3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸的新應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說，涉及3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮 氨酸作為活性成分在制備用于預(yù)防和治療炎癥疾病和與炎癥相關(guān)的感染疾病的藥物制劑 中的新應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 炎癥是一種十分常見而又重要的基本病理過程，任何能夠引起組織損傷的因素， 如感染、非感染性組織損傷（如創(chuàng)傷、手術(shù)等）均可導(dǎo)致炎癥的發(fā)生，且這些炎癥具有很 多相似的特征（Barton GM. A calculated response: control of inflammation by the innate immune system. J. Clin. Invest.，2008, 118:413-420)。以細(xì)菌感染導(dǎo)致的炎癥為 例，細(xì)菌分泌的內(nèi)毒素（細(xì)菌脂多糖lipopolysaccharides，簡稱LPS)是細(xì)菌致病的主要 因素，可引起機(jī)體的一系列炎癥反應(yīng)。LPS誘導(dǎo)的炎癥信號與Toll樣受體（TLRs)家族等有 關(guān)。當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌感染時，LPS作用于細(xì)胞膜上TLRs受體，通過胞內(nèi)信號傳遞，級聯(lián)基因 表達(dá)發(fā)生變化，LPS可刺激體內(nèi)多種細(xì)胞因子合成和釋放炎性因子（如NO, TNF-a，IL-6， IL-Ιβ等），導(dǎo)致全身性炎癥反應(yīng)發(fā)生，引起中毒性休克、全身炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS)和多 器官功能障礙綜合征（MODS)等炎癥疾病（王曉東，內(nèi)毒素中和蛋白及其在膿毒癥防治中的 作用[J]，國外醫(yī)學(xué)生理、病理科學(xué)與臨床分冊，2001，21⑵：144-146;麗穎、王興鵬，阻斷 內(nèi)毒素信號傳導(dǎo)通路治療膿毒癥或膿毒性休克的研宄進(jìn)展[J]，中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2003， 12(2) :135-137 ;王穎、郭在晨，感染性休克的治療[J]，中華實(shí)用兒科臨床雜志，2007， 22(6) :403-405 ;張雪梅、熊煥章，LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)信號傳導(dǎo)通路研宄進(jìn)展，中國獸醫(yī)雜 志，2010,46 (7) :45-47)。因此，LPS可視為細(xì)菌的主要致病因子，在細(xì)菌感染的發(fā)病機(jī)理中 起著十分重要的作用。同樣，在組織損傷時，機(jī)體會分泌大量細(xì)胞因子以修復(fù)損傷，但當(dāng)反 應(yīng)過度時，也會引發(fā)SIRS、MODS等炎癥疾病。
[0003] 烏苯美司（Ubenimex，又名Bestatin)是常見的抗腫瘤輔助藥物，可增強(qiáng)免 疫功能，用于抗癌化療、放療的輔助治療等（Umezawa, H.，Aoyagi, T.，Suda, H.，Hamada ,M. &Takeuchi,T. (1976). Bestatin,an inhibitor of aminopeptidase B,produced by actinomycetes, (29). Pp. 97-99 ；Muskardin, D. T. , Voelkel. N. F. &Fitzpatrick, F. A. (1994). Modulation of pulmonary leukotriene formation and perfusion pressure by bestatin,an inhibitor of leukotriene A4hydrolase. (48). pp. 131-137 ； Hirayama, Y ；Sakamaki, S ；Takayanagi, N ；Tsuji, Y ；Sagawa, T ；Chiba, H ；Matsunaga, T ； Niitsu, Y. (2003). "Chemotherapy with ubenimex corresponding to patient age and organ disorder for 18cases of acute myelogeneous leukemia in elderly patients-effects, complications and long-term survival"· Gan to kagakuryoho. Cancer&chemotherapy 30(8) :1113-8)。烏苯美司的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0004]
