專利名稱：特異性調(diào)節(jié)pokemon基因表達的反義寡核苷酸及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
POKEMON是一種新發(fā)現(xiàn)的致癌基因，它能夠?qū)е缕渌掳┗虬l(fā)作，最終促使腫瘤 形成。POKEMON可以使癌細胞獲得抗老化和死亡的能力，因此被稱為癌癥的"總開關(guān)"。非 常重要的一點是細胞內(nèi)Pokemon的缺失不會對細胞的正常生長造成影響，這就為設(shè)計低副 作用的特異性抗癌藥物提供了可能。 Izant和Weintraub于1984年首次提出反義技術(shù)，所謂反義技術(shù)就是根據(jù)核酸間 結(jié)合堿基互補原理，用人工合成或生物合成的特定互補的反義核酸或它們的化學修飾物與 細胞內(nèi)的核酸相互作用以抑制或封閉其表達。惡性腫瘤的發(fā)生與細胞內(nèi)某些癌基因的激活 或某些抑癌基因的失活或缺失有關(guān)。反義核酸能特異地阻斷癌基因激活后的過度表達而不 影響其他基因的正常功能，目前利用反義技術(shù)設(shè)計出與有害基因、突變基因、非正常表達基 因及其mRNA互補的反義核酸，以封閉這些基因或抑制其表達。而反義核酸治療腫瘤的研究 主要在腫瘤細胞株、荷瘤動物和腫瘤患者三個水平上進行應(yīng)用。目前ISIS3521、ISIS5132、 ISIS2503、G3139、GEM231等已進入臨床試驗階段。 天然寡核苷酸在血清中不能穩(wěn)定存在，在幾分鐘內(nèi)就會完全被降解，因此，天然寡 核苷酸不能作為反義治療的藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸及其應(yīng) 用。 本發(fā)明所提供的反義寡核苷酸是，其分子式為下述式I至式IV中之一
5， CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx 3，(式I);
5， CxGxCxTxGyAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx 3，(式II);
5， GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx 3，(式III);
5， TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx 3，(式IV); 其中，式I至式IV中，x均指硫代磷酸酯核苷間鍵(硫代磷酸酯鍵)；y均指磷酸 二酯核苷間鍵(磷酸二酯鍵)；A均指2'-脫氧腺苷；T均指2'-胸苷；C均指2'-脫氧胞 苷；G均指2'-脫氧鳥苷。 本發(fā)明所提供的上述反義寡核苷酸的應(yīng)用，是其在制備對POKEMON基因表達進行 調(diào)節(jié)、調(diào)整或抑制的藥物，特別是治療POKEMON基因過表達所引起的疾病(如惡性腫瘤)的 藥物中的應(yīng)用。
所述藥物以上述反義寡核苷酸為有效成分。
所述藥物可通過經(jīng)脈或皮下給藥治療；所述藥物可通過局部給藥治療。
所述給藥治療可與放射療法結(jié)合或與化學療法結(jié)合治療疾病。
所述給藥治療的用藥劑量范圍是50nmol/L—-100nmol/L。 本發(fā)明的反義寡核苷酸可特異性抑制POKEMON基因的表達；本發(fā)明的反義寡核苷 酸進行了硫代磷酸酯鍵的修飾，其在血清和細胞那的穩(wěn)定性都大大提高，并且毒副作用很 小。本發(fā)明的反義寡核苷酸可作為有效成分用于制備治療POKEMON高表達引起的疾病的的 基因治療藥物。
具體實施例方式
實施例1、特異性調(diào)節(jié)P0KEM0N基因表達的反義寡核苷酸的獲得
1、 P0KEM0N基因二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測和反義寡核苷酸的設(shè)計利用工作站(www.bioinfo.rpi.edu.cn/applications/mfold)對P0KEM0N基因
(NM_015898)的mRNA的二級結(jié)構(gòu)進行了預(yù)測。針對P0KEM0N基因的閱讀框架，結(jié)合其二級
結(jié)構(gòu)設(shè)計了四條含有18-mer的硫代反義寡核苷酸AS1 AS4 (下述式I-式IV)。并以與人
