專利名稱：治療前列腺疾病的靶向藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物和治療領(lǐng)域。具體地，涉及一種包含靶向部分和前列腺疾病治療 分子的靶向藥物。本發(fā)明還涉及含有該靶向藥物的藥物組合物，并公開了將該靶向藥物用 于前列腺疾病治療的方法，特別是在前列腺癌的治療中的用途。
背景技術(shù)：
在男性疾病中，前列腺疾病的發(fā)病率越來越高。前列腺疾病主要由三種疾病構(gòu)成 前列腺炎，前列腺增生和前列腺癌。其中后兩種較為難治，尤其是前列腺癌會導(dǎo)致部分患者 死亡。前列腺癌是困擾65歲以上男子的常見腫瘤之一。在美國，據(jù)信約有數(shù)百萬美國男 性患有前列腺癌。雖然只有不到3%患有該病的男性因此而死亡，但前列腺癌依舊是男性癌 癥死亡的第二殺手。這種癌癥通常局限于前列腺，但在某些情況中癌癥被診斷出時已擴(kuò)散 到骨骼、腎或腦。一旦診斷出前列腺癌，就必須確定并施用合適的治療方法。已有的治療方法包括 根治性前列腺切除術(shù)、放療和激素抑制。為了確定合適的治療方法，通常考慮一些因素如患 者的年齡和疾病的嚴(yán)重程度。通常這種病對較年輕的患者攻擊性較高。通常將任何大于 0.5cc的腫瘤視為是臨床顯著的。局部前列腺癌的優(yōu)選治療是根治性前列腺切除術(shù)。但這 種治療可能會導(dǎo)致死亡、失禁、陽痿、直腸受損或肺栓塞。已開發(fā)了一些小分子化合物用作治療前列腺疾病的藥物。然而，在施用這些小分 子藥物時，由于缺乏靶向性，因此通常需要使用較高的劑量才能在前列腺組織中達(dá)到治療 效果所需的濃度。然而，大劑量使用藥物往往伴隨則一些毒副作用，對于患者產(chǎn)生了不利影 響。因此，對于前列腺疾病的治療尚難以令人滿意。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)針對前列腺疾病的更有效的、針對性更強(qiáng)的藥物和治 療手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種針對前列腺疾病的更有效的、針對性更強(qiáng)的藥物和治
療方案。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種式I所示的靶向性治療分子，T-A (I)式中，T為針對前列腺細(xì)胞的靶向性部分(moiety)；A是對于前列腺疾病有治療活性的化合物；并且T和A通過化學(xué)鍵或共價鍵結(jié)合。在另一類優(yōu)選例中，所述的T為抗前列腺特異性抗原(PSA)的抗體或其具有靶向 性的抗體片段。
在另一類優(yōu)選例中，所述的抗PSA的抗體為單克隆抗體。在另一類優(yōu)選例中，所述的A為治療前列腺癌、前列腺增生或前列腺炎的化合物。在另一類優(yōu)選例中，所述的A為治療前列腺癌的化合物。在另一類優(yōu)選例中，所述的靶向性治療分子的治療活性保留率> 50%，其中治療 活性保留率按下式計算
治療活性保留率=趟示的靶向性治謝_臓xl00%。
‘化合物A的治療活性在另一類優(yōu)選例中，所述的靶向性治療分子的治療活性保留率> 60%,^ 70%, 彡80%或彡90%。其中，所述的治療活性是在不考慮靶向因素情況下的同一種治療活性。例如，如果 化合物A的治療活性是抑制前列腺增生的活性，則靶向性治療分子的治療活性也是抑制前 列腺增生的活性。如果化合物A的治療活性是治療前列腺癌的活性，則靶向性治療分子的 治療活性也是治療前列腺癌的活性。在另一類優(yōu)選例中，所述的A為選自下組的治療前列腺癌的化合物愛普列特、非 那甾胺或它們的衍生物(如藥學(xué)上可接受的鹽和活性衍生物)。在另一類優(yōu)選例中，所述的T和A通過共價鍵結(jié)合。在另一類優(yōu)選例中，所述的T和A是通過DCC法形成偶聯(lián)的。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種藥物組合物，它含有藥學(xué)上可接受的載體和本 發(fā)明第一方面中所述的靶向性治療分子。在另一類優(yōu)選例中，所述的藥物組合物劑型是片劑、膠囊、粉末劑、顆粒劑、混懸 劑、或注射劑、口腔噴霧劑、滴丸、混懸劑。在另一類優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還含有致凋亡化療藥物。在另一類優(yōu)選例中，所述的致凋亡化療藥物是腫瘤壞死因子。在另一類優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還含有選自下組的治療劑TRAIL、TGF_i3、 IFN-α、血管他丁(Angiostatin)、內(nèi)皮他丁(Endostatin)、甘磷酰芥、血卟啉、石蒜堿內(nèi)銨 鹽、鴉膽子乳、足葉乙甙(即依托泊甙)、脫水衛(wèi)矛醇、阿霉素、三苯氧胺、5-氟尿嘧啶、去甲 斑螯素、雙呋喃氟尿嘧啶、葫蘆素、三尖杉酯堿、冬凌草乙素、馬藺子甲素、云芝糖肽、阿糖胞 苷、卡波鉬、紫杉醇、香菇多糖、氟他胺、異環(huán)磷酰胺、烏苯美司、醋酸亮丙瑞林、脫氧氟尿苷、 洛波鉬、依林諾特肯、來屈唑或替尼泊甙。在本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明第一方面中所述的靶向性治療分子的用途， 它被用于制備治療前列腺疾病的藥物。較佳地，它用于制備治療前列腺癌、前列腺增生、或前列腺炎的藥物。在本發(fā)明的第四方面，提供了一種制備本發(fā)明第一方面中所述的靶向性治療分子 的方法，其特征在于，包括步驟(a)在偶聯(lián)劑存在下，將靶向性部分T與化合物A進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，從而形成式I所 示的靶向性治療分子T-A (I)其中，
