專利名稱：Hcv ns3蛋白酶抑制劑與干擾素和利巴韋林的組合的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療組合，其包括如本文所述的化合物(1)、干擾素α和利巴韋林。本發(fā)明還涉及使用此類治療組合治療患者的HCV感染或緩解其一種或多種癥狀的方法。本發(fā)明還提供包括本發(fā)明治療組合的試 劑盒。
現(xiàn)有技術(shù)丙型肝炎病毒(HCV)感染為全球性人類健康問題，僅在美國每年即有約150，000 例新報(bào)告病例。HCV為單股RNA病毒，其為在大多數(shù)非Α、非B型輸血后及移植后肝炎病例中的鑒定出的病原體，還為急性散發(fā)性肝炎的常見原因。估計(jì)超過50%感染HCV的患者變成慢性感染，且其中20%在20年內(nèi)發(fā)展成肝硬化。已證實(shí)多種干擾素(特別是α-干擾素)可用于治療慢性HCV:例如干擾素-α -2a ( ROFERON _A)、干擾素-α -2b ( INTRON _A)、復(fù)合干擾素 (INFERGEN ),以及這些和其它干擾素的聚乙二醇化形式，如聚乙二醇化干擾素-α -2a (PEGASYS )與聚乙二醇化干擾素-α -2b (PEG- INTRON )。大多數(shù)患者對(duì)干擾素_ α治療沒有反應(yīng)，而在有反應(yīng)者中，在中斷治療后6個(gè)月內(nèi)存在高復(fù)發(fā)率(Liang 等人，J. Med. Virol. 40 :69，1993)。已在臨床試驗(yàn)中顯示，利巴韋林(一種對(duì)抗多種RNA與DNA病毒的具廣譜活性的鳥嘌呤核苷類似物)當(dāng)與干擾素-α組合使用時(shí)，可有效對(duì)抗慢性HCV感染(參見例如 Poynard 等人，Lancet 352 1426-1432，1998 ；Reichard 等人，Lancet351 :83_87，1998)， 且已證實(shí)下列組合療法可用于治療HCV :REBETRON (干擾素- α -2b加利巴韋林， Schering-Plough)、PEGASYS RBV (聚乙二醇化干擾素_ α _2a加利巴韋林組合療法，Roche)；也參見 Manns 等人，Lancet 358 :958_965 (2001)和 Fried 等人，2002，N. Engl. J. Med. 347 :975-982。然而，即使使用該組合療法，病毒應(yīng)答率仍然等于或低于50%。更進(jìn)一步，通常這些療法會(huì)出現(xiàn)相關(guān)的明顯副作用。利巴韋林的缺點(diǎn)包括致畸活性(teratogenic activity)、影響精子發(fā)育、溶血、疲勞、頭痛、失眠、惡心和/或厭食。聯(lián)用或不聯(lián)用利巴韋林的干擾素α與許多副作用相關(guān)。在治療期間，必須小心監(jiān)視患者的流感樣癥狀、抑郁、皮疹及異常血細(xì)胞計(jì)數(shù)。使用干擾素α-2b加利巴韋林治療的患者不應(yīng)有嚴(yán)重肝臟功能失調(diào)的并發(fā)癥，且在小心追蹤試驗(yàn)時(shí)，這些受試者僅考慮接受丙型肝炎治療。某些用于治療HCV感染的含干擾素的組合療法還公開在下列美國專利申請(qǐng)公開中=US 2005/0112093、US 2005/0129659 和 US 2008/0138316。已知以下化合物(1)為HCV NS3絲氨酸蛋白酶的強(qiáng)效選擇性抑制劑，且適用于治療HCV感染
化合物(1)落入美國專利6，323，180,7, 514，557和7，585，845中所公開的非環(huán)肽系列的HCV抑制劑的范圍內(nèi)。化合物(1)具體以化合物#1055公開在美國專利7，585，845 中，以及化合物#1008公開在美國專利7，514，557中?；衔?1)及藥物制劑可根據(jù)以上所引用參考文件中找到的一般操作制得，所有參考的全文在此引入作為參考?；衔?1) 的優(yōu)選形式包括結(jié)晶形式，特別是結(jié)晶鈉鹽形式，其可根據(jù)本文實(shí)施例部份所述制得。化合物(1)還已知具有以下另一種化學(xué)替代性結(jié)構(gòu)式，該結(jié)構(gòu)式等同于上述結(jié)構(gòu)
式
其中B 為< 為 MeO- ；L1 為 Br ；及 R2 為<
雖然已發(fā)現(xiàn)化合物(1)通?？捎行Ы档筒《矩?fù)荷量與治療HCV感染，但是已觀察到一定量的病毒抗性，結(jié)果可觀察到病毒反彈。例如，我們已觀察到作為單一療法每日一次對(duì)未曾接受過治療的患者給藥化合物(1) 14天出現(xiàn)強(qiáng)小且非常快速的抗病毒作用，隨后， 在5-6天后形成一定量的抗性。
因此，本領(lǐng)域仍需要一種用于治療及預(yù)防HCV感染的替代性療法。發(fā)明概述 本發(fā)明提供一種治療患者的HCV感染或緩解其一種或多種癥狀的方法，其包括向患者給藥治療組合的步驟，該治療合包括如本文定義的化合物(1)或其可藥用鹽，以及如本文所定義的干擾素α和利巴韋林。作為療程的一部份，該組合的三種活性劑可同時(shí)或分開給藥。本發(fā)明進(jìn)一步提供試劑盒，其包括含化合物(1)或其可藥用鹽的第一藥物組合物、含干擾素α的第二藥物組合物，以及含利巴韋林的第三藥物組合物。


