專利名稱：：菝葜有效部位群及其提取純化工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥用植物有效部位群的提取純化方法，具體涉及中藥菝葜有效部位群的提取純化方法及其提取物產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
：菝葜為百合科植物菝葜SmilaxchinaL.的干燥根莖，又名金剛藤，為傳統(tǒng)中藥，《中國(guó)藥典》2005年版一部收載，菝葜具有祛風(fēng)利濕，解毒散瘀的功效，用于筋骨酸痛、小便淋漓、帶下量多、疔瘡癰腫。中醫(yī)臨床除用于治療婦科炎癥疾患外，還用于治療腫瘤，并取得了很好的療效。目前國(guó)內(nèi)有多家中藥企業(yè)以菝葜藥材為原料制成的傳統(tǒng)中藥制劑主要有金剛藤膠囊、金剛藤糖漿、金剛藤顆粒和金剛藤片劑等劑型，臨床用于治療附件炎、慢性盆腔炎等婦科炎癥，由于療效肯定、作用顯著而倍受廣大醫(yī)務(wù)工作者和患者歡迎，市場(chǎng)銷售良好，其中湖北福人藥業(yè)公司生產(chǎn)的金剛藤膠囊單品種的年銷售額連續(xù)多年過億元。但是，上述中藥品種均為傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝制備，尚存在著藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)不完善，臨床療效不穩(wěn)定，臨床服用劑量過大等弊端，不符合現(xiàn)代臨床用藥要求。菝葜屬的植物化學(xué)成分的研究較多，至今已從該屬植物中分離得到80余種化合物，其中主要有黃酮類、甾體皂苷類、鞣質(zhì)等類型化合物。藥理試驗(yàn)研究表明，黃酮類化合物和甾體皂苷類化合物具有明顯抗炎藥理活性，鞣質(zhì)具有顯著的抗菌作用。菝葜屬植物普遍含有黃酮類化合物，現(xiàn)已從該屬植物中分離并鑒定了20余種黃酮類化合物，這些黃酮類化合物的基本母核為黃酮和黃酮醇類、二氫黃酮和二氫黃酮醇類、查爾酮類、兒茶素類。迄今為止，從菝葜屬植物中分離得到30多種甾體皂苷化合物。這些甾體皂苷類化合物，按皂苷元結(jié)構(gòu)不同，可分為三種類型螺甾烷醇型(spirostanols)、異螺甾烷型(isospirostanols)和呋喃甾烷醇型(furostanols)，主要是螺甾烷醇型化合物。皂苷中所含的糖主要有4種D-葡萄糖J-半乳糖丄-鼠李糖、L-阿拉伯糖，它們以不同的方式與皂苷元結(jié)合構(gòu)成種類繁多的皂苷。目前菝葜的藥效物質(zhì)的提取純化方法有水提醇沉法和乙醇提取_大孔樹脂純化法等。水提醇沉法屬于傳統(tǒng)提取工藝，其提取物的有效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)難以控制，臨床用藥量過大；乙醇提取_大孔樹脂純化法，是采用乙醇作為提取溶媒，存在提取純化過程繁瑣，生產(chǎn)成本較高，環(huán)境污染嚴(yán)重，安全隱患較大等弊端，不符合中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化要求。本發(fā)明采用水作為提取溶媒，提取液通過大孔吸附樹脂純化，得到較高含量的黃酮類、皂苷類和鞣質(zhì)類有效部位群，該提取純化技術(shù)國(guó)內(nèi)外未見相關(guān)資料報(bào)道。其提取純化工藝流程簡(jiǎn)單，有效物質(zhì)含量較高，降低了生產(chǎn)成本，節(jié)約了能源，降低了環(huán)境污染，減少了生產(chǎn)中的安全隱患，符合中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化的要求。本發(fā)明采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)和單因素相結(jié)合的方法，對(duì)菝葜中的黃酮類、皂苷類和鞣質(zhì)類成分的水提取工藝及D101大孔樹脂純化工藝進(jìn)行了全面系統(tǒng)的研究，獲得了可靠的技術(shù)參數(shù)，進(jìn)行了中試驗(yàn)證，可過渡到產(chǎn)業(yè)化。其提取純化工藝具有較強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供了一種菝葜有效部位群物質(zhì)的提取、純化和提取物的干燥方法。本發(fā)明的又一目的在于提供了采用上述提取方法得到的菝葜有效部位群提取物A口廣PRo本發(fā)明的一種菝葜有效部位群的提取純化方法包括以下步驟a.菝葜用水提取，提取液濃縮，濾過；b.