T為針對前列腺細(xì)胞的靶向性部分(moiety)；A是對于前列腺疾病有治療活性的化合物，并且T和A通過化學(xué)鍵或共價鍵結(jié)合。在另一類優(yōu)選例中，所述的偶聯(lián)劑是羧基活化劑，并且在步驟(a)中包括(i)將 化合物A用活化試劑進(jìn)行活化，形成活化的化合物Α4Π (ii)將活化的化合物A與靶向性 部分T進(jìn)行偶聯(lián)，從而形成式I所示的靶向性治療分子。在另一類優(yōu)選例中，在步驟(ii)中，還包括添加N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)共同 參與活化的化合物A與靶向性部分T的偶聯(lián)反應(yīng)。 在另一類優(yōu)選例中，所述的偶聯(lián)劑選自下組1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二 亞胺鹽酸鹽(EDC)、溴化氰、和高碘酸鈉。在另一類優(yōu)選例中，靶向性部分T與化合物A的摩爾比為1 5-1 500;較佳地 為 1 10-1 200 ；更佳地為 1 10-1 100。在另一類優(yōu)選例中，偶聯(lián)反應(yīng)在0-40°C，更佳地4-35°C下進(jìn)行。在另一類優(yōu)選例中，偶聯(lián)反應(yīng)在pH 3. 0-7. 0，更佳地pH4. 0-6. 0下進(jìn)行。應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實施例)中具 體描述的各技術(shù)特征可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。例如，就靶向性部 分T與化合物A的摩爾比而言，范圍1 5-1 500的上限1 500可以與另一優(yōu)選范圍 1 10-1 200的下限1 10進(jìn)行組合，從而構(gòu)成范圍1 10-1 500。限于篇幅，在此 不再--累述。
具體實施例方式本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，首次意外地發(fā)現(xiàn)，將治療前列腺疾病的小分子 化合物與抗PSA的抗體通過化學(xué)偶聯(lián)所形成的偶聯(lián)物，不僅結(jié)合牢固并保留了 PSA抗體的 靶向性，而且基本上保留了小分子化合物全部活性。因此，與原先單獨的小分子化合物(如 愛普列特和非那留胺)相比，藥物使用劑量大大降低(在抑制前列腺增生時劑量下降約 1000倍左右)，從而降低了藥物使用過程中產(chǎn)生的毒副作用。更出乎意料的是，在原本無治 療前列腺癌效果的愛普列特和非那留胺的臨床劑量范圍內(nèi)，本發(fā)明的相應(yīng)偶聯(lián)物表現(xiàn)出顯 著的抑制前列腺癌細(xì)胞生長的效力。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。活性成分如本文所用，術(shù)語“本發(fā)明的小分子化合物”或“治療前列腺疾病的小分子化合物” 可互換使用，都指對于前列腺疾病有治療活性的化學(xué)合成的化合物(compound)。代表性的 小分子化合物包括但并不限于愛普列特和非那甾胺。1)愛普列特。其他名稱17b-(N-叔丁基氨基甲?；?雄留-3，5_ 二烯-3-羧酸；依立雄胺；愛 普列特UV;(17B)-17-[[(1，1-二甲基乙基)氨基]羧基]雄甾-3，5-二烯-3-羧酸；依普甾胺。愛普列特通過抑制人體內(nèi)5 α-還原酶的活性，抑制睪丸酮還原為雙氫睪丸酮，從 而降低雙氫睪丸酮的濃度，起到治療前列腺良性增生癥的作用。其分子式=C25H37NO3
其化學(xué)結(jié)構(gòu)式 2)非那甾胺其他名稱N-叔丁基-3-氧代-4-氮雜-5 α -雄甾烯-17 β -甲酰胺，非那雄 胺其分子式=C23H36N2O2其化學(xué)結(jié)構(gòu)式 本發(fā)明的小分子化合物是可從商業(yè)途徑購買到，也可常規(guī)的有機(jī)合成方法制備獲得。如本文所用，本發(fā)明的小分子化合物還包括所述小分子的由藥學(xué)上或生理學(xué)可接 受的酸或堿衍生的鹽。這些鹽包括(但不限于)與如下無機(jī)酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝 酸、磷酸，以及與有機(jī)酸形成的鹽，而有機(jī)酸則指乙酸、草酸、丁二酸和馬來酸。其他鹽包括 與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以及以酯、氨基甲酸酯或其他常規(guī)的 “前體藥物”的形式(當(dāng)以這種形式給藥時，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成活性部分)。PSA 抗體前列腺特異性抗原(Prostate Specific Antigen, PSA)是一個被證明的標(biāo)志物， 大量存在于前列腺中，血清中也有少量，PSA有不同的分子形式，F(xiàn)REE-PSA以游離的形式循 環(huán)于血液中。測定血清中不同分子形式的PSA對于區(qū)別前列腺癌和前列腺增生有重要意 義。前列腺癌患者血清中Free PSA/TotalPSA比值明顯較前列腺增生患者低，當(dāng)PSA值為 4 15ng/ml時，應(yīng)用游離PSA/總PSA比值來區(qū)別癌和增生。PSA抗體能夠?qū)Ｒ坏刈R別PSA，尤其是抗PSA的單克隆抗體，具有靈敏度高，專一性 強(qiáng)的特點，可以被用作靶向性藥物的載體，專門運(yùn)載針對前列腺增生和前列腺癌的藥物。除了抗前列腺特異性抗原PSA的完整抗體之外，抗體的具有靶向性的抗體片段也 可用于本發(fā)明。
可用于本發(fā)明的PSA抗體可從商業(yè)途徑購買到，也可常規(guī)的單克隆技術(shù)制備獲得。小分子化合物-PSA抗體的偶聯(lián)物及其制法本發(fā)明提供了小分子化合物-PSA抗體的偶聯(lián)物及其制法。本發(fā)明的偶聯(lián)物可用式I表示T-A (I)式中，T為針對前列腺細(xì)胞的靶向性部分(moiety)；A是對于前列腺疾病有治療活性的化合物；并且T和A通過化學(xué)鍵或共價鍵結(jié)合。如本文所用，術(shù)語“本發(fā)明的偶聯(lián)物”和“小分子化合物-PSA抗體的偶聯(lián)物”可互 換使用，都指將本發(fā)明的小分子化合物與靶向性部分(優(yōu)選PSA單克隆抗體)通過DCC法 等進(jìn)行偶聯(lián)，所形成的小分子化合物-PSA抗體的偶聯(lián)物。應(yīng)理解，在本發(fā)明的偶聯(lián)物中，一個PSA抗體上可以共價結(jié)合有一個或多個小分 子化合物。本發(fā)明的方法包括將現(xiàn)有的治療前列腺疾病小分子化合物與PSA抗體經(jīng)化學(xué)共 價偶聯(lián)(優(yōu)選通過DCC法)，從而產(chǎn)生穩(wěn)定的共價偶聯(lián)物。