加工人乳的廢產(chǎn)物。可以使用滲透物或自滲透物獲得的組合物(單獨地或與人和非人乳配制劑組合或與藥物或益生菌劑組合)，例如以促進有益的腸道菌群，對抗感染，改善以免疫缺陷為特征的狀況的癥狀，并提供額外的營養(yǎng)。這些組合物對于各個年齡的接受者從早產(chǎn)嬰兒到兒童至成人可以是有益的。腸道菌群人腸道菌群，即腸道中存在的細菌執(zhí)行多種功能，包括某些多糖的消化和腸粘膜免疫系統(tǒng)的形成。腸道細菌可以刺激與腸粘膜有關(guān)的淋巴樣組織以生成針對病原體的抗體，僅留下有用的物種，在嬰兒期中形成耐受性。正常胎兒的胃腸道是無菌的。在出生期間及此后不久，嬰兒的腸道被多種細菌定殖。細菌的來源可以是母體和/或環(huán)境。出生后，多種細菌可以經(jīng)由哺乳和接觸從母親轉(zhuǎn)移到嬰兒。大多數(shù)嬰兒GI道最初被大量的大腸桿菌(E.coli)和鏈球菌(Streptococci)定殖。最后，母乳喂養(yǎng)的嬰兒變成由雙歧桿菌支配，而配方食品喂養(yǎng)的嬰兒在腸道中具有多種細菌，包括腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、腸球菌(Enterococci)、雙歧桿菌、擬桿菌(Bacteroides)、和梭菌(Clostridia)。在引入固體食物和斷奶后，母乳喂養(yǎng)的嬰兒的微生物區(qū)系變得與喂養(yǎng)配方食品的嬰兒的微生物區(qū)系相似。經(jīng)過約2年，兒童的糞便微生物區(qū)系與成人的微生物區(qū)系相似。鑒于腸道菌群的重要性，在出生時形成有益的細菌群并使其在整個兒童和成年期得到維持是至關(guān)重要的。本文中作為特征的組合物和方法可以有助于建立并維持此類有益的腸道菌群?？梢詫υ绠a(chǎn)嬰兒、足月嬰兒、兒童、和成人施用包含人乳寡糖的組合物，例如人乳滲透物或源自人乳滲透物的組合物。它們可以單獨地或與其它有助于建立有益腸道菌群的組合物，例如益生細菌或益生性植物多糖組合施用，以形成共生組合物。它們可以作為人乳配制劑(例如申請U.S.S.N.11/947,580中所描述的組合物)或非人乳嬰兒配方食品的一部分施用。不限于理論，認為目前的滲透物組合物可以促進乳桿菌和/或雙歧桿菌定殖于腸道。乳桿菌和雙歧桿菌兩者都認為是益生菌劑，即保護其宿主并預(yù)防疾病的細菌。雙歧桿菌是有助于消化，而且與變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生率降低和癌癥預(yù)防有關(guān)的厭氧細菌。乳桿菌是將乳糖和其它糖轉(zhuǎn)化成乳酸，而且可以擁有消炎和抗癌特性的細菌。另外，可以對兒童或成人施用含有人乳寡糖的本發(fā)明的人乳滲透物或源自人乳滲透物的組合物以治療炎性腸病。炎性腸病是一個集合性術(shù)語，其涵蓋相關(guān)的，但獨特的慢性胃腸道炎性病癥，諸如克羅恩氏病、刺激性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、未確定型結(jié)腸炎、顯微鏡下結(jié)腸炎和膠原性結(jié)腸炎。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了與健康個體相比，活動性克羅恩氏病患者在其糞便中具有顯著更少的可回收的雙歧桿菌。觀察到雙歧桿菌數(shù)目的這種降低與β-D半乳糖苷酶生成和活性水平降低呈正相關(guān)(Favier，C.等，Dig.Dis.Sci.1997；42:817-822)。β-D半乳糖苷酶是一種由雙歧桿菌生成的酶。這些結(jié)果支持其它研究中提出的建議，即雙歧桿菌菌株可以在維持平衡的健康的腸微生物區(qū)系中發(fā)揮重要的作用。因此，依照本發(fā)明，本發(fā)明的富含寡糖的滲透物對雙歧桿菌定殖于腸道中的菌落促進作用可用于改善炎性腸病的癥狀。類似地，本發(fā)明的組合物可用于治療偽膜性結(jié)腸炎(又稱為艱難梭菌相關(guān)結(jié)腸炎(C.difficile-relatedcolitis))，即由于產(chǎn)毒素的艱難梭菌菌株比正常菌群過度生長所致的廣譜抗生素治療延長的一種常見并發(fā)癥。本發(fā)明的滲透物組合物可以在炎性腸病的任何其它治療，包括益生性配制劑、抗炎藥或免疫調(diào)節(jié)劑之前、期間或之后施用。