濾液通過大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，繼用乙醇洗脫；c.收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，即得。本發(fā)明的菝葜藥材提取物的優(yōu)選的提取步驟如下a.取菝葜飲片，加812倍藥材量的水浸泡26小時(shí)，提取13次，每次13小時(shí)，合并水提取液；將水提取液濃縮至一定體積，使藥液體積為525倍藥材量，靜置過濾后，得到濾液；b.濾液以每小時(shí)13倍柱床體積的流速通過大孔吸附樹脂柱，先用24倍樹脂量的水洗脫除去雜質(zhì)，再用25倍柱床體積的4095%的乙醇以每小時(shí)13倍柱床體積的流速進(jìn)行洗脫，得到乙醇洗脫液；c.將乙醇洗脫液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.011.IO，濃縮液經(jīng)干燥，得到菝葜提取物產(chǎn)品。提取物中總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的含量之和可達(dá)70%90%。收集干燥的提取物，密封，稱重，置干燥處保存。本發(fā)明的菝葜藥材提取物的進(jìn)一步優(yōu)選的提取方法為a.取菝葜飲片，加10倍藥材量的水浸泡4小時(shí)，提取三次，第一、二次分別為2小時(shí)，第三次為l小時(shí)，合并提取液；將提取液濃縮至一定體積，使藥液體積為IO倍藥材量，靜置過濾后，得到濾液；b.濾液以每小時(shí)2倍柱床體積的流速通過大孔吸附樹脂柱，然后用3倍樹脂量的水洗脫，最后用3倍柱床體積的70%的乙醇以每小時(shí)2倍柱床體積的流速進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；c.將洗脫液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.03的濃縮液；濃縮液經(jīng)噴霧干燥得到菝葜有效部位群提取物產(chǎn)品，噴霧干燥條件為進(jìn)風(fēng)口溫度為17(TC，出風(fēng)口溫度為85t:，霧化盤轉(zhuǎn)速為20000轉(zhuǎn)/分鐘。本發(fā)明的菝葜藥材提取物提取中總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的含量之和可達(dá)72.26%。本發(fā)明中所述的乙醇濃度是指lOOmL體積乙醇水溶液中含乙醇體積分?jǐn)?shù)。本發(fā)明還包括提取物的藥物組合物，即總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)，以及本發(fā)明的提取物在制備一種抗菌消炎藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴5劑、貼劑。本發(fā)明的藥物組合物，在制備成藥劑時(shí)可加入藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體可以是淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纖維素類及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、聚山梨酯80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發(fā)明的藥物組合物，包括含0.1-99.9%重量百分比的本發(fā)明的提取物，其余為藥物可接受的載體。在使用時(shí)根據(jù)病人的情況確定用法用量，一般為每日服三次，每次1-10片/或粒。本發(fā)明的組合物在制備抗菌消炎藥物中的應(yīng)用。和現(xiàn)有的菝葜提取純化技術(shù)比較，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢(shì)1.本發(fā)明采用水作為提取溶媒，主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)在于用水作為提取溶媒提取菝葜藥材，提取液用大孔吸附樹脂純化得到菝葜有效部位群，與水提醇沉傳統(tǒng)提取工藝法比較，其提取物的有效物質(zhì)基礎(chǔ)明確，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可控。