專利名稱：：一種雙黃連液體制劑及其含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種雙黃連液體制劑及其含量測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：雙黃連液體制劑為金銀花、連翹和黃茶經(jīng)提取精制而得，主要含有黃芩苷、連翹苷、綠原酸、木犀草苷、漢黃芩素等?，F(xiàn)代藥理研究證明，雙黃連液體制劑具有抗菌、抗病毒、解熱等作用，可以清熱解毒，清宣風(fēng)熱，適用于外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛等病癥。臨床上被廣泛用于治療病毒及細(xì)菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎、咽炎等。然而，隨著雙黃連液體制劑在臨床上的廣泛應(yīng)用，其不良反應(yīng)的報(bào)道也屢見不鮮。雙黃連液體制劑的不良反應(yīng)主要表現(xiàn)在過敏性休克、皮膚潮紅、皮滲等。因此，需要研究解決雙黃連液體制劑在使用過程中引起的過敏問題，從而確定更加安全的雙黃連液體制劑的配方。另外，為了保證雙黃連液體制劑的質(zhì)量，還需要提供更加高效的有效成分含量檢測(cè)方法。目前廣泛使用的方法是《中國藥典》2005年版一部記載的方法。該方法采用高效液相色譜法分別測(cè)定綠原酸、連翹苷和黃茶苷含量，且在每一種成分的測(cè)定中，使用不同的色譜條件。例如，在檢測(cè)黃茶苷時(shí)，使用的流動(dòng)相是甲醇-水-冰醋酸(50:50:1);使用的檢測(cè)波長為274nm;并要求按黃芩苷峰計(jì)算，色譜柱的理論塔板數(shù)不低于1500。再如在檢測(cè)綠原酸時(shí)，使用的流動(dòng)相是甲醇-水-冰醋酸(20:80:1);使用的檢測(cè)波長為324nm;并要求按綠原酸峰計(jì)算，色譜柱的理論塔板數(shù)不低于6000。另外，在檢測(cè)連翹苷時(shí)，使用的流動(dòng)相是乙腈-水(25:75);使用的檢測(cè)波長為278nm;并要求按連翹苷峰計(jì)算，色譜柱的理論塔板數(shù)不低于6000。由此可見，現(xiàn)有技術(shù)中為了檢測(cè)綠原酸、連翹香和黃茶苷的含量，使用了3套不同的色譜條件，這顯然增加了檢測(cè)工作量，延長了檢測(cè)時(shí)間，增加了檢測(cè)成本。另外，現(xiàn)有技術(shù)中的檢測(cè)方法通常只檢測(cè)黃茶苷、連翹香和綠原酸的含量，而不檢測(cè)另外兩種有效成分木犀草苷和漢黃茶素的含量。
發(fā)明內(nèi)容在雙黃連液體制劑所含的有效成分中，綠原酸既是抗病毒、抗菌的有效成分，也是可疑的致敏原性物質(zhì)，進(jìn)入機(jī)體后可能會(huì)導(dǎo)致過敏反應(yīng)。另外，黃茶和連翹提取物中的皂苦成分在大劑量應(yīng)用的情況下，也易引起過敏反應(yīng)。為了盡量避免和減少雙黃連液體制劑引起的過敏反應(yīng)，需要控制其中的綠原酸、黃茶苷和連翹苷的含量。因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種有效成分配比更加合理的雙黃連液體制劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種可以同時(shí)檢測(cè)雙黃連液體制劑中多種有效成分含量的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案一種雙黃連液體制劑，其中含有連翹苷0.1-1.0mg/ml、黃茶苷6.0-12.0mg/ml、綠原酸0.4-1.Omg/ml。根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的雙黃連液體制劑中含有連翹苷0.1-0.8mg/ml、黃茶苷6.0-10.0mg/ml、綠原酸0.4-1.0mg/ml。該實(shí)施方案提供的雙黃連液體制劑為一種注射液。