圖1說明四個(gè)患者劑量組中的HCV病毒負(fù)荷量的平均變化，所述患者罹患慢性基因型-1 HCV感染且未曾接受過治療，患者接受14天的作為單一療法的化合物(1)鈉鹽，以及隨后另14天的化合物(1)鈉鹽、聚乙二醇化干擾素α-2a與利巴韋林的組合療法的治療。圖2說明三個(gè)患者劑量組中的HCV病毒負(fù)荷量的平均變化，所述患者罹患慢性基因型-1 HCV感染且曾接受過治療，患者接受28天的作為組合療法的化合物(1)鈉鹽、聚乙二醇化干擾素α _2a與利巴韋林治療。實(shí)施方案定義“化合物(1)”如上定義?！案蓴_素”是指抑制病毒復(fù)制與細(xì)胞增殖且調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的高度同源性物種特異性蛋白家族的成員。基于人干擾素的細(xì)胞起源與抗原性將其分成三類α-干擾素(白細(xì)胞)、β-干擾素(成纖維細(xì)胞)、Y-干擾素(B細(xì)胞)。已開發(fā)出每一類的重組形式且可市售購得。每一類的亞型基于抗原/結(jié)構(gòu)特征分類。通過分離與測(cè)序編碼這些肽的DNA而鑒定出至少24種具有不同氨基酸序列的干擾素α (分成A至H亞型)。本申請(qǐng)中可相互交換使用術(shù)語“ α "干擾素”(α -interferon)、“ α -干擾素”(alfa-interferon)、“干擾素 α “ (interferon alfa)，以描述該組的成員。在本發(fā)明的實(shí)踐中可使用天然產(chǎn)生與重組的 α-干擾素，包括復(fù)合干擾素。適用于本發(fā)明的干擾素-α包括但不限于重組干擾素α _2b (例如INTRON _Α 干擾素與VIRAFERON )、重組干擾素α _2a (例如ROFERON 干擾素)、重組干擾素 α -2c (例如BEROFOR α 2干擾素)、干擾素α -η1 ( 一種天然α干擾素的純化摻合物) (例如SUMIFERON 或WELLFERON 干擾素α-nl (INS))、或復(fù)合α干擾素(例如美國專利4，897，471與4，695，623中所述)或干擾素α-η3( —種天然α干擾素的混合物)(例如ALFERON )。優(yōu)選使用干擾素α -2a或α -2b。干擾素α -2b的制造描述于美國專利4，530,901中。術(shù)語“干擾素α ”還指包括那些“聚乙二醇化”類似物，其是指干擾素α經(jīng)聚乙二醇修飾的共軛物，優(yōu)選干擾素α "2a和_2b。優(yōu)選的聚乙二醇干擾素α -2b共軛物為 PEG12_-干擾素α-2b。本文所用術(shù)語“PEG12_-IFNα ”是指根據(jù)國際專利申請(qǐng)WO 95/13090 制得，且在干擾素a _2a或_2b的氨基與平均分子質(zhì)量為12000的聚乙二醇之間含有尿烷(urethane)連接基。 優(yōu)選的PEG12ticitl-干擾素α -2b通過使PEG聚合物與IFN α -2b分子中賴氨酸殘基的ε-氨基連接制得。單一 PEG12tl。。分子經(jīng)尿烷連接基與IFN α _2b分子上游離氨基共軛連接。該共軛物的特征為所連接PEG12_的分子量。該P(yáng)EG12_-IFNa-2b共軛物配制為用于注射的凍干粉。共軛連接IFNa與PEG的目的為通過顯著延長(zhǎng)其血漿半衰期而改善該蛋白的遞送，且因此提供延長(zhǎng)的IFNα活性?？捎糜诒景l(fā)明的特別優(yōu)選的干擾素α共軛物為聚乙二醇化α干擾素，例如聚乙二醇化干擾素α _2a、聚乙二醇化干擾素α-2b、聚乙二醇化復(fù)合干擾素或聚乙二醇化純化的干擾素α產(chǎn)物。聚乙二醇化干擾素α _2a描述于例如歐洲專利案EP 0593868中， 且可購得例如名為PEGASYS (Hoffmarm-LaRoche)的商品。聚乙二醇化干擾素α-2b 描述于例如美國專利5，908, 621與WO 98/48840中，且可購得例如名為PEG- INTRON A(ScheringPlough)的商品。聚乙二醇化復(fù)合干擾素描述于WO 96/11953中。優(yōu)選的聚乙二醇化α干擾素為聚乙二醇化干擾素α _2a與聚乙二醇化干擾素α _2b。還優(yōu)選聚乙二醇化復(fù)合干擾素。術(shù)語“干擾素α ”進(jìn)一步包括其它干擾素α共軛物，其可經(jīng)將干擾素α與水溶性聚合物偶聯(lián)而制得。這些聚合物的非限制性列表包括其它聚氧化烯烴均聚物，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌段共聚物。另一種基于聚氧化烯烴聚合物的替代物可有效使用非抗原性材料，例如葡聚糖、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、 聚乙烯基醇、基于碳水化合物的聚合物等。這些干擾素α-聚合物共軛物描述于美國專利 4，766，106、美國專利4，917，888、歐洲專利申請(qǐng)0236987、歐洲專利申請(qǐng)0510356,0593868 及0809996 (聚乙二醇化干擾素α-2a)和國際公開W095/13090中。術(shù)語“干擾素α ”進(jìn)一步包括干擾素α的融合蛋白，例如干擾素a_2a、干擾素a-2b、復(fù)合干擾素或純化的干擾素α (它們每個(gè)與另一蛋白融合)的融合蛋白。某些優(yōu)選的融合蛋白包括干擾素(例如干擾素a_2b)與白蛋白，如美國專利6，972，322 及國際公開WO 2005/003296與WO 2005/077042所述。與人白蛋白共軛的優(yōu)選干擾素為ALBUFERON ，其為利用白蛋白融合技術(shù)產(chǎn)生的更長(zhǎng)效形式干擾素a。 ALBUFERON 產(chǎn)生自人白蛋白與干擾素α的基因融合。還包括復(fù)合干擾素，例如 INFERGEN 。術(shù)語“可藥用鹽”是指式(1)化合物的鹽，其在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適于與人類及較低等動(dòng)物的組織接觸使用，且無過度毒性、刺激性、過敏反應(yīng)、等，具有合理的收益/ 風(fēng)險(xiǎn)比例，通常為水或油可溶或可分散的，且有效用于那些所需的用途。該術(shù)語包括可藥用酸加成鹽與可藥用堿加成鹽。適宜鹽的列表可在例如 S. M-Birge 等人，J. Pharm. Sci.，1977，66，第 1-19 頁中找到。