專(zhuān)利名稱：2-[5-(2-羥苯基)-4h-1,2,4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽及制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種三唑類(lèi)化合物及其制備方法和在抗微生物方面的應(yīng)用；特別涉及 一種式(III)的2-[5-(2-羥苯基)-4Η-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可 藥用的鹽及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供的式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H_l，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙 酮類(lèi)化合物或其可藥用的鹽在抗真菌、抗革蘭氏陰性菌等藥物開(kāi)發(fā)方面有重要應(yīng)用前景。
背景技術(shù)：
近些年來(lái)，由免疫缺陷或使用抗癌藥品導(dǎo)致的缺陷免疫力宿主身上的真菌感染已 成為誘發(fā)由于真菌感染造成的真菌病的嚴(yán)重問(wèn)題。于是為解決這個(gè)難題研究出了各種抗真 菌劑。例如EP. A. 333059公開(kāi)了具有三唑結(jié)構(gòu)的化合物，其具有農(nóng)用抗真菌活性；但是沒(méi)有 公開(kāi)其醫(yī)學(xué)用途和對(duì)人或動(dòng)物的真菌感染的抑制作用，又例如ZL02136947.X，其公開(kāi)了一 種三氮唑醇的抗真菌化合物，其抗真菌效果較好，但與酮康唑相比其在抗真菌效果上不具 備明顯的優(yōu)勢(shì)。為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中化合物對(duì)抗真菌的缺陷，我們對(duì)上述化合物進(jìn)行了進(jìn) 一步的研究，驚喜地發(fā)現(xiàn)，將鄰羥基二苯醚類(lèi)化合物和唑類(lèi)化合物(現(xiàn)有的抗菌劑)中的 核心結(jié)構(gòu)片斷依據(jù)生物活性疊加原理進(jìn)行進(jìn)一步的改造后得到式(III)的2-[5-(2-羥苯 基)-4H-1,2,4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用的鹽，對(duì)抗真菌效果尤為突 出，同時(shí)大大降低了副作用。目前，由于嚴(yán)重感染、器官移植、惡性腫瘤患者由于免疫功能低下或抑制，易伴發(fā) 條件致病性感染特別是真菌感染。三唑類(lèi)抗真菌藥物主要有氟康唑，這類(lèi)藥物對(duì)白色念珠 菌顯示了良好的抗菌效果。但是大多數(shù)克柔念珠菌對(duì)氟康唑呈現(xiàn)耐藥性。由于長(zhǎng)期反復(fù)和 大劑量應(yīng)用，耐藥菌株和發(fā)生率日趨升高，已引起醫(yī)學(xué)界和藥學(xué)界的廣泛關(guān)注。因此，開(kāi)發(fā) 新型的低毒、抗菌譜廣、耐藥性強(qiáng)的抗菌藥已成為急需研究的問(wèn)題。因此，本發(fā)明提供了一種具有極強(qiáng)抗菌活性的式(III)的2-[5-(2_羥苯 基)-4Η-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用的鹽，經(jīng)生物活性測(cè)試表 明，該類(lèi)化合物對(duì)真菌、革蘭氏陰性菌等均表現(xiàn)出極強(qiáng)的抑菌活性，具有很好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種式(III)的2-[5-(2_羥苯 基)-4H-1,2,4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用的鹽及其制備方法和在抗 微生物方面的應(yīng)用，它在抗真菌、抗革蘭氏陰性菌等藥物開(kāi)發(fā)方面有重要應(yīng)用前景。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H_l，2，4-三
唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為χ
r R2R :H, F, Cl, Br, I 式(III)R1 R5 :H, F, Cl, Br, I，CH3, C2H5，C3H7, C4H9，NH2, OH, OCH3, OC2H5，NO2。本發(fā)明包括式III定義的化合物的可藥用鹽。根據(jù)本發(fā)明的化合物可具有足夠的 酸性、足夠的堿性或兩者的功能基，并因此與許多有機(jī)或無(wú)機(jī)堿或有機(jī)或無(wú)機(jī)酸而形成可 藥用鹽。此處使用的術(shù)語(yǔ)“可藥用鹽”指式III化合物的鹽，其對(duì)活的有機(jī)體基本上無(wú)毒。 典型的可藥用鹽包括那些通過(guò)本發(fā)明的化合物與可藥用無(wú)機(jī)或有機(jī)酸或有機(jī)或無(wú)機(jī)堿形 成的鹽。這些鹽被稱為酸加成鹽或堿加成鹽。用于形成酸加成鹽的酸通常包括無(wú)機(jī)酸，例如氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸 等，有機(jī)酸，例如對(duì)-甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對(duì)-溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲 酸、乙酸等。優(yōu)選的可藥用酸加成鹽為那些與無(wú)機(jī)酸如氫氯酸和氫溴酸形成的鹽和那些與 有機(jī)酸如馬來(lái)酸和甲基苯磺酸形成的鹽。