專利名稱：：樺木酸在制備糖苷酶抑制劑藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及從紫薇屬植物中分離得到的一個五環(huán)三萜酸化合物樺木酸(betulinicacid)用于制備糖苷酶抑制劑藥物的用途。該化合物具有強(qiáng)效抑制cc-葡萄糖苷酶的生物活性，因此該化合物或其可藥用的鹽，以及與制劑允許的藥物賦形劑或載體制備成的藥物組合物可預(yù)期作為糖苷酶抑制劑藥物尤其是防治II型糖尿病也即非胰島素依賴型糖尿病藥物之用途。
背景技術(shù)：
：隨著科技進(jìn)步和生活水平的提高，在全球范圍內(nèi)，糖尿病的發(fā)病率正在提高。據(jù)統(tǒng)計，糖尿病發(fā)生在約3%的人身上，全世界患者總?cè)藬?shù)己超過一億兩千萬。其中造成國民經(jīng)濟(jì)的重大損失。糖尿病是臨床常見的內(nèi)分泌代謝性疾病。西醫(yī)認(rèn)為糖尿病病人可分為兩種即I型糖尿病(或稱胰島素依賴型，IDDM)和II型糖尿病(或稱非胰島素依賴型，NIDDM)，其中非胰島素依賴型糖尿病的患病率和發(fā)病率更高，危害更大。我國糖尿病患者有2000萬以上，其中近90%為II型糖尿病。文獻(xiàn)報道，使用競爭性a-糖苷酶抑制劑，可以推遲淀粉、蔗糖等糖類化合物在消化道內(nèi)的轉(zhuǎn)化和吸收，減輕腎臟負(fù)擔(dān)，控制飯后血糖急劇上升，使血糖濃度在一天內(nèi)變化波動幅度減小。此乃有效抑制糖尿病患者前期具備的葡萄糖調(diào)節(jié)受損尤其是葡萄糖耐量受損(IGT)階段，而許多尚未發(fā)病的糖尿病潛在患者仍處于此階段當(dāng)中。德國拜耳公司研制的a-葡糖苷酶抑制劑阿卡波糖(acarbose)于19卯年在德國首次上市，現(xiàn)已成為多個國家包括我國治療非胰島素依賴型糖尿病一線用藥，商品名為拜糖平。亞太地區(qū)非胰島素依賴型糖尿病政策研究組2005年給出治療指南，將a-葡糖苷酶抑制劑(a-glucosidase)抑制劑作為降餐后血糖的首選用藥。各國針對新的a-糖苷酶抑制劑暨降糖藥物展開激烈競爭，日本開發(fā)的a-糖苷酶抑制劑voglibose也已于1994年上市，正在臨床試驗的a-糖苷酶抑制劑還有miglitol，emigliate等。然而其居高的價格必將受到新型低廉創(chuàng)新性同類藥物的競爭。中醫(yī)常稱糖尿病為消渴癥。李時珍本草綱目中記錄單味中藥用于治療糖尿病者有苦蕎麥、苦瓜、三七、夏枯草等187種。但從中分離確定的以a-糖苷酶抑制劑為作用機(jī)制的活性先導(dǎo)物和藥物鮮見報道。千屈菜科紫薇屬植物在我國主要分布于云南省(全國共16個種，在云南則有15種)，臨床上該屬植物有用于降糖的報道，從中進(jìn)行活性檢測下的活性成分篩選具有開發(fā)出新的a-糖苷酶抑制劑之潛力。根據(jù)該思路，我們從采自云南的數(shù)種紫薇屬植物之枝、莖、葉等部位經(jīng)醇提后再用石油醚萃取的低極性提取物中，用a-葡萄糖苷酶抑制作用為篩選指標(biāo)，活性追蹤提純石油醚提取物中其最有效抑制a-葡萄糖苷酶的部位，并從中得到一個抑制a-葡萄糖苷酶作用最強(qiáng)的單體化合物，經(jīng)化學(xué)測定其結(jié)構(gòu)為一個羽扇豆型五環(huán)三萜化合物樺木酸即betulinicacid，從而提供了可期待用于制備oc-糖苷酶抑制劑的藥物。其中，與ct-糖苷酶引起或有關(guān)的生理改變或疾病包括但不限于非胰島素依賴型糖尿病。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供樺木酸或其可藥用的鹽在制備糖苷酶抑制劑藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的樺木酸或其可藥用的鹽尤其在制備a-葡萄糖苷酶抑制劑藥物中的應(yīng)用。藥理實驗證實樺木酸具有較高的抑制a-葡萄糖苷酶活性的作用，可作為預(yù)防和治療與a-糖苷酶有關(guān)的疾病或生理改變癥狀，包括但不限于非胰島素依賴型糖尿病。本發(fā)明提供的樺木酸或其可藥用的鹽為羽扇豆型五環(huán)三萜化合物，通過從千屈菜科紫薇屬植物植物中提取制備得到所述的樺木酸化合物，具體結(jié)構(gòu)如下。樺木酸來源于千屈菜科紫薇屬植物的各個部位，優(yōu)選從云南省分布廣泛的常見的紫薇種，例如絨毛紫薇(Zagera"oew/"towe"toraPrezl)、西南紫薇(丄agentraem/"intermediateKoehne)、大卩十紫薇(丄agen^raew/areginaeRoxb)、大果紫薇(丄agera^oe柳/aflos-reginaeRetz)、d、口十紫薇(iyagerj/roew/apavviflora)、長毛紫薇(丄"gerWroew/"villosaKurz)制備而得。優(yōu)選植物的根莖和葉，可以是干品或鮮品。本發(fā)明人以往的植物化學(xué)研究發(fā)現(xiàn)紫薇屬植物中主要含有三萜類、香豆素類、酚酸類、倍半萜類、木質(zhì)素類、和胡蘿卜素類化合物[竇輝，張榮平，婁旭，賈々責(zé)，周長新，趙昱，jBz'oc/zemz'c"/S3^fewaf/cs五co/ogy,2005,13,639-642，2005]。本發(fā)明中，本發(fā)明人以ot-葡萄糖苷酶抑制(a-glucosidaseinhibition)為生物活性篩選模型及評價標(biāo)準(zhǔn)，對上述六種紫薇屬植物的石油醚提取部位進(jìn)行篩選，并通過多種正、反相層析手段對最強(qiáng)效抑制a-葡糖苷酶部位跟蹤篩選得到該有效抑制a-葡萄糖苷酶的活性化合物，并經(jīng)紅外、質(zhì)譜、紫外和核磁共振波譜等綜合解析推導(dǎo)出其化學(xué)結(jié)構(gòu)為樺木酸(betulinicacid)。