術(shù)語“可藥用酸加成鹽”是指那些保留游離堿的生物效力與性質(zhì)，且不是生物學(xué)上或其它不合需要的鹽，其利用無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸等或利用有機(jī)酸例如乙酸、三氟乙酸、己二酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、丁酸、樟腦酸、 樟腦磺酸、肉桂酸、檸檬酸、二葡萄糖酸、乙磺酸、谷氨酸、乙醇酸、甘油磷酸、半磺酸、己酸、 甲酸、富馬酸、2-羥基乙烷-磺酸(羥乙磺酸)、乳酸、羥基馬來酸、蘋果酸、丙二酸、苯乙醇酸、均三甲苯磺酸(mesitylenesulfonic acid)、甲磺酸、萘磺酸、煙堿酸、2_萘磺酸、草酸、雙羥萘酸、果膠酸、苯基乙酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、丙酸、丙酮酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、磺氨酸、酒石酸、對(duì)甲苯磺酸、十一烷酸等形成。術(shù)語“可藥用堿加成鹽”是指那些保留游離酸的生物效力與性質(zhì)，且不為生物學(xué)上或其它不合需要的鹽，其利用無機(jī)堿例如氨，或銨或金屬陽離子(例如鈉、鉀、鋰、鈣、鎂、 鐵、鋅、銅、錳、鋁等)的氫氧化物、碳酸鹽、或碳酸氫鹽形成。特別優(yōu)選為銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、 鈣鹽及鎂鹽。衍生自可藥用有機(jī)無毒堿的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺、季銨化合物、取代的胺 (包括天然產(chǎn)生的取代的胺)、環(huán)狀胺及堿性離子交換樹脂，例如甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、異丙胺、三丙胺、三丁胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二環(huán)己基胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡堿、哈巴胺、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、四甲基銨化合物、四乙基胺化合物、吡啶、N，N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環(huán)己基胺、二苯甲基胺、 N，N-二苯甲基苯乙胺、1-二苯羥甲胺、N，N' -二苯甲基乙二胺、聚胺樹脂等。特別優(yōu)選的有機(jī)無毒堿為異丙基胺、二乙基胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己基胺、膽堿和咖啡堿。“利巴韋林”指獲自 ICN Pharmaceuticals, Inc. (Costa Mesa, Calif.)的 1-3-0-呋喃核糖基-1!1-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，且描述于第11版Merck Index，化合物第8199號(hào)。其制備和制劑描述于美國專利4，211，771中。優(yōu)選的市售利巴韋林產(chǎn)品包括 REBETOL 與COPEGUS 。該術(shù)語進(jìn)一步包括其衍生物或類似物，例如那些描述于美國專利6，063, 772、 6，403, 564和6，277，830中。例如，衍生物或類似物包括經(jīng)修飾的利巴韋林,例如5'-氨基酯、ICNPharmaceutical的利巴韋林的L-對(duì)映異構(gòu)體(ICN 17261)、利巴韋林的2'-脫氧衍生物與利巴韋林的3-甲脒衍生物、viramidine (過去稱為ribamidine)寸。本文所用術(shù)語“治療組合”是指一種或多種活性藥物(即具有治療用途的化合物) 的組合。本發(fā)明治療組合中的各化合物通常呈包括該化合物與可藥用載體的藥物組合物。 本發(fā)明治療組合中的化合物可作為療程的一部份，同時(shí)或分開給藥。本發(fā)明的實(shí)施方案根據(jù)一般實(shí)施方案，本發(fā)明提供一種治療患者的HCV感染或緩解其一種或多種癥狀的方法，其包括向患者給藥包括如本文定義的化合物(1)或其可藥用鹽，以及干擾素α 與利巴韋林的治療組合的步驟。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明教導(dǎo)本文定義的化合物(1) 或其可藥用鹽、干擾素α和利巴韋林在制備用于治療患者的丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀的醫(yī)藥試劑盒中的用途。盡管預(yù)期該組合療法為有效對(duì)抗所有HCV基因型，但是已證實(shí)其對(duì)治療HCV基因型-1 (包括基因亞型-Ia與lb)感染尤其有效。接受本發(fā)明組合療法的患者群體可進(jìn)一步分為“未曾接受過治療 (treatment-naive)”患者(即過去未曾接受過任何針對(duì)HCV感染的治療的那些患者)與 “曾接受過治療(treatment experienced)，，患者(即過去曾接受過針對(duì)HCV的治療的那些患者)。這兩類患者均可接受本發(fā)明的組合療法。優(yōu)選的曾接受過治療的特定患者為那些過去曾經(jīng)接受過干擾素加利巴韋林的療法，但對(duì)該療法沒有反應(yīng)的患者(本文稱為 “沒有反應(yīng)者(non-responders)”)。這些沒有反應(yīng)者包括三個(gè)不同的患者群(1)在干擾素加利巴韋林治療期間的HCV RNA水平的最大降低程度< Ix Iogltl的患者(“無反應(yīng)者 (nullresponders)"), (2)在干擾素加利巴韋林治療期間的HCV RNA水平的最大降低程度彡Ix Iogltl，但從未達(dá)到HCV RNA水平低于檢測(cè)的水平的患者(“部份反應(yīng)者(partial responders)”)，及(3)在干擾素加利巴韋林療法期間獲得病毒學(xué)響應(yīng)，但在治療期間(不適應(yīng)的患者除外)或在治療完成后，病毒負(fù)荷量反彈的患者(“復(fù)發(fā)者(relapser)”)。