專利名稱：提供對(duì)瘧原蟲(chóng)的長(zhǎng)效免疫應(yīng)答的用于瘧疾的多組分疫苗的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開(kāi)了用于在受試者中激發(fā)對(duì)瘧原蟲(chóng)(Plasmodium)的免疫應(yīng)答并且保護(hù)受試者不受瘧原蟲(chóng)感染的免疫原性綴合物。
背景技術(shù)：
瘧疾可歸為全球三大致命疾病之一(每年約3億病例)。惡性瘧原蟲(chóng) (P. falciparum)可導(dǎo)致最嚴(yán)重的形式，每年導(dǎo)致約一百萬(wàn)人死亡(其中90%是幼兒)。感染開(kāi)始于蚊子將瘧疾子孢子注入至宿主血流之時(shí)。在注射后，它們遷移到肝臟并在肝細(xì)胞中繁殖一至兩周。子孢子分化為裂殖子，裂殖子從肝臟釋放進(jìn)入血流，而它們?cè)谘褐懈腥炯t細(xì)胞。當(dāng)裂殖子在紅細(xì)胞中成熟時(shí)，它被稱為滋養(yǎng)體，并且當(dāng)完全發(fā)育后成為裂殖體。裂殖體階段出現(xiàn)核分裂以形成單個(gè)裂殖子，所述裂殖子被釋放以侵入其他紅細(xì)胞。 在數(shù)個(gè)裂體生殖周期后，一些寄生蟲(chóng)不再通過(guò)無(wú)性生殖形成裂殖體，而是發(fā)育為大單核寄生蟲(chóng)。這些寄生蟲(chóng)發(fā)生性發(fā)育。瘧原蟲(chóng)的性發(fā)育涉及雌性大配子母細(xì)胞和雄性小配子細(xì)胞。如果蚊子攝食感染宿主的血液，它將攝入血液中的配子母細(xì)胞。在蚊子的消化道中發(fā)生寄生蟲(chóng)的受精和性結(jié)合。 隨后，被稱為接合子的受精寄生蟲(chóng)發(fā)育為動(dòng)合子。動(dòng)合子穿透蚊子的中腸壁并發(fā)育為囊合子，其中形成許多小子孢子。當(dāng)囊合子破裂時(shí)，子孢子經(jīng)血淋巴遷移至蚊子的唾液腺。一旦寄生蟲(chóng)在蚊子的唾液中，其就能被注入至宿主，重復(fù)生命周期。還沒(méi)有疫苗，并且瘧原蟲(chóng)正在日益變得對(duì)已經(jīng)用于治療所述疾病數(shù)十載的抗瘧藥具有抗性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開(kāi)了可激發(fā)針對(duì)瘧原蟲(chóng)蛋白的免疫應(yīng)答的免疫原性綴合物。在具體的實(shí)例中，所述瘧原蟲(chóng)蛋白包括有性階段表面蛋白(如P25、P28、P48/45或P230)、無(wú)性環(huán)子孢子蛋白(CSP)或其免疫原性部分。本文提供了免疫原性綴合物，所述免疫原性綴合物包括與至少一種瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白(CSP)或CSP的免疫原性部分共價(jià)連接的至少一種瘧原蟲(chóng)有性階段表面蛋白(例如，P25、P28、P48/45或P230)。所述蛋白或肽通過(guò)如非肽接頭(如酰胺鍵、腙鍵或硫醚鍵)或通過(guò)肽接頭(如約1至12個(gè)肽鍵)共價(jià)連接。在具體的實(shí)例中，所述免疫原性綴合物包括與至少一種CSP共價(jià)連接的至少一種有性階段表面蛋白Pfs25或Pvs25(例如，至少1、2、3、4或5種Pfs25或Pvs25蛋白)。在另外的實(shí)例中，所述免疫原性綴合物包括與至少一種來(lái)自瘧原蟲(chóng)CSP的免疫原性重復(fù)共價(jià)連接的至少一種有性階段表面蛋白(如P25、P28、P48/45或P230)，所述免疫原性重復(fù)例如至少一種 Asn-Ala-Asn-Pro(NANP) (SEQ ID NO 1)重復(fù)、至少一種 Asn-Pro-Asn-Ala (NPNA) (SEQ ID NO 2)重復(fù)、至少一種 Pro-Asn-Ala-Asn(PNAN) (SEQ ID NO 3)重復(fù)、至少一種 Ala-Asn-Pro-Asn(ANPN) (SEQ ID NO 4)重復(fù)或者其兩種或多種的結(jié)合物。