以愛普列特和非那甾胺兩種藥物為例，分別與PSA單克隆抗體偶聯(lián)后，得到兩類 偶聯(lián)物愛普列特-PSA抗體(簡稱E_PSA)非那留胺-PSA抗體(簡稱F_PSA)對本發(fā)明的偶聯(lián)物進(jìn)行動物試驗表明，其具有極其優(yōu)異的藥物效果。與原先單獨 的愛普列特和非那留胺相比，藥物使用劑量大大降低(在抑制前列腺增生時，用藥劑量可 下降約1000倍左右)，從而降低了藥物使用過程中產(chǎn)生的副作用。另外，采用本發(fā)明提供的新偶聯(lián)物，可以用作治療前列腺癌的臨床應(yīng)用。原先單獨 使用愛普列特和非那留胺在臨床可接受的劑量范圍無法觀測到抗癌效果，而加大使用劑量 造成嚴(yán)重的副作用而無法實施。而本發(fā)明偶聯(lián)物在愛普列特和非那留胺的臨床可接受的劑 量范圍內(nèi)可以觀察到對前列腺癌的治療效果。藥物組合物本發(fā)明還包括含有小分子化合物-PSA抗體的偶聯(lián)物的藥物組合物。本發(fā)明的小 分子化合物-PSA抗體的偶聯(lián)物及其藥物組合物可用于治療前列腺簡便(尤其是前列腺增 生和前列腺癌)，即給哺乳動物施用安全有效量的本發(fā)明偶聯(lián)物。本發(fā)明的偶聯(lián)物可單獨直接用于疾病治療，還可與其他治療劑聯(lián)用，如TNF-α、 TRAIL、TGF-β、IFN-α、血管他丁(Angiostatin)、內(nèi)皮他丁(Endostatin)、甘磷酰芥、血 卟啉、石蒜堿內(nèi)銨鹽、鴉膽子乳、足葉乙甙(即依托泊甙)、脫水衛(wèi)矛醇、阿霉素、三苯氧胺、 5-氟尿嘧啶、去甲斑螯素、雙呋喃氟尿嘧啶、葫蘆素、三尖杉酯堿、冬凌草乙素、馬藺子甲素、 云芝糖肽、阿糖胞苷、卡波鉬、紫杉醇、香菇多糖、氟他胺、異環(huán)磷酰胺、烏苯美司、醋酸亮丙 瑞林、脫氧氟尿苷、洛波鉬、依林諾特肯、來屈唑和替尼泊甙等。此外，還可與抗腫瘤的中藥 (或其制劑)合用。
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一種優(yōu)選的藥物組合物還含有致凋亡化療藥物，尤其是腫瘤壞死因子如人腫瘤壞 死因子α等。當(dāng)本發(fā)明的偶聯(lián)物用于治療前列腺癌時，它可與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體 或賦形劑混合，如溶劑、稀釋劑等，從而形成藥物組合物。液態(tài)載體包括無菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花 生油和芝麻油)，而固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸氫鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，只要 適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有 利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素Ε、維生素C、2，6-二叔丁基對 甲酚(BHT)和叔丁基羥基茴香醚(BHA)。通常，本發(fā)明的藥物組合物包括以下劑型如下口服給藥片劑、膠囊、可分散的 粉末、顆?；驊腋∫?混懸劑)(含有如約0. 05-5%懸浮劑(助溶劑))、糖漿(含有如約 10-50%糖)、和酏劑(含有約20-50%乙醇)，或者以無菌可注射溶液或混懸劑形式(在等 滲介質(zhì)中含有約0. 05-5%助溶劑)進(jìn)行非腸胃給藥。這些藥物制劑通?？珊信c載體混合 的約0. 5-99. 5wt%，較佳地2. 5-90wt%，更佳地5%-60wt% (重量)的本發(fā)明偶聯(lián)物，按 組合物的總重量計。在制備藥物組合物時，通常，可將這些本發(fā)明的化合物配制于無毒的、惰性的和藥 學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中PH通常約為5-8，較佳地pH約為6-8，盡管pH值可隨 被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括(但并不限于)瘤 內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、口服或局部給藥。優(yōu)選靜脈給藥方式。適應(yīng)于注射的藥物形式包括無菌水溶液或分散液和無菌粉(用于臨時制備無菌 注射溶液或分散液)。在所有情況中，這些形式必須是無菌的且必須是流體以易于注射器 排出流體。在制造和儲存條件下必須是穩(wěn)定的，且必須能防止微生物(如細(xì)菌和真菌)的 污染影響。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二 醇)、它們的適當(dāng)混合物和植物油。所用的活性成分的有效劑量可隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。 然而，通常當(dāng)本發(fā)明化合物每天以約0. 005-500mg/kg動物體重(較佳地0. 01-100mg/kg體 重，更佳地0. 05-5mg/kg體重給藥)的劑量給予時，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以 1-4次的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為 0. I-IOOOmg或更高，較佳地0. 5-500mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上 可接受的載體混合的約0. 5-500mg的活性化合物。可調(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng) 答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的藥物組合物是液態(tài)組合物。本發(fā)明的主要優(yōu)點包括(a)本發(fā)明偶聯(lián)物不僅結(jié)合牢固并保留了 PSA抗體的靶向性，而且基本上保留了 小分子化合物全部活性。(b)與原先單獨的小分子化合物(如愛普列特和非那甾胺)相比，藥物使用劑量大 大降低(在抑制前列腺增生時劑量下降約1000倍左右)，從而降低了藥物使用過程中產(chǎn)生 的副作用。