如將于下文詳述，利用本發(fā)明組合療法的療程治療某些沒有反應(yīng)患者，已獲得令人特別吃驚的結(jié)果。 根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供一種在有此需要的患者中降低HCV-RNA水平的方法，其包括向該患者給藥本發(fā)明的治療組合的步驟。本發(fā)明方法優(yōu)選使患者的HCV-RNA 水平降低至小于可檢測(cè)水平。本文術(shù)語“小于可檢測(cè)水平”及“低于檢測(cè)的水平”可交換使用，且具有與低于HCV RNA的可檢測(cè)濃度的相同含義。如本發(fā)明中使用的HCV RNA的可檢測(cè)水平是指每毫升患者血清至少50個(gè)國際單位(UI)，根據(jù)WHO國際標(biāo)準(zhǔn)的定量、多循環(huán)逆轉(zhuǎn)錄酶 PCR 方法所測(cè)定(Saladanha J, Lelie N 與 Heath A, Establishment ofthe first international standard for nucleicacid amplification technology(NAT)assays for HCV RNA. WHO Collaborative Study Group. Vox Sang 76:149-158,1999)。此類方法于本領(lǐng)域中公知的。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明方法將患者的HCV-RNA水平降低至低于每毫升血清25 IU，更優(yōu)選降低至低于每毫升血清10IU。干擾素加利巴韋林的標(biāo)準(zhǔn)療法的常用治療持續(xù)時(shí)期為針對(duì)HCV基因型-1感染的至少48周，針對(duì)HCV基因型-2及3的至少24周。然而，再加上化合物(1)或其可藥用鹽的本發(fā)明三重組合療法，可以大大縮短治療持續(xù)時(shí)間。利用本發(fā)明的三重組合療法，計(jì)劃的治療持續(xù)時(shí)間包括至少4周，優(yōu)選為至少12周，例如約12周至約24周，盡管還有可能治療長(zhǎng)達(dá)且甚至超過48周。因此，其它的實(shí)施方案包括治療至少24周與至少48周。預(yù)期針對(duì)不同HCV基因型(例如HCV基因型_2、3或4)的時(shí)期是相似的。還包括以本發(fā)明三重組合療法為初始療程，隨后繼續(xù)僅含干擾素與利巴韋林的二重組合療法。因此，初始三重且隨后兩重的組合療法的可能情況包括例如(1)4周的三重組合療法，隨后為20至44周的僅含干擾素加利巴韋林的療法；(2) 12周的三重組合療法，隨后為12至36周的僅含干擾素加利巴韋林的療法；及(3) 24周的三重組合療法，隨后為12至24周的僅含干擾素加利巴韋林的療法。治療組合的第一種組分(即化合物(1)或其可藥用鹽)包含于組合物中。此類組合物包含化合物(1)或其可藥用鹽，以及可藥用助劑或載體。針對(duì)化合物(1)或其可藥用鹽可使用的常用藥物組合物描述于美國專利7，585，845。通?；衔铫呕蚱淇伤幱名}可以以至少40mg/日的劑量(單劑或分成小劑量) 給藥。關(guān)于劑量與范圍的其他實(shí)施方案可包括(單劑或分成小劑量)(a)至少 48mg/ 日(b)至少 1OOmg/ 日(c)至少 120mg/ 日(d)至少 200mg/ 日(e)至少 240mg/ 日(f)至少 360mg/ 日(g)至少 480mg/ 日(h)自約 40mg/ 日至約 480mg/ 日
(i)自約 48mg/ 日至約 240mg/ 日(j)自約 IOOmg/ 日至約 300mg/ 日

(k)自約 120mg/ 日至約 300mg/ 日(1)自約 120mg/ 日至約 240mg/ 日(m)自約 240mg/ 日至約 480mg/ 日(η)約 48mg/ 日(ο)約 120mg/ 日(ρ)約 240mg/ 日(q)約 360mg/ 日(r)約 480mg/ 日雖然化合物(1)或其可藥用鹽可以每日給藥一次或分成小劑量給藥，然而優(yōu)選以每日給藥一次日劑量。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解，可能需要低于或高于上述劑量。任一具體患者的具體劑量及治療療程將取決于多種因素，包括年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時(shí)間、排泄率、藥物組合、感染的嚴(yán)重度及進(jìn)程、患者對(duì)感染的處置與治療醫(yī)生的判斷。通常，該藥物最需要以通常可提供抗病毒性效力結(jié)果，但不引起任何有害或不良的副作用的水平給藥。該治療組合的第二種組分(即干擾素α )包含于藥物組合物中。該組合物通常為可注射制劑，其包含干擾素α與可藥用助劑或載體，且為本領(lǐng)域中是公知的，包括許多市售干擾素α制劑。參見例如多種市售干擾素-α產(chǎn)品，及多種專利，及其它關(guān)于上文所引用的干擾素α的文獻(xiàn)?？捎糜诮M合的干擾素-α類型已在上文定義部份中列出。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，干擾素α為聚乙二醇化干擾素a。在另一個(gè)實(shí)施方案中，干擾素α為聚乙二醇化干擾素a-2a或聚乙二醇化干擾素a_2b。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，干擾素α為 PEGAS YS 或 PEG- INTRON 。當(dāng)使用已知的市售干擾素α產(chǎn)品時(shí)，這些產(chǎn)品可呈用于治療HCV感染的干擾素加利巴韋林的組合療法所制定的指示劑量給藥。