胺基鹽可包括季銨鹽，其中氨基的氮上連接有適宜的有機(jī)基團(tuán)，如烷基、低級(jí)鏈烯 基、取代的低級(jí)鏈烯基、低級(jí)炔基、取代的低級(jí)炔基或芳烷基部分。堿加成鹽包括那些衍生自無(wú)機(jī)堿的鹽，無(wú)機(jī)堿如銨或堿金屬或堿土金屬氫氧化 物、碳酸鹽、碳酸氫鹽。因此。在制備本發(fā)明的鹽中有用的堿包括氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧 化銨、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、氫氧化鈣、碳酸鈣等。本發(fā)明還提供了一種式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H_l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其藥學(xué)上可接受鹽在制備抗真菌、革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌 或抗病毒藥物的應(yīng)用。本發(fā)明部分優(yōu)選化合物或其藥學(xué)上可接受鹽有(A) :2-[5-(2-羥苯基)-4!1-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮;(B) :2-[5-(2-羥苯基)-4!1-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-對(duì)氯苯乙酮;(C) :2-[5-(2-羥苯基)-4!1-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-對(duì)溴苯乙酮;(D) :2-[5-(2_羥苯基)-4H_l，2，4-三唑-3-硫醚]-1-對(duì)甲基苯乙酮;本發(fā)明所提供的制備方法是取代水楊酸甲酯和水合胼反應(yīng)生成取代水楊酰胼， 再和硫氰酸銨、酸反應(yīng)，所得產(chǎn)物進(jìn)一步在堿性條件下反應(yīng)生成化合物II，最后與取代鹵代 苯乙酮發(fā)生親核取代反應(yīng)生成目標(biāo)化合物，其合成路線如下
R :H, F, Cl, Br, I R1-R5 :H，F(xiàn), Cl, Br, I，CH3, C2H5，C3H7, C4H9, NH2, OH, OCH3, OC2H5， NO2 R6:Cl，Br本發(fā)明的制備方法描述如下a、取代水楊酰胼(I)的合成以取代水楊酸甲酯和水合胼為原料，取代水楊酸甲酯和水合胼的摩爾比控制在 1 1.0-2.0，優(yōu)選的摩爾比是1 1.3-1.5 ；選用的溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正 丁醇、異丁醇、叔丁醇、仲丁醇、丁二醇、正戊醇、異戊醇、正己醇、環(huán)己醇、正庚醇、正辛醇、 異辛醇、仲辛醇、乙腈、二氯甲烷、氯仿、丙酮或乙醚中的一種或者它們的混合物，溫度在 40°C 200°C之間加熱回流，反應(yīng)完畢，減壓蒸餾脫去部分溶劑，冷卻，抽濾，把所得濾餅重 結(jié)晶，所用溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇或叔丁醇中的一種或者它們 的混合物或者它們和水的混合物。13、5-(2-羥苯基)_4!1-1，2，4-三唑-3-硫酮類(lèi)化合物(II)的合成將取代水楊酰胼溶在溶劑中，所用溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異 丁醇、叔丁醇、仲丁醇、丁二醇、正戊醇、異戊醇、正己醇、環(huán)己醇、正庚醇、正辛醇、異辛醇、仲 辛醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷或氯仿中的一種或者它們的混合物，攪拌溶解至澄清，常溫下加 入硫氰酸銨和酸(鹽酸、稀硝酸、氫溴酸、磷酸、亞磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、異丁酸、 正戊酸、正己酸、正庚酸、正辛酸、異辛酸、苯甲酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、氯磺酸、甲基磺酸或 氨基磺酸中的一種或者它們的混合物)。溫度控制在40°C 200°C加熱回流，TLC跟蹤反 應(yīng)，原料斑點(diǎn)消失后停止反應(yīng)，減壓蒸餾脫去部分溶劑，冷卻，抽濾，所得固體干燥后直接用 于下一步反應(yīng)。將第一步產(chǎn)物溶于堿的水溶液中，所用堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸 鈉、碳酸鉀、碳酸鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、硫酸鈉、硫酸鉀、硫酸鋰、硫酸氫鈉、硫酸氫鉀、磷 酸鈉、磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉中的一種或者它們的混合物，攪拌下升溫至40°C 200°C 加熱回流，TLC跟蹤反應(yīng)，反應(yīng)完畢，冷卻，用酸調(diào)pH，其中pH值應(yīng)控制在2 10，最佳pH值 為5 6。如果pH值太大或者太小，產(chǎn)物就會(huì)以鹽的形式存在而溶于水中，從而無(wú)法析出， 使其收率降低。調(diào)PH時(shí)有大量固體析出，抽濾，把濾餅水洗至中性，用適當(dāng)溶劑重結(jié)晶。