本發(fā)明還提供了免疫原性綴合物，所述免疫原性綴合物包括具有至少一種來(lái)自瘧原蟲(chóng)CSP的免疫原性重復(fù)的肽，所述重復(fù)例如與至少一種其他免疫原性蛋白(如非瘧原蟲(chóng)蛋白的免疫原性蛋白，如激發(fā)免疫應(yīng)答的蛋白，例如細(xì)菌毒素)共價(jià)連接的至少一種 NPNA (SEQ ID NO :2)重復(fù)、至少一種 PNAN (SEQ ID NO 3)重復(fù)或至少一種 ANPN (SEQ ID NO: 4)重復(fù)。所述蛋白或肽通過(guò)例如非肽接頭(linker)(如酰胺鍵、腙鍵或硫醚鍵)或通過(guò)肽接頭(如約1至12個(gè)肽鍵或氨基酸)共價(jià)連接。本發(fā)明還提供了包括具有瘧原蟲(chóng)T細(xì)胞表位(如來(lái)自CSP的T細(xì)胞表位)和與至少一種其他免疫蛋白(如非瘧原蟲(chóng)蛋白的免疫原性蛋白，如可激發(fā)免疫應(yīng)答的人病原體蛋白，如細(xì)菌毒素)共價(jià)連接的至少4種CSP免疫原性重復(fù)(例如，NANP(SEQ ID NO 1)、 NPNA(SEQ ID NO 2) ,PNAN(SEQ ID NO 3)或ANPN(SEQ ID NO 4)重復(fù))的肽的免疫原性綴合物。所述蛋白通過(guò)例如非肽接頭(如酰胺鍵、腙鍵或硫醚鍵)或通過(guò)肽接頭(如約1至 12個(gè)肽鍵)共價(jià)連接。本文還提供了包括一種或多種所公開(kāi)的免疫原性綴合物和可藥用載體的免疫原性組合物。還提供了一種激發(fā)對(duì)宿主中的瘧原蟲(chóng)(例如，惡性瘧原蟲(chóng)(P. falciparum)、 間日瘧原蟲(chóng)(P. vivax)、卵形瘧原蟲(chóng)(P. ovale)、三日瘧原蟲(chóng)(P. malariae)或諾氏瘧原蟲(chóng) (P. knowlesi))的免疫應(yīng)答的方法，所述免疫應(yīng)答例如對(duì)宿主(如需要加強(qiáng)對(duì)瘧原蟲(chóng)的免疫性的宿主)中有性或無(wú)性階段的瘧原蟲(chóng)或者對(duì)瘧原蟲(chóng)CSP或其部分的免疫應(yīng)答，所述方法包括給予所述宿主本文公開(kāi)的免疫原性組合物。本公開(kāi)的上述特征和其他特征根據(jù)以下的具體實(shí)施方式
將更加明顯，這是參考附圖進(jìn)行的。


圖IA的圖表顯示了用于制備Pfs25_Pfs25蛋白綴合物的一步方法。圖IB的圖表顯示了用于制備Pfs25_Pfs25蛋白綴合物的兩步方法。圖2的圖表顯示了通過(guò)形成硫醚鍵綴合至NANP重復(fù)的蛋白。序列表在所附序列表中列出的核酸和氨基酸序列是使用核苷酸堿基的標(biāo)準(zhǔn)字母縮寫(xiě)和氨基酸的三字母密碼子來(lái)顯示，如37C. F. R. 1. 822中所定義。雖然僅示出每個(gè)核酸序列的一條鏈，但應(yīng)理解任何提及所示鏈時(shí)均包括互補(bǔ)鏈。在所附序列表中SEQ ID NO 1 是氨基酸序列 NANP。SEQ ID NO 2 是氨基酸序列 NPNA。SEQ ID NO 3 是氨基酸序列 PNAN。SEQ ID NO 4 是氨基酸序列 ANPN。SEQ ID NO :5和6分別是示例性惡性瘧原蟲(chóng)CSP蛋白的核酸和氨基酸序列，所述惡性瘧原蟲(chóng)CSP蛋白被修飾以除去GPI錨并且加了用于純化的C-末端6XHis標(biāo)簽。
SEQIDNO7是示例性惡性瘧原蟲(chóng)Pfs25蛋白的氨基酸序列。
SEQIDNO8是示例性間日瘧原蟲(chóng)Pvs25蛋白的氨基酸序列。
SEQIDNO9是間日瘧原蟲(chóng)VK210CSP重復(fù)的氨基酸序列。
SEQIDNO10是間日瘧原蟲(chóng)VKM7CSP重復(fù)的氨基酸序列。
SEQIDNO11是三日瘧原蟲(chóng)CSP重復(fù)的氨基I酸序列。
SEQIDNO12是諾氏瘧原蟲(chóng)CSP重復(fù)的氨基I酸序列。
SEQIDNO13是卵形瘧原蟲(chóng)CSP重復(fù)的氨基I酸序列。
SEQIDNO14是來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位的氨基酸序列。
SEQIDNO15是來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的T細(xì)胞表位的氨基酸序列。