(c)在原本無治療前列腺癌效果的愛普列特和非那甾胺的臨床劑量范圍內(nèi)，本發(fā) 明的相應(yīng)偶聯(lián)物表現(xiàn)出顯著的抑制前列腺癌細(xì)胞生長的效力。(d)本發(fā)明偶聯(lián)物的毒副作用小。下面結(jié)合具體實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條 件如 Sambrook 等人，分子克隆實驗室手冊(New York Co Id Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實施例1DCC法制備愛普列特-PSA抗體(方法一)采用EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)是一種可溶于水的碳 二亞胺，在酰胺合成中用作羧基的活化試劑。愛普列特與EDC之比為IM 1.2-1. SM0活化 反應(yīng)的PH范圍為4. 0-6. O。活化反應(yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體(該抗體為小鼠單抗)，PSA抗 體加入的量與愛普列特之比為IM IO-IOOM0采用DEAE離子交換柱進(jìn)行色譜分離，即將 E-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖液中，緩沖液使用IOOmM Tris, pH8. 6，去除小分子化合物，得到純 化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例2DCC法制備愛普列特-PSA抗體(方法二 )采用EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)是一種可溶于水的碳 二亞胺，在酰胺合成中用作羧基的活化試劑。愛普列特與EDC之比為IM 1.2-1. SM0活 化反應(yīng)的PH范圍為4. 0-6. 0。活化反應(yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體，PSA抗體加入的量與愛普列 特之比為IM 10-100M，同時加入少量N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，共同完成偶聯(lián)反應(yīng)。采 用DEAE離子交換柱進(jìn)行色譜分離，即將E-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖液中，緩沖液使用IOOmM Tris, pH8. 6，去除小分子化合物，得到純化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例3DCC法制備愛普列特-PSA抗體(方法三)愛普列特加入溴化氰活化(與溴化氰的重量比例為1 0. 5)，再加入己二酰胼處 理，衍化率為1_3%?；罨磻?yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體和碳二亞胺(19. 17mg/ml), PSA抗體 加入的量與愛普列特之比為IM 10-100M，同時加入少量N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，共同 完成偶聯(lián)反應(yīng)。采用DEAE離子交換柱進(jìn)行色譜分離，即將E-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖液中， 緩沖液使用IOOmM Tris，pH8.6，去除小分子化合物，得到純化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例4DCC法制備愛普列特-PSA抗體(方法四)愛普列特加入高碘酸鈉氧化(愛普列特與高碘酸鈉之比為IM 1. 2-1. 8M)?；罨?反應(yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體和硼氰氫化鈉(愛普列特與硼氰氫化鈉之比為IM 1.2-1.8M)， PSA抗體加入的量與愛普列特之比為IM 10-100M反應(yīng)得到E-PSA結(jié)合物。采用100KD的 超濾器純化，以去除殘留的硼氰氫化鈉，得到初步純化的偶聯(lián)物。采用DEAE離子交換柱進(jìn) 行色譜分離，即將E-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖液中，緩沖液使用IOOmM Tris，pH8. 6，去除小分 子化合物，得到純化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例5
DCC法制備非那留胺-PSA抗體(方法一)采用EDC (1- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)是一種可溶于水的碳 二亞胺，在酰胺合成中用作羧基的活化試劑。非那留胺與EDC之比為IM 1.2-1. SM0活化 反應(yīng)的PH范圍為4. 0-6.0。活化反應(yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體，PSA抗體加入的量與非那甾胺 之比為IM 10-100M.采用DEAE離子交換柱進(jìn)行色譜分離，即將F-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖 液中，緩沖液使用IOOmM Tris, pH8. 6，去除小分子化合物，得到純化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例6DCC法制備非那留胺-PSA抗體(方法二)采用EDC (1- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)是一種可溶于水的碳 二亞胺，在酰胺合成中用作羧基的活化試劑。非那留胺與EDC之比為IM 1.2-1. SM0活化 反應(yīng)的PH范圍為4. 0-6.0?；罨磻?yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體，PSA抗體加入的量與非那甾胺 之比為IM 10-100M,同時加入少量(終濃度約為0. 