專利名稱：包含松節(jié)提取物的用于皮膚外用的組合物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及包含松節(jié)提取物作為有效成分的用于皮膚外用的組合物。更特別地， 其涉及包含具有良好的皮膚細胞增殖和膠原生物合成促進作用的松節(jié)提取物作為有效成 分的防止皮膚老化的用于皮膚外用的組合物。
背景技術：
作為人體的第一層防護屏障，皮膚為各種器官提供對于溫度和濕度的變化以及環(huán) 境刺激例如UV或污染的保護，以及保持體內平衡。然而，來自外界的過度的物理/化學刺 激或壓力或營養(yǎng)不良導致皮膚正常功能的退化并加速皮膚老化，例如彈性喪失、角質化、產 生皺紋等。為了防止皮膚老化并保持健康和皮膚彈性，已經使用來源于天然物質的化妝品物 質。例如，包含提取自各種植物或微生物的生理學活性物質的化妝品已經被用于保持皮膚 的內在功能和通過活化皮膚細胞預防皮膚老化。然而，大多數(shù)已知的化妝品物質不能提供足夠的作用或會引起不良的皮膚反應。 因此，對于提供皮膚抗老化作用而不會導致皮膚不良反應的物質存在很強的需求。如Dongeui Bogam所述，自古以來，松節(jié)已被用于緩解風濕病或關節(jié)炎，且當被釀 入酒中時，其可以使病腿強壯。這表明，松節(jié)可能包含各種活性成分。通過長期的研究，發(fā) 明人開發(fā)出了使用松節(jié)的用于皮膚外用的組合物。

發(fā)明內容
技術問題本發(fā)明涉及提供包含松節(jié)提取物作為有效成分的用于防止皮膚老化的用于皮膚 外用的組合物。本發(fā)明的還涉及提供包含松節(jié)提取物的用于皮膚外用的組合物，其可以有效地促 進皮膚細胞增殖和膠原生物合成。本發(fā)明還涉及提供制備包含松節(jié)提取物的用于皮膚外用的組合物的方法。技術方案依據本發(fā)明的用于皮膚外用的組合物包含松節(jié)提取物作為有效成分。有益作用依據本發(fā)明的包含松節(jié)提取物的組合物通過促進皮膚細胞增殖和膠原生物合成 提供了防止皮膚老化的作用，并且因此可廣泛地用于皮膚美容護理和化妝品領域中。
具體實施例方式以下，將參考附圖
(其中顯示示例性的實施方案)更充分地描述示例性的實施方 案。但是，本公開還可以以許多不同的形式體現(xiàn)，而且不應被解釋為限于以下所述的示例性 的實施方案。相反，提供這些示例性的實施方案是為了使本發(fā)明詳盡和完整，并向本領域的
3技術人員充分傳達本發(fā)明的范圍。在說明書中，可能省略已知特征和技術的細節(jié)，以避免不 必要地使所述的實施方案模糊。本文使用的術語僅僅是出于描述特定實施方案的目的，并非意圖限制本發(fā)明。本 文中所使用的單數(shù)形式“a”，“an”和“the”也意圖包括復數(shù)形式，除非上下文中明確地另外 說明。此外，術語a，an等的使用不表示對數(shù)量的限制，而是表示存在所述項目中的至少一 種。術語“第一”、“第二”等的使用不意味著任何特別的順序，但是它們被引入以區(qū)分單個的 要素。此外，術語第一、第二等的使用不表示任何順序或重要性，相反，術語第一、第二等用 于將一個要素和另一個要素區(qū)分。還應理解，當用于本說明書中時，術語“包含”或“包括” 具體表示所述特征、范圍、整體、步驟、操作、要素，和/或組分的存在，但不排除一種或多種 其它特征、范圍、整體、步驟、操作、要素、組分和/或它們的集合的存在或加入。