任何基因都不具有同源性的18個核苷酸序列AS5作為對照。 AS1 :5， CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx 3，(式I); AS2 :5， CxGxCxTxGyAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx 3，(式II); AS3 :5， GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx 3，(式III); AS4 :5， TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx 3，(式IV); AS5 :5， AxTxGxTxAyGyTyCyGyTyCyTyGyCyCxTxAxGx 3，(式V) 其中，式I至式IV中，x均指硫代磷酸酯鍵；y均指3， 5磷酸二酯鍵；A均指2'-脫
氧腺苷；T均指2'-胸苷；C均指2'-脫氧胞苷；G均指2'-脫氧鳥苷。AS1 AS4可以與POKEMON基因的mRNA形成DNA/RNA雜化雙鏈，其可以被RNase
H酶識別、降解，從而抑制POKEMON基因的表達。 2、固相合成POKEMON基因硫代反義寡核苷酸 根據(jù)上述反義寡核苷酸AS1、AS2、AS3、AS4、AS5的分子式，用ABI391DNA自動合成 儀，按照通常的硫代寡核苷酸合成方法合成了硫代反義寡核苷酸AS1 AS5，將上述制備得 到的硫代反義寡核苷酸AS1 AS5，經(jīng)HPLC純化，經(jīng)紫外分光光度計定量，具體方法為用貝 克曼庫爾特(Beckmancoulter)公司的DU800紫外分光光度計精確測定寡核苷酸的濃度，光 徑10mm的比色杯中，單鏈寡核苷酸在260nm處的消光系數(shù)是20iig/ml/10D.在光徑10mm 的100 ii 1微量比色杯，加入98 ii 1純凈水，在260nm和280nm兩個波長處的定零，然后加 入2 iil寡核苷酸并混勻，在260nm和280nm兩個波長處測溶液的光吸收，純的寡核苷酸的 A260/A280的比值在1. 8至2. 0之間，此時在260nm所測的OD值就是寡核苷酸的濃度(P g/ iU)。上述硫代反義寡核苷酸AS1 AS5可向上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司訂做按 照上述AS1、AS2、AS3、AS4、AS5的分子式，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司以a位 帶硫代磷酸酯鍵的dNTP作為原料，用標準的DNA自動合成儀合成硫代反義寡核苷酸AS1 AS5。 用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測寡核苷酸的純度，實驗采用的條件是緩沖溶液為Tris(三羥甲基氨基甲烷)一硼酸-EDTA，及凝膠濃度30 %的變性聚丙酰胺凝膠，通過分 子篩效應(yīng)電泳分離合成的寡核苷酸及其合成失敗的序列，采用銀染色法顯色呈現(xiàn)分離的圖 譜，該電泳分離方法可以分離僅有一個核苷酸差異的寡核苷酸序列，加上靈敏的銀染色法 顯色技術(shù)，能夠有效地檢測到合成失敗的序列.結(jié)果顯色圖譜上僅有一條顯色條帶，表明 純化后的反義寡核苷酸純度均高于99%。 實施例2、反義寡核苷酸對P0KEM0N-pEGFP融合蛋白的抑制效果實驗
1 、 POKEMON與pEGFP的融合質(zhì)粒的構(gòu)建 從人宮頸癌HeLa細胞(購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，ATCC)中克隆得到 POKEMON的閱讀框架片斷，將其亞克隆到pEGFP-N2報告質(zhì)粒中，使其可以在哺乳動物細胞中 可以表達POKEMON-EGFP融合蛋白。