SEQIDNO16 是 4 個(gè) NANP J■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO17 是 5 個(gè) NANP 1■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO18 是 4 個(gè) NPNA J■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO19 是 5 個(gè) NPNA 1■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO:20 是 4 個(gè) PNAN J■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO21 是 5 個(gè) PNAN J■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO:22 是 4 個(gè) ANPN J■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNOJ4 是 6 個(gè) NANP 1■復(fù)的肽的氨基畫(huà)I序列。
SEQIDNO25是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的4個(gè)NANP
重復(fù)的肽的氨基酸序列。SEQ ID NO 26是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的5個(gè)NANP 重復(fù)的肽的氨基酸序列。SEQ ID NO ,21是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的4個(gè)ANPN 重復(fù)的肽的氨基酸序列。SEQ ID NO 28是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的5個(gè)ANPN 重復(fù)的肽的氨基酸序列。SEQ ID NO 29是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的4個(gè)NPNA 重復(fù)的肽的氨基酸序列。SEQ ID NO 30是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的5個(gè)NPNA 重復(fù)的肽的氨基酸序列。SEQ ID NO 31是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的4個(gè)PNAN 重復(fù)的肽的氨基酸序列。SEQ ID NO 32是具有與來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)CSP的通用T細(xì)胞表位綴合的5個(gè)PNAN 重復(fù)的肽的氨基酸序列
具體實(shí)施例方式I.縮寫(xiě)ADH:己二酸二酰胼BSA:牛血清白蛋白
6
CSP:環(huán)子孢子蛋白EDC 1-乙基-3-[3- 二甲基氨基丙基]碳化二亞胺氫氯化物ELISA 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法IFA 免疫熒光測(cè)定法Pfs25 惡性瘧原蟲(chóng)動(dòng)合子表面蛋白25Pvs25 間日瘧原蟲(chóng)動(dòng)合子表面蛋白25SBAP =N-琥珀酰亞胺基_3_溴乙酰胺丙酸酯SFB =N-琥珀酰亞胺基-4-甲酰基苯甲酸酯SPDP =N-琥珀酰亞胺基-3- (2-吡啶二硫代)-丙酸酯II.術(shù)語(yǔ)除非另有說(shuō)明，技術(shù)術(shù)語(yǔ)依其常規(guī)用法使用。分子生物學(xué)中對(duì)常規(guī)術(shù)語(yǔ)的定義可見(jiàn)于 Benjamin Lewin, Genes V, published by Oxford University Press, 1994(ISBN 0-19-854287-9) ；Kendrew et al. (edss. ), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd.，1994(ISBN 0-632-02182-9) ；Robert A. Meyers (ed. ) , Molecular Biology and Biotechnology -.a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc.，1995(ISBN 1-56081-569-8)。為了有助于理解本公開(kāi)內(nèi)容的各種實(shí)施方案，提供了以下對(duì)具體術(shù)語(yǔ)的解釋輔劑非特異性地增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的物質(zhì)或載體。輔劑可包括其上吸附了抗原的礦物質(zhì)(如鋁、氫氧化鋁或磷酸鹽)懸液劑；或油包水乳劑，其中抗原溶液被乳化在礦物油(例如弗氏不完全佐劑)中，有時(shí)包含滅活的分枝桿菌(弗氏完全佐劑)以進(jìn)一步增強(qiáng)抗原性。免疫刺激性寡核苷酸(如包含CpG基序的那些)也可被用作輔劑(例如， 參見(jiàn)美國(guó)專利 No. 6，194，388,6, 207，646,6, 214，806,6, 218，371,6, 239，116,6, 339，068、 6，406，705和6，429，199)。輔劑還包括生物分子，如共刺激分子。示例性的生物輔劑包括 IL-2、RANTES, GM-CSF, TNF- α、IFN- y、G-CSF, LFA-3、CD72、B7-1、B7-2、0X-40L 和 41BBL。抗體由B淋巴樣細(xì)胞產(chǎn)生的具有特定氨基酸序列的免疫球蛋白分子。在人和其他動(dòng)物中，抗體由特定抗原(免疫原)所誘發(fā)。抗體的特征是與所述抗原以某種可證明的方式特異性反應(yīng)，抗體和抗原彼此相互界定?！凹ぐl(fā)抗體應(yīng)答”是指抗原或其他分子誘發(fā)抗體產(chǎn)生的能力?？乖梢源碳?dòng)物體產(chǎn)生抗體或T細(xì)胞應(yīng)答的化合物、組合物或物質(zhì)，包括注射或吸收至動(dòng)物中的組合物?？乖膳c特定體液免疫或細(xì)胞免疫的產(chǎn)物(包括由異源免疫原誘導(dǎo)的產(chǎn)物)反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗原是瘧原蟲(chóng)抗原(如瘧原蟲(chóng)有性階段表面蛋白、 CSP或其免疫原性部分)。環(huán)子孢子蛋白(CSP)所述環(huán)子孢子蛋白(CSP)是孢子生成周期中的主要瘧原蟲(chóng)表面蛋白。CSP覆蓋瘧原蟲(chóng)子孢子的表面，所述子孢子是從蚊子的唾液腺傳播到宿主肝細(xì)胞中。它是高度免疫原性的，并且在地方病區(qū)域，可在循環(huán)系統(tǒng)血液中觀察到抗該蛋白的高抗體效價(jià)。參見(jiàn),例如 Dame et al.，Science 225 :593-599,1985 ；Zavala et al.，Science 228 :1436-1440,1985 ；國(guó)際公開(kāi)文本 No. WO 2008/107370。CSP序列是公眾可獲得的。例如，GenBank編號(hào)NC_000521.3(在2008年11月 7日以引用的方式納入本文)公開(kāi)了來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)3D7的CSP基因。GenBank編號(hào)XM_001351086. 1和XP_001351122. 1 (在2008年11月7日以引用的方式納入本文)分別公開(kāi)了惡性瘧原蟲(chóng)3D7CSP cDNA和蛋白序列。在一個(gè)實(shí)例中，CSP是分別顯示在SEQ ID NO: 5和6中的惡性瘧原蟲(chóng)CSP核酸和蛋白序列。CSP的直系同源物存在于其他瘧原蟲(chóng)種(如間日瘧原蟲(chóng)、卵形瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)和諾氏瘧原蟲(chóng))中并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉。綴合物通過(guò)將兩個(gè)或多個(gè)化合物(如兩個(gè)或多個(gè)蛋白或蛋白片段，例如兩個(gè)或多個(gè)免疫原性蛋白、蛋白的免疫原性片段或它們的結(jié)合物)連接而形成的化合物。本文描述的綴合物是通過(guò)將兩個(gè)或多個(gè)蛋白或其免疫原性片段(例如免疫原性肽)共價(jià)連接而形成的。在一些實(shí)例中，所述蛋白或肽是通過(guò)非肽接頭例如腙接頭、酰胺接頭、硫醚接頭或者其兩種或多種的結(jié)合物連接。