從已發(fā)表資料看，樺木酸基本是作為抗腫瘤和抗HIV天然產(chǎn)物報道和使用的，而本發(fā)明得到的該羽扇豆烷型五環(huán)三萜酸成分，即樺木酸具有強(qiáng)效抑制a-葡萄糖苷酶的作用，其作用強(qiáng)度超過陽性對照阿卡波糖，此強(qiáng)效的a-葡萄糖苷酶對于該化合物屬于首次報道，從而為醫(yī)藥學(xué)界及制藥企業(yè)提供了一種新型的、來自天然界的、可期待用于制備a-糖苷酶抑制劑的藥物，用于防治包括但不限于非胰島素依賴型糖尿病的疾病。本發(fā)明的另一目的是提供所述藥物由式(1)化合物或其可藥用的鹽與制劑允許的藥物賦形劑或載體制備成藥物組合物。本發(fā)明的樺木酸或其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合，制備得到具有樺木酸抑制活性從而可以用于防治非胰島素依賴型糖尿病等與a-糖苷酶相關(guān)疾病的藥物或藥物組合物。該藥物或藥物組合物可以采用片劑、顆粒劑、膠囊、口服液、滴丸、注射劑、透皮貼劑、氣霧劑等劑型；還可以采用現(xiàn)代制藥界所公知的控釋或緩釋劑型或納米制劑。本發(fā)明的有益之處是紫薇屬植物為中國西南常見植物藥材，從中提取分離強(qiáng)效的a-葡萄糖苷酶抑制劑樺木酸，其制備過程簡便、成本低廉、低污染，且其植物來源豐富，提取方便，用植物葉子進(jìn)行提取樺木酸可以使得植物本身不經(jīng)破壞而得到多次循環(huán)利用，既提高了經(jīng)濟(jì)效益，又對環(huán)境友好，且該單體化合物產(chǎn)品穩(wěn)定、易存放。其抑制a-葡萄糖苷酶活性高，極有可能進(jìn)一步發(fā)展成為臨床治療NIDDM的藥物，并且符合醫(yī)藥市場上回歸自然的趨勢，具有潛在的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益，因此具有較好的市場化前景。具體實施例方式下面通過實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。必須說明，下述實施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制，根據(jù)本發(fā)明的實質(zhì)對本發(fā)明進(jìn)行的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實施例1:絨毛紫薇干葉中樺木酸(betulinicacid)的制備1.1儀器與試劑核磁共振氫譜。H-NMR)，核磁共振碳譜(13C-NMR)和二維核磁共振波譜(2DNMR)由INOVA型超導(dǎo)核磁共振波譜儀(VARIANINOVA-400MHz)測定(四甲基硅醚為內(nèi)標(biāo))；電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)由BrukerEsquire3000+質(zhì)譜儀測定，柱層析用硅膠(100-200，200-300)以及薄層層析用硅膠GF254(10-40目)均購自青島海洋化工廠；所用試劑均為分析純，其中石油醚沸程為60-9(TC;薄板(TLC)檢測用254nm和365nm的紫外燈；顯色劑用10%硫酸-乙醇以及溴甲酚綠溶液。1.2植物來源與鑒定供提取用藥材為絨毛紫薇(丄agerafraem^towe"tosaPrezl)于2001年8月采自云南省境內(nèi)，由中國科學(xué)院昆明植物研究所彭華研究員鑒定。1.3提取與分離絨毛紫薇干葉(0.5公斤)粉碎后用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得51克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(14.6克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第33-45流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為49.2%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(12.6毫克)。1.4樺木酸的結(jié)構(gòu)鑒定樺木酸無色針晶；熔點(diǎn)307-309。C(未校)；ESI-MSm/z:455[M-H]-;核磁共振氫譜(氘代吡啶，400MHz):34.23(1H,雙峰，/=2.0Hz),4.55(1H,雙峰，《/=0.8Hz)，3.33(1H,多重峰)，3.26(1H,雙雙峰，《/=8.4,8.4Hz),2.54(1H)，2.41(1H),1.57(3H,單峰)，1.05(3H，單峰)，0.85(3H，單峰)，0.84(3H，單峰)，0.79(3H，單峰)，0.60(3H,單峰)；核磁共振碳譜(氖代吡啶，100MHz):3177.8(C,C-28),150.2(C,C-20),108.8(CH2,C-29),76.9(CH，C-3)，55.4(C,C-17),54.7(CH,C-5),49.7(CH,C-9),48.6(CH,C-19)，46.6(CH,C-18),41.6(C,C-14),39.9(C,C-8),38.3(C，C-10),38.1(CH2,C-l)，37.4(CH，C-13),36.4(CH2，C-22),36.3(C，C-4)，33.6(CH2，C-7),31.7(CH2,C-16)，30.0(CH2,C-15),29.1(CH2,C-21),27.4(CH3,C-23),27.0(CH2,C-2),24.9(CH2，C-12),20.0(CH2,C-ll),18.2(CH3,C-30)，17.6(CH2，C-6),15.2(CH3,C-25),15.2(CH3,C-26),15.1(CH3,C-24),13.7(CH3,C-27)。