根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的雙黃連液體制劑中含有連翹苷0.3-1.0mg/ml、黃蒼香8.0-12.0mg/ml、綠原酸0.6-1.0mg/ml。該實(shí)施方案提供的雙黃連液體制劑為一種口服液。根據(jù)本發(fā)明的又一種優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明的雙黃連液體制劑中還含有木犀草苷0.005-0.05mg/ml、漢黃茶素0.05-0.2mg/ml。一種雙黃連液體制劑的含量測(cè)定方法，該方法使用高效液相色譜作為檢測(cè)系統(tǒng)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000，以乙腈-0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相，其中乙腈為流動(dòng)相A,0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相B，纟全測(cè)波長為270-290nm,其中包括柱平衡、上樣、洗脫等步驟，在洗脫步驟中，流動(dòng)相A的體積百分比逐漸遞增，先用體積百分比為27%的A相和73%的B相作為流動(dòng)相洗脫2-4個(gè)柱體積；然后用體積百分比為30%的A相和70%的B相作為流動(dòng)相洗脫1-3個(gè)柱體積；4妄著用體積百分比為60%的A相和40%的B相作為流動(dòng)相洗脫2-4個(gè)柱體積；再用體積百分比為90%的A相和10%的B相作為流動(dòng)相洗脫3-5個(gè)柱體積。本發(fā)明提供的雙黃連液體制劑含有適量的綠原酸、黃芩苷和連翹苷，不僅具有理想的治療效果，而且還同時(shí)降低了過敏反應(yīng)的發(fā)生。根據(jù)本發(fā)明的檢測(cè)方法，只需要使用一種流動(dòng)相，就可以同時(shí)檢測(cè)黃荅苷、連翹普、綠原酸、木犀草苷和漢黃芩素等五種有效成分的含量。該方法不僅顯著提高了檢測(cè)效率，而且還有效地降低了檢測(cè)成本。具體實(shí)施方式實(shí)施例11)金銀花提取物的制備稱取金4艮花，加水溫浸2-3次，過濾，濃縮，醇沉，過濾，濾液回收乙醇至無乙醇味，加入膏重2-6倍量的純化水，輕輕攪拌，靜置，取上清液過濾，濾液濃縮后再次進(jìn)行醇沉，靜置，取上清液過濾，濃縮，得金銀花提取物。采用高效液相色譜法檢測(cè)，測(cè)得提取物中含綠原酸15.22mg/g,木犀草苷0.38mg/g。2)連翹提取物的制備稱取連翹，加水煎煮3次，合并藥液，后續(xù)步驟同金銀花溫浸后步驟，得連翹提取物。采用高效液相色譜法檢測(cè)，測(cè)得提取物中含連翹苷4.05mg/g。3)黃茶提取物的制備取黃芩飲片，加水煎煮2次，每次2小時(shí)，過濾，合并濾液，調(diào)pH值，靜置，濾過，沉淀加水調(diào)pH值溶解，再加等量乙醇，攪拌，過濾，調(diào)pH值，濾過，沉淀用乙醇洗至中性，回收乙醇，離心，精制得黃茶提取物。采用高效液相色鐠法檢測(cè)，測(cè)得提取物中含黃芩苷72.16mg/g，含漢黃茶素1.07mg/g。實(shí)施例2用實(shí)施例1中得到的3種提取物配制如下配方注射液的配制(每支注射液的裝量為10ml)1)配方1:綠原酸0.4mg/ml，黃芩苷6.0mg/ml,連翹苷0.1mg/ml，漢黃茶素0.09mg/ml,木犀草苷0.01mg/ml。2)配方2:綠原酸1.0mg/ml,黃芩苷10.0mg/ml,連翹苷0.8mg/ml，漢黃茶素0.15mg/ml，木犀草苷0.024mg/ml。3)配方3:綠原酸1.5mg/ml，黃芩苷9.0mg/ml，連翹苷0.3mg/ml,漢黃芩素0.13mg/ml,木犀草苷0.04mg/ml。4)配方4:綠原酸2.0mg/ml，黃茶苷8.0mg/ml，連翹苷0.5mg/ml,漢黃茶素0.12mg/ml,木犀草苷0.05mg/ml?？诜旱呐渲?每支口服液的裝量為10ml)5)配方5:綠原酸0.6mg/ml,黃芩苷8.0mg/ml,連翹苷0.3mg/ml,漢黃芩素0.12mg/ml,木犀草苷0.015mg/ml。6)酉己方6:綠原酸1.0mg/ml，黃芩苷12.0mg/ml,連翹苷l.Omg/ml,漢黃芩素0.18mg/ml,木犀草苷0.024mg/ml。