C、溴代苯乙酮的合成在裝有冷凝管(冷凝管上端接氯化鈣干燥管及氯化氫吸收裝置)、溫度計(jì)及50mL 恒壓滴液漏斗的250mL三口瓶中分別加入苯乙酮，無(wú)水乙醚，冰鹽浴冷卻至0°C以下，攪拌 下滴加液溴，先滴加一滴，等顏色褪去后再繼續(xù)滴加，控制滴加速度，約2h滴完。維持反應(yīng) 溫度繼續(xù)攪拌30min左右至顏色褪去，停止反應(yīng)。將反應(yīng)液倒入500mL分液漏斗中，用冰水 洗滌分去水層，反復(fù)水洗至有機(jī)相成中性，用無(wú)水硫酸鎂干燥過(guò)夜。濾去硫酸鎂再減壓蒸去 溶劑，粗品為淡黃色固體，用1 1的乙醇和水重結(jié)晶得白色片狀晶體。d、取代氯代苯乙酮的合成在裝有冷凝管(冷凝管上端接氯化鈣干燥管及氯化氫吸收裝置)、溫度計(jì)及50mL 恒壓滴液漏斗的250mL三口瓶中分別加入取代苯，無(wú)水三氯化鋁和無(wú)水二硫化碳，常溫?cái)?拌下滴加氯乙酰氯，控制滴加速度，滴加完畢再反應(yīng)0. 5h，緩慢升溫至回流反應(yīng)。將反應(yīng)液 緩慢倒入裝有冰水和濃鹽酸混合物的燒杯中，并攪拌0. 5h后于室外放置過(guò)夜。過(guò)濾，濾餅 用合適溶劑重結(jié)晶。
^2-[5-(2-羥苯基)-4!1-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物(III)的合 成在裝有冷凝管、溫度計(jì)及50mL恒壓滴液漏斗的250mL三口瓶中分別加入適量水、 5-(2-羥苯基)-4Η-1，2，4-三唑-3-硫酮類(lèi)化合物和等物質(zhì)的量的堿，所用堿為氫氧化鈉、 氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、硫酸鈉、硫酸鉀、硫酸 鋰、硫酸氫鈉、硫酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫二鈉或磷酸二氫鈉中的一種或者它們的混合物，攪 拌使其溶解得澄清液。常溫?cái)嚢柘碌渭尤〈u代苯乙酮和乙醇的混合溶液或者分批加入取 代鹵代苯乙酮。滴加過(guò)程中有固體析出，滴加完畢，升溫至40°C 200°C，將反應(yīng)混合物加 熱回流，TLC跟蹤反應(yīng)，原料斑點(diǎn)消失后停止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，抽濾，濾餅用適當(dāng) 溶劑重結(jié)晶，得目標(biāo)化合物。為了得到親核性強(qiáng)的硫醇負(fù)離子，需要使用強(qiáng)堿性物質(zhì)(優(yōu)選氫氧化鈉、氫氧 化鉀、氫氧化鋰)，因此將硫酮溶于堿的水溶液中使其生成巰基負(fù)離子，這樣便能很好地 與取代鹵代苯乙酮發(fā)生親核取代反應(yīng)生成目標(biāo)化合物。其中，硫酮和堿的摩爾比控制在 1 1. 0 2.0，優(yōu)選的摩爾比是1 1.0 1. 1。如果摩爾比太小硫酮反應(yīng)不完，摩爾比太 大就會(huì)有其它產(chǎn)物生成，收率降低。f、抑菌活性測(cè)試方法如下實(shí)驗(yàn)原料本試驗(yàn)所用菌株，包括白色念珠菌(ATCC10231)、大腸桿菌(8099)和金黃色葡萄 球菌(ATCC6538)均由中國(guó)科學(xué)院微生物研究所提供；所用的培養(yǎng)基為沙氏瓊脂培養(yǎng)基和 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。抑菌實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)檢測(cè)依據(jù)以及菌懸液、活菌計(jì)數(shù)均參照GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》。試驗(yàn)樣品質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0. 1%、0.05%、0.01%，溶劑為V(DMF) V(H2O)= 1 4。具體操作如下將試驗(yàn)菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液(要求的濃度 為用100 μ L滴于對(duì)5mL樣液內(nèi)，回收菌數(shù)為(1 X IO4 9X IO4Cfu · mL—1)。取被試樣液 (5mL)和對(duì)照樣液(與試樣同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理)各4管。 取上述菌懸液，分別在每個(gè)被試樣液和對(duì)照樣液上滴加100 μ L，均勻混合，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用 20min，用無(wú)菌刻度吸管分別將樣液(0. 5mL)吸入含4. 5mLPBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng) 稀釋?zhuān)缓笕∑渲? 3個(gè)稀釋度，分別吸取0. 5mL,置于兩個(gè)培養(yǎng)皿，用涼至40 45°C的 沙氏瓊脂培養(yǎng)基(酵母菌)15mL作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板， 350C 士2°C培養(yǎng)48h (細(xì)菌)，作活菌菌落計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)1次，按下式計(jì)算抑菌率X4 = (A-B)/A X 100%式中X4——抑菌率，％ ；A——對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；B——被試樣品平均菌落數(shù)。