根據(jù)上述結(jié)構(gòu)鑒定相關(guān)數(shù)據(jù)可以看出，該化合物的波譜數(shù)據(jù)與化合物樺木酸基本一致[AkimIkuta;HidejiItokawa;Phytochemistry，27(9」,2813—2815，(1988);ZongzeMa;YoshioHano,FengQiu;etal.;Tetrahedron,45，3261-3263,(2004)]，從而鑒定出該化合物結(jié)構(gòu)為樺木酸(betulinicacid)。實施例2:絨毛紫薇鮮葉中樺木酸(betulinicacid)的制備2.1儀器與試劑同實施例1。2.2植物來源與鑒定同實施例l。2.3提取與分離樣品(絨毛紫薇鮮葉，重0.5公斤)采回后立即用刀剁碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得35克褐黑色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(10.1克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第31-40流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為51.5%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(8.3毫克)。2.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例3:絨毛紫薇莖枝及根皮中樺木酸(betulinicacid)的制備3.1儀器與試劑同實施例1。3.2植物來源與鑒定同實施例l。3.3提取與分離樣品(絨毛紫薇莖枝及根皮，干重0.5公斤)粉碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得43克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(12.2克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第35-47流份所測得ot-葡萄糖苷酶抑制活性為55.3%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(7.1毫克)。3.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例4:西南紫薇干葉中樺木酸(betulkiicacid)的制備4.1儀器與試劑同實施例1。4.2植物來源與鑒定f共提取用藥禾才為西南紫薇(丄agera^oe附/aintermediateKoehne)于2001年8月采自云南省境內(nèi)，由中國科學(xué)院昆明植物研究所彭華研究員鑒定。4.3提取與分離樣品(西南紫薇干葉，重0.5公斤)粉碎后用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得48.9克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(16.0克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第31-40流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為47.7%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(8.7毫克)。4.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例5:西南紫薇鮮葉中樺木酸(betulinicacid)的制備5.1儀器與試劑同實施例1。5.2植物來源與鑒定同實施例4。5.3提取與分離樣品(西南紫薇鮮葉，重0.5公斤)采回后立即用刀剁碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得39克褐黑色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升海次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(12.2克)用IO克IOO-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0—0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測oc-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第32-43流份所測得oc-葡萄糖苷酶抑制活性為50.2%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(6.5毫克)。5.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例6:西南紫薇莖枝及根皮中樺木酸(betulinicacid)的制備6.1儀器與試劑同實施例1。6.2植物來源與鑒定同實施例4。6.3提取與分離樣品(西南紫薇莖枝及根皮干，重0.5公斤)粉碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得37克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(13.7克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(IOO'.O-O:IOO)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測oc-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第33-39流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為49.8%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(7.3毫克)。