7)配方7:綠原酸1.5mg/ml,黃芩苷1l.Omg/ml,連翹苷0.5mg/ml,漢黃芩素0.16mg/ml，木犀草苷0.04mg/ml。8)配方8:綠原酸2.0mg/ml,黃芩苷9.0mg/ml,連翹苷0.8mg/ml,漢黃茶素0.13mg/ml,木犀草苷0.05mg/ml。實(shí)施例3雙黃連液體制劑對(duì)小鼠流感病毒感染的保護(hù)作用藥物本發(fā)明的雙黃連注射液(配方1,新雙黃連1):綠原酸0.4mg/ml,黃茶香6.0mg/ml，連翹苷O.lmg/ml,漢黃茶素0.09mg/ml,木犀草香0.01mg/ml。本發(fā)明的雙黃連口月l液(配方5,新雙黃連2):綠原酸0.6mg/ml,黃茶苷8.0mg/ml,連翹苷0.3mg/ml，漢黃芩素0.12mg/ml,木犀草苷0.015mg/ml。市售雙黃連注射液綠原酸1.3mg/ml,黃芩苷7.2mg/ml,連翹苷0.04mg/ml，漢黃蒼素0.02mg/ml,木犀草苷0.003mg/ml。。市售雙黃連口服液綠原酸l.lmg/ml,黃茶苷8.4mg/ml,連翹苷0.4mg/ml，漢黃茶素0.04mg/ml,木犀草苷0.002mg/ml。動(dòng)物ICR封閉群小鼠，體重(20±2)g,雌雄各半病毒林甲型流行性感冒病毒鼠肺適應(yīng)抹FMl方法1)病毒滴度測(cè)定將FM1接種于9-lld胚齡雞胚尿嚢腔，0.2ml/胚，35。C孵育72h,連續(xù)傳代2次，收獲雞胚尿嚢液。用血凝實(shí)驗(yàn)測(cè)定混合的尿嚢液中FM1的血凝效價(jià)?；旌夏驀耙翰《镜味葹?280Hp/ml。病毒液分裝，保存-80。C備用。2)病毒毒力(LD50)測(cè)定ICR小鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，雌雄各半。用Hank's液將FM1病毒液自原液濃度起做IO倍梯度稀釋，稀釋倍數(shù)分別為1、10、102、103、104，用乙醚對(duì)小鼠進(jìn)行淺麻醉。每一稀釋度病毒滴鼻感染一組小鼠，0.03ml/只，正常對(duì)照組用生理鹽水滴鼻，0.03ml/只。小鼠感染病毒后連續(xù)飼養(yǎng)觀察7d，逐日記錄小鼠死亡數(shù)及活動(dòng)情況。當(dāng)正常對(duì)照組小鼠無異常，全部存活時(shí)，按Bliss法計(jì)算FM1對(duì)ICR小鼠的LD50及其95%可信區(qū)間。3)小鼠病毒性肺炎造模采用10xLD50的病毒量滴鼻感染ICR小鼠。4)死亡保護(hù)率和生命延長率測(cè)定ICR小鼠40只，隨機(jī)分為4組兩組給藥組(新雙黃連1組、市售雙黃連注射液組)、肺炎沖莫型組和正常對(duì)照組，每組10只，雌雄各半。除正常對(duì)照組外，其他組小鼠淺麻醉狀態(tài)下滴鼻感染10xLD50FMl，0.03ml/只。兩組給藥組分別注射新的雙黃連液體制劑、市售雙黃連液體制劑0.2ml/20g,肺炎才莫型組和正常對(duì)照組小鼠注射0.2ml/20g生理鹽水。1次/d,連續(xù)給藥7d。逐日觀察記錄各組小鼠發(fā)病死亡數(shù)，統(tǒng)計(jì)各組小鼠存活時(shí)間，計(jì)算小鼠生命延長率和小鼠死亡保護(hù)率。生命延長率(％)=(實(shí)驗(yàn)組存活時(shí)間-模型組存活時(shí)間)/模型組存活時(shí)間><100%死亡保護(hù)率(％)=(才莫型組死亡率-實(shí)一驗(yàn)組死亡率)/模型組死亡率><100%5)肺指數(shù)測(cè)定小鼠造模、分組同上。灌胃給予新雙黃連2、市售雙黃連口服液或生理鹽水。給藥7d期間，立即稱量死亡小鼠的體重和肺臟重量。給藥7d后，斷頸處死仍然存活的小鼠，稱量體重和肺臟重量。計(jì)算肺指數(shù)和肺炎抑制率。肺指數(shù)=肺臟重量/體重x100%抑制率(％)=(模型組肺指數(shù)-實(shí)驗(yàn)組肺指數(shù))/模型組肺指數(shù)xlOO%6)病毒感染小鼠肺部組織中流感病毒含量的測(cè)定將上述實(shí)驗(yàn)小鼠的肺臟稱重，按每0.1g肺組織加lml的比例加入生理鹽水，在組織勻漿器中研磨制成勻漿液，1500rpm/10min離心，取上清液，用血凝實(shí),驗(yàn)測(cè)定流感病毒的滴度(血凝單位Hp/g)。