1)細胞培養(yǎng) 人子宮癌(Hela)細胞(購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，ATCC number :CCL_2)用 含體積分數(shù)為10%的胎牛血清，lOOu/ml青霉素和lOOu/ml鏈霉素及0. 2% NaHC03的DMEM 培養(yǎng)液，在37t:、體積分數(shù)為5%的C02條件下常規(guī)培養(yǎng)。 DMEM(Dulbecco' s Modified Eagle Medium)培養(yǎng)液非常適合于許多哺乳動物細 胞培養(yǎng)，是由無機鹽組分、氨基酸組分、維生素組分等組成，其具體配方為每L培養(yǎng)基中含 有200. OOmg CaCl2，0. 10mg Fe (N03) 3 *9H20， 400. OOmg KCl， 97. 67mgMgS04， 6400. OOmg NaCl， 3700. OOmg NaHC03， 125. OOmg NaH2P04_H20， 4500mg葡萄糖，15. OOmg酚紅(Phenol red)， llOmg丙酮酸鈉(Sodium Pyruvate) ， 84. OOmgL-精氨酸鹽酸鹽(L-Arginine-HCl) ， 63. OOmg L-胱氨酸二鹽酸鹽(L-Cystine 2HC1) ， 584. OOmg L_谷氨酰胺(L-Glutamine) ， 30. OOmg
甘氨酸(Glycine) ，42. OOmg L_半胱氨酸鹽酸鹽水合物(L-Histidine HC1-H20)， 105.OOL-異亮氨酸(L-Isoleucine)，105. OOmg L_亮氨酸(L-Leucine)，146. OOmg賴 氨酸鹽酸鹽(L-Lysine-HCl)，30. OOmg L_蛋氨酸(L-Methionine) ，95. OOmg L-蘇氨酸 (L-Threonine)，16. OOmg L_色氨酸(L-Tryptophan)，104. OOmg L-Tyrosine2Na 2H20， 94. OOmg L-纈氨酸(L-Valine) ，4. OOmg D-泛酸牽丐(D_Ca pantothenate) ， 4. OOmg氯化膽堿 (Choline Chloride) ， 4. OOmg葉酸(Folic Acid) ， 7. 20mg肌醇(i-Inositol) ， 4. OOmg煙酰 胺(Niacinamide) ， 4. OOmg維生素B6 (鹽酸妣多辛，PyridoxineHCl) ， 0. 40mg維生素B2 (核 黃素，O. 40) ，4. OOmg鹽酸硫胺(Thiamine HC1) ， pH值7. 2-7. 4。
2)細胞總RNA的提取 取出步驟1)培養(yǎng)得到的人子宮癌(Hela)細胞，吸去培養(yǎng)液(懸浮細胞需要離 心)，用適量PBS洗滌，加入1ml TRizol液，混勻，室溫放置5min，吸出培養(yǎng)瓶內(nèi)的液體轉(zhuǎn)移 到1. 5ml無Rase酶EP管內(nèi)，每管加入0. 2ml氯仿，劇烈震蕩15s，混勻，室溫放置2_3min。 在12， 000g(2-8°C )離心15min。吸取水相于另一只1. 5ml的EP管內(nèi)，加入等體積的異丙 醇，室溫放置lmin。在12，000g(2-8°C )離心10min，此時有RNA沉淀產(chǎn)生，棄去上清，加 200-500ul 70X乙醇洗滌后，在7500g(4t:)離心5min.吸掉乙醇，用小Tip吸干液體。沉 淀自然干燥5-10分鐘，DEPC處理水20-30ul加入，用槍打勻，55-6(TC水浴10分鐘讓總RNA 完全溶解，測OD值得到人子宮癌(Hela)細胞總RNA。
3) RT-PCR克隆Pokemon 以步驟2)得到的人子宮癌(Hela)細胞總RNA進行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系20ul，包括Oligo(dt)lul，人子宮癌(Hela)細胞總RNA lug， DEPC水，置于7(TC 5min，然后置于冰上 5min，加入DEPC水，5x緩沖液4ul， 25mM MgCL24ul，加入10mMdNTPlul， RNA酶抑制劑20U和 反轉(zhuǎn)錄酶lul，25。C 5min，42。C 60min，于70°C 15min終止反應(yīng)，得到cDNA。結(jié)束后以cDNA 作為模版進行PCR。 Pokemon基因上游引物5 ' -CTTAAGCTTGCCACCATGGCCGGCGGCGTGG-3 '，下游引 物5 ' -CATGATATCGGCGAGTCCGGCTGTGAAGTTAC-3 ' 。 PCR反應(yīng)體系為Pokemon上、下游引 物各10翻1/L， 5X緩沖溶液10ul， 2mM dNTP 5ul，甜菜堿禾口 DMSO各5ul， lul cDNA， 2. 