6.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例7:大葉紫薇干葉中樺木酸(betulinicacid)的制備7.1儀器與試劑同實施例1。7.2植物來源與鑒定供提取用藥材為大葉紫薇(丄"g^^rae脂'areginaeRoxb)于2001年8月采自云南省境內(nèi)，由中國科學(xué)院昆明植物研究所彭華研究員鑒定。7.3提取與分離樣品(大葉紫薇干葉，重0.5公斤)粉碎后用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得52.5克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(18.3克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第35-46流份所測得oc-葡萄糖苷酶抑制活性為52.5%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(11.1毫克)。7.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例8:大葉紫薇鮮葉中樺木酸(betulinicacid)的制備8.1儀器與試劑同實施例1。8.2植物來源與鑒定同實施例7。8.3提取與分離樣品(大葉紫薇鮮葉，重0.5公斤)采回后立即用刀剁碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得45.3克褐黑色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(12.8克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第29—39流份所測得a-葡糖苷酶抑制活性為48.6%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(10.2毫克)。8.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例9:大葉紫薇莖枝及根皮中樺木酸(betulinicacid)的制備9.1儀器與試劑同實施例1。9.2植物來源與鑒定同實施例7。9.3提取與分離樣品(大葉紫薇莖枝及根皮，干重0.5公斤)粉碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得46.4克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(13.5克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測oc-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第29-38流份所測得ot-葡萄糖苷酶抑制活性為46.4%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑迸行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(8.6毫克)。9.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例10:大果紫薇干葉中樺木酸(betulinicadd)的制備10.1儀器與試劑同實施例1。10.2植物來源與鑒定供提取用藥材為大果紫薇aagera&oem/aflos-reginaeRetz)于2001年8月采自云南省境內(nèi)，由中國科學(xué)院昆明植物研究所彭華研究員鑒定。10.3提取與分離樣品(大果紫薇干葉，重0.5公斤)粉碎后用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得50.7克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(17.7克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第34-40流份所測得oc-葡萄糖苷酶抑制活性為50.1%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(10.2毫克)。10.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例lh大果紫薇鮮葉中樺木酸(betulinicacid)的制備11.1儀器與試劑同實施例1。11.2植物來源與鑒定同實施例IO。11.3提取與分離樣品(大果紫薇鮮葉，重0.5公斤)采回后立即用刀剁碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得42.7克褐黑色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(13.2克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析,以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每ioo毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第35-39流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為40.5%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(4.5毫克)。