02M)N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，共同 完成偶聯(lián)反應(yīng)。采用DEAE離子交換柱進(jìn)行色譜分離，即將F-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖液中， 緩沖液使用IOOmM Tris，pH8.6，去除小分子化合物，得到純化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例7DCC法制備非那留胺-PSA抗體(方法三)非那留胺加入溴化氰活化(與溴化氰的重量比例為(1 0. 5)，再加入己二酰胼處 理，衍化率為1_3%。活化反應(yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體和碳二亞胺(19. 17mg/ml), PSA抗體 加入的量與非那甾胺之比為IM 10-100M，同時加入少量N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，共同 完成偶聯(lián)反應(yīng)。采用DEAE離子交換柱進(jìn)行色譜分離，即將F-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖液中， 緩沖液使用IOOmM Tris，pH8.6，去除小分子化合物，得到純化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例8DCC法制備非那留胺-PSA抗體(方法四)非那留胺加入高碘酸鈉氧化(非那留胺與高碘酸鈉之比為IM 1. 2-1. 8M)?；罨?反應(yīng)結(jié)束后，加入PSA抗體和硼氰氫化鈉(非那留胺與硼氰氫化鈉之比為IM 1.2-1.8M)， PSA抗體加入的量與非那甾胺之比為IM 10-100M反應(yīng)得到F-PSA結(jié)合物。采用100KD的 超濾器純化，以去除殘留的硼氰氫化鈉，得到初步純化的偶聯(lián)物。采用DEAE離子交換柱進(jìn) 行色譜分離，即將F-PSA偶聯(lián)物懸浮于緩沖液中，緩沖液使用IOOmM Tris，pH8. 6，去除小分 子化合物，得到純化的偶聯(lián)物產(chǎn)品。實施例9不同偶聯(lián)方法的結(jié)果比較對于實施例1-8中所制備的偶聯(lián)物，通過常規(guī)方法測定其與等量游離藥物的活性 等同性(按照標(biāo)準(zhǔn)愛普列特，非那留胺活性測定方法測定)，結(jié)果列于下表。
偶聯(lián)物偶聯(lián)方法與等量游離藥物的活性等同性愛普列特-PSA抗體實施例165%
10 通過對比實驗，考證不同的方法，表明不同的偶聯(lián)方法對不同的藥物產(chǎn)生明顯不 同的結(jié)果。對于愛普列特-PSA抗體而言，實施例3和實施例2的方法都被證明可行有效，但 是實施例3中采用溴化氰活化的方法在將來生產(chǎn)過程中非常危險和難以操作，涉及高度危 險的生產(chǎn)防護(hù)。而采用實施例2的方法，簡單容易。對于非那留胺-PSA抗體而言，實施例8的方法被證明可行有效，這可能由于采用 溴化氰活化的方法對非那留胺結(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞，而采用高碘酸鈉氧化方法能夠提高效率。兩種藥物相比，在結(jié)構(gòu)上愛普列特末端羧酸提供了很好的活化位點，且不影響活 性，與抗體蛋白分子上的活化氨基形成較為牢固的共價偶聯(lián)。非那留胺也能提供了很好的化學(xué)活化位點，并可與抗體蛋白分子上的活化氨基形 成較為牢固的共價偶聯(lián)。實施例10愛普列特的PSA偶聯(lián)抗體和非那甾胺的PSA偶聯(lián)抗體的抗丙酸睪酮引起的大白鼠 前列腺增生試驗在本實施例中，SD雄性大白鼠經(jīng)去勢恢復(fù)后，以丙酸睪丸酮誘發(fā)前列腺增生，繼而 連續(xù)一個月靜脈注射1. 6和8. Oug/kg的愛普列特和非那留胺的PSA偶聯(lián)抗體，結(jié)果顯示與 丙睪組相比，24小時排尿量增加；前列腺體積、前列腺濕重及前列腺指數(shù)均縮小，腹部葉腺 上皮細(xì)胞高度降低，腺腔面積縮小。因此，愛普列特的PSA偶聯(lián)抗體和非那留胺的PSA偶聯(lián) 抗體都具有改善前列腺增生癥狀效果，同時，對于丙睪誘導(dǎo)的大鼠前列腺增生具有抑制作 用。一、激素與藥物1、苯甲酸雌二醇，上海第九制藥廠，批號20090401，橄欖油稀釋；2、丙酸睪酮，上海華聯(lián)制藥有限公司，批號010504，橄欖油溶解；3、非那甾胺，廣豐縣創(chuàng)新醫(yī)藥原料有限公司提供，英文名finasteride，化學(xué)名 N-叔丁基-3-氧代-4-氮雜-5 α -雄甾-1-烯-17 β -甲酰胺，分子式=C23H36N2O2，分子量 373，外觀白色或類白色結(jié)晶性粉末；
4、愛普列特，江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司提供，英文名=Epristeride,化學(xué)名 17B- (N-叔丁基-氨基-甲?；?雄甾-3，5-Z烯-3-羧酸，分子式=C25H37NO3,分子量 399. 57，外觀白色結(jié)晶性粉末；5、愛普列特-PSA偶聯(lián)抗體，簡稱E-PSA，實施例2制備，純度98. 1 % ；6、非那留胺-PSA偶聯(lián)抗體，簡稱F-PSA，實施例8制備，純度98. 3%。二、動物1、來源、種屬、合格證SD大鼠，$，100_120g，上海西普爾-必凱公司提供，合格證 號滬動合證字SCXK滬2003-0002號，飼養(yǎng)條件按普通級動物要求飼養(yǎng)，自由取水，室溫 25士2°C，相對濕度40-70%，光照明暗各12小時。經(jīng)一周適應(yīng)性。飼料購自中英合資上海 西普爾_必凱實驗動物有限公司；2、體重給藥時體重為170 士 20g左右；3、性另Ij 雄性；4、動物數(shù)54只，每組6只。三、劑量設(shè)置根據(jù)文獻(xiàn)資料，以5為劑距，設(shè)兩個供試品各1. 6和8. Oug/kg高和低兩個劑量組。四、給藥方法1、E-PSA或F-PSA =SD大鼠尾靜脈注射，1. 6和8. Oug/kg體重；(該用量是按偶聯(lián) 物的重量計算，大致合0. 16-0. Sug愛普列特或非那留胺/kg體重和0. 8-4ug愛普列特或非 那甾胺a/kg體重)2、苯甲酸雌二醇皮下注射，0. 05mg/kg ；3、丙酸睪酮皮下注射，0. 5mg/只；4、非那甾胺SD大鼠灌胃，1.0ml/100g體重。五、給藥時間連續(xù)給藥31天。六、實驗方法1、分組將去勢SD大鼠隨機(jī)分組，同時設(shè)置正常對照組共10組，見表1所示。表1、實驗動物分組及劑量設(shè)計