除非另外有定義，否則本文使用的所有術語(包括技術術語和科學術語)的含義 與本領域的普通技術人員通常理解的含義相同。另外應該理解，術語例如那些在常用詞典 中定義的術語應解釋具有含義與它們在相關技術領域和本發(fā)明中的上下文中的含義一致， 并且不應以理想化的或過于形式上的方式加以解釋，除非本文明確地如此定義。在本發(fā)明的一個實施方案中，用于皮膚外用的組合物包含松節(jié)提取物作為有效成 分。在一個實施方案中，松節(jié)提取物具有促進皮膚細胞(成纖維細胞)增殖和促進膠原生 物合成的作用。在另一個實施方案中，用于皮膚外用的組合物具有防止皮膚老化和防止或 改善皺紋的作用。在本發(fā)明中使用的“松節(jié)”意為松樹中節(jié)或分叉的部位，并包括松樹枝生長的部位 和松樹枝被砍掉的部位。在松樹枝生長的部位處，收集松脂。松樹枝被砍掉的部位處由于 松脂而變成淺黃色。在實施方案中，基于組合物的總重量，包含的松節(jié)提取物的量可以為0. 0001至10 重量％，更特別地為0. 001至5. 0重量％。如果松節(jié)提取物的含量低于前述的范圍，則促進 皮膚細胞增殖和膠原生物合成的作用可能會低。并且，如果含量超出前述的范圍，則最終的 制劑形式會有令人不愉快的顏色或氣味。本發(fā)明還提供制備用于皮膚外用的組合物的方法。在一個實施方案中，制備用 于皮膚外用的組合物的方法包括(a)研磨松節(jié)；(b)使用低極性溶劑，通過冷浸(cold infusion)或浸漬(maceration)提取經研磨的松節(jié)；和(c)在減壓條件下使用配有冷卻冷 凝器的蒸餾裝置濃縮(b)中的提取物。 在一個實施方案中，低極性溶劑可以是選自由C1-C4無水或含水低級醇(例如甲醇 或乙醇)、丙酮、乙酸乙酯、乙酸二乙酯、二乙醚、苯、氯仿和己烷組成的組中的一種或多種溶 劑。在另一個實施方案中，制備用于皮膚外用的組合物的方法可進一步包括，在用無 水或含水低級醇或丙酮提取松節(jié)之后，(b-Ι)用低極性溶劑進行再提取。用于(b-1)中再 提取的低極性溶劑可以是選自由乙酸乙酯、二乙醚、苯、氯仿和己烷組成的組中的一種或多 種溶劑。通過再提取，活性成分的含量可以被最大化，雜質可以被去除，提取物的穩(wěn)定性可 以被改善，并且所需的作用可以被最大化。下文中將給出制備本發(fā)明的包含松節(jié)提取物的組合物方法的更詳細的描述。將松 節(jié)細細地研磨?；诮浹心サ乃晒?jié)的干重，通過5-20當量體積的提取溶劑將經研磨的松節(jié)浸漬提取。過濾之后，在減壓下濃縮濾液。提取溶劑可以是極性溶劑例如水、低級醇(例如 甲醇或乙醇)、水-低級醇混合物、丙酮、1，3-丁二醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇等，或它們的 混合物。在通過添加水分散濃縮物之后，在加入相同體積的低極性有機溶劑例如乙酸乙 酯、氯仿、二乙醚等之后，攪拌分散體。分離有機層，并通過在減壓下濃縮獲得具有優(yōu)良活性 的提取物?？梢酝ㄟ^冷浸或滲濾約12-96小時或通過在C1-C4無水或含水低級醇、乙酸乙酯 或二乙醚中在4-25°C的常溫下浸泡3-20天而提取有效成分?？蛇x的，浸漬可以在接近溶劑 的回流溫度的溫度下進行約5-M小時，盡管條件可能會隨溶劑和浸漬溫度而變化。在一個實施方案中，組合物可被用于通過促進皮膚細胞增殖和膠原生物合成來防 止皮膚老化。