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供了 一種式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4Η_1，2，4_三唑_3_硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用的鹽及其制備方法和在抗微生物方面的應(yīng)用。這類(lèi)化 合物不僅合成步驟簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低，而且產(chǎn)率較高，結(jié)構(gòu)新穎。本發(fā)明從設(shè)計(jì)、生產(chǎn)到應(yīng)用 都符合環(huán)境友好和綠色化學(xué)的要求。2-[5- (2-羥苯基)-4H-1,2,4-三唑_3_硫醚]苯乙酮類(lèi)化合物對(duì)白色念珠菌、 大腸桿菌具有強(qiáng)抑菌活性，對(duì)金黃色葡萄球菌具有一定的抑菌活性。這表明這類(lèi)化合物對(duì) 不同菌株的抑菌活性具有明顯的選擇性和特異性，在抗真菌、抗革蘭氏陰性菌等藥物開(kāi)發(fā) 方面有重要應(yīng)用前景。本發(fā)明制備過(guò)程中的合成方法成本低、步驟簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和、產(chǎn)率高、易于后 處理；并為安全高效抗微生物新藥研制提供了先導(dǎo)化合物。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)依據(jù)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式
、特征詳述如下本發(fā)明制備過(guò)程中取代水楊酸甲酯和水合胼反應(yīng)生成取代水楊酰胼，再和硫氰酸 銨、酸反應(yīng)，所得產(chǎn)物進(jìn)一步在堿性條件下反應(yīng)生成化合物11，最后與取代鹵代苯乙酮發(fā)生 親核取代反應(yīng)生成目標(biāo)化合物，合成路線如下 R :H, F, Cl, Br, I R1-R5 :H，F(xiàn), Cl, Br, I，CH3, C2H5，C3H7, C4H9, NH2, OH, OCH3, OC2H5， NO2 R6:Cl，Br實(shí)施例1 水楊酰胼的合成IOOmL的三口瓶中，將0. IOmol水楊酸甲酯和0. 13mol水合胼溶于40mL無(wú)水乙醇 中，室溫?cái)嚢瑁芤簾o(wú)色透明，80°C加熱回流，此溫度下反應(yīng)約9h，TLC跟蹤反應(yīng)，展開(kāi)劑為 V(乙酸乙酯)V(石油醚)=1 5(體積比)，原料斑點(diǎn)消失后停止反應(yīng)，冷卻后旋干溶 劑，抽濾得白色固體，乙醇重結(jié)晶得白色粉末，產(chǎn)率88. 7%，熔程147 148°C。實(shí)施例2 5-(2-羥苯基)_1，2，4-三唑-3-硫酮的合成及結(jié)構(gòu)鑒定IOOmL的三口瓶中，將0. Olmol水楊酰胼溶于50mL乙醇中，攪拌溶解至澄清。常溫 下加入0. Ollmol硫氰酸銨，2mL濃鹽酸。攪拌下升溫至80°C，將反應(yīng)混合物加熱回流，TLC 跟蹤反應(yīng)，展開(kāi)劑為V(乙酸乙酯)V(石油醚)=1 3的混合液，原料斑點(diǎn)消失后停止 反應(yīng)，減壓蒸去溶劑，抽濾，真空干燥，得1.91g白色粉末固體，直接用于下步反應(yīng)。產(chǎn)率: 90.3%,熔點(diǎn)195-197°C。將第一步產(chǎn)物溶于30mL5% NaOH水溶液中，攪拌下升溫至100°C，
8將反應(yīng)混合物加熱回流，TLC跟蹤反應(yīng)，展開(kāi)劑為V(乙酸乙酯)V(石油醚)=1 3的 混合液.反應(yīng)完，室溫靜置，用lmol/L鹽酸中和至pH為5 6，有大量固體析出，抽濾水洗 至中性，無(wú)水乙醇/乙酸乙酯重結(jié)晶，真空干燥得1. 27g灰白色粉末狀固體。產(chǎn)率72. 9%, 熔點(diǎn)308 310°C。1HNMR(DMSOdOOMHz) δ 11. 816 (s，1H，NH)，10. 873 (s，ΙΗ,ΟΗ) ,6. 95 7. 95(m,4H,ArH). IR(KBr) ν :3416 (OH)，3234 (NH)，1661 (C = N)，1509 (C = C)，1299 (C = S) cm 1.實(shí)施例3 溴代苯乙酮的合成在裝有攪拌器、冷凝管(冷凝管上端接氯化鈣干燥管及氯化氫吸收裝置)溫度計(jì) 及50mL恒壓滴液漏斗的250mL四口反應(yīng)瓶中分別加入0. 2mol苯乙酮，IOOmL無(wú)水乙醚，用 冰鹽浴冷卻至0°C以下，攪拌滴加0. 2mol液溴，先滴加一滴，等褪色后再繼續(xù)滴加，控制滴 加速度，約2h滴完。維持反應(yīng)溫度繼續(xù)攪拌30min左右至顏色褪去，停止反應(yīng)。將反應(yīng)液 倒入500mL分液漏斗中，用冰水洗滌分去水層，反復(fù)水洗至有機(jī)相成中性，用無(wú)水硫酸鎂干 燥過(guò)夜。濾去硫酸鎂再減壓蒸去溶劑，粗品為淡黃色固體，用1 1的乙醇和水重結(jié)晶得白 色片狀晶體。產(chǎn)率77.0%，熔點(diǎn)50 51°C。實(shí)施例4 對(duì)氯氯代苯乙酮的合成在裝有攪拌器、冷凝管(冷凝管上端接氯化鈣干燥管及氯化氫吸收裝置)、溫度計(jì) 及50mL恒壓滴液漏斗的250mL四口反應(yīng)瓶中分別加入0. Imol氯苯，30g無(wú)水三氯化鋁和 IOmL無(wú)水二硫化碳，常溫?cái)嚢柘碌渭?. Imol氯乙酸氯，控制滴加速度，約3h滴完，再反應(yīng) 0. 5h，緩慢升溫至回流反應(yīng)2h。將反應(yīng)液緩慢倒入裝有500mL冰水和濃鹽酸的混合物的燒 杯中，并攪拌0.5h后于室外放置過(guò)夜。