當(dāng)然，采用本發(fā)明的三重組合療法時(shí)，可能使用較低劑量的干擾素α，例如顯著低于現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)干擾素加利巴韋林的療法所使用者，卻可達(dá)到與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)療法相同或更佳的效力而且通常與該療法相關(guān)的副作用較少。在一個(gè)實(shí)施方案中，每周一至三次(優(yōu)選每周一次或兩次)腸胃外給藥干擾素α。 對(duì)于聚乙二醇化干擾素α，通常每周給藥一次，且周總劑量范圍為例如，若為聚乙二醇化干擾素0-2比則約0.5 48/1^/周至約2 48/1^/周；而對(duì)于聚乙二醇化干擾素a-2a，劑量取決于受試者的體重，且通常為約90至200 μ g/周，更優(yōu)選為約160至約200 μ g/周。在與利巴韋林的組合中，與約600-1200mg/日，特別與800-1200mg/日口服給藥的利巴韋林一起給藥的聚乙二醇化干擾素a -2b的標(biāo)準(zhǔn)劑量為約1. 5μ g/kg/周，聚乙二醇化干擾素a -2a 的標(biāo)準(zhǔn)劑量為約ISOyg/周。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，聚乙二醇化干擾素α -2b的給藥量如下(a)約 0. 5 μ g/kg/ 周至約 2 μ g/kg/ 周；(b)約 1 μ g/kg/ 周至約 2 μ g/kg/ 周；(c)約 1. 5 μ g/kg/ 周至約 2 μ g/kg/ 周；
(d)約 1· 5μ g/kg/周。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，聚乙二醇化干擾素α -2a的給藥量如下(a)約 90 至約 200 μ g/ 周；(b)約 160 至約 200 μ g/ 周;(b)約 180 μ g/周。本治療組合的第三種組分(即利巴韋林)包含于藥物組合物中。此類組合物通常包含利巴韋林及可藥用助劑或載體，且為本領(lǐng)域中公知的，其包括許多市售利巴韋林制劑。 包括利巴韋林的制劑還公開在例如美國專利4，211，771中。可用于該組合的利巴韋林類型已于上文定義部份中列出。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，利巴韋林為REBETOL 或COPEGUS ，且其為以用于治療HCV感染的干擾素加利巴韋林的組合療法所指出的指示劑量給藥。當(dāng)然，采用本發(fā)明為三重組合療法時(shí)，可能使用較低劑量的利巴韋林，例如低于現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)干擾素加利巴韋林的療法所使用，卻可達(dá)到與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)療法相同或更佳的效力而且通常與該療法相關(guān)的副作用更少。根據(jù)多個(gè)實(shí)施方案，利巴韋林的給藥量如下(單劑或分成小劑量)(a) 400mg/ 日至約 1200mg/ 日；(b)約 800mg/ 日至約 1200mg/ 日；(c)約 IOOOmg/ 日至約 1200mg/ 日；(d)約 IOOOmg/ 日(e)約 1200mg/ 日(f)約 300mg/ 日至約 800mg/ 日(g)約 300mg/ 日至約 700mg/ 日(h) 500mg/ 日至約 700mg/ 日(i)400mg/ 日至約 600mg/ 日(j)約 400mg/ 日(k)約 600mg/ 日(1)約 800mg/ 日 根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，利巴韋林組合物包括呈制劑的利巴韋林，其適于每日一次、每日兩次、每日三次、每日四次、每日五次、或每日六次給藥。例如，若治療組合包括約IOOOmg/ 日劑量的利巴韋林，且需要每日給藥五次，則治療組合將包括呈制劑的利巴韋林，例如含有例如約200mg利巴韋林的片劑。對(duì)于本發(fā)明的化合物(1)或其可藥用鹽加干擾素α加利巴韋林的三重組合療法， 本發(fā)明包括涵蓋且包括上文所述的多種優(yōu)選實(shí)施方案及亞實(shí)施方案的所有組合。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種治療患者的丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀的方法，其包括向患者給藥治療組合的步驟，該治療組合包括(a)每日約48mg至約480mg劑量的化合物⑴或其可藥用鹽；(b)約160至約200 μ g/周劑量的聚乙二醇化干擾素α -2a,或約0.5 μ g/kg/周至約2 μ g/kg/周劑量的聚乙二醇化干擾素α -2b ；及(c)約400mg/日至約1200mg/日劑量的利巴韋林。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種治療患者的丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀的方法，其包括向患者給藥治療組合的步驟，該治療組合包括(a)每日約48mg至約480mg劑量的化合物⑴或其可藥用鹽；(b)約180 μ g/周劑量的聚乙二醇化干擾素α -2a ；及(c)約IOOOmg/日至約1200mg/日劑量的利巴韋林。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明包括一種治療患者的丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀的方法，其包括對(duì)患者給藥治療組合的步驟，該治療組合包括(a)每日約48mg至約480mg劑量的化合物⑴或其可藥用鹽；(b)約1. 5 μ g/kg/周劑量的聚乙二醇化干擾素α -2b ；及(c)約800mg/日劑量的利巴韋林。