與乙醇提取_大孔樹脂純化法比較，工藝流程簡(jiǎn)單，有效物質(zhì)含量較高，降低了生產(chǎn)成本，節(jié)約了能源，控制了環(huán)境污染，減少了生產(chǎn)中的安全隱患，符合中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化的要求。2.本發(fā)明采用D-101大孔吸附樹脂技術(shù)提取純化有效部位群，具有工藝簡(jiǎn)單，成本較低，樹脂可反復(fù)使用，適合工業(yè)生產(chǎn)的特點(diǎn)。而且本發(fā)明對(duì)相應(yīng)的技術(shù)參數(shù)進(jìn)行了細(xì)致周密的考察，優(yōu)選出最佳條件，進(jìn)行了中試驗(yàn)證，可過渡到產(chǎn)業(yè)化，提高了有效物質(zhì)的純度，提取物中總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的含量可以達(dá)到70%90%。綜上所述，本發(fā)明的提取方法具有成本低，工藝簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，提取率高，環(huán)境污染小，質(zhì)量可控，適合大規(guī)模生產(chǎn)等特點(diǎn)。圖1菝葜有效部位群的提取純化工藝流程圖圖2菝葜樣品溶液上D101大孔樹脂柱吸附總黃酮的泄露曲線圖370%乙醇為洗脫劑洗脫樹脂柱中總黃酮的洗脫曲線圖470%乙醇為洗脫劑洗脫樹脂柱中總皂苷的洗脫曲線圖570%乙醇為洗脫劑洗脫樹脂柱中總鞣質(zhì)的洗脫曲線具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不作為本發(fā)明的限制。實(shí)施例1菝葜有效部位群以水作溶媒的提取工藝試驗(yàn)(1)水回流提取工藝試驗(yàn)采用L9(34)正交試驗(yàn)法，以菝葜總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)為考察指標(biāo)，確定浸泡時(shí)間、加水量(菝葜藥材量的倍數(shù))及提取時(shí)間-次數(shù)等因素的工藝參數(shù)，并采用紫外_可見分光光度法對(duì)提取物中總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的含量進(jìn)行測(cè)定，并以總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)含量及干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行比較分析。結(jié)果見表l-表7。表1試驗(yàn)因素水平表因素水平A提取時(shí)間一次數(shù)(h)B浸泡時(shí)間(h)C空白D加水量(倍)121822—221032—2—1412表2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析試驗(yàn)ABCD菝葜總黃酮量(mg/g)菝葜總皂苷量千膏得綜合率(％〕評(píng)分111113.611.066.067.7850.198.2201.8637.7476.7374.5976.4737.2176.3678.2276.8237.0907.5331433.6301.2740.柳1.1661.1351.6161.6851.6001.6311.6721.691I.9831.7341.6241.6900.8480.1180.0610.0917.2839.9409.7879.287II.1779.85310.23010.51011.77710.44310.22010.4404.4960.5900.4431.2238.66310.05010.33710.14311.2431048710.57710.58711.50710.87710.50010.6832.8440.8270.2400.54057.95577.67681.25576.2065.005.187.897.119.687.928.368.381.151.201.861.741.991.932.012.017.648.1511.5510.311.6812.2111.6211.58.909.3111.1410.9611.6311.2311.6011.6960.3963.2990.2283.6298.7992.6294.7994.818菝葜總黃酮MKKK菝葜總鬼哲量菝葜總鞣質(zhì)量干膏得率_綜合評(píng)分K290.87779.60081.80583.934K394.07385.62979.84582.766R36.1187.9531.9607.728其中權(quán)重系數(shù)總黃酮、總皂苷各占30%，總鞣質(zhì)、干膏得率各占20%。