依據施用的身體部位，用于外用的組合物的制劑形式沒有具體的限制。例如， 用于皮膚外用的組合物可以是柔膚露(softening lotion)、滋養(yǎng)露(nourishing lotion)、 按摩霜(massage cream)、滋養(yǎng)霜(nourishing cream)、皮月夫貝占(pack)或 疑月交齊Ll形式的施 用于皮膚上的化妝品組合物，或為經皮給藥的形式，例如洗劑、軟膏劑、凝膠劑、霜劑、貼劑 或噴霧劑。此外，在各種制劑形式的用于外用的組合物中可以包括除松節(jié)提取物之外的其它 成分。本領域技術人員根據劑型、使用目的等可以容易地選擇成分。通過添加這些組分可 以獲得協(xié)同作用。下面將描述實施例和實驗。下述實施例和實驗僅是為了說明目的，并不意圖限制 本發(fā)明的范圍。實施例[實施例1]用純水洗滌松節(jié)，干燥并細細地研磨成粉末。將松節(jié)粉末(IOOg)與50%乙醇水 溶液(IL)混合。通過在配有冷卻冷凝器的提取器中煮沸12小時提取混合物。提取物通過 300目的濾布過濾。過濾物在4-15°C下保持7天并通過Whatman 2號濾紙過濾。將經過濾 的提取物放入3L分離漏斗中，并在加入乙酸乙酯(IL)之后，通過振搖充分混合。將混合物 置于常溫下。在完全分離為兩層之后，收集上層(乙酸乙酯層)。用分離漏斗從下層(含水 層)再進行兩次提取。將收集到的上層合并，并用配有冷卻冷凝器的蒸餾裝置在50°C下在 減壓下濃縮。干燥之后，獲得22. Ig(干重)提取物。[比較例1]用純凈水洗滌松針，干燥并細細地研磨成粉末。將松針粉末(IOOg)與50%乙醇水 溶液(IL)混合。通過在配有冷卻冷凝器的提取器中煮沸12小時提取混合物。提取物通過 300目的濾布過濾。過濾物在4-15°C下保持7天并通過Whatman 2號濾紙過濾。將經過濾 的提取物放入3L分離漏斗中，并在加入乙酸乙酯(IL)之后，通過振搖充分混合。將混合物 置于常溫下。在完全分離為兩層之后，收集上層(乙酸乙酯層)。用分離漏斗從下層(含水 層)再進行兩次提取。將收集到的上層合并，并用配有冷卻冷凝器的蒸餾裝置在50°C下在 減壓下濃縮。干燥之后，獲得17.5g(干重)提取物。[比較例2]用純水洗滌松皮，干燥并細細地研磨成粉末。將松樹皮粉末(IOOg)與50%乙醇水 溶液(IL)混合。通過在配有冷卻冷凝器的提取器中煮沸12小時提取混合物。提取物通過300目的濾布過濾。過濾物在4-15°C下保持7天并通過Whatman 2號濾紙過濾。將經過濾 的提取物放入3L分離漏斗中，并在加入乙酸乙酯(IL)之后，通過振搖充分混合。將混合物 置于常溫下。在完全分離為兩層之后，收集上層(乙酸乙酯層)。用分離漏斗從下層(含水 層)再進行兩次提取。將收集到的上層合并，用配有冷卻冷凝器的蒸餾裝置在50°C下在減 壓下濃縮。干燥之后，獲得19. Ig(干重)提取物。[比較例3]用純水洗滌松果，干燥并細細地研磨成粉末。將松果粉末(IOOg)與50%乙醇水 溶液(IL)混合。通過在配有冷卻冷凝器的提取器中煮沸12小時提取混合物。提取物通過 300目的濾布過濾。過濾物在4-15°C下保持7天并通過Whatman 2號濾紙過濾。將經過濾 的提取物入3L分離漏斗中，并在加入乙酸乙酯(IL)之后，通過振搖充分混合。將混合物置 于常溫下。在完全分離為兩層之后，收集上層(乙酸乙酯層)。用分離漏斗從下層(含水 層)再進行兩次提取。將收集到的上層合并，用配有冷卻冷凝器的蒸餾裝置在50°C下在減 壓下濃縮。