結(jié)果1)雙黃連注射液對(duì)流感病毒性肺炎小鼠的保護(hù)作用流感病毒FM1給小鼠滴鼻后，連續(xù)觀察7d,FM1感染的肺炎小鼠死亡發(fā)生在感染后的第3-5天。模型組小鼠在第3、4、5天分別死亡4、4、2只，死亡率100%。兩組給藥組對(duì)流感病毒性肺炎小鼠的死亡保護(hù)率均為80%,新雙黃連1組的生命延長率為65.7%,市售雙黃連注射液組的生命延長率為66.2%,兩組間無顯著差異，但與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明兩組給藥組均能降低流感病毒性FM1肺炎小鼠的死亡率，延長存活時(shí)間，兩組給藥組對(duì)流感病毒的保護(hù)作用相當(dāng)。結(jié)果詳見表l。表1雙黃連注射液對(duì)流感病毒性肺炎小鼠的死亡保護(hù)作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2)雙黃連口服液對(duì)流感病毒性肺炎小鼠肺部流感病毒FM1滴度的影響模型組的肺指數(shù)是正常組的2.5倍，新雙黃連2組的肺指數(shù)是正常組的1.77倍，市售雙黃連口服液組的肺指lt是正常組的1.75倍，兩組給藥組與模型組比較P〈0.01;正常組小鼠的病毒滴度為0,模型組的病毒滴度為2011Hp/g,兩組給藥組的病毒滴度與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),但兩組間無顯著性差異。結(jié)果詳見表2。表2雙黃連口服液對(duì)流感病毒性肺炎小鼠肺部的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例4過每丈反應(yīng)試-驗(yàn)比較取實(shí)施例2中的配方1、2、5和6,按過每文反應(yīng)檢查法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果小鼠無明顯反應(yīng)，表明上述配方的雙黃連液體制劑不會(huì)致過敏反應(yīng)。而選擇配方3、4、7和8進(jìn)行試驗(yàn)，各組小鼠均有不同程度的過敏反應(yīng)，表現(xiàn)為輕微抓鼻、顫抖、豎毛等，表明綠原酸含量在1.Omg/ml以上的雙黃連液體制劑有產(chǎn)生過敏現(xiàn)象的可能。按現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)對(duì)新雙黃連液體制劑進(jìn)行檢驗(yàn)，各項(xiàng)均符合要求，另對(duì)其進(jìn)行異常毒性、降壓物質(zhì)、過敏反應(yīng)、樹脂、重金屬、有害元素和指紋圖譜檢查，也符合相關(guān)要求。實(shí)施例51)儀器與試藥儀器高效液相色譜儀Agilent1200,色譜柱AgilentZORBAXEclipseXDB-C184.6x150mm5p。對(duì)照品黃茶苷(批號(hào)110715-200514),連翹普(批號(hào)110821-200610),綠原酸(批號(hào):110753-200413),漢黃茶素(批號(hào)111514-200403),木犀草苷(批號(hào)111720-200503),上述對(duì)照品均購自中國藥品生物制品檢定所。沖羊品配方1、2、3試劑乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。2)色譜條件與洗脫程序色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相；4企測(cè)波長為278nm;流速為1.0ml/min;柱溫25。C;理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000。