在其他實(shí)例中，所述蛋白或肽是通過(guò)肽接頭例如包括約1至 12個(gè)肽鍵的接頭連接。宿主攜帶另一種生物體或生物實(shí)體一通常是寄生物(如瘧原蟲(chóng))一的細(xì)胞或生物體。在一個(gè)實(shí)例中，宿主是能被或被瘧原蟲(chóng)(如惡性瘧原蟲(chóng)、間日瘧原蟲(chóng)、卵形瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)或諾氏瘧原蟲(chóng))感染的人或非人靈長(zhǎng)類。在本文中，術(shù)語(yǔ)“宿主”可與術(shù)語(yǔ)“受試者”互換使用。免疫應(yīng)答免疫系統(tǒng)的細(xì)胞(如B細(xì)胞、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或多形核細(xì)胞 (polymorphonucleocyte))對(duì)刺激物(例如抗原)的應(yīng)答。免疫應(yīng)答可包含參與宿主防御應(yīng)答的任何身體細(xì)胞，包括例如分泌干擾素或細(xì)胞因子的上皮細(xì)胞。免疫應(yīng)答包括但不局限于先天免疫應(yīng)答或炎癥。本文使用的保護(hù)性免疫應(yīng)答是指保護(hù)受試者不受感染(防止感染或防止與感染相關(guān)的疾病發(fā)生)的免疫應(yīng)答。免疫原在合適的條件下能刺激動(dòng)物中免疫應(yīng)答的化合物、組合物或物質(zhì)，所述免疫應(yīng)答例如產(chǎn)生抗體或T細(xì)胞應(yīng)答，包括注射或吸收至動(dòng)物中的組合物。本文使用的“免疫原性組合物”是包含免疫原的組合物。免疫通過(guò)例如疫苗接種而保護(hù)受試者免受傳染性疾病。分離的“分離的”生物組分(例如核酸、蛋白或病原體)已從其他生物組分(如細(xì)胞碎片或者其他蛋白或核酸)中基本上分離或純化出來(lái)。已被“分離的”生物組分包括通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)純化方法純化的那些組分。該術(shù)語(yǔ)還包括重組核酸、蛋白或病原體，以及化學(xué)合成的核酸或肽。瘧疾瘧疾是人和非人靈長(zhǎng)類被瘧原蟲(chóng)種一惡性瘧原蟲(chóng)、間日瘧原蟲(chóng)、卵形瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)和諾氏瘧原蟲(chóng)一感染的寄生蟲(chóng)傳染病。人在被感染的按蚊(瘧原蟲(chóng)的宿主)叮咬之后受到感染。瘧疾有時(shí)候會(huì)在輸血后或共用針頭后發(fā)生?？赡艹霈F(xiàn)的瘧疾感染臨床表現(xiàn)包括黑尿熱、腦型瘧、呼吸衰竭、肝壞死和心肌毛細(xì)血管阻塞。其他瘧原蟲(chóng)種可感染其他宿主，如嚙齒動(dòng)物(柏格氏鼠瘧原蟲(chóng)(P.berghei)、夏氏鼠瘧原蟲(chóng)(P. chabaudi)、文氏瘧原蟲(chóng)(P. vinckei)和約氏瘧原蟲(chóng)(P. yoelii))、其他哺乳動(dòng)物、鳥(niǎo)和爬行動(dòng)物。P25 富含半胱氨酸的25kDa抗原的家族，包括惡性瘧原蟲(chóng)蚊子階段抗原Pfs25 及其間日瘧原蟲(chóng)中的直系同源物Pvs25(參見(jiàn)Kaslow et al.，Nature 333 =74-76,1988 ； Malkin et al. ,Vaccine 23 :3131-3138,2005) P25蛋白由4個(gè)串聯(lián)表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，并且在蚊子體內(nèi)寄生蟲(chóng)的合子和成熟動(dòng)合子階段表達(dá)。由于P25僅在蚊子中腸中而不是在脊椎動(dòng)物宿主中表達(dá)，這些蛋白不處在宿主免疫系統(tǒng)的選擇壓力下并且P25的抗原性變化似乎比出現(xiàn)在無(wú)性血內(nèi)階段中的大多數(shù)候選疫苗局限性更大。參見(jiàn)，例如美國(guó)專利No. 5，853，739，國(guó)際公開(kāi)文本No. WO 2006/124712o P25的直系同源物存在于其他瘧原蟲(chóng)種(如卵形瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)和諾氏瘧原蟲(chóng))中，并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉。Pfs25序列是公眾可獲得的。例如，GenBank編號(hào)NC_004314. 1(2008年11月 7日以引用的方式納入本文)公開(kāi)了來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)3D7的Pfs25基因。GenBank編號(hào) ΧΜ_001347551. 1禾口 XP_001347587. 1 (2008年11月7日以引用的方式納入本文)分別公開(kāi)了惡性瘧原蟲(chóng)3D7的Pfs25cDNA和蛋白序列。在一個(gè)具體實(shí)例中，Pfs25蛋白是SEQID NO: 7的氨基酸序列。Pvs25序列也是公眾可獲得的。例如，GenBank編號(hào)NC_009911. 1 (2008年11月 7日以引用的方式納入本文)公開(kāi)了來(lái)自間日瘧原蟲(chóng)ΜΙ-Ι的Pvs25基因。GenBank編號(hào) XM_001608410. 1和ΧΡ_001608460. 1 (2008年11月7日以引用的方式納入本文)分別公開(kāi)了間日瘧原蟲(chóng)&iI-lPvs25cDNA和蛋白序列。在一個(gè)具體的實(shí)例中，Pvs25蛋白是SEQ ID NO 8的氨基酸序列?？伤幱幂d體可用于本公開(kāi)內(nèi)容的可藥用載體(運(yùn)載體)是常規(guī)的。Remington The Science and Practice of Pharmacy, The University of the Sciences in Philadelphia， Editor， Lippincott， Williams, & Wilkins, Philadelphia， PA,21st Edition(2005)描述了適于藥物遞送一種或多種治療性化合物或分子(如一種或多種肽綴合物)和另外的藥劑的組合物和制劑。一般而言，載體的性質(zhì)依賴于所使用的具體給藥方式。例如，腸胃外制劑一般包括可注射流體，所述可注射流體包括可藥用的或可生理可接受的流體，如水、生理鹽水、平衡鹽溶液、水性葡萄糖、甘油等載體。對(duì)于固體組合物(例如，粉劑、丸劑、片劑或膠囊劑形式)，常規(guī)的無(wú)毒固體載體可包括，例如藥用級(jí)甘露醇、乳糖、淀粉或硬脂酸鎂。除了生物中性載體，可給予的藥物組合物可包含微量的無(wú)毒輔助物質(zhì)，如潤(rùn)濕劑或乳化劑、防腐劑、PH 緩沖劑等，例如乙酸鈉或山梨聚糖單月桂酸酯。多肽其中單體為通過(guò)酰胺鍵連接在一起的氨基酸殘基的多聚體。當(dāng)氨基酸是α 氨基酸時(shí)，可使用L-旋光異構(gòu)體或D-旋光異構(gòu)體。本文使用的術(shù)語(yǔ)“多肽”或“蛋白”意欲包括任何氨基酸序列，并且包括經(jīng)修飾的序列，如糖蛋白。術(shù)語(yǔ)“多肽”特別地意欲包括天然存在的蛋白，以及以重組方法或合成方法產(chǎn)生的那些。術(shù)語(yǔ)“殘基”或“氨基酸殘基”包括指納入蛋白、多肽或肽的氨基酸。保守性氨基酸殘基置換是指當(dāng)進(jìn)行所述置換時(shí)對(duì)原始蛋白的性質(zhì)干擾最小的氨基酸置換，也就是說(shuō)，所述蛋白的結(jié)構(gòu)特別是功能是保守的，不會(huì)被這樣的置換顯著改變。 下面是保守性置換的實(shí)例。
權(quán)利要求
1.一種免疫原性綴合物，包含與至少一種瘧原蟲(chóng)(Plasmodium)環(huán)子孢子蛋白或環(huán)子孢子蛋白的免疫原性部分共價(jià)連接的至少一種瘧原蟲(chóng)有性階段表面蛋白，其中所述綴合物可在受試者中激發(fā)針對(duì)所述有性階段表面蛋白和所述環(huán)子孢子蛋白的免疫應(yīng)答，優(yōu)選地其中所述免疫原性綴合物包含與所述環(huán)子孢子蛋白的免疫原性部分共價(jià)連接的至少一種瘧原蟲(chóng)有性階段表面蛋白Pfs25，其中所述免疫原性部分選自(NANP) x、(NPNA)x, (PNAN)x* (ANPN)x，其中χ是3至6。
2.權(quán)利要求1的免疫原性綴合物，其中所述有性階段表面蛋白包括P25、P28、P48/45 或P230蛋白。