公式為綜合評(píng)分=總黃酮測(cè)定值/總黃酮測(cè)定最大值*30+總皂苷測(cè)定值/總皂苷測(cè)定最大值*30+總鞣質(zhì)測(cè)定值/總鞣質(zhì)測(cè)定最大值*20+干膏測(cè)定值/干膏測(cè)定最大值*20表3總黃酮量的方差分析因素離差平方和自由度F值A(chǔ)26.305270.903<0.05B2.59626.997D2.11625.704空白(誤差)0.3702F0.05(2，2)=19.00F0.01(2，2)=99.00表4總皂苷量的方差分析因素離差平方和自由度F值PA1.2632210.500<0.05B0.02524.167D0.01622.667空白(誤差)0.0102F0.05(2，2)=19.00F0.01(2，2)=99.00表5總鞣質(zhì)量的方差分析因素離差平方和自由度F值PA35.708292.990〈0.05B0.6092L586D2.83227.375空白(誤差)0,38029F0.05(2，2)=19.00F0.01(2，2)表6干膏得率的方差分析99.00離差平方和自由度F值A(chǔ)BD空白(誤差)14.8101.0260.4970.0902222164.55611.4005.5220<0.05FO.05(2，2)=19.00FO.01(2，2)=99.00表7綜合評(píng)分的方差分析因素離差平方和自由度F值PA2398.6282391.229<0.05B103.304216.849D104.114216.982空白(誤差)6.1302FO.05(2，2)=19.00FO.01(2，2)=99.00正交試驗(yàn)結(jié)果表明，影響因素最大的為提取時(shí)間-次數(shù)，且具有顯著性差異，而浸泡時(shí)間和加水量無顯著影響。結(jié)合提高生產(chǎn)效率和降低成本，確定最佳工藝為A3B3D2，即選定的最佳工藝條件為10倍量水浸泡4小時(shí)，提取3次，提取時(shí)間分別為2小時(shí)，2小時(shí)，1小時(shí)。(2)驗(yàn)證試驗(yàn)取菝葜飲片，共3份，按照優(yōu)選提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見表8。表8菝葜水提取驗(yàn)證試驗(yàn)試驗(yàn)號(hào)藥材用量菝葜總黃酮量菝葜總皂苷量菝葜總鞣質(zhì)量干膏得率——(g」————^mi/g」——(mg/g)(mg/g)(%)5010.262.2412.7911.92509.902.1113.6512.07509.632.1312.7912.32驗(yàn)證結(jié)果表明優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定可行。實(shí)施例2菝葜有效部位群的大孔樹脂純化工藝試驗(yàn)用前述優(yōu)選提取條件提取得到的菝葜提取液進(jìn)行如下試驗(yàn)(1)大孔樹脂的篩選試驗(yàn)樹脂來源DIOI樹脂(天津市海光化工有限公司)，AB-8、HPD100樹脂(河北寶滄有限責(zé)任公司)。①不同大孔吸附樹脂對(duì)樣品溶液中總黃酮和總皂苷的靜態(tài)飽和吸附和解吸附洗脫試驗(yàn)精密稱取已處理好的大孔吸附樹脂lg(抽濾至不滴水為止)，置lOOmL磨口三角瓶中，精密加入供試品藥液50mL，置振蕩器上持續(xù)振搖24h，使其充分吸附后，取上層液分別測(cè)定總黃酮和總皂苷的濃度。并按下式計(jì)算樹脂飽和吸附量飽和吸附量=[(初始濃度_吸附后濃度)X吸附液體積]/樹脂量]，洗脫率=(洗脫液濃度X洗脫液體積)/飽和吸附量X100X，結(jié)果見表9。表9三種樹脂靜態(tài)飽和吸附與解吸附測(cè)定結(jié)果總黃酮總皂苷^總鞣質(zhì)樹脂種類吸附量洗脫率吸附量洗脫率吸附量洗脫率46.3086.4516.2588.8956.2393.57D10147.7285.9316.0889.0556.8794.8246.8987.9316.7290.1256.7389.57AB-847.0387.5617.0991.0757.0688.9246.8588.1318.7689.7556.2791.27HPD10046.0987.6818.5289.9656.8893.26結(jié)果表明，在靜態(tài)吸附和解吸附試驗(yàn)中，D101、AB-8、HPD100型大孔吸附樹脂對(duì)樣品中總黃酮、總皂苷的飽和吸附量以及洗脫量和洗脫率比較接近，對(duì)這三種樹脂進(jìn)行進(jìn)一步的動(dòng)態(tài)吸附和解吸附性能的考察。