12 2、給藥及處理將SD大白鼠去勢后，觀察SD大鼠身體狀況，每周根據(jù)動物體重 變化。待大白鼠恢復(fù)后，根據(jù)其體重調(diào)整用藥量，按照表1中所示藥量及方案，每日上午 8 30-10 30給藥，丙酸睪酮及苯甲酸雌二醇每日皮下注射。連續(xù)給藥一個月，于末次給藥 前最后一天用代謝籠收集大鼠24小時尿液，測其尿量。末次給藥24小時后，將SD大鼠稱 重后處死，取血及前列腺組織，進(jìn)行檢驗分析，提取血清后保存于-80°C備用。前列腺測量 體積大小后，將前列腺組織分腹側(cè)葉和背側(cè)葉，稱取各葉濕重，再將各葉分成兩部分，一部 分稱取濕重后，將組織塊放置80°C烘箱中烘24小時后稱干重。另一部分前列腺組織經(jīng)中 性福爾馬林固定，組織切片，在顯微鏡下，利用顯微圖像分析軟件測量腺腔面積和腺上皮高 度，判斷結(jié)果。七、實驗觀察指標(biāo)1、尿量；2、前列腺體積；3、前列腺濕重；4、前列腺腺腔面積和腺上皮高度。八、數(shù)據(jù)處理方法數(shù)據(jù)用又士SD表示，以單因素方差分析法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。九、結(jié)果1、E-PSA和F-PSA對SD大鼠體重、尿量、前列腺重量及前列腺系數(shù)的影響給予
E-PSA和F-PSA后，SD大鼠體重與丙睪組相比，體重未見明顯異常(P > 0. 05) ；24小時排尿
量較丙睪組增加；與丙睪組相比，高劑量和低劑量組前列腺體積、前列腺濕重及前列腺指數(shù)均縮小(表2)。表2、藥物對SD大鼠體重、尿量、前列腺體積、前列腺濕重及前列腺系數(shù)的影響(η =6) 注*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0. 01 VS 丙睪組2、E-PSA和F-PSA對SD大鼠前列腺各葉上皮高度影響與丙睪組相比，E-PSA和F-PSA組腹側(cè)葉上皮高度均縮小(P < 0. 01)(表3)。3、E-PSA和F-PSA對SD大鼠前列腺各葉腺腔面積影響與丙睪組相比，主要是腹側(cè)葉腺腔面積縮小(表3)。表3、藥物對SD大鼠前列腺各葉上皮高度和腺腔面積影響 注*P < 0. 05廣P < 0. 01 VS丙睪組上皮高度η = 40，腺腔面積η = 20.十、結(jié)論愛普列特和非那甾胺的PSA偶聯(lián)抗體在丙酸睪酮引起的大白鼠中，對前列腺增生 有抑制作用。另外，與原先單獨的愛普列特和非那留胺相比，藥物使用劑量大大降低(1000倍 左右)，從而降低了藥物使用過程中產(chǎn)生的副作用。本試驗中使用非那留胺為陽性對照藥 物。i^一、參考文獻(xiàn)中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥學(xué)、 藥理學(xué)、毒理學(xué))[M]北京人民衛(wèi)生出版社，1993. 101-103.實施例11愛普列特的PSA偶聯(lián)抗體和非那留胺的PSA偶聯(lián)抗體的抗裸鼠移植性前列腺癌藥 效學(xué)試驗在本實施例中，分別觀察愛普列特的PSA偶聯(lián)抗體和非那留胺的PSA偶聯(lián)抗體對 裸鼠移植性前列腺癌的治療效果。方法如下(1)取BABL/C裸鼠20只，雄性，17 23g。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，套管 針皮下接種把大小相近的組織塊接種入這20個裸鼠右側(cè)背部靠腋下部。每天觀察腫瘤大 小，用游標(biāo)卡尺測量腫瘤長徑短徑，計算腫瘤體積，直至大部分裸鼠腫瘤體積范圍為100 300mm3，剔除此范圍之外的裸鼠，結(jié)果18只裸鼠在此范圍之內(nèi)。隨機(jī)分成6組，分別灌胃給 藥，給藥體積為0. 2ml/20g，每天1次，連續(xù)25天。觀察供試品對裸鼠移植性前列腺癌的治 療效果。結(jié)果陽性對照(比卡魯胺)組可減輕瘤重，抑制腫瘤進(jìn)展，與陰性對照組對比差 異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 01)，抑瘤率為83. 45% ；E-PSA高低兩劑量組亦可減輕瘤 重，抑制腫瘤進(jìn)展，與陰性對照組對比差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0. 01)，抑瘤率分別為61. 38%和31. 03%，認(rèn)為對前列腺癌有抑制作用。F-PSA高低兩劑量組亦可減輕瘤重， 抑制腫瘤進(jìn)展，與陰性對照組對比差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P < 0.01)，抑瘤率分別為 68. 97%和59. 31%，認(rèn)為對前列腺癌有抑制作用。一、動物1、動物來源、種屬、品系BABL/C裸鼠由中科院上海實驗動物中心提供。通過實驗 動物檢測所檢疫選用符合國家實驗動物；合格證SCXK滬2003-0002 (上海市醫(yī)學(xué)實驗動物 管委會頒發(fā))；2、周齡6 8周齡；3、體重17 23g;4、性別雄;5、動物數(shù)18只。二、飼養(yǎng)條件1、飼料飼料由中英合資上海西普爾_必凱試驗動物有限公司提供；2、飼養(yǎng)條件在SPF級動物房層流架中飼養(yǎng)。每天上、下午各喂食一次，用高壓滅 菌的標(biāo)準(zhǔn)飼料和水供動物自由食用。動物房通風(fēng)良好，室溫25 士 2°C，相對濕度40-70 %，光 照12小時，黑暗12小時；3、飼養(yǎng)環(huán)境BABL/C裸鼠飼養(yǎng)于318X 202X 135mm3塑料籠內(nèi)，每籠飼養(yǎng)同性小鼠 3只，用高壓滅菌的標(biāo)準(zhǔn)飼料和水供動物自由食用。三、陽性對照藥1、名稱比卡魯胺；2、性狀白色，粉末狀；3、提供單位上海希地醫(yī)藥科技有限公司；4、批號=20051201 ；5、含量99. 4%;6、溶媒0. 5 % 的 CMC-Na。