O
[0005] 3-氨基-2-羥基-4-苯基-繳氨酰-異殼氨酸是與烏苯美司（Bestatin)結(jié)構(gòu)相 似的新型衍生物，本發(fā)明的申請人在申請?zhí)枮?01110076554. 6的中國發(fā)明專利中首次公 開該化合物3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0007] 在申請?zhí)枮?01110076555. 0的中國發(fā)明專利中進(jìn)一步公開了化合物3-氨 基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸作為氨肽酶抑制劑的應(yīng)用，其活性優(yōu)于烏苯美司 (Bestatin)，可用作腫瘤治療或輔助治療藥物，具有更好的體內(nèi)免疫增強(qiáng)作用，如能增強(qiáng)T 細(xì)胞和殺傷性NK細(xì)胞活性和功能等，但對在如細(xì)菌引起的急性炎癥中的作用尚未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的發(fā)明人在對化合物3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸的功 能做進(jìn)一步研宄中發(fā)現(xiàn)，該化合物對于LPS引起的急性炎癥具有明顯的抑制作用。因此，本 發(fā)明的目的在于提供一種3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸作為活性成分在 制備炎癥抑制劑或制備用于預(yù)防和治療炎癥疾病的藥物制劑中的新應(yīng)用。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0010] 本發(fā)明的第一個方面是提供3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸作為 活性成分在制備用于預(yù)防和治療炎癥疾病和與炎癥相關(guān)的感染疾病的藥物制劑中的應(yīng)用， 所述3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0012] 其中，所述炎癥疾病和與炎癥相關(guān)的感染疾病包括細(xì)菌感染、無并發(fā)癥的膀胱炎、 支氣管炎、外傷、術(shù)后炎癥反應(yīng)、意外傷害、心肌梗塞、結(jié)核病或肉狀瘤病、膿毒癥、轉(zhuǎn)移性腫 瘤、活動期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、血清陰性的脊椎關(guān)節(jié)炎、免疫性血管炎、風(fēng)濕性多肌病、局限性 回腸炎、深部靜脈血栓形成的炎癥等。
[0013] 發(fā)明人通過構(gòu)建細(xì)菌內(nèi)毒素 LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型，腹腔給予3-氨 基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸藥物，檢測藥物對LPS引起的急性肺損傷的作用， 并檢驗(yàn)3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸對細(xì)胞因子、炎癥分子等表達(dá)的影響。 同時，還評價(jià)了 3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸的抗炎效果，發(fā)明人選擇小 鼠單核-巨噬細(xì)胞系Raw264. 7進(jìn)行測試，檢測LPS誘導(dǎo)的炎性因子NO表達(dá)和釋放，檢測后 發(fā)現(xiàn)，LPS誘導(dǎo)的炎性因子NO的釋放量大幅減少。
[0014] 還通過髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MP0)活性檢測、肺籃洗液中總蛋白含量 檢測和HE染色組織切片，觀測并檢驗(yàn)嗜中性粒細(xì)胞的浸潤情況，以評價(jià)LPS誘導(dǎo)的急性肺 損傷嚴(yán)重程度。檢測結(jié)果表明，3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸對LPS誘導(dǎo) 的小鼠肺部嗜中性粒細(xì)胞浸潤有抑制作用。