②三種大孔樹脂對(duì)樣品溶液中總黃酮和總皂苷的動(dòng)態(tài)飽和吸附及解吸附性能試驗(yàn)精密稱取已處理好的上述三種大孔吸附樹脂各2g，上柱備用，分別用100mL供試品藥液以lmL，min-l通過樹脂柱，過柱液重復(fù)吸附一次，再用一定體積的水洗，分別測(cè)量流出液中總黃酮、總皂苷的含量，并按下式計(jì)算樹脂比吸附量比吸附量=[(上柱液中物質(zhì)的含量_下柱液中物質(zhì)的含量_水洗脫液中物質(zhì)的含量)/樹脂量]，比洗脫量=[洗脫液濃度X吸附液體積/樹脂量]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表10。表10三種大孔樹脂動(dòng)態(tài)篩選結(jié)果總黃酮總皂苷總鞣質(zhì)樹脂種類比吸附量洗脫率比吸附量洗脫率比吸附量洗脫率D10132.8286.7512.5688.1449.2694.25AB-830.5180.5413.3881.3651.1788.96HPD10033.2985.8215.1389.5650.2693.92試驗(yàn)結(jié)果表明DIOI、HPD100兩種型號(hào)大孔樹脂對(duì)菝葜總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的比吸附量和洗脫率均較好，兩者效果差異不是很明顯。由于D101型大孔樹脂價(jià)格較低，且安全性較高，是目前國(guó)內(nèi)藥品生產(chǎn)行業(yè)應(yīng)用最多的一種大孔樹脂，故本研究選用D101型大孔樹脂同時(shí)純化菝葜總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)。(2)D101大孔樹脂純化工藝試驗(yàn)①吸附條件優(yōu)選試驗(yàn)采用正交試驗(yàn)方法以上樣流速、藥液的濃度(以樣品中所含有的原藥材量計(jì))及徑高比作為考察因數(shù)，應(yīng)用L9(34)正交表安排試驗(yàn)，因素及水平安排見表ll。對(duì)以下9組試驗(yàn)分別測(cè)定總黃酮、總皂苷、總鞣質(zhì)含量，計(jì)算其比吸附量，并進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。分析結(jié)果見表1216。表ll因素水平表因素水平A上樣濃度(g/mL)B吸附流速(倍柱體積/h)C空白D徑高比10.052——1:420.14——1:830.26——1:12表12正交試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)號(hào)ABCD總黃酮比吸附量(mg/g)總皂苷比吸附量(郵/g)總鞣質(zhì)比吸附量('呢/g)會(huì)示合評(píng)分1111130.7213.350.5698.142122227.1211.85'38.7286.583133327.2810.7537.7676.3142.12332.0012.7052.1698.425223130.2411.4847.2891.0012注權(quán)重系數(shù)總黃酮、總皂苷各占35%，總鞣質(zhì)占30%，公式為綜合評(píng)分=總黃酮比吸附量/總黃酮比吸附量最大值*35+總皂苷比吸附量/總皂苷比吸附量最大值*35+總鞣質(zhì)比吸附量/總鞣質(zhì)比吸附量最大值*30表13菝葜總黃酮比吸附量的方差分析26.5028.1624.6422.826.64029.06726.66726.88028.29327.22727.01327.57025.20023.84026.45325.6803.0935.2270.5601.S939.9511.4010.668.9037.0447.3634.5626.3278.1788.0474.8863.5011.96712.46711.30311.227.11.37711.33011.15011.06710.3209.86711.21011.3701.6472.6000.1530.30342.34750.02740.72041.38745.49340.18739.06741.04036.08033.70744.13341.4939.41316.3205.0660.45387.01094.867S3.73084.21389.197.84.15382.83384.26375.47372.66085.11783.20313.72422.2072.2841.0601菝1{^黃酮量菝葜總皂苷量12菝葜總鞣質(zhì)量綜合評(píng)分13<