專利名稱：一種高純度維生素B₁₂的純化工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生化產(chǎn)品的分離純化領(lǐng)域，具體涉及一種高純度維生素B12 (以下簡稱VB12)的純化工藝。
背景技術(shù)：
維生素B12，簡稱VB12，又叫鈷胺素，自然界中的VB12都是微生物合成的，高等動植物不能制造vb12。在保健食品和注射針劑等領(lǐng)域，隨著食品和藥品的安全要求越來越高，
VB12用途越來越廣泛，相應(yīng)地制備生產(chǎn)高純度的VB12漸成技術(shù)發(fā)展的必然要求和廣大技術(shù)人員的努力目標(biāo)。目前，目前商品化的VB12由工業(yè)發(fā)酵法獲得，VB12的分離純化工藝有溶劑法，膜法，樹脂吸附法，磺酸Zn2+型配位吸附法等，上述方法分別存在溶劑消耗大，生產(chǎn)繁瑣，離子污染，產(chǎn)品純度及收率不高等技術(shù)問題，上述方法所得到的產(chǎn)品經(jīng)重結(jié)晶可得到90%左右的粗品，但在這種粗品中殘留的雜質(zhì)難以再用重結(jié)晶的方法除去，造成產(chǎn)品品質(zhì)不高只能做低檔的原料出售。

發(fā)明內(nèi)容
為解決現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)品中雜質(zhì)難以除去、產(chǎn)品純度不高的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的是提供一種不僅工藝簡單成本低，而且可達(dá)到高純度和高產(chǎn)率的VB12的純化工藝。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂為層析填料，使用低濃度的丙酮水溶液做流動相，實現(xiàn)對VB12的純化。一種高純度VB12的純化工藝，其特征在于包括下述步驟
1>色譜柱平衡采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂為層析填料，裝入色譜柱作為固定相，裝柱完成后，用兩倍柱體積去離子水以I 4倍柱體積每小時的流速平衡色譜柱；2>樣品制備稱取純度為85 93%的VB12粗品，加入到去離子水中攪拌溶解完全，使VB12粗品的濃度為5 12. 5mg/ml，用濾紙過濾得到樣品液備用；
3>上樣將步驟2>得到的樣品液以I 4倍柱體積每小時的流速連續(xù)流過所述色譜柱，所用樹脂的體積(U和樣品的重量(g)比為1:10 1:30 ；
4>洗脫上樣結(jié)束后，用去離子水沖洗I 4倍柱體積，然后以6. 25%的丙酮水溶液為流動相，I 4倍柱體積每小時的流速洗脫，所述洗脫液用高效液相色譜儀檢測純度，將純度合格的洗脫液合并得到收集液；
5>后處理將步驟4>得到的收集液用納濾膜濃縮，再經(jīng)噴霧干燥，得到純度大于99%的 VB12。所述的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂為HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂。其中步驟3>中樣品液優(yōu)選以2倍柱體積每小時流速連續(xù)流過色譜柱。其中步驟4>中流動相洗脫流速優(yōu)選以2倍柱體積每小時。
采用本技術(shù)方案的有益效果是將大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂作為層析填料，裝入色譜柱成為固定相，釆用的樹脂具有吸附量大，選擇性好；把含有待分離的VB12粗品溶液流過該色譜柱，然后再把吸附在樹脂上的VB12洗脫下來而實現(xiàn)VB12和雜質(zhì)的分離。本發(fā)明具有工藝簡單，生產(chǎn)效率高，容易工業(yè)化生產(chǎn)，環(huán)境污染小等優(yōu)點，一次操作就可以得到99%以上純的VB12。
具體實施例方式下面通過實施例更詳細(xì)的說明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍不限于這些實施例。實施例中采用的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂為的HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂HZ PS20ss樹脂，HZ PS816樹脂、HZ PS818樹脂或HZ PS830樹脂，系市售，由上海華震科技有限公司生產(chǎn)。實施例I
樣品制備稱取16g VB12粗品(純度92. 5%)，加入到1280ml去離子水中，攪拌使樣品溶解完全，后用濾紙過濾備用，得到的樣品濃度為12. 5mg/ml ；
VB12純化采用49X460mm玻璃柱，HZ PS20ss樹脂為層析填料，裝柱體積800ml，用兩倍柱體積去離子水以每小時一倍柱體積流速平衡色譜柱；取配置好的上樣液，以每小時一倍柱體積流速連續(xù)流過色譜柱上樣，上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水沖洗一倍柱體積，然后用6. 25%的丙酮水溶液以每小時一倍柱體積的流速洗脫，根據(jù)安捷倫高效液相色譜儀1100檢測收集純度合格的洗脫液，共得到合并的收集液8000ml，HPLC檢測純度為99. 3%，VB12回收率為75. 1%。實施例2