洗脫程序在洗脫步驟中，流動(dòng)相A的體積百分比逐漸遞增，先用體積百分比為27%的A相和73%的B相作為流動(dòng)相洗脫2-4個(gè)柱體積；然后用體積百分比為30%的A相和70%的B相作為流動(dòng)相洗脫1-3個(gè)柱體積；接著用體積百分比為60%的A相和40%的B相作為流動(dòng)相洗脫2-4個(gè)柱體積；再用體積百分比為90%的A相和10%的B相作為流動(dòng)相洗脫3-5個(gè)柱體積。3)供試品溶液的制備精密吸耳又雙黃連液體制劑l.Oml,置于50ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，0.45pm微孔濾膜過濾，即得。4)對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的綠原酸、黃芩苷、連翹苷、漢黃芩素和木犀草苦對(duì)照品適量，置10ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為20fig/ml、240|ig/ml、7pg/ml、1.6^g/ml和0.3|ng/ml的混合對(duì)照品溶液。5)線性關(guān)系考察分別精密吸取混合對(duì)照品溶液2|ul、5|il、10^1、15jxl、20|al，將其注入液相色譜儀，記錄色譜圖。分別以綠原酸、黃茶苷、連翹苷、漢黃芩素和木犀草苷進(jìn)樣量(ng)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見表3。表3綠原酸、黃茶苷、連翹苷、漢黃茶素和木犀草苷的<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>6)精密度試驗(yàn)精密吸取綠原酸、黃芩苷、連翹苷、漢黃芩素和木犀草苷混合對(duì)照品溶液注入液相色譜4義，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次20pl。綠原酸峰面積RSD=0.96%,黃蒼苷峰面積RSD=0.81%,連翹苷峰面積RSD=0.64%,漢黃茶素峰面積RSD=0.58Q/。，木犀草苷峰面積RSD=0.76%。結(jié)果表明，所選方法精密度良好。7)穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液，分別在O、2、4、6、8、10、12、24h進(jìn)樣，測(cè)定樣品中綠原酸、黃茶苷、連翹苷、漢黃茶素和木犀草苷的峰面積，結(jié)果綠原酸峰面積RSD=1.55%,黃茶苷峰面積RSD=1.96%，連翹苷峰面積RSD=1.74%,漢黃茶素峰面積RSD=2.01%，木犀草香峰面積RSD=1.68%。表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。8)重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品，按供試品溶液制備方法分別制備5份樣品溶液，按含量測(cè)定方法分別測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果綠原酸RSD=1.20%,黃茶苷RSD:1.340/0,連翹香RSD=1.06%,漢黃茶素RSD=1.28%,木犀草苷RSD-1.49。/。，表明方法重現(xiàn)性良好。9)專屬性試驗(yàn)按處方比例及制備工藝，分別制備缺金銀花、黃茶、連翹的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。分別取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在供試品溶液和混合對(duì)照品溶液中綠原酸、黃茶苷、連翹苷、漢黃茶素和木犀草苷保留時(shí)間相應(yīng)位置上均無吸收峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照品無千擾。10)準(zhǔn)確度試驗(yàn)精密量取同一樣品0.4ml各6份，分別置于50ml容量瓶中，每瓶均加入綠原酸、黃茶苷、連翹苷、漢黃芩素和木犀草苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，0.45pm微孔濾膜過濾。