干燥之后，獲得16. 4g(干重)提取物。[實驗例1]松節(jié)提取物的皮膚細胞增殖作用測試松節(jié)提取物的皮膚細胞增殖作用。首先，將人類正常成纖維細胞接種至96孔 的微板上，每孔ι χ IO4個細胞。將接種的細胞在Dulbecco改進的fegle培養(yǎng)基(DMEM)中 培養(yǎng)M小時。在分別用含500 μ g/mL實施例1中的松節(jié)提取物或比較例1-3中的提取物 的無血清DMEM替換培養(yǎng)基之后，將細胞進一步培養(yǎng)M小時。在加入5mg/mL 3-(4，5-二甲 基噻唑-2-基)2，5-二苯基四唑鐺(MTT) (10 μ L每孔)之后，4小時后移除培養(yǎng)基。添加二 甲基亞砜(100 μ L每孔)之后，在570nm下用酶標儀測定吸光度。細胞增殖作用通過等式1計算，結果在表1中給出。[等式1] 細胞增殖作用(％)=[(用提取物處理后的吸光度-對照組的吸光度)/對照組 的吸光度]xlOO表 1[表 1][表]
權利要求
1.包含松節(jié)提取物作為有效成分的用于皮膚外用的組合物。
2.如權利要求1所述的用于皮膚外用的組合物，其中基于組合物的總重量，包含的所 述松節(jié)提取物的量為0. 0001重量％至10重量％。
3.如權利要求1所述的用于皮膚外用的組合物，其中所述松節(jié)提取物對于皮膚細胞增殖有效。
4.如權利要求1所述的用于皮膚外用的組合物，其中所述松節(jié)提取物對于促進膠原生 物合成有效。
5.如權利要求1所述的用于皮膚外用的組合物，其用于預防皮膚老化。
6.如權利要求1所述的用于皮膚外用的組合物，其用于預防或改善皺紋。
7.制備包含松節(jié)提取物作為有效成分的用于皮膚外用的組合物的方法，包括 研磨松節(jié)；使用低極性溶劑，通過冷浸或浸漬提取經研磨的松節(jié)；和 在減壓條件下使用配有冷卻冷凝器的蒸餾裝置濃縮提取物。
8.如權利要求7所述的制備用于皮膚外用的組合物的方法，其中所述低極性溶劑是選 自由C1-C4無水或含水低級醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸二乙酯、二乙醚、苯、氯仿和己烷組成的 組中的一種或多種溶劑。
9.如權利要求7所述的制備用于皮膚外用的組合物的方法，其進一步包括，在所述萃 取之后，使用選自由乙酸乙酯、二乙醚、苯、氯仿和己烷組成的組中的一種或多種溶劑進行 再提取。
10.防止皮膚老化的方法，包含向有此需要的對象給藥有效量的如權利要求1所述的 組合物。
11.如權利要求10所述的方法，其通過促進皮膚細胞增殖和膠原生物合成來防止皮膚 老化。
12.如權利要求10所述的方法，其中經皮給藥如權利要求1所述的組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了包含松節(jié)提取物作為有效成分的用于防止皮膚老化的用于皮膚外用的組合物。所述組合物通過皮膚細胞增殖和膠原生物合成來防止和改善皺紋，并且可以廣泛地應用于皮膚美容護理和化妝品領域中。
文檔編號A61K8/97GK102105130SQ200980129052
公開日2011年6月22日 申請日期2009年6月23日 優(yōu)先權日2008年6月24日
發(fā)明者盧浩植, 文恩晶, 樸城逸, 趙嘉英, 金修晶, 金延埈, 金德姬, 金漢坤, 金銀珠 申請人:株式會社愛茉莉太平洋