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>F0.05(2，2)=19.00，F(xiàn)O.01(2，2)=99.00表14菝葜總皂苷比吸附量的方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>FO.05(2，2)=19.00，F(xiàn)O.01(2，2)=99.00表15菝葜總鞣質(zhì)比吸附量的方差分析<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>FO.1(2，2)=9.00，F(xiàn)O.05(2，2)=19.00表16綜合評(píng)分的方差分析因素離差平方和自由度F值PA326.206241.084<0.05B740.008293.200<0.05D2.14620.270誤差7.942F0.05(2，2)=19.00，F(xiàn)O.01(2，2)=99.00綜合評(píng)分直觀分析和方差分析結(jié)果表明，各因素對(duì)各指標(biāo)性成分影響的大小順序?yàn)锽〉A(chǔ)〉D，其中A(上樣濃度)與B(吸附流速)具有顯著性差異。因此優(yōu)選總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的最佳吸附條件為4B"^即上樣濃度為0.lg/mL，吸附速率為2BV/h，徑高比為1:8。②上樣量考察取0.lg/mL樣品溶液，加于20gD101樹脂柱中(20mmX400mm)，以2Bv/h的流速通過。每個(gè)流份收集20mL，測(cè)定并計(jì)算流份中總黃酮的濃度，并繪制泄露曲線，結(jié)果見圖2。圖中可以看出當(dāng)上樣量為120mL(約為6倍樹脂量)時(shí)，總黃酮開始泄漏，上樣量為800mL時(shí)(約為40倍樹脂量)達(dá)到吸附飽和狀態(tài)。③水洗條件考察按上述最佳吸附條件進(jìn)行上樣吸附，上樣量為120mL，再用水沖洗，每10mL下柱液為1流份，用FeCL3反應(yīng)、Liebermann反應(yīng)檢識(shí)，同時(shí)測(cè)定干膏重，水洗60mL后FeCL3反應(yīng)、Lieberma皿反應(yīng)均呈陰性，干膏重量不再變化，結(jié)果表明，用60mL水洗(約3倍樹脂量)后樹脂柱上的糖類可以基本除去。④乙醇洗脫濃度考察另取20g樹脂共五份上柱，按上述吸附條件和水洗條件進(jìn)行吸附和去雜，再各用10%，30%，50%，70%，90%的乙醇90mL，以相同的流速進(jìn)行洗脫，測(cè)定，計(jì)算總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的含量及解吸率，結(jié)果見表17、18、19。表17菝葜總黃酮乙醇洗脫濃度考察結(jié)果乙醇濃度(％)1030507090黃酮解吸量(rag)32.5879.35101.17114.58107.41解吸率(％)20.3359.2575.5585.56肌21干膏重(mg)10.0824.1834.4434.3333.46總黃酮含量(％)24.1424.5121.9424.9223.97表18菝葜總皂苷乙醇洗脫濃度考察結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>洗脫流速總皂苷洗脫量(mg)解吸率(％)干膏中總皂苷含量(％)lBV/h19.0887.825.382BV/h18.7986.475.114BV/h18.6785.935.24表22菝葜總鞣質(zhì)乙醇洗脫流速考察結(jié)果"洗脫流速總鞣質(zhì)洗脫量(mg)解吸率(％)~干膏中總鞣質(zhì)含量(％)lBV/h118,4188.8033.402BV/h117.5588.1532.004BV/h116.6987.5132.74結(jié)果表明洗脫速率為l倍柱體積/小時(shí)和2倍柱體積/小時(shí)時(shí)相差不大，考慮生產(chǎn)效率，選用2Bv/h的洗脫流速較合理。⑥乙醇洗脫量考察按上述條件進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，以70%乙醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫，定量收集流出液并測(cè)定其中總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的含量。結(jié)果見圖3，圖4，圖5。