3.權(quán)利要求2的免疫原性綴合物，其中所述P25蛋白包括Pfs25或Pvs25。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述綴合物包含比例高于 1.0 1.0的所述有性階段表面蛋白與所述環(huán)子孢子蛋白或其免疫原性部分。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述共價(jià)鍵包括非肽鍵。
6.權(quán)利要求5的免疫原性綴合物，其中所述非肽鍵包含至少一種選自如下的鍵酰胺鍵、腙鍵、硫醚鍵或它們的兩種或多種的結(jié)合。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述綴合物包含與所述環(huán)子孢子蛋白或其免疫原性部分共價(jià)連接的2個(gè)有性階段表面蛋白。
8.權(quán)利要求7的免疫原性綴合物，其中所述綴合物包含2個(gè)P25蛋白。
9.權(quán)利要求8的免疫原性綴合物，其中所述2個(gè)P25蛋白都是Pfs25。
10.權(quán)利要求1的免疫原性綴合物，其中所述環(huán)子孢子蛋白的免疫原性部分包含至少1 個(gè) Asn-Ala-Asn-Pro (NANP)重復(fù)。
11.權(quán)利要求10的免疫原性綴合物，其中所述NANP重復(fù)包括(NANP)4或(NANP) 5。
12.權(quán)利要求1的免疫原性綴合物，其中所述環(huán)子孢子蛋白的免疫原性部分包含至少1 個(gè) Asn-Pro-Asn-Ala (NPNA)重復(fù)。
13.權(quán)利要求12的免疫原性綴合物，其中所述NPNA重復(fù)包括(NPNA)4或(NPNA) 5。
14.一種在宿主中激發(fā)針對(duì)瘧原蟲(chóng)有性階段和無(wú)性階段的免疫應(yīng)答的方法，包括向所述宿主給予權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述瘧原蟲(chóng)包括惡性瘧原蟲(chóng)(P.falciparum)、間日瘧原蟲(chóng)(P. vivax)、卵形瘧原蟲(chóng)(P. ovale)、三日瘧原蟲(chóng)(P. malariae)和諾氏瘧原蟲(chóng) (P. knowlesi)中的一種或多種。
16.權(quán)利要求14或15的方法，其中所述宿主是人。
17.權(quán)利要求14至16中任一項(xiàng)的方法，還包括選擇需要增強(qiáng)針對(duì)瘧原蟲(chóng)的免疫性的宿主。
18.一種用于在宿主中激發(fā)針對(duì)瘧原蟲(chóng)的有性階段和無(wú)性階段的免疫應(yīng)答的藥用組合物，所述組合物包含權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物和可藥用載體。
19.權(quán)利要求18的藥物組合物，還包含佐劑。
20.權(quán)利要求18的藥物組合物，其中所述佐劑是氫氧化鋁。
21.一種免疫原性綴合物，包含一種肽，包含來(lái)自瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白的至少一個(gè)重復(fù)，其中所述重復(fù)選自(NPNA) x、 (PNAN) x 和(ANPN) x，其中 χ 是 1 至 6 ；共價(jià)連接至至少一種其他免疫原性蛋白，其中所述綴合物在受試者中激發(fā)針對(duì)所述環(huán)子孢子蛋白的免疫應(yīng)答。
22.權(quán)利要求21的免疫原性綴合物，其中所述瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白包括來(lái)自惡性瘧原蟲(chóng)、間日瘧原蟲(chóng)、卵形瘧原蟲(chóng)或諾氏瘧原蟲(chóng)的環(huán)子孢子蛋白。
23.權(quán)利要求21或22的免疫原性綴合物，其中所述共價(jià)鍵包括非肽鍵。
24.權(quán)利要求23的免疫原性綴合物，其中所述非肽鍵包括至少一種選自如下的鍵酰胺鍵、腙鍵、硫醚鍵或它們的兩種或多種的結(jié)合。
25.權(quán)利要求21至M中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述至少一個(gè)重復(fù)包括 (NPNA)4或(NPNA)5。