過(guò)濾，濾餅用環(huán)己烷重結(jié)晶，得黃色針狀晶體，收率 77. 3%，熔程 204 2070C ο實(shí)施例5 對(duì)溴氯代苯乙酮的合成在裝有攪拌器、冷凝管(冷凝管上端接氯化鈣干燥管及氯化氫吸收裝置)、溫度計(jì) 及50mL恒壓滴液漏斗的250mL四口反應(yīng)瓶中分別加入0. Imol溴苯，30g無(wú)水三氯化鋁和 IOmL無(wú)水二硫化碳，常溫?cái)嚢柘碌渭?. Imol氯乙酸氯，控制滴加速度，約3h滴完，再反應(yīng) 0. 5h，緩慢升溫至回流反應(yīng)2h。將反應(yīng)液緩慢倒入裝有500mL冰水和濃鹽酸的混合物的燒 杯中，并攪拌0.5h后于室外放置過(guò)夜。過(guò)濾，濾餅用環(huán)己烷重結(jié)晶，得白色片狀晶體，收率 74. 8%，熔點(diǎn) 119-121 "C。實(shí)施例6:對(duì)甲基氯代苯乙酮的合成IOOml三口燒瓶中稱取0. 0033mol (4. 41g)三氯化鋁，IOml 二硫化碳， 0. 030mol (2. 76g)甲苯，電磁攪拌，三口燒瓶上裝溫度計(jì)，恒壓滴液漏斗及尾氣吸收裝置。稱 取0. 0315mol (3. 56g)氯乙酰氯加入恒壓滴液漏斗中，緩慢滴加，約1. 5h滴完，溶液變?yōu)榛?黑色，加熱回流3小時(shí)左右，反應(yīng)完冷卻后，將反應(yīng)液倒入200ml含少量濃鹽酸的冰水中，放 出大量熱，有淡黃色固體析出，攪拌，靜止過(guò)夜，抽濾得對(duì)甲基氯代苯乙酮，熔程55 57°C。實(shí)施例7
2-[5- (2-羥苯基)-4H-1,2,4-三唑_3_硫醚]苯乙酮的合成及結(jié)構(gòu)鑒定50mL三口瓶中，加入0. 003moINaOHU5mL水和0. 003mol化合物4，攪拌使其溶解 得澄清液，溶液為暗紅色。常溫?cái)嚢柘碌渭?. 003mol溴代苯乙酮和5mL乙醇的混合溶液， 滴加過(guò)程中有暗紅色固體析出，控制滴加速度，大約0.5h滴加完。攪拌下升溫至100°C，將 反應(yīng)混合物加熱回流，TLC跟蹤反應(yīng)。展開(kāi)劑為V(乙酸乙酯)V(石油醚)=1 2的 混合液，原料斑點(diǎn)消失后停止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，抽濾，乙醇/乙酸乙酯重結(jié)晶。 1HNMR (400MHz, DMS0) δ 8. 02 (d, J = 7. 2Hz，2H，Ar-H), 7. 83 (q, J1 = 8. IHz，J2 = 1. 58Hz, 1H, Ar-H) ,7. 69 (t, J = 7. 3Hz, 1H, Ar-H)，7. 57 (t，J = 7. 6Hz,2H, Ar-H)，7. 29 7· 36 (m, 1H, Ar-H), 6. 91 6. 99 (m, 1Η, Ar-H), 4. 88(s，2H，CH2). IR(KBr, cnT1) ν 3550 ；3411 ；3236 ； 1697 ；1637 ；1617,1598,1456 ；623. Anal, calcd for C16H13N3O2S :C61· 69，Η4· 25，N 13.53; foundC 61. 72，Η4. 21，N 13. 50.實(shí)施例8 2-[5-(2-羥苯基)-4H_l，2，4-三唑-3-硫醚]-1-對(duì)氯苯乙酮的合成及結(jié)構(gòu)鑒定50mL三口瓶中，加入0. 003moINaOHU5mL水和0. 003mol化合物4，攪拌使其溶解 得澄清液，溶液為黃色。常溫?cái)嚢柘路峙尤?. 003mol對(duì)氯氯代苯乙酮，此過(guò)程中有黃色 固體析出，攪拌下升溫至100°C，將反應(yīng)混合物加熱回流，TLC跟蹤反應(yīng)。展開(kāi)劑為V(乙 酸乙酯)V(石油醚)=1 2的混合液，原料斑點(diǎn)消失后停止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷卻至 室溫，抽濾，乙醇 / 乙酸乙酯重結(jié)晶。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ 8. 08 (d, J = 8. 7Hz，2H， Ar-H)，7. 82 (dd, J1 = J2 = 1. 2Hz, 1H, Ar-H)，7. 65 (d, J = 8. 7Hz,2H, Ar-H)，7. 31 (t, J = 7. 6Hz, 1H, Ar-H), 6. 90 7· 00 (m, 2H, Ar-H), 4. 86(s，2H，CH2). IR(KBr, cnT1) 3552 ；3413 ； 3233 ；1672 ；1637 ；1617，1588，1459 ；626. Anal, calcd for C16H12ClN3O2S :C55. 47，H 3. 59，N 12. 18 ； foundC 55. 57，Η3· 50，N 12. 15.實(shí)施例9 2-[5-(2-羥苯基)-4Η_1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-對(duì)溴苯乙酮的合成及結(jié)構(gòu)鑒定50mL三口瓶中，加入0. 003moINaOHU5mL水和0. 003mol化合物4，攪拌使其溶解 得澄清液，溶液為土紅色。常溫?cái)嚢柘路峙尤?. 003mol對(duì)溴氯代苯乙酮，此過(guò)程中有土 紅色固體析出，攪拌下升溫至100°C，將反應(yīng)混合物加熱回流，TLC跟蹤反應(yīng)。展開(kāi)劑為V (乙 酸乙酯)V (石油醚)=1 2的混合液，原料斑點(diǎn)消失后停止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷卻至室 溫，抽濾，乙醇 / 乙酸乙酯重結(jié)晶。1Hnmr(^omHzjCDCI3) δ 7. 