其它實(shí)施方案包括上述實(shí)施方案中任一例，且其中(a)HCV感染為基因型-1，且患者為未曾接受過治療的患者；或(b)HCV感染為基因型-1，且患者為曾接受過治療，但對(duì)干擾素加利巴韋林的組合療法沒有反應(yīng)的患者。其它實(shí)施方案包括上述實(shí)施方案中任一例，且其中化合物(1)或其可藥用鹽為每日給藥一次，且干擾素α為每周給藥一次及利巴韋林為每日給藥兩次。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明的治療療程包括對(duì)患者給藥至少約4周， 更優(yōu)選至少約12周或至少約24周(i)每日一次的治療有效量的化合物(1)或其可藥用鹽；(ii)每周一次的治療有效量的干擾素α ；及(iii)每日兩次的治療上有效量的利巴韋林。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供一種用于治療患者HCV感染的試劑盒。本發(fā)明試劑盒可包括本發(fā)明任一種治療組合。該試劑盒進(jìn)一步包括指示該治療組合用法的說明書?？砂锤鞣N類別或種類的患者的需要或按其它臨床相關(guān)因素(例如年齡、體重、并發(fā)疾病 /病癥、HCV感染的嚴(yán)重性及階段、對(duì)先前治療有反應(yīng)或沒有反應(yīng)、副作用傾向等)而調(diào)整試劑盒。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供試劑盒，其包括(a)第一藥物組合物，其包含化合物(1)或其可藥用鹽(b)第二藥物組合物，其包含干擾素α ；(c)第三藥物組合物，其包含利巴韋林；及(d)指示使用上述組合物用法的說明書。另外，在以本發(fā)明涵蓋的組合療法治療期間，在抑制HCV病毒抗性上觀察到令人驚奇的結(jié)果。在未曾接受過治療的所有劑量組中觀察到病毒負(fù)荷量降低的大多數(shù)患者中， 作為單一療法給藥的化合物(1)(鈉鹽)在治療頭14天期間即導(dǎo)致快速的病毒負(fù)荷量反彈。不同的是，曾接受過治療的19名患者中，在接受28天與聚乙二醇化干擾素a-2a及利巴韋林(PeglFN/RBV)組合的每日一次(qd)48mg(n = 6)、120mg(n = 7)、或 240mg(n = 6) 劑量的化合物(1)(鈉鹽)時(shí)，在28天治療期間，僅在48mg劑量組的2/6患者，及120mg劑量組的1/7患者中觀察到病毒量反彈。值得注意的是，在頭28天內(nèi)，在曾接受過治療的劑量組中，接受每日一次與PeglFN/RBV組合的240mg化合物(1)(鈉鹽)治療時(shí)，未觀察到反彈。
因此，在其它的 實(shí)施方案中，在本發(fā)明組合療法期間出現(xiàn)有限的或不出現(xiàn)病毒抗性(viral resistance) 0在更具體的實(shí)施方案中，在本發(fā)明組合療法期間，可編碼在R155 和/或D168和/或A156的一或多處出現(xiàn)的氨基酸取代的HCV NS3蛋白酶的HCV變異株的出現(xiàn)受到限制或不出現(xiàn)。其它的實(shí)施方案包括上述實(shí)施方案中的任一例，且其中(a)HCV感染為基因型-la，且患者為未曾接受過治療的患者；或(b)HCV感染為基因型-la，且患者為曾接受過治療且對(duì)干擾素加利巴韋林的組合療法沒有反應(yīng)的患者；且其中在本發(fā)明組合療法期間，出現(xiàn)有限的或不出現(xiàn)可編碼在NS3蛋白酶Rl55處氨基酸取代的變異株。其它實(shí)施方案包括上述實(shí)施方案中的任一例，且其中(a)HCV感染為基因型-lb，且患者為未曾接受過治療的患者；或(b)HCV感染為基因型_lb，且患者為曾接受過治療且對(duì)干擾素加利巴韋林的組合療法沒有反應(yīng)的患者；且其中在本發(fā)明組合療法期間，出現(xiàn)有限的或不出現(xiàn)可編碼在NS3蛋白酶D168處氨基酸取代的變異株。
實(shí)施例I.制備化合物(1)的方法制備無定形化合物(1)的方法可于US 6，323，180、7，514，557和7，585，845中，將其整個(gè)在此引入作為參考。下列實(shí)施例1至5提供制備可用于本發(fā)明的其它形式的化合物 (1)的方法。實(shí)施例I-A型結(jié)晶形式的化合物⑴的制備將無定形化合物(1)(批次7，13. 80g)添加至IOOOml三頸燒瓶中。添加無水乙醇 (248. 9g)至該燒瓶中。在攪拌下，以每小時(shí)攝氏60度加熱燒瓶的內(nèi)容物至約攝氏74度。 (固體在攝氏74度下不溶解)。隨后在攪拌且保持?jǐn)z氏74度的溫度，連續(xù)4小時(shí)，以線性方式連續(xù)添加水(257. 4g)至所得漿液中。在完成添加水后，以每小時(shí)攝氏8度，使溫度以線性方式連續(xù)降至環(huán)境溫度，且隨后在攪拌和室溫下放置6小時(shí)。通過過濾，收集所得固體，并以50ml的1/1 (w/w) EtOH/水洗滌。通過使N2抽吸經(jīng)過濾餅，使?jié)窆腆w在漏斗上干燥。(該樣本的XRPD分析說明其圖譜與EtOH溶劑合物類似)。隨后在真空(P = 25，以Hg表示) 及攝氏65-70度下及氮?dú)鈿饬髦?，干燥固體1. 5小時(shí)。通過XRPD，確定所得固體(12. 6g， 95. 5%準(zhǔn)確產(chǎn)率)為A型化合物(1)。實(shí)施例2-化合物⑴的鈉鹽的制備_方法1將2. Ig無定形化合物(1)的鈉鹽與8. 9g丙酮添加至小玻璃瓶中，并在室溫下攪拌3小時(shí)。漿液經(jīng)濾除母液，所得固體在20分鐘的氮?dú)鈿饬髦懈稍?0分鐘。得到1. 51g 的化合物(1)鈉鹽結(jié)晶。實(shí)施例3-化合物⑴的鈉鹽的制備_方法2在250ml反應(yīng)器中，添加15. 6g A型化合物(1)與175ml丙酮及3. 6ml水，并加熱至攝氏53度，溶解固體。添加900 μ 1的10. ON NaOH至反應(yīng)器，并在該溶液中接種A型晶種。在攝氏53度下攪拌已接晶種的溶液10分鐘。添加第二份90(^1的10.(^ NaOH，并在攝氏53度下攪拌該系統(tǒng)30分鐘，經(jīng)過該步驟形成漿液。