結(jié)果表明用80mL(約4倍樹脂量)70%乙醇可以完全洗脫20g樹脂所吸附的黃酮類成分；用90mL(約3倍樹脂柱體積)70%乙醇可以完全洗脫20g樹脂所吸附的皂苷類成分；用90mL(約3倍樹脂柱體積)70%乙醇可以完全洗脫20g樹脂所吸附的皂苷類和鞣質(zhì)類成分。因此采用90mL(3倍樹脂柱體積)70X乙醇以2Bv/h的流速可以使20g樹脂所吸附的黃酮類、皂苷類及鞣質(zhì)類成分完全洗脫。實(shí)施例3中試放大試驗(yàn)取12Kg菝葜飲片，加10倍量水浸泡4小時(shí)，加熱回流提取3次，第一、二次各2小時(shí)，第三次1小時(shí)，合并濾液，濃縮至藥液體積為io倍藥材量，抽濾得上樣藥液。將20Kg藥用級(jí)D101型大孔樹脂用適量乙醇浸泡，濕法裝柱，處理后備用。以2Bv/h的加樣流速進(jìn)行吸附，樹脂床徑高比為l:8，吸附完畢后，用3倍樹脂量的蒸餾水，以2Bv/h的流速洗脫至Molish反應(yīng)為陰性，然后以3倍樹脂柱體積的70%乙醇，以2Bv/h的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。洗脫液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.03，噴霧干燥(進(jìn)風(fēng)口溫度為170°C，出風(fēng)口溫度為85°C，霧化盤轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)/分鐘)。收集干燥提取物，封口，放冷，稱重，置陰涼處保存。采用紫外-可見分光光度法測(cè)量提取物中物質(zhì)的含量，計(jì)算轉(zhuǎn)移率(轉(zhuǎn)移率=提取物中物質(zhì)的含量/原藥材中物質(zhì)的含量X100%)和收膏率(收膏率=提取物總重量/原藥材總重量X100%)。采用上述方法，取12Kg菝葜飲片，共4批，進(jìn)行菝葜有效部位群提取純化中試放大試驗(yàn)，結(jié)果見表23。表23中試試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)批次投藥量提取物重收膏率總黃酮轉(zhuǎn)移率總黃酮純度總皂苷轉(zhuǎn)移率總皂苷純度總鞣質(zhì)轉(zhuǎn)移率總鞣質(zhì)純度黃酮、皂苷和鞣質(zhì)含量之和(kg)(g)(%)(%)(%)(%)(%〉(%)(%)(%)(1)12282.82.3681.0227.7083,335.8681.3640.1873.74(2)12293.12.44肌4327.3483.055.8481.5640.2873.46(3)12280.42.3477.8526.3978.615.2479.6439.3070.93(4)12280.42.3477.2526.5576.275.2477,63.39.1070.89平均值12284.22.3779.1427.00肌325.5580.0539.7272.26結(jié)果表明四批提取物中總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)的含量之和可達(dá)70%以上。表明本試驗(yàn)研究的工藝參數(shù)可行，工藝條件經(jīng)中試進(jìn)一步調(diào)整后，可過渡到產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。實(shí)施例4、本發(fā)明的提取方法本發(fā)明菝葜有效部位群提取物的制備方法取12Kg菝葜飲片，加10倍量水浸泡4小時(shí)，加熱回流提取3次，第一、二次各2小時(shí)，第三次1小時(shí)，合并濾液，濃縮至藥液體積為IO倍藥材量(120L)，抽濾得上樣藥液，備用。濾液以2Bv/h的加樣流速進(jìn)行吸附(樹脂床徑高比為l:8)，吸附完畢后，用3倍樹脂量的蒸餾水以2Bv/h的流速?zèng)_洗，然后以3倍樹脂柱體積的70%乙醇，以2Bv/h的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。洗脫液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.03，噴霧干燥，收集干燥提取物，封口，放冷，稱重，置陰涼處保存。(圖l所示)18權(quán)利要求一種菝葜有效部位群提取物的制備方法，所述提取物中總黃酮、總皂苷和總鞣質(zhì)成分的含量之和為70～90％，其特征在于，所述方法，經(jīng)過以下步驟制備a.菝葜用水提取，提取液濃縮，濾過；b.濾液通過大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，繼用乙醇洗脫；c.