99(d,J = 8. 4Hz，2H，Ar-H)， 7. 77 7. 84 (m, 3H, Ar-H)，7. 30 7. 36 (m, 1H, Ar-H)，6. 91 7. 01 (m，1H, Ar-H)，4. 76 (s, 2H, CH2). IR(KBr, cnT1) 3551 ；3414 ；3232 ；1675 ；1637 ； 1617，1587，1474 ；623. Anal, calcd for C16H12BrN3O2S :C49. 21，H 3. 19，N 10. 72 ；found C 49. 24，H 3. 10，N 10. 77.實(shí)施例10 2-[5-(2-羥苯基)-4H_l，2，4_三唑_3_硫醚]對(duì)甲基苯乙酮的合成及結(jié)構(gòu)鑒 定50mL三口瓶中，加入0. 003moINaOHU5mL水和0. 003mol化合物4，攪拌使其溶解 得澄清液，溶液為粉紅色。常溫?cái)嚢柘路峙尤?. 003mol對(duì)甲基氯代苯乙酮，此過(guò)程中有 粉紅色固體析出，攪拌下升溫至100°C，將反應(yīng)混合物加熱回流，TLC跟蹤反應(yīng)。展開(kāi)劑為 V(乙酸乙酯)V(石油醚)=1 3的混合液，原料斑點(diǎn)消失后停止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷卻至室溫，抽濾，乙醇/乙酸乙酯重結(jié)晶。1HNMR(400MHz, CDCl3) δ 7. 95 (d，J = 8. IHz, 2Η, Ar-H), 7. 83 (dd, J1 = 7. 8Hz, J2 = 1. 5Hz, 1Η, Ar-H) 7. 30 7. 36 (m, 3Η, Ar-H), 6. 70 6.91(m，2H，Ar-H) ,4. 85 (s, 2Η, CH2) ,2. 40(s,3H, CH3). IR (KBr，cnT1) 3551 ；3413 ；3236 ； 1670 ；1637 ；1617，1457，1436 ；623. Anal, calcd for C17H15N3O2S :C62. 71，H 4. 67，N 12. 95 ； foundC 62. 75，H4. 65N 12. 91.根據(jù)上述實(shí)施例相似的原料和方法，我們制備了如下化合物，但保護(hù)并不限于 此 生物活性實(shí)驗(yàn)按照國(guó)標(biāo)GB15979-2002《一次性使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中溶出性抑菌產(chǎn)品抑菌性能實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行，所用菌株為大腸桿菌(Ec) (8099)、金黃色葡萄球菌(Sa) (ATCC6538)、白色念珠菌(Ma) (ATCC 10231)，均由預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院消毒檢測(cè)中心提供，試樣 質(zhì)量濃度依次為0. 1%,0. 05%,0.01%o抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1稱量2-[5- (2-羥苯基)-4H-1,2,4-三唑_3_硫醚]苯乙酮0. 5mg,配成試驗(yàn)樣 品質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0. 1%，溶劑為V(DMF) V(H2O) =1:4。具體操作如下將試驗(yàn)菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液(要求的濃度 為用100 μ L滴于對(duì)5mL樣液內(nèi)，回收菌數(shù)為(1 X 104_9 X 104cfu mr1)。取被試樣液(5mL) 和對(duì)照樣液(與試樣同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理)各4管。取上述 菌懸液，分別在每個(gè)被試樣液和對(duì)照樣液上滴加100 μ L，均勻混合，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用20min， 用無(wú)菌刻度吸管分別將樣液(0. 5mL)吸入含4. 5mLPBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng)稀釋?zhuān)?后取其中2-3個(gè)稀釋度，分別吸取0. 5mL,置于兩個(gè)培養(yǎng)皿，用涼至40_45°C的沙氏瓊脂培養(yǎng) 基(酵母菌)15mL作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，35°C 士 2°C培養(yǎng) 48h (細(xì)菌)，作活菌菌落計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)1次，按下式計(jì)算抑菌率X4 = (A-B)/A X 100%式中X4——抑菌率，％ ；A——對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；B——被試樣品平均菌落數(shù)。抑菌率=(145-0)/145X 100%= 100%。按抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1的方法，對(duì)上述實(shí)施例中的化合物和氟康唑(FLCZ)進(jìn)行該濃 度下的抑菌活性測(cè)試，上述實(shí)施例中的4個(gè)化合物與FLCZ的測(cè)試結(jié)果如下化合物A-D對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌活性結(jié)果見(jiàn)下表(濃度為0. 