感染認為人乳寡糖執(zhí)行多種抗感染功能，例如抑制病原體結(jié)合。如此，可以使用本文中作為特征的且含有極其多種人乳寡糖(因為它們源自合并的人乳)的滲透物組合物來保護嬰兒、兒童、和成人免于多種類型的感染。例如，可以保護接受本組合物施用的早產(chǎn)和足月嬰兒免于感染性腹瀉、壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)、呼吸道感染、菌血癥、腦膜炎等。兒童和成人可以同樣受益于組合物的施用?？梢栽诟腥景l(fā)作后(以改善和/或消除其癥狀)，或者在感染前(對于認為有風(fēng)險的個體)施用所述組合物?？梢越?jīng)由多種手段，包括口服或表面(例如以治療皮膚感染和其它皮膚狀況)施用組合物。一般地，對于通過應(yīng)用源自人乳的寡糖、肽、或其它小分子會得到改善或消除的任何狀況或病癥，可以對受試者，例如各個年齡的人受試者施用本文中作為特征的滲透物組合物。試劑盒本公開內(nèi)容的特征還在于包含本文中所描述的人乳滲透物組合物的試劑盒和用于混合組合物與人原料乳或非人原料乳的容器。容器可以包括瓶，例如刻度瓶以幫助適當(dāng)稀釋，注射器，罐，和本領(lǐng)域已知的其它容器。本公開內(nèi)容的實施方案可以在不偏離本公開內(nèi)容的精神和范圍的前提下以與本文中所列的方式不同的方式實施。因此，應(yīng)當(dāng)在所有方面中認為實施方案是例示性的，而非限制性的。實施例1人乳滲透物的收集和分析從遍及美國的篩選出的供體收集母乳，并將其于-20°C貯存多達12個月。加工合并的供體人乳，并對多個樣品分析其寡糖組成。使用來自20-50名供體的合并物來生成申請U.S.S.N.11/947，580中所描述的人乳強化劑組合物。加工前，留出初始合并的供體乳的樣品，用于分析(表III中的樣品49)。將合并的乳篩選，過濾，熱處理，分成脫脂乳和乳脂，并將脫脂乳超濾。留出濾出組合物，即滲透物的一部分，用于分析(表IV中的樣品53)。將脫脂乳與乳脂混合，并巴氏消毒。留出成批終1產(chǎn)物的一部分，用于分析(分別為表I、II和V中的樣品42、48、和54)。將留出用于分析的每份乳樣品(0.5mL)用0.5mL純水稀釋，并于4°C以4000rpm離心30分鐘以分離脂肪。分析未稀釋的滲透物。用4個體積O1)的氯仿-甲醇溶液(ν/ν)處理無脂肪的級分。于4°C以3500rpm將乳狀液離心30分鐘，并棄去下方的氯仿層和變性的蛋白質(zhì)。收集上層，添加2個體積的純乙醇，并讓蛋白質(zhì)級分于4°C過夜沉淀。通過于4°C以3500rpm離心30分鐘來進行蛋白質(zhì)分離后，將清澈的上部溶液收集并冷凍干燥。使用所得的粉末(冷凍干燥的富含寡糖的級分)來進行寡糖分析。使用去離子水中1.0M氫化硼鈉來將寡糖還原成糖醇形式，并于42°C溫育過夜。反應(yīng)后，使用無孔石墨化碳筒(GCC-SPE)通過固相提取自污染物純化寡糖。供脫鹽用的無孔石墨化碳筒(150mg床重量，4mL柱大小)購自Alltech(Deerfield，IL,USA)。使用speedvac離心機來實施溶劑的蒸發(fā)。固相提取。使用前，用3倍柱體積的在0.05%三氟乙酸(TFA)中的80%乙腈(ν/ν)，接著用3倍柱體積的去離子水來清洗每個GCC-SPE筒。將寡糖混合物加載到筒上后，通過用8個筒體積的去離子水清洗來除去鹽和殘留的肽。然后，使用水中的10%乙腈(ν/ν)和水中的20%乙腈(ν/ν)自柱洗脫寡糖。收集每個級分(6mL)，并在真空中蒸發(fā)，之后是MS分析。質(zhì)譜分析。在HiResMALDI(IonSpecCorp.，Irvine,CA)上實施基質(zhì)輔助激光解吸/離子化(MALDI)傅里葉變換-離子回旋共振質(zhì)譜術(shù)(FTICRMS)，所述HiResMALDI(IonSpecCorp.，Irvine,CA)裝備有外部MALDI源、7.0特斯拉超導(dǎo)磁體和脈沖Nd:YAG激光(355nm)。使用2，5_二氫苯甲酸(DHB)作為基質(zhì)(50%乙腈/50%水(ν/ν)溶液中5mg/100yL)。將寡糖溶液(IuL)應(yīng)用于MALDI探頭，接著添加0.OlMNaCl(0.5μL)和基質(zhì)溶液(lPL)。在氣流下干燥樣品，并將其進行質(zhì)譜術(shù)。表I-IV中呈現(xiàn)了上文所討論的多個樣品的組成，并在圖2中顯示了匯總。