按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果綠原酸平均回收率為98.5%,RSD為1.04%;黃茶苷平均回收率為99.43%,RSD為1.36%;連翹苷平均回收率為99.67%，RSD為1.03。/。；漢黃茶素平均回收率為98.02%，RSD為1.81。/。；木犀草苷平均回收率為99.28%,RSD為1.160/。。11)含量測(cè)定取3批樣品，按供試品溶液制備方法分別進(jìn)行處理得供試品溶液。分別4青密吸取混合對(duì)照品溶液與供試品溶、液各10^1,注入液相色譜儀，按上述色傳條件和洗脫程序進(jìn)行檢測(cè)，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸、黃芩苷、連翹苷、漢黃茶素和木犀草苷的含量，結(jié)果見表4。表4配方l、2、3中各有效成分的含量測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>權(quán)利要求1.一種雙黃連液體制劑，其中含有連翹苷0.1-1.0mg/ml、黃芩苷6.0-12.0mg/ml、綠原酸0.4-1.0mg/ml。2.如權(quán)利要求1所述的雙黃連液體制劑，其中含有連翹苷0.1-0.8mg/ml、黃茶普6.0-10.0mg/ml。3.如權(quán)利要求1所述的雙黃連液體制劑，其中含有連翹苷0.3-1.0mg/ml、黃茶苷8.0-12.0mg/ml、綠原酸0.6-1.Omg/ml。4.如權(quán)利要求1至3任一權(quán)利要求所述的雙黃連液體制劑，其中還含有木犀草苷0.005-0.05mg/ml、漢黃芩素0.05-0.2mg/ml。5.如權(quán)利要求2所述的雙黃連液體制劑，該制劑為一種注射液。6.如權(quán)利要求3所述的雙黃連液體制劑，該制劑為一種口服液。7.—種雙黃連液體制劑的含量測(cè)定方法，4吏用高效液相色譜作為檢測(cè)系統(tǒng)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于2000,以乙腈-0.2%磷酸溶液為流動(dòng)相，其中乙腈為流動(dòng)相A,0.2。/Q磷酸溶液為流動(dòng)相B，檢測(cè)波長為270-290nm，其中包括柱平衡、上樣、洗脫等步驟，在洗脫步驟中，流動(dòng)相A的體積百分比逐漸遞增，先用體積百分比為27%的A相和73%的B相作為流動(dòng)相洗脫2-4個(gè)柱體積；然后用體積百分比為30%的A相和70%的B相作為流動(dòng)相洗脫1-3個(gè)柱體積；接著用體積百分比為60%的A相和40%的B相作為流動(dòng)相洗脫2-4個(gè)柱體積；再用體積百分比為90%的A相和10%的B相作為流動(dòng)相洗脫3-5個(gè)柱體積。8.如權(quán)利要求7所述的含量測(cè)定方法，其中檢測(cè)對(duì)象為連翹苷、黃茶苷和綠原酸的含量。9.如權(quán)利要求7所述的含量測(cè)定方法，其中檢測(cè)對(duì)象為連翹苷、黃茶苷、綠原酸、木犀草苷和漢黃茶素的含量。全文摘要本發(fā)明主要涉及一種雙黃連液體制劑及其含量測(cè)定方法。雙黃連液體制劑主要含有黃芩苷、連翹苷、綠原酸等，其不良反應(yīng)主要表現(xiàn)在過敏性休克、皮膚潮紅、皮疹等。本發(fā)明提供了一種雙黃連液體制劑，其中含有適量的綠原酸、黃芩苷和連翹苷等有效成分，不僅具有理想的治療效果，同時(shí)還降低了過敏反應(yīng)的發(fā)生。本發(fā)明還提供了一種雙黃連液體制劑有效成分的檢測(cè)方法。使用本發(fā)明的檢測(cè)方法，只需要使用一種流動(dòng)相，就可以同時(shí)檢測(cè)黃芩苷、連翹苷、綠原酸、木犀草苷和漢黃芩素等五種有效成分的含量。該方法不僅顯著提高了檢測(cè)效率，而且還有效地降低了檢測(cè)成本。文檔編號(hào)A61K36/185GK101474260SQ200910000860公開日2009年7月8日申請(qǐng)日期2009年1月19日優(yōu)先權(quán)日2009年1月19日發(fā)明者周廣紅,周雪峰,岳大彪,方同華,王春生,項(xiàng)彥華申請(qǐng)人:黑龍江省珍寶島制藥有限公司