1 % ) 抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2稱量2-[5- (2-羥苯基)-4H-1，2，4-三唑_3_硫醚]苯乙酮0. 25mg,配成試驗(yàn) 樣品質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.05%，溶劑為V(DMF) V(H2O) =1:4。具體操作按照實(shí)施例1，抑菌率=(138_0)/138X100%= 100%。(抑菌率= (A-B) /A X 100% )按抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1的方法，對(duì)上述實(shí)施例中的化合物和氟康唑(FLCZ)進(jìn)行該濃 度下的抑菌活性測(cè)試，上述實(shí)施例中的4個(gè)化合物與FLCZ的測(cè)試結(jié)果如下化合物A-D對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌活性結(jié)果見(jiàn)下表(濃度為0. 05% ) 抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3稱量2-[5- (2-羥苯基)-4H-1，2，4-三唑_3_硫醚]苯乙酮0. 05mg,配成試驗(yàn) 樣品質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.01%，溶劑為V(DMF) V(H2O) =1:4。具體操作按照實(shí)施例1，抑菌率=(140-0)/140X100%= 100%。(抑菌率=(A-B/ AX100% )按抑菌實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1的方法，對(duì)上述實(shí)施例中的化合物和氟康唑(FLCZ)進(jìn)行該濃 度下的抑菌活性測(cè)試，上述實(shí)施例中的4個(gè)化合物與FLCZ的測(cè)試結(jié)果如下化合物A-D對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌活性結(jié)果見(jiàn)下表(濃度為0. 01% ) 抑菌測(cè)試表明，質(zhì)量濃度為0. 05 %時(shí)，2-[5- (2-羥苯基)_4H_1，2，4_三唑_3_硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物對(duì)白色念珠菌、大腸桿菌的抑菌率高達(dá)100 %，對(duì)金黃色葡萄球菌 抑菌率達(dá)90%以上；質(zhì)量濃度為0.01%時(shí)，對(duì)白色念珠菌、大腸桿菌的抑菌率高達(dá)95%以 上，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌率達(dá)80%以上。這表明2-[5-(2_羥苯基)-4Η-1，2，4-三唑 3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物對(duì)真菌、革蘭氏陰性菌等具有強(qiáng)抑菌活性，對(duì)不同菌株的抑菌 活性具有明顯的選擇性和特異性，在抗真菌、抗革蘭氏陰性菌藥物開(kāi)發(fā)方面有重要應(yīng)用前 景。與FLCZ相比，目標(biāo)化合物對(duì)白色念珠菌、大腸桿菌均具有更強(qiáng)的抑菌活性。上述參照實(shí)施例對(duì)該通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H_l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用的鹽及其制備方法和在抗微生物方面的應(yīng)用進(jìn)行的詳 細(xì)描述，是說(shuō)明性的而不是限定性的；因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬 本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種通式為式(III)的2 [5 (2 羥苯基) 4H 1，2，4 三唑 3 硫醚] 1 苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽式(III)RH，F(xiàn)，Cl，Br，IR1～R5H，F(xiàn)，Cl，Br，I，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，OH，OCH3，OC2H5，NO2。F2009100708438C00011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽，其特征在于所述化合物或其可藥用鹽選自(A):2-[5-(2-羥苯基)-411-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮；(B)2-[5-(2-羥苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-對(duì)氯苯乙酮；(C)2-[5-(2-羥苯基)-4H-l，2，4-三唑-3-硫醚]對(duì)溴苯乙酮；(D)2-[5-(2-羥苯基)-4H-l，2，4_三唑-3-硫醚]對(duì)甲基苯乙酮。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三 唑_3硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽的制備方法，其特征在于合成路線如下R