對于人乳中已知的寡糖，將實驗的質(zhì)量電荷比率(m/zexpe)與計算的質(zhì)量電荷比率(m/zcal)匹配。表III-V中顯示了特定樣品的質(zhì)譜概況(表III中的人乳樣品，表IV中的成批產(chǎn)物，和表V中的滲透物)。對5種樣品的質(zhì)譜分析揭示人乳典型的且在大小、組成、和豐度上有所變化的寡糖的高度復(fù)雜混合物。所鑒定的寡糖來自兩個主要種類(1)含有半乳糖、N-乙酰葡糖胺、乳糖、和果糖(Hex、HexNAc和Fuc)的中性寡糖；和(含有相同寡糖組成且添加有N-乙酰神經(jīng)氨酸(NeuAC)的陰離子寡糖。先前的調(diào)查(Ninonuevo等，J.Agric.FoodChem.2008,547471-7480)鑒定出個體間在未過濾乳中的特定寡糖的總數(shù)和相對豐度上的多樣性。如此，所分析的乳樣品(天然的或濃縮的)確認所有樣品在表面上顯示先前發(fā)現(xiàn)在來自不同供體的人乳中所共有的大多數(shù)寡糖。魁樣品42(成批終產(chǎn)物)寡糖權(quán)利要求1.一種營養(yǎng)組合物，其包含乳和人乳滲透物。2.權(quán)利要求1的營養(yǎng)組合物，其中所述乳是人乳。3.權(quán)利要求1的營養(yǎng)組合物，其中所述乳是非人乳。4.權(quán)利要求3的營養(yǎng)組合物，其中所述非人乳是牛乳。5.權(quán)利要求1的組合物，其中所述滲透物是通過從人乳過濾液體獲得的。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述人乳是人脫脂乳。7.權(quán)利要求1的組合物，其進一步包含維生素和礦物。8.一種營養(yǎng)組合物，其包含濃縮的或稀釋的人乳滲透物。9.權(quán)利要求8的組合物，其中所述滲透物是通過從人乳過濾液體獲得的。10.權(quán)利要求8的組合物，其中所述滲透物是通過從人脫脂乳過濾液體獲得的。11.權(quán)利要求8的組合物，其進一步包含維生素和礦物。12.—種制備濃縮的或稀釋的人乳滲透物的方法，該方法包括(a)獲得人乳；(b)將所述乳分成乳脂和脫脂乳；(c)過濾所述脫脂乳以獲得滲透物；(d)保留所述滲透物；并(e)稀釋、濃縮、或干燥所述滲透物。13.權(quán)利要求12的方法，其中(e)中的稀釋步驟包括將非人乳組合物添加至所述滲透物。14.權(quán)利要求12的方法，其中所述非人乳組合物是牛乳。15.權(quán)利要求12的方法，其中(e)中的稀釋步驟包括將水或緩沖液添加至所述滲透物。16.權(quán)利要求12的方法，其中(e)中的濃縮步驟包括反滲透。17.權(quán)利要求12的方法，其進一步包括將維生素和礦物添加至步驟(d)后的所述滲透物。18.權(quán)利要求12的方法，其中所述過濾包括超濾。19.權(quán)利要求12的方法，其進一步包括(f)降低生物負荷。20.權(quán)利要求19的方法，其中降低生物負荷包括巴氏消毒或無菌過濾。21.一種對受試者施用包含人乳寡糖的滲透物組合物的方法，該方法包括(a)獲得人乳；(b)將所述乳分成乳脂和脫脂乳；(c)過濾所述脫脂乳以獲得滲透物；(d)保留所述滲透物；并(e)對所述受試者施用所述滲透物。22.權(quán)利要求21的方法，其中所述受試者是人早產(chǎn)嬰兒或人足月嬰兒。23.權(quán)利要求22的方法，其中口服或表面施用所述組合物。24.權(quán)利要求23的方法，其中經(jīng)由飼管口服施用所述組合物。25.一種在受試者中建立有益的腸道菌群的方法，該方法包括對所述受試者施用包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述受試者是人。27.權(quán)利要求25的方法，其中所述受試者是人早產(chǎn)嬰兒或人足月嬰兒。28.權(quán)利要求25的方法，其中所述受試者是出生后喂養(yǎng)配方食品的人早產(chǎn)嬰兒或出生后喂養(yǎng)配方食品的足月嬰兒。29.權(quán)利要求25的方法，其中在可用于建立有益的腸道菌群的其它組合物之前、同時、或之后施用所述組合物。30.權(quán)利要求29的方法，其中其它組合物是益生細菌或植物多糖。31.權(quán)利要求25的方法，其中與非人乳配制劑一起施用所述組合物。32.