[0015] 本發(fā)明的第二個方面是提供一種用于預(yù)防和治療炎癥疾病和與炎癥相關(guān)的感染 疾病的藥物制劑，含有治療有效量的活性成分和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，所述活性 成分為3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸、其旋光異構(gòu)體或其藥物學(xué)上可接受 的鹽。
[0016] 優(yōu)選地，所述藥物制劑的劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑或注射劑（如凍 干粉針劑）。
[0017] 藥物學(xué)上可接受的鹽可以是藥理學(xué)上和其藥物學(xué)上都接受的。藥理學(xué)上和其藥物 學(xué)上可接受的鹽可以是堿金屬鹽或堿土金屬鹽，優(yōu)選鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽。
[0018] 所述藥物制劑涉及經(jīng)腸的（例如口服、舌下含服或直腸給藥）、胃腸外的或局部的 (如透皮藥物制劑）劑型。不與活性成分反應(yīng)的有機(jī)或無機(jī)物可以作為載體，如水、油、苯甲 醇、聚乙二醇、甘油三乙酸酯或其它脂肪酸甘油酯、明膠、卵磷脂、環(huán)糊精、乳二糖或淀粉等 糖類、硬脂酸鎂、滑石或纖維素?？诜盟巸?yōu)選片劑、糖衣丸劑、膠囊、粉、糖漿、濃縮劑或滴 劑，直腸給藥優(yōu)選栓劑，胃腸外給藥優(yōu)選水溶液或油溶液，或凍干劑。也可以使用混懸劑、乳 劑或植入劑，局部用藥可以用貼劑或乳膏劑。胃腸外使用的藥物制劑包括活性化合物的無 菌含水或無水注射液，在此優(yōu)選與受體血液等滲的溶液。
[0019] 這些藥物制劑可以含有穩(wěn)定劑、控制藥學(xué)活性化合物釋放的添加劑、抗氧劑、緩沖 劑、抑菌劑和用于制備等滲溶液的佐劑。含水和無水的無菌混懸劑可以含有混懸添加劑和 增稠劑。藥物制劑可以分裝在單劑量或多劑量容器如密封劑瓶中，也可以作為經(jīng)凍干的制 品保存，如需要，使用時可用無菌液體如水或鹽溶液配制。還可以以同樣的方式使用無菌粉 劑、顆粒劑或片劑。
[0020] 所述藥物制劑可用于人和動物中預(yù)防和治療炎癥和炎癥相關(guān)疾病。
【附圖說明】
[0021] 圖1為構(gòu)建的LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型中，髓過氧化物酶（MPO)活性檢測 結(jié)果圖表；
[0022] 圖2A和圖2B為構(gòu)建的LPS誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷模型中，肺盥洗液中總蛋白含 量檢測結(jié)果圖表；其中，圖2A為LPS給藥4小時后肺盥洗液的總蛋白濃度測定，圖2B為LPS 給藥12小時后肺盥洗液的總蛋白濃度測定；
[0023] 圖3為LPS誘導(dǎo)4小時后，在有無3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸 (LYRM03)的情況下，小鼠肺組織中細(xì)胞因子和炎癥因子的表達(dá)水平圖表；
[0024] 圖4為3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸（LYRM03)對LPS誘導(dǎo)的肺 組織中iNOS和COX-2蛋白表達(dá)的免疫印跡結(jié)果圖表；
[0025] 圖5A為LPS誘導(dǎo)的Raw264. 7細(xì)胞中，iNOS蛋白表達(dá)的兩次免疫印跡結(jié)果圖表；
[0026] 圖5B為LPS誘導(dǎo)的Raw264. 7細(xì)胞中，iNOS蛋白表達(dá)的量化分析圖表；
[0027] 圖6為Griess法檢測培養(yǎng)上清中NO釋放量的檢測結(jié)果圖表。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)和具體的介紹，以使更好的理解本發(fā)明， 但是下述實(shí)施例并不限制本發(fā)明范圍。
[0029] 本發(fā)明提供了 3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸作為活性成分在制備 用于預(yù)防和治療炎癥疾病和與炎癥相關(guān)的感染疾病的藥物制劑中的應(yīng)用。在本實(shí)施例中， 發(fā)明人將3-氨基-2-羥基-4-苯基-纈氨酰-異亮氨酸編號為LYRM03。
[0030] 以下實(shí)施例中所使用的檢測方法的具體操作如下：
[0031] 1、構(gòu)建LPS誘導(dǎo)的急性炎癥模型：
[0032] 將C57/BL小鼠分組，每組至少5只，稱重，分別用生理鹽水