5U/ LPrimer star聚合酶lul，總體系50ul。 PCR循環(huán)條件98。C變性10s，70。C復性10s，72。C 延伸lmin，40個循環(huán)。 把所得PCR產(chǎn)物在70v，進行瓊脂糖電泳，30min后，膠置于紫外燈下照射，小心把 DNA片段切下轉(zhuǎn)入到1.5ml EP管內(nèi)，稱重EP管，近似確定體積。假設(shè)膠的密度為lg/ml，于 是凝膠的體積可通過如下方法的得到如凝膠薄片質(zhì)量為0. 2g，則體積為0. 2ml，然后加入 等體積的NJ緩沖液，把混合物置于55-65t:水浴中l(wèi)Omin.，至膠完全溶解混合均勻。將膠 溶解后轉(zhuǎn)移到膠回收柱內(nèi)，8000g離心lmin，用SPW緩沖液重復洗滌2次，最后加入DNA洗 脫液將PCR產(chǎn)物洗下，10， OOOg離心lmin。 DNA產(chǎn)量計算把抽提樣品稀釋20倍，在260nm 和280nm下測OD值。DNA濃度=A26。X50X稀釋倍數(shù)。
4) POKEMON與pEGFP的融合質(zhì)粒的構(gòu)建 將步驟3)得到的PCR產(chǎn)物用EcoRV和Hindi 11雙酶切，克隆進pEGFP_N2質(zhì)粒的 Hindlll和Sma I酶切位點，得到pEGFP-N2_P0KEM0N融合質(zhì)粒；具體方法如下所示
①將步驟3)得到的PCR產(chǎn)物的酶切PCR產(chǎn)物的酶切為45ul體系，回收 DNA25ii 1(0. 4iig)，4. 5ul lOXbuffer K，O. 15ul Hindlll (15U/ii 1) ， 0. 15ul EcoRV(15U/ ii 1)，15. 2ulH20，37t:酶切3小時。 ②pEGFP-N2質(zhì)粒酶切和產(chǎn)物純化回收取12 pEGFP-N2質(zhì)粒， 6ii 110XbufferM，6ii 1 Hindlll， 5 yl NaAc (3mM PH5. 2) ， 150ul乙醇于-20 °C 10min， 10，000g離心5min，棄上清，沉淀加入55iU TE溶解。結(jié)束后再加入55iU TE溶解液， 8iillOXbuffer T，8iU BSA，6iU Sma I，lyl磷酸酶(CIAP) ， 37。C酶切3小時酶切。酶 切結(jié)束后，加入等體積NJ緩沖液，8000g， lmin，再加入SPW液8000g， lmin重復一次，最后加 入DNA洗脫液，10， OOOg， lmin.最后得酶切純化產(chǎn)物。 ③酶切純化PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒pEGFP-N2的連接連接體系為40ul， 2 ii 1 pEGFP-N2(Hindl11， Sma I) ，34ii 1PCR純化產(chǎn)物(HindIII， EcoRV)，置于56。C水浴4min，冰 上5min.再加入2iU T4連接緩沖液，1 yl 50mM ATP，O. 5iU T4連接酶，16。C連結(jié)過夜。
④感受態(tài)細胞的制備及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化取過夜JM109菌液800ul，3000g離心 5min，棄上清，加入50iil新鮮LB培養(yǎng)基，用槍吹打均勻，然后加入2ia質(zhì)粒液(ly g/yl) 和2iU的CaCl2，冰上放置30min，42。C水浴熱休克60-120s，結(jié)束后，放置于冰上2-3min， 加入lmlLB液，然后再搖床上搖45min，結(jié)束后，在3000g離心5min，除去部分上清液，剩余 大約100 ii 1左右液體，加入12 ii 1 AMP，滴加平板上進行涂布，正向平板放置30min，然后倒 置平板7-8小時。 ⑤挑克隆并小提陽性克隆細胞在20個LB平板底部標上1，2，3，4....20。取20 只中型離心管，每管加入1.5ML含有(60i!g/mL)卡那霉素的LB培養(yǎng)基，用已經(jīng)滅菌的牙