U.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例12:大果紫薇莖枝及根皮中樺木酸(betulinicacid)的制備12.1儀器與試劑同實施例1。12.2植物來源與鑒定同實施例10。12.3提取與分離樣品(大果紫薇莖枝及根皮，干重0.5公斤)粉碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得44.6克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(12.3克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(IOO:O-O:IOO)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測oc-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第30-34流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為40.7%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(5.2毫克)。12.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例13:小葉紫薇干葉中樺木酸(betulinicacid)的制備13.1儀器與試劑同實施例1。13.2植物來源與鑒定供提取用藥材為小葉紫薇(丄agera/raem/apavviflora)于2001年8月采自云南省境內(nèi)，由中國科學(xué)院昆明植物研究所彭華研究員鑒定。13.3提取與分離樣品(小葉紫薇干葉，重0.5公斤)粉碎后用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得50.2克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(17.9克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測ot-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第31-37流份所測得oc-葡萄糖苷酶抑制活性為43.5%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(8.8毫克)。13.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例l。實施例14:小葉紫薇鮮葉中樺木酸(betulinicacid)的制備14.1儀器與試劑同實施例1。14.2植物來源與鑒定同實施例13。14.3提取與分離樣品(小葉紫薇鮮葉，重0.5公斤)采回后立即用刀剁碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得41.1克褐黑色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(13.5克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測oc-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第33-40流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為45.5%(粗提物于100微克/亳升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(7.0毫克)。14.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例15:小葉紫薇莖枝及根皮中樺木酸(betulinicacid)的制備15.1儀器與試劑同實施例1。15.2植物來源與鑒定同實施例13。15.3提取與分離樣品(小葉紫薇莖枝及根皮，干重0.5公斤)粉碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得43.2克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(11.7克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測oc-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第31-35流份所測得oc-葡萄糖苷酶抑制活性為41.8%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑迸行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(6.4毫克)。15.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例16:長毛紫薇干葉中樺木酸(betulinicacid)的制備16.1儀器與試劑同實施例1。16.2植物來源與鑒定供提取用藥材為長毛紫薇aflgw^raew^villosaKurz)于2001年8月采自云南省境內(nèi)，由中國科學(xué)院昆明植物研究所彭華研究員鑒定。