26.權(quán)利要求21至M中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述至少一個(gè)重復(fù)包括 (PNAN) 4或(PNAN)5。
27.權(quán)利要求21至M中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述至少一個(gè)重復(fù)包括 (ANPN) 4或(ANPN)5。
28.權(quán)利要求21至27中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述至少一種其他免疫原性蛋白包括非瘧原蟲(chóng)蛋白的免疫原性蛋白。
29.權(quán)利要求觀的免疫原性綴合物，其中所述至少一種其他免疫原性蛋白包括激發(fā)免疫應(yīng)答的人病原體蛋白。
30.權(quán)利要求觀的免疫原性綴合物，其中所述至少一種其他免疫原性蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、破傷風(fēng)類毒素、白喉類毒素、霍亂毒素、艱難梭菌(Clostridium difficile)毒素Α、艱難梭菌毒素B和銅綠假單胞菌O^seudomonas aeruginosa)重組體胞外蛋白A。
31.權(quán)利要求21至27中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物，其中所述至少一種其他免疫原性蛋白包括瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白。
32.—種在宿主中激發(fā)針對(duì)瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白的免疫應(yīng)答的方法，包括向所述宿主給予權(quán)利要求21至31中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物。
33.權(quán)利要求32的方法，其中所述瘧原蟲(chóng)包括惡性瘧原蟲(chóng)、間日瘧原蟲(chóng)、卵形瘧原蟲(chóng)、 三日瘧原蟲(chóng)和諾氏瘧原蟲(chóng)中的一種或多種。
34.權(quán)利要求32或33的方法，其中所述宿主是人。
35.權(quán)利要求32至34中任一項(xiàng)的方法，還包括選擇需要增強(qiáng)針對(duì)瘧原蟲(chóng)的免疫性的宿主。
36.一種用于在宿主中激發(fā)針對(duì)瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子蛋白的免疫應(yīng)答的藥物組合物，所述組合物包含權(quán)利要求21至31中任一項(xiàng)的免疫原性綴合物和可藥用載體。
37.權(quán)利要求36的藥物組合物，還包含佐劑。
38.權(quán)利要求37的藥物組合物，其中所述佐劑是氫氧化鋁。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了可激發(fā)針對(duì)瘧原蟲(chóng)(Plasmodium)蛋白的免疫應(yīng)答的免疫原性綴合物。在具體的實(shí)例中，所述瘧原蟲(chóng)蛋白包括有性階段表面蛋白、環(huán)子孢子蛋白(CSP)或CSP的免疫原性部分。本發(fā)明還提供了包含一種或多種所公開(kāi)的免疫原性綴合物和可藥用載體的免疫原性組合物。本發(fā)明還提供了一種在受試者中激發(fā)針對(duì)瘧原蟲(chóng)的免疫應(yīng)答的方法，包括給予所述受試者本發(fā)明所公開(kāi)的免疫原性組合物。
文檔編號(hào)A61K39/002GK102264381SQ200980148315
公開(kāi)日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2009年10月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月1日
發(fā)明者C·P·沫卡, D·劉, F·馬加德利, J·B·羅賓斯, J·基思, J·庫(kù)布勒-吉爾布, L·米勒, R·施尼森, R·紐森茲威格, Z·貝索娃 申請(qǐng)人:紐約大學(xué), 美國(guó)政府(由衛(wèi)生和人類服務(wù)部的部長(zhǎng)所代表)