6簽分別挑取上述連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化后長出的不同菌落在標有數(shù)字的平板上劃線(必須一一對 應(yīng))，劃線后的牙簽放置于中型的離心管內(nèi)(也必須是管號和平樣板上的數(shù)字一一對應(yīng))， 劃線后的培養(yǎng)皿37t:過夜或放置10小時，中型離心管搖床上過夜(37°C )或者把搖床上培 養(yǎng)過夜的液體轉(zhuǎn)移到新的小離心管內(nèi)，在3000g離心6min，棄上清液體，沉淀提取質(zhì)粒，用 BamH I酶切鑒定，篩選連接正確的質(zhì)粒。將BamH I酶切鑒定正確的質(zhì)粒進行測序結(jié)果表 明，我們已經(jīng)克隆得到P0KEM0N閱讀框架序列，并正確地裝進pEGFP-N2質(zhì)粒中，將測序表明 正確的含有P0KEM0N片段的重組質(zhì)粒命名為pEGFP-N2-P0KEM0N。 pEGFP_N2-P0KEM0N在細 胞中，可表達Pokemon-GFP融合蛋白。 2、反義寡核苷酸AS1、 AS2、 AS3、 AS4對P0KEM0N-GFP融合蛋白的抑制效果 [OO53] 以脂質(zhì)體Lipofectamine 2000 (Invitrogen)作為轉(zhuǎn)染試齊U，將反義 寡核苷酸ASl(式I)、AS2(式11)、 AS3(式III)、AS4(式IV)和對照寡核苷酸 AS5 (ATGTAGTCGTCTGCCTAG)(濃度均為40nmol/L)與融合質(zhì)粒pEGFP—N2-P0KEM0N共轉(zhuǎn)染猴 腎成纖維C0S-7細胞(購自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，ATCC皿mber :CRL_1651) ， 24h檢測熒 光強度。具體方法如下所述 1) pEGFP-N2-P0KEM0N質(zhì)粒和反義核苷酸共轉(zhuǎn)染 取指數(shù)生長期的C0S-7細胞，于37t:，包含有10%胎牛血清，青霉素100mg/ml和 鏈霉素100mg/ml的DMEM培養(yǎng)基，5X C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞轉(zhuǎn)染前一天，細胞用胰酶 消化并用無抗生素的培養(yǎng)基懸浮，以每孔1 X 105個COS-7細胞的密度鋪入24孔板內(nèi)繼續(xù) 培養(yǎng)24小時。 培養(yǎng)24小時后，將實施例1制備的反義核苷酸AS1、AS2、AS3、AS4和AS5分別以終 濃度均為40nmol/L力B入50 ii 1無雙抗的優(yōu)化培養(yǎng)基(Opti-MEM IReduced-Serum Medium, GIBCO/BRL公司產(chǎn)品)中混勻靜止5min得到濃度均為40nmol/L的AS1、 AS2、 AS3、 AS4和 AS5溶液，同時取2. 5 ill脂質(zhì)體Lipof ectamine-2000加入另外一個含有48. 5 無雙抗的 優(yōu)化培養(yǎng)基(Opti-MEM I Reduced-SerumMedi咖，GIBCO/服L公司產(chǎn)品)中混勻靜止5min， 結(jié)束后將上述配制的稀釋后的脂質(zhì)體分別與反義苷酸AS1、 AS2、 AS3、 AS4或AS5溶液等體 積混合，分別同時補加0. 4 ii g的pEGFP-N2-P0KEM0N質(zhì)粒，然后分別將混和液按照100 y 1/ 孔的量加入到上述鋪入C0S-7細胞的24孔板內(nèi)，以AS5與pEGFP-N廠POKEMON質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 細胞做對照組，檢測上述實驗組和對照組培養(yǎng)24h后的熒光強度。 上述步驟1)的處理和步驟2)的處理的實驗結(jié)果如

圖1所示，其中，圖1中A為對 照(AS5)與pEGFP-N2-P0KEM0N質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染結(jié)果，B為AS1與pEGFP_N2-P0KEM0N質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染 結(jié)果，C為AS2與pEGFP-N2-P0KEM0N質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染結(jié)果，D為AS3與pEGFP_N2-P0KEM0N質(zhì)粒 共轉(zhuǎn)染結(jié)果，E為AS4與pEGFP-N2-P0KEM0N質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染結(jié)果。