權(quán)利要求25的方法，其中所述組合物在與非人乳配制劑的混合物中。33.權(quán)利要求25的方法，其中所述組合物是人乳超濾滲透物。34.權(quán)利要求32的方法，其中所述滲透物是通過過濾人乳獲得的。35.權(quán)利要求32的方法，其中所述滲透物是通過過濾人脫脂乳獲得的。36.權(quán)利要求25的方法，其中建立有益的腸道菌群包括使雙歧桿菌或乳桿菌或兩者在腸道建群。37.一種治療具有感染或有風(fēng)險形成感染的受試者的方法，該方法包括對所述受試者施用包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物。38.權(quán)利要求37的方法，其中所述感染的癥狀是由細菌、細菌毒素、或病毒引起的。39.權(quán)利要求37的方法，其中所述受試者是人。40.權(quán)利要求37的方法，其中所述受試者是人新生兒、嬰兒、兒童、或成人。41.權(quán)利要求37的方法，其中所述治療包括改善所述感染的至少一種癥狀。42.權(quán)利要求37的方法，其中所述治療包括促進有益的腸道細菌的形成。43.權(quán)利要求42的方法，其中所述有益的腸道細菌是雙歧桿菌或乳桿菌或兩者。44.一種治療患有炎性腸病的受試者的方法，該方法包括對所述受試者施用包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物。45.權(quán)利要求44的方法，其中所述炎性腸病是下列中的一種或多種克羅恩氏病、刺激性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎(UC)、未確定型結(jié)腸炎、顯微鏡下結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎和偽膜性結(jié)腸炎。46.權(quán)利要求44的方法，其中所述受試者是人。47.權(quán)利要求44的方法，其中所述受試者是人新生兒、嬰兒、兒童、或成人。48.權(quán)利要求44的方法，其中所述治療包括改善所述炎性腸病的至少一種癥狀。49.權(quán)利要求44的方法，其中所述治療包括促進有益的腸道細菌的形成。50.權(quán)利要求49的方法，其中所述有益的腸道細菌是雙歧桿菌或乳桿菌或兩者。51.一種制備營養(yǎng)補充劑的方法，該方法包括獲得包含來自人乳的寡糖的滲透物組合物，并用所述組合物補充非人乳配制劑。52.權(quán)利要求51的方法，其中所述組合物是濃縮的或稀釋的人乳滲透物組合物。53.權(quán)利要求51的方法，其中所述滲透物組合物是通過從人乳過濾液體獲得的。54.權(quán)利要求51的方法，其中所述滲透物組合物是通過從人乳的脫脂乳部分過濾液體獲得的。55.一種制備濃縮的或稀釋的人乳滲透物的方法，該方法包括(a)獲得人乳；(b)將所述乳分成乳脂和脫脂乳；(C)過濾所述脫脂乳以獲得滲透物；(d)保留所述滲透物；并(e)稀釋、濃縮、或干燥所述滲透物。56.權(quán)利要求55的方法，其中(e)中的稀釋步驟包括將非人乳組合物添加至所述滲透物。57.權(quán)利要求56的方法，其中所述非人乳組合物是牛乳。58.權(quán)利要求55的方法，其中(e)中的稀釋步驟包括添加去離子水或緩沖液。59.權(quán)利要求55的方法，其中(e)中的濃縮步驟包括反滲透。60.權(quán)利要求55的方法，其進一步包括將維生素和礦物添加至步驟(d)后的所述滲透物。61.權(quán)利要求55的方法，其中所述過濾包括超濾。62.權(quán)利要求55的方法，其進一步包括(f)降低生物負荷。63.權(quán)利要求62的方法，其中降低生物負荷包括巴氏消毒或無菌過濾。全文摘要本公開內(nèi)容的特征在于自分級的人全乳獲得的人乳滲透物和含有該人乳滲透物的組合物。本發(fā)明的富含寡糖的滲透物和滲透物組合物作為早產(chǎn)和足月嬰兒的營養(yǎng)補充劑可用于建立或維持腸道菌群及用于治療炎性腸病的癥狀。文檔編號A61K35/20GK102300575SQ200980155914公開日2011年12月28日申請日期2009年12月2日優(yōu)先權(quán)日2008年12月2日發(fā)明者D.J.雷克特曼,J.福爾尼爾,S.埃克,S.埃爾斯特申請人:普羅萊克塔生物科學(xué)公司