四、受試物1、愛普列特-PSA偶聯(lián)抗體，簡稱E-PSA，實施例2制備，純度98. 1 % ；2、非那留胺-PSA偶聯(lián)抗體，簡稱F-PSA，實施例8制備，純度98. 3%。五、試驗方法1、裸鼠皮下移植瘤模型的建立[1]取裸鼠32只，雄性，17 23g。取腫瘤生長旺 盛且無破潰，健康情況良好的荷瘤鼠3只，右側(cè)均長了由22Rvl前列腺癌細(xì)胞所致的皮下 腫瘤，脫白處死，固定于手術(shù)板上，用酒精消毒動物皮膚，無菌條件下剝腫瘤，所用器械均 經(jīng)高壓消毒。剔除壞死部分，選取表皮邊緣長勢良好形如魚肉狀的腫瘤，放入盛有加入了 抗生素的生理鹽水的培養(yǎng)皿中，仔細(xì)沖洗，用眼科剪小心分離腫瘤組織至大小均一，大概 ImmXlmmXlmm的小塊，剪去壞死和血管，把邊緣修剪光滑，再反復(fù)用生理鹽水沖洗。用20 號套管針小心吸入腫瘤塊，接入這18個裸鼠右側(cè)靠腋窩處。保證接入裸鼠的同一位置，避 免觸及血管，套管針在皮下的滑行距離盡可能長，酒精消毒接種部位的皮膚。2、觀察和測量腫瘤生長情況每天觀察裸鼠腫瘤生長情況，每隔3天稱裸鼠體重， 并用游標(biāo)卡尺測量裸鼠腫瘤的最長徑和最短徑，按照公式V = O. 5ab2計算腫瘤體積，式中V為腫瘤體積，a為通過腫瘤中心量取的最長徑，b為通過腫瘤中心量取的最短徑。直至大部 分裸鼠腫瘤體積范圍為100 300mm3，剔除此范圍之外的裸鼠2只，結(jié)果30只裸鼠在此范 圍之內(nèi)。用SAS程序生成隨機(jī)數(shù)據(jù)表，隨機(jī)分成10組。3、觀察供試品對裸鼠移植性前列腺癌的防治作用根據(jù)預(yù)實驗的結(jié)果，每個供試 品各設(shè)計高劑量低劑量2個劑量，分別為10mg/Kg和0. 5mg/Kg。陽性藥比卡魯胺的濃度根 據(jù)文獻(xiàn)[2]配置成25mg/Kg，詳細(xì)情況見表4。按照表4的分組給予相應(yīng)藥物，根據(jù)每20mg裸 鼠給予0.2ml的藥物給藥。每天早晨9點灌胃。灌胃后密切觀察裸鼠一般狀態(tài)。每三天稱 裸鼠體重[3]，用游標(biāo)卡尺測量裸鼠長短徑，計算腫瘤體積。直至大部分裸鼠腫瘤出現(xiàn)壞死時 結(jié)束實驗。停藥24小時后處死所有裸鼠，稱量裸鼠體重，把它們排列整齊拍照。取出皮下 腫瘤，小心分離皮膚，直至腫瘤完整剝離，測量腫瘤長短徑，稱腫瘤體重，放在濾紙上排列整 齊，拍照。4、療效評價[1]停藥24小時后處死所有裸鼠，稱量裸鼠體重，解剖剝離瘤塊，稱瘤 重。如果對照組裸鼠腫瘤平均重量小于1克，或20%裸鼠腫瘤重量小于400mg，則表示腫瘤 生長不良，試驗作廢。本試驗結(jié)果所有裸鼠腫瘤均大于1克，試驗有效。療效評價公式腫瘤抑制率=(C-T)/0100%式中T為給藥組平均瘤重；C為對照組平均瘤重。老版本的指導(dǎo)原則認(rèn)為，抑制率> 30%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P < 0. 05) 且經(jīng)2次重復(fù)實驗證明后，則評定該藥對腫瘤有一定療效。然而，最近學(xué)術(shù)界有趨向認(rèn)為抑制率要> 60%才算有效，目前還沒有定論，本試驗 采用的標(biāo)準(zhǔn)為抑制率> 50%且經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異算有效。表4、抗裸鼠前列腺癌藥效學(xué)模型中受試物劑量組設(shè)置 六、結(jié)果各給藥組間裸鼠體重、生存天數(shù)、瘤重和抑制率結(jié)果(叉土 SD)表5、裸鼠體重、生存天數(shù)、瘤重和抑制率結(jié)果 注與陰性對照組相比*P < 0. 05< 0.01根據(jù)表5中數(shù)據(jù)顯示陽性對照(比卡魯胺)組可減輕瘤重，抑制腫瘤進(jìn)展，與 陰性對照組對比差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.01)，抑瘤率為83.45% ；E-PSA高低 兩劑量組亦可減輕瘤重，抑制腫瘤進(jìn)展，與陰性對照組對比差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P
<0. 01)，抑瘤率分別為61. 38%和31. 03%，認(rèn)為對前列腺癌有抑制作用。F-PSA高低兩 劑量組亦可減輕瘤重，抑制腫瘤進(jìn)展，與陰性對照組對比差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P
<0. 01)，抑瘤率分別為68. 97%和59. 31 %，認(rèn)為對前列腺癌有抑制作用。七、結(jié)論愛普列特的PSA偶聯(lián)抗體和非那留胺的PSA偶聯(lián)抗體高劑量組對前列腺癌抑制作 用明顯，抑瘤率> 50%，而低劑量組抑瘤率< 50%，兩者與陰性藥對比差異均有顯著的統(tǒng) 計學(xué)意義(P <0.01)。八、參考文獻(xiàn)1、中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.新藥(西藥)臨床前研究指導(dǎo)原則匯編(藥學(xué)、 藥理學(xué)、毒理學(xué)).北京人民衛(wèi)生出版社，1993. 88 90.2> B. J. A. Furr, Ph. D. , and H. Tucker, Ph. D. The preclinical development of bicalutamide pharmacodynamics and mechanism of action. UROLOGY 47(Supplement ΙΑ), January 1996 13-263、張均田主編，現(xiàn)代藥理實驗方法[下冊].北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合 出版社，1991. 2281實施例12愛普列特和非那甾胺的PSA偶聯(lián)抗體急性毒性試驗一、實驗?zāi)康挠^察受試物一次靜脈注射后對小鼠產(chǎn)生的急性毒性反應(yīng)和死亡情況。二、受試藥物1、愛普列特-PSA偶聯(lián)抗體，簡稱E-PSA，實施例2制備，純度98. 1 % ；2、非那留胺-PSA偶聯(lián)抗體，簡稱F-PSA，實施例8制備，純度98. 3%。