以每小時(shí)攝氏15度的冷卻速率使?jié){液冷卻至攝氏19度，并在攝氏19度下放置過夜。過濾最終所得漿液，并以15ml丙酮洗滌濕固體。在攝氏52度及真空下，在氮?dú)鈿饬髦懈稍锕腆w1小時(shí)，且隨后使固體暴露于實(shí)驗(yàn)室空氣一小時(shí)。得到12. Ig化合物(1)鈉鹽結(jié)晶固體。實(shí)施例4-化合物⑴的鈉鹽的制備_方法3在反應(yīng)器中添加25.4Kg無定形化合物(1)、228L THF及11. IKg 10重量％ NaOH(水溶液)。在攝氏25度下混合這些組分，溶解所有固體。過濾所得溶液，并以23L THF洗滌反應(yīng)器與濾器。采用常壓蒸餾，在攝氏65度下移除180L溶劑。添加195L MIBK， 并通過真空蒸餾，在約攝氏44度下移除166L溶劑。再次添加161L MIBK與0. 41Kg水至反應(yīng)器，且加熱該內(nèi)容物至攝氏70度。在攝氏70度下，添加255g化合物(1)鈉鹽晶種，并以 1. 5小時(shí)時(shí)間添加1. 42L水。在添加水后，漿液置于攝氏70度下45分鐘，且在隨后1小時(shí)， 使其冷卻至攝氏45度。過濾所得漿液，并以64L含約0.8重量％水的MIBK洗滌。濕濾餅在攝氏55度下干燥，產(chǎn)生約25Kg的化合物(1)鈉鹽結(jié)晶。

實(shí)施例5-化合物⑴的鈉鹽的制備_方法4在反應(yīng)器中添加2. OOg無定形化合物(1)、9. 96g THF及0. Ilg水，并在環(huán)境溫度下攪拌，直至固體溶解。伴隨攪拌該溶液，逐滴添加0. 820ml的21重量％ NaOEt的乙醇溶液，得到A溶液。在第二反應(yīng)器中添加15. 9g的n-BuAc與160 μ 1水，并加熱至攝氏65度 (B溶液)。在攝氏65度下添加2. 56gA溶液至B溶液，且在所得混合物中接種40mg化合物 (1)鈉鹽晶種。在攝氏65度下，靜置經(jīng)接晶種的混合物45分鐘。分四次添加2. 56g的B溶液至A溶液，且每次隨后靜置45分鐘。在最后一次添加并靜置后，在1小時(shí)內(nèi)，使?jié){液冷卻至攝氏50度并過濾。以6ml含0.5重量％水的n-BuAc洗滌濕濾餅。利用氮?dú)鉀_刷，在真空與攝氏50度下干燥所得固體。收得化合物(1)晶型鈉鹽固體。II.臨床結(jié)果下文所述的臨床試驗(yàn)中，給藥的藥物產(chǎn)品為化合物(1)鈉鹽的口服液?；衔?1) 鈉鹽以粉末提供給一個(gè)或多個(gè)臨床中心，以利用一起提供的溶劑制成口服液。該溶劑還作為安慰劑。實(shí)施例6-未曾接受過治療的患者的臨床試驗(yàn)以單一療法，以及與聚乙二醇化干擾素α -2a(P)與利巴韋林(R)組合給藥的化合物(1)鈉鹽(一種新的HCV NS3蛋白酶抑制劑)，對(duì)罹患慢性基因型-1丙型肝炎病毒感染的未曾接受過治療的患者的安全性及抗病毒活性。背景化合物(1)鈉鹽為HCV NS3蛋白酶抑制劑(EC50為3_6nM)。由多組劑量漸增測(cè)試(a multiple rising dose study)評(píng)估對(duì)罹患慢性基因型-1HCV感染且未曾接受過治療的患者(Pts)的安全性與抗病毒活性，其作為單一療法給藥14天，隨后以與P+R的三重組合療法再給藥14天。方法將34名(法國、德國、西班牙、美國)Metavir纖維化評(píng)分(Metavirfibrosis score)為0至3且未經(jīng)任何干擾素或R療法治療的患者隨機(jī)分組(2位安慰劑6或7位活性成份)為四個(gè)每日一次(qd)化合物(1)鈉鹽的劑量組20mg(n = 8)、48mg(n = 9)、 120mg(n = 9)、或240mg(n = 8)?；衔?1)鈉鹽作為單一療法給藥14天。對(duì)第10天的病毒負(fù)荷量(VL)降幅< 1 Iogltl的患者，在第14天后停止提供化合物(1)鈉鹽。對(duì)第 10天的VL降幅彡1 Iogltl的患者，在第15天繼續(xù)提供化合物(1)鈉鹽，并增加P (180 μ g/ 周)+R(以體重為基準(zhǔn)計(jì))，以形成三重組合療法，直到第28天。主要終點(diǎn)為直到第14天， VL 降幅彡 2 Iogltl 時(shí)的任何時(shí)間點(diǎn)。以 RocheCOBAS TaqMan 測(cè)試(LLOQ 25IU/mL) 測(cè)定血漿HCV-RNA水平。在第28天后，由研究者判斷患者是否繼續(xù)接受標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理治療，即 P+R。 結(jié)果:33名患者為白人，1名為亞洲人，27名為男性，平均年齡=48. 9 士 11. 1歲， 平均體重為79. 1 士 17. 5kg，且中值(范圍)基線VL為6. 8 (4. 7-7. 7) Iog100在劑量組之間不存在顯著人口統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?；衔?1)鈉鹽的耐受性良好。單一療法期間，沒有患者因不良事件(AE)而中斷治療。觀察到的AE通常針對(duì)P+R。在開始P+R 6天后，20mg劑量組中有一位出現(xiàn)嚴(yán)重AE (即虛弱無力)。所有患者中均觀察VL快速降低，且最大降幅通常出現(xiàn)在開始化合物(1)鈉鹽后2-4天。除了 20mg組中的一名患者外，化合物(1)鈉鹽的所有患者均在單一療法期間達(dá)到> 21og1(1的VL降幅。對(duì)于20mg、48mg、120mg、及240mg組，14天單一療法期間的VL最大降幅中值(范圍)分別為3. O (1. 5-3. 9)、3. 6 (3. 1-3. 8)、3. 7 (3. 3-4. 1)、 ^4.2(3. 6-4. 8) Iog10 IU/ml。安慰劑的VL無顯著變化。在單一療法的頭14天，所有劑量組的大多數(shù)患者均在治療期間觀察到VL反彈。結(jié)論作為單一療法給藥14天且隨后與P+R組合再給藥14天的化合物(1)鈉鹽的耐受性良好，且在未曾接受過治療的患者中誘發(fā)強(qiáng)力且快速的抗病毒響應(yīng)。