收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，即得。2.權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟制備a.取菝葜飲片，加812倍藥材量的水浸泡26小時(shí)，提取13次，每次13小時(shí)，合并水提取液；將水提取液濃縮至一定體積，使藥液體積為525倍藥材量，靜置過濾后，得到濾液；b.濾液以每小時(shí)13倍柱床體積的流速通過大孔吸附樹脂柱，先用24倍樹脂量的水洗脫除去雜質(zhì)，再用25倍柱床體積的4095%的乙醇以每小時(shí)13倍柱床體積的流速進(jìn)行洗脫，得到乙醇洗脫液；c.將乙醇洗脫液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.011.IO，濃縮液經(jīng)干燥，得到菝葜提取物產(chǎn)品。3.權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟制備a.取菝葜飲片，加10倍藥材量的水浸泡4小時(shí)，提取三次，第一、二次分別為2小時(shí)，第三次為1小時(shí)，合并提取液；將提取液濃縮至一定體積，使藥液體積為IO倍藥材量，靜置過濾后，得到濾液；b.濾液以每小時(shí)2倍柱床體積的流速通過大孔吸附樹脂柱，然后用3倍樹脂量的水洗脫，最后用3倍柱床體積的70%的乙醇以每小時(shí)2倍柱床體積的流速進(jìn)行洗脫，得到洗脫液；c.將洗脫液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.03的濃縮液；濃縮液經(jīng)噴霧干燥得到菝葜有效部位群提取物產(chǎn)品，噴霧干燥條件為進(jìn)風(fēng)口溫度為17(TC，出風(fēng)口溫度為85t:，霧化盤轉(zhuǎn)速為20000轉(zhuǎn)/分鐘。4.權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，經(jīng)過以下步驟制備取12Kg菝葜飲片，加10倍量水浸泡4小時(shí)，加熱回流提取3次，第一、二次各2小時(shí)，第三次1小時(shí)，合并濾液，濃縮至藥液體積為10倍藥材量(120L)，抽濾得上樣藥液，備用。濾液以2Bv/h的加樣流速進(jìn)行吸附(樹脂床徑高比為l:8)，吸附完畢后，用3倍樹脂量的蒸餾水以2Bv/h的流速?zèng)_洗，然后以3倍樹脂柱體積的70%乙醇，以2Bv/h的流速進(jìn)行洗脫，收集洗脫液。洗脫液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.03，噴霧干燥，收集干燥提取物，密封，稱重，置陰涼處保存。5.根據(jù)權(quán)利要求l-4所述的任意一種制備方法制備得到的提取物。6.含有權(quán)利要求5所述的提取物的藥物組合物，包括含0.1_99.9%重量百分比的本發(fā)明的提取物，其余為藥物可接受的載體。7.權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于，是任何可藥用的劑型。8.權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于，在制備成藥劑時(shí)加入藥物可接受的載體。9.權(quán)利要求6所述的組合物在制備抗菌消炎藥物中的應(yīng)用。10.權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于，選自片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴劑或貼劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種藥用植物菝葜有效部位群及其提取純化工藝，具體涉及中藥菝葜有效部位群的提取純化方法及其提取物產(chǎn)品。所述提取方法包括以下步驟a.菝葜用水提取，提取液濃縮，濾過；b.濾液通過大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，繼用乙醇洗脫；c.收集乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，即得。文檔編號(hào)A61P35/00GK101703669SQ200910247018公開日2010年5月12日申請(qǐng)日期2009年12月15日優(yōu)先權(quán)日2009年12月15日發(fā)明者馮蕓,劉焱文,尹玲,陳樹和,黃顯章申請(qǐng)人:湖北福人藥業(yè)股份有限公司