結(jié)果表明，在C0S-7細胞內(nèi)， 共轉(zhuǎn)染pEGFP-N廠POKEMON和AS1、 AS2、 AS3或AS4反義核苷酸。通過熒光顯微鏡觀察，發(fā) 現(xiàn)四種的反義核苷酸對Pokemon的抑制存在顯著差異。從圖1中可看到AS2(圖1中C)和 AS4 (圖1中E)熒光強度弱于AS1 (圖1中B)和AS3 (圖1中D)的熒光強度，這說明AS2和 AS4抑制效率比AS1和AS3的抑制效率高。使用Image-pro plus v 5. 02對熒光強度進行 分析計算，AS2和AS4對pEGFP-N2-P0KEM0N表達的P0KEM0N-GFP融合蛋白的抑制效率分別 是74 %和78 % ，同樣說明，AS2和AS4對P0KEM0N-GFP融合蛋白的抑制效率比AS1和AS3的 抑制效率高，并且AS4抑制效率最高，結(jié)果表明AS4可以作為治療Pokemon表達引發(fā)的疾病的藥物，如癌癥等。
權(quán)利要求
一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸，其分子式如式III所示5’GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx 3’(式III)；其中，式III中，x均指硫代磷酸酯核苷間鍵；y均指磷酸二酯核苷間鍵；A均指2’-脫氧腺苷；T均指胸苷；C均指2’-脫氧胞苷；G均指2’-脫氧鳥苷。
2. 權(quán)利要求1所述的反義寡核苷酸在制備對POKEMON基因表達進行調(diào)節(jié)、調(diào)整或抑制 藥物中的應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求1所述的反義寡核苷酸在制備治療P0KEM0N基因過表達所引起的疾病的藥 物中的的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物是以權(quán)利要求1所述的反 義寡核苷酸為有效成分。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物通過經(jīng)脈或皮下給藥治療。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物通過局部給藥治療。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于所述給藥治療與放射療法結(jié)合。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于所述給藥治療與化學療法結(jié)合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種特異性調(diào)節(jié)POKEMON基因表達的反義寡核苷酸及其應(yīng)用。該反義寡核苷酸，為下述化學式所示物質(zhì)之一CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx；CxGxCxTxGxAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx；GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx；TxTxCxAxGxGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx；TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx。x指硫代磷酸酯核苷間鍵。本發(fā)明的反義寡核苷酸可作為用于制備治療POKEMON高表達引起的疾病的的基因治療藥物。
文檔編號A61K48/00GK101792762SQ20091024707
公開日2010年8月4日 申請日期2008年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月20日
發(fā)明者張楠, 蔣宇揚, 謝振華 申請人:清華大學深圳研究生院