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽的制備方法，其特征在于合成路線第一步中，取代 水楊酸甲酯和水合胼的摩爾比控制在1 1.0-2.0，優(yōu)選的摩爾比是1 1.3-1. 5;反應(yīng)所 用溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、仲丁醇、丁二醇、正戊醇、異 戊醇、正己醇、環(huán)己醇、正庚醇、正辛醇、異辛醇、仲辛醇、乙腈、二氯甲烷、氯仿、丙酮或乙醚 中的一種或它們的混合物；溶劑的使用量是在反應(yīng)溫度下，使反應(yīng)混合物具有良好的流動(dòng) 性。重結(jié)晶溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇或叔丁醇中的一種或它們的 混合物或者其中一種和水的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽的制備方法，其特征在于合成路線第二步中，取 代水楊酰胼、硫氰酸銨和酸的摩爾比控制在1 1.0-2.0 1.0-2.0，優(yōu)選的摩爾比是·1 1.1-1.3 1.2-1.5 ；所用溶劑為甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、叔丁醇、 仲丁醇、丁二醇、正戊醇、異戊醇、正己醇、環(huán)己醇、正庚醇、正辛醇、異辛醇、仲辛醇、乙腈、丙 酮、二氯甲烷或氯仿中的一種或它們的混合物；該反應(yīng)中所用酸是鹽酸、稀硝酸、氫溴酸、磷 酸、亞磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、異丁酸、正戊酸、正己酸、正庚酸、正辛酸、異辛酸、苯 甲酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、氯磺酸、甲基磺酸或氨基磺酸中的一種或它們的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽的制備方法，其特征在于合成路線第三步所用堿為 氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鋰、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀、硫酸鈉、硫酸 鉀、硫酸鋰、硫酸氫鈉、硫酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫二鈉、三乙胺、正丁胺或吡啶中的一種或它 們的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽的制備方法，其特征在于合成路線第三步用酸調(diào)pH 值，其PH值控制在2 10，最佳pH值為5 6 ；所用酸是鹽酸、稀硝酸、氫溴酸、磷酸、亞磷 酸、甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、異丁酸、正戊酸、正己酸、正庚酸、正辛酸、異辛酸、苯甲酸、苯 磺酸、對(duì)甲苯磺酸、氯磺酸、甲基磺酸或氨基磺酸中的一種或者它們的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三唑-3-硫 醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽的制備方法，其特征在于合成路線第四步中的親核 取代反應(yīng)是在堿性條件下進(jìn)行的，硫酮和堿的摩爾比控制在1 1.0-2.0，優(yōu)選的摩爾比是 1 1.0-1. 1;其中，所用堿是氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸鋰、硫酸 鉀、硫酸鈉、硫酸鋰、三乙胺、正丁胺或吡啶中的一種或者它們的混合物。
9.一種根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的通式為式(III)的2-[5-(2_羥苯基)-4H-l，2，4-三 唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用鹽在制備抗真菌、革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性 菌或者抗病毒藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種式(III)的2-[5-(2-羥苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物或其可藥用的鹽及其制備方法和在抗微生物方面的應(yīng)用。取代水楊酸甲酯和水合肼反應(yīng)生成取代水楊酰肼，再和硫氰酸銨、酸反應(yīng)，所得產(chǎn)物進(jìn)一步在堿性條件下反應(yīng)生成化合物II，最后與取代鹵代苯乙酮發(fā)生親核取代反應(yīng)生成2-[5-(2-羥苯基)-4H-1，2，4-三唑-3-硫醚]-1-苯乙酮類(lèi)化合物，通式如下。該類(lèi)化合物或其可藥用的鹽在抗真菌、抗革蘭氏陰性菌等藥物開(kāi)發(fā)方面有重要應(yīng)用前景。RH，F(xiàn)，Cl，Br，I；R1～R5H，F(xiàn)，Cl，Br，I，CH3，C2H5，C3H7，C4H9，NH2，OH，OCH3，OC2H5，NO2。
文檔編號(hào)A61P31/04GK101928253SQ20091007084
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2009年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月16日
發(fā)明者盧俊瑞, 朱姍姍 申請(qǐng)人:天津理工大學(xué)