三、動物1、來源、種屬、合格證昆明種小鼠40只，雌雄各半，由上海醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，合格證號醫(yī)動字第02-22-1號。經(jīng)一周適應(yīng)性。飼料購自中英合資上海西普爾-必凱 實驗動物有限公司。自由飲水，飼養(yǎng)溫度22士 1°C ；相對濕度60士5% ；2、體重給藥時體重為18_20g ；3、性別雌雄各半；4、動物數(shù)按體重隨機(jī)分2組，20只/組。四、劑量1、參照預(yù)試結(jié)果，最高劑量定為2. Og/kg ；2、每只動物接受容量注射體積約為0. 25ml/10g。五、給藥方式小鼠單次尾靜脈注射，緩慢推注約15秒。六、實驗方法動物按體重隨機(jī)分為2組，每組20只，雌雄各半。單次尾靜脈注射給予供試品注 射液，緩慢推注約15秒，給藥后即觀察動物各方面反應(yīng)情況，死亡動物即進(jìn)行解剖，檢查內(nèi) 臟。記錄每天動物的死亡數(shù)。七、觀察指標(biāo)1、觀察期連續(xù)觀察14天；2、毒性反應(yīng)觀察檢查小鼠外觀、行為、進(jìn)食、糞便等情況，死亡動物進(jìn)行尸檢。第 15天實驗結(jié)束時，存活小鼠解剖，檢查心、肺、肝、脾、腎等臟器病變。八、結(jié)果1、毒性反應(yīng)及死亡情況小鼠在靜脈注射供試品注射液后，小鼠給藥后無明顯反 應(yīng)，第15天全部解剖，肉眼檢查未見明顯病變；2、最大耐受量小鼠在靜脈注射供試品注射液后，最大耐受量MTD = 2. Og/kg。九、結(jié)論昆明種小鼠靜脈注射供愛普列特的PSA偶聯(lián)抗體和非那甾胺的PSA偶聯(lián)抗體的最 大耐受量(MTD)分別都為2. Og/kg。討論近年來，靶向性藥物的開發(fā)成為了研究的熱點。靶向性藥物因其靶向性可以使得 藥物在病灶或其附近富集，從而在總用藥量減少的情況下，也能顯著提高病灶處藥物的有 效濃度，從而取得更為有效的治療效果。目前，已經(jīng)開發(fā)出了針對肝臟組織的靶向性藥物。 然而，對于靶向性藥物的制備中，在將小分子化合物與靶向性部分(通常為針對某一特定 組織的抗體或配體)時，并沒有非常通用而有效的方法。必須針對不同的化合物而選用不 同的連接方案。此外，基于連接方法、靶向性分子的空間結(jié)構(gòu)等諸多因素，制備的靶向性分 子常常會產(chǎn)生以下問題(1)小分子化合物與靶向性部分的結(jié)合不夠牢固；(2)因空間位阻 等多種因素，靶向性分子僅保留了小分子化合物的少量活性。本發(fā)明的試驗結(jié)果表明，將對于前列腺疾病有治療活性的小分子化合物(如愛普 列特和非那留胺)和對前列腺細(xì)胞的有靶向性的PSA抗體通過DCC化學(xué)偶聯(lián)法，可以形成 結(jié)合牢固的偶聯(lián)物。該偶聯(lián)物不僅保留了原PSA抗體的靶向性，而且基本上保留了小分子 化合物全部活性。與原先單獨的愛普列特和非那留胺相比，藥物使用劑量大大降低(1000 倍左右)，從而降低了藥物使用過程中產(chǎn)生的副作用。
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在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨 引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
一種式I所示的靶向性治療分子，T A(I)式中，T為針對前列腺細(xì)胞的靶向性部分；A是對于前列腺疾病有治療活性的化合物；并且T和A通過化學(xué)鍵或共價鍵結(jié)合。
2.如權(quán)利要求1所述的靶向性治療分子，其特征在于，所述的T為抗前列腺特異性抗原 (PSA)的抗體或其具有靶向性的抗體片段。
3.如權(quán)利要求2所述的靶向性治療分子，其特征在于，所述的抗PSA的抗體為單克隆抗體。
4.如權(quán)利要求1所述的靶向性治療分子，其特征在于，所述的A為治療前列腺癌、前列 腺增生或前列腺炎的化合物。
5.如權(quán)利要求1所述的靶向性治療分子，其特征在于，所述的靶向性治療分子的治療 活性保留率> 50%，其中治療活性保留率按下式計算治療活性保留率=式1所示的靶向性治療細(xì)治療活性X100O/O 。 _化合物A的治療活性
6.如權(quán)利要求5所述的靶向性治療分子，其特征在于，所述的A為選自下組的治療前列 腺癌的化合物愛普列特、非那留胺或它們的衍生物。
7.如權(quán)利要求1所述的靶向性治療分子，其特征在于，所述的T和A通過共價鍵結(jié)合。
8.—種藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物含有藥學(xué)上可接受的載體和權(quán)利 要求1所述的靶向性治療分子。
9.如權(quán)利要求1所述的靶向性治療分子的用途，其特征在于，用于制備治療前列腺疾 病的藥物。
10.一種制備權(quán)利要求1所述的靶向性治療分子的方法，其特征在于，包括步驟(a)在偶聯(lián)劑存在下，將靶向性部分T與化合物A進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，從而形成式I所示的 靶向性治療分子 T-A (I) 其中，T為針對前列腺細(xì)胞的靶向性部分； A是對于前列腺疾病有治療活性的化合物， 并且T和A通過化學(xué)鍵或共價鍵結(jié)合。全文摘要
本發(fā)明提供了治療前列腺疾病的靶向藥物。具體地，本發(fā)明提供了一種結(jié)構(gòu)如“T-A”所示的靶向性治療分子，式中，T為針對前列腺細(xì)胞的靶向性部分(moiety)；A是對于前列腺疾病有治療活性的化合物；并且T和A通過化學(xué)鍵或共價鍵結(jié)合。本發(fā)明的靶向藥物不僅保留了原前列腺特異抗原(PSA)抗體的靶向性，而且基本上保留了小分子化合物全部活性。與原先單獨的愛普列特和非那甾胺相比，本發(fā)明的靶向藥物的使用劑量大大降低(1000倍左右)，從而降低了藥物使用過程中產(chǎn)生的毒副作用。
文檔編號A61K47/48GK101897979SQ200910052110
公開日2010年12月1日 申請日期2009年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月27日
發(fā)明者孫祖越, 黃文華 申請人:上海市計劃生育科學(xué)研究所;上海國源生物技術(shù)有限公司