樣品制備稱取24g VB12粗品(純度90. 5%)，加入到4800ml去離子水中，攪拌使樣品溶解完全，后用濾紙過濾備用，樣品的濃度為5mg/ml ;；
VB12純化采用49X460mm玻璃柱，HZ PS816樹脂為層析填料，裝柱體積800ml，用兩倍柱體積去離子水以每小時四倍柱體積流速平衡色譜柱；取配置好的上樣液，以每小時四倍柱體積流速連續(xù)流過色譜柱上樣，上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水沖洗兩倍柱體積，然后用6. 25%的丙酮水溶液以每小時二倍柱體積的流速洗脫，根據(jù)高效液相色譜儀1100檢測收集純度合格的洗脫液，共得到合并的收集液9600ml，HPLC檢測純度為99. 1%，VB12回收率為67. 1%。實施例3
樣品制備稱取16gVB12粗品(純度88. 7%)，加入到1600ml去離子水中，攪拌使樣品溶解完全，后用濾紙過濾備用，樣品的濃度為10mg/ml ；
VB12純化采用49X460mm玻璃柱，HZ PS818樹脂為層析填料，裝柱體積800ml，用兩倍柱體積去離子水以每小時一倍柱體積流速平衡色譜柱；取配置好的上樣液，以每小時一倍柱體積流速連續(xù)流過色譜柱上樣，上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水沖洗兩倍柱體積，然后用6. 25%的丙酮水溶液以每小時一倍柱體積的流速洗脫，根據(jù)高效液相色譜儀1100檢測收集純度合格的洗脫液，共得到合并的收集液8000ml，HPLC檢測純度為99. 4%，VB12回收率為69. 1%。實施例4
樣品制備稱取12g VB12粗品(純度91. 6%)，加入到960ml去離子水中，攪拌使樣品溶解完全，后用濾紙過濾備用，樣品的濃度為12. 5mg/ml ；VB12純化采用49X460mm玻璃柱，HZ PS830樹脂為層析填料，裝柱體積800ml，用兩倍柱體積去離子水以每小時二倍柱體積流速平衡色譜柱；取配置好的上樣液，以每小時二倍柱體積流速連續(xù)流過色譜柱上樣，上樣結(jié)束后繼續(xù)用去離子水沖洗四倍柱體積，然后用6. 25% 的丙酮水溶液以每小時二倍柱體積的流速洗脫，根據(jù)高效液相色譜儀1100檢測收集純度合格的洗脫液，共得到合并的收集液8800ml，HPLC檢測純度為99. 5%，VB12回收率為77. 8%。
權(quán)利要求
1.一種高純度VB12的純化工藝，其特征在于包括下述步驟 1>色譜柱平衡采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂為層析填料，裝入色譜柱作為固定相，裝柱完成后，用兩倍柱體積去離子水以I 4倍柱體積每小時的流速平衡色譜柱；2>樣品制備稱取純度為85 93%的VB12粗品，加入到去離子水中攪拌溶解完全，使VB12粗品的濃度為5 12. 5mg/ml，用濾紙過濾得到樣品液備用； 3>上樣將步驟2>得到的樣品液以I 4倍柱體積每小時的流速連續(xù)流過所述色譜柱，所用樹脂的體積(L)和樣品的重量(g)比為1:10 1:30 ; 4>洗脫上樣結(jié)束后，用去離子水沖洗I 4倍柱體積，然后以6. 25%的丙酮水溶液為流動相，I 4倍柱體積每小時的流速洗脫，所述洗脫液用高效液相色譜儀檢測純度，將純度合格的洗脫液合并得到收集液； 5>后處理將步驟4>得到的收集液用納濾膜濃縮，再經(jīng)噴霧干燥，得到純度大于99%的 VB12。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種高純度VB12的純化工藝，其特征在于所述的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂為HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純度維生素B12的純化工藝，屬于生化產(chǎn)品的分離純化技術(shù)領(lǐng)域。所解決的是現(xiàn)有工藝中存在的產(chǎn)品雜質(zhì)難以除去、純度不高技術(shù)問題，其特征在于將大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球樹脂作為層析填料，裝入色譜柱成為固定相，把含有待分離的VB12粗品溶液流過該色譜柱，然后再把吸附在樹脂上的VB12洗脫下來，實現(xiàn)VB12和雜質(zhì)的分離。本發(fā)明釆用的樹脂吸附量大，選擇性好，一次操作可以得到99%以上純VB12產(chǎn)品，工藝方法簡單，生產(chǎn)效率高，具有容易工業(yè)化生產(chǎn)、環(huán)境污染小等優(yōu)點。
文檔編號C07H23/00GK102977173SQ20121053686
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者江邦和, 厲留柱, 寧方紅, 楊超男 申請人:上海華震科技有限公司