圖1說明本研究中四個(gè)患者劑量組的HCV病毒負(fù)荷量的平均變化，即由罹患慢性基因型-1 HCV感染且未曾接受過治療的患者接受以化合物(1)鈉鹽作為單一療法給藥14 天，隨后以化合物(1)鈉鹽、聚乙二醇化干擾素α _2a及利巴韋林的組合療法再給藥14天治療。在該圖中，病毒負(fù)荷量的變化以IU/ml Iogltl單位表示，且四個(gè)患者劑量組標(biāo)示如下“20 naiv aV” = 20mg劑量組的平均病毒負(fù)荷量變化“48 naiv aV” = 48mg劑量組的平均病毒負(fù)荷量變化“120 naiv aV” = 120mg劑量組的平均病毒負(fù)荷量變化“240 naiv aV” = 240mg劑量組的平均病毒負(fù)荷量變化在未曾接受過治療患者治療期間的變異株的出現(xiàn)在基線及治療期間反彈時(shí)的NS3/4A蛋白酶群的測(cè)序揭示出導(dǎo)致體外化合物(1) 鈉鹽耐藥的變異株部分。在多個(gè)劑量組的治療期間，觀察到相對(duì)于亞型參考物(亞基因型-la :AF009606或亞基因型-Ib :AJ238799)，在NS3蛋白酶域內(nèi)關(guān)鍵殘基上有顯著變化。 詳細(xì)內(nèi)容請(qǐng)參見下表1至4。在所有表格中，Gt表示HCV亞基因型，及第一天表示基線序列，所指出的氨基酸取代出現(xiàn)在天然出現(xiàn)的NS3多態(tài)現(xiàn)象的關(guān)鍵殘基上?？稍谥委熎陂g的不同天觀察到可能編碼耐藥性或與耐藥性相關(guān)的其它變化。表1 未曾接受過治療的20mg劑量組患者的基于族群的氨基酸序列中，關(guān)鍵殘基上的主要變異(相對(duì)于亞型參考物)
權(quán)利要求
1.以下組合在制備用于治療丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀的藥物中的用途，所述組合為(a)下式(1)化合物或其可藥用鹽
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述藥物包括(a)第一藥物組合物，其包含下式(1)化合物或其可藥用鹽
3.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述組分(a)、(b)和(c)以治療有效量存在于藥物中。
4.權(quán)利要求1或2的用途，其中該HCV感染為基因型-1。
5.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述藥物用于治療未曾接受過治療的患者的丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀。
6.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述藥物用于治療對(duì)使用利巴韋林和干擾素α的組合療法沒有反應(yīng)的患者的丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀。
7.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述藥物用于治療因接受治療而使HCV-RNA水平降至低于可檢測(cè)水平的患者的丙型肝炎病毒(HCV)感染或緩解其一種或多種癥狀。
8.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述藥物給藥至少4周。
9.權(quán)利要求1或2的用途，其中化合物(1)或其可藥用鹽的給藥量為至少每日40mg。
10.權(quán)利要求1或2的用途，其中利巴韋林的給藥量為400mg/日、600mg/日、800mg/ 日、IOOOmg/ 日，或 1200mg/ 日。
11.權(quán)利要求1或2的用途，其中干擾素α每周給藥一次。
12.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述干擾素α為聚乙二醇化干擾素α。
13.權(quán)利要求12的用途，其中所述聚乙二醇化干擾素α為以約90至約200μ g/周的劑量給藥的聚乙二醇化干擾素α _2a，或?yàn)橐约s0. 5μ g/kg/周至約2μ g/kg/周的劑量給藥的聚乙二醇化干擾素α-2b。
14.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述治療用于對(duì)使用利巴韋林與干擾素的組合療法沒有反應(yīng)的患者的基因型-1的HCV感染，化合物(1)或其可藥用鹽以每日約48mg至每日約 240mg的量給藥，且所述干擾素α為聚乙二醇化干擾素α-2a或聚乙二醇化干擾素α _2b。
15.權(quán)利要求1或2的用途，其中所述化合物(1)或其可藥用鹽每日給藥一次；利巴韋林每日給藥兩次；以及干擾素α每周給藥一次。
16.權(quán)利要求1或2的用途，其中出現(xiàn)有限的或不出現(xiàn)HCV變異株，所述HCV變異株編碼在R155、D168或Α156中一處或多處位點(diǎn)的氨基酸取代的HCV NS3蛋白酶。
17.試劑盒，其包括(a)第一藥物組合物，其包含下式(1)化合物或其可藥用鹽
全文摘要
本發(fā)明涉及治療組合，其包括(a)如本文所述的化合物(1)或其可藥用鹽、(b)干擾素α和(c)利巴韋林。所述化合物(1)為HCV NS3絲氨酸蛋白酶的強(qiáng)效選擇性抑制劑。本發(fā)明還涉及使用此類治療組合用于治療患者的HCV感染或緩解其一種或多種癥狀的方法。
文檔編號(hào)A61K45/06GK102159245SQ200980136292
公開日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2009年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月17日
發(fā)明者戴維·黃, 杰里·O·斯特恩, 格哈德·G·斯坦曼 申請(qǐng)人:貝林格爾.英格海姆國際有限公司