16.3提取與分離樣品(長毛紫薇干葉，重0.5公斤)粉碎后用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得46.4克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(14.8克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(IOO:O-O:IOO)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第33-39流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為45.2%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(7.5毫克)。16.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例17:長毛紫薇鮮葉中樺木酸(betulinicacid)的制備17.1儀器與試劑同實施例1。17.2植物來源與鑒定同實施例16。17.3提取與分離樣品(長毛紫薇鮮葉，重0.5公斤)采回后立即用刀剁碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得40.8克褐黑色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(13.2克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第32-39流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為44.4%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(7.2毫克)。17.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例18:長毛紫薇莖枝及根皮中樺木酸(betuliiiicadd)的制備18.1儀器與試劑同實施例1。18.2植物來源與鑒定同實施例16。18.3提取與分離樣品(長毛紫薇莖枝及根皮，干重0.5公斤)粉碎后并用95%乙醇室溫下浸提兩次，每次24小時，提取液冷卻后合并，經(jīng)減壓濃縮得41.8克棕褐色粘稠狀粗提物。將粗提物用2升熱水溶解，石油醚萃取(2升/每次，共3次)，減壓蒸除溶劑，得到的石油醚浸膏(12.9克)用10克100-200目硅膠拌樣，用硅膠柱(200-300目，150克)柱層析，以石油醚-乙酸乙酯(100:0-0:100)為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，每100毫升為一流份，薄層層析檢測相同組分之流份，減壓脫溶后送測a-葡萄糖苷酶抑制活性。合并第32-38流份所測得a-葡萄糖苷酶抑制活性為43.7%(粗提物于100微克/毫升濃度下測定)，繼而減壓蒸除其溶劑，以甲醇為溶劑進(jìn)行多次重結(jié)晶，得到無色針晶化合物即樺木酸(8.6毫克)。18.4樺木酸(betulinicacid)的結(jié)構(gòu)鑒定同實施例1。實施例19:化合物樺木酸(betulinicacid)對a-葡萄糖苷酶的抑制活性檢測19.1儀器與試劑19丄1實驗儀器酶標(biāo)儀ELISAplatereader(Bio-TekInstruments,USA)19丄2試劑ot-D-Glucosidase即a-葡萄糖苷酶(Sigma,500U/毫升)；4-硝基酚-ot-D-吡喃葡萄糖苷(PNPQMerck)，還原性谷胱甘肽(上海生工)，阿卡波糖即拜糖平(拜耳醫(yī)藥保健有限公司，北京)。19.2測試方法化合物對(x-葡萄糖苷酶的抑制作用測定采用比色法。樣品孔中加入磷酸緩沖液(67毫摩爾/升，pH6.8，170微升)，還原型谷光甘肽(l毫克/毫升，5微升)，a-葡萄糖苷酶(用磷酸緩沖液稀釋成0.2U/毫升，25微升)，化合物樺木酸用二甲亞砜溶解，用磷酸緩沖液稀釋，每孔25微升，使其終濃度為0.04毫克/毫升，0.004毫克/毫升，0.0004毫克/毫升，最后加入底物4-硝基酚-(x-D-吡喃葡萄糖苷(23.2毫摩爾/升，25微升)，37°C，水浴反應(yīng)15分鐘后，加入碳酸鈉(1摩爾/升，50微升)終止反應(yīng)，在405nm波長處比色測定?？瞻卓字杏孟嗤w積的三羥甲基氨基甲烷-氯化氫緩沖液代替底物。溶劑對照孔中加入與化合物等濃度的二甲亞砜?；衔镆种坡视蓸悠稯D值對于空白和對照OD值計算。其中樺木酸對a--葡萄糖苷酶的半數(shù)抑制濃度(ic5())由劑』效應(yīng)曲線得到。19.3試驗結(jié)果參見表l:表l<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>19.4實驗結(jié)論a-葡萄糖苷酶是a-糖苷酶抑制劑藥物篩選中的的指標(biāo)性測試酶，許多藥物是基于對a-葡萄糖苷酶競爭性抑制作用而成為降糖藥物的。本實驗表明樺木酸具有強(qiáng)效抑制a-葡萄糖苷酶的作用，其抑制活性超過一線用藥阿卡波糖100%，因而具有較強(qiáng)的開發(fā)潛力，有可能進(jìn)一步發(fā)展成為新的預(yù)防或治療非胰島素依賴型糖尿病用藥。權(quán)利要求1.一種樺木酸或其可藥用的鹽在制備糖苷酶抑制劑藥物的應(yīng)用，所述樺木酸化合物是羽扇豆型五環(huán)三萜化合物，具有式(1)所示結(jié)構(gòu)式2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于樺木酸或其可藥用的鹽在制備a-葡萄糖苷酶抑制劑藥物中的應(yīng)用。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物由式(1)化合物或其可藥用的鹽與制劑允許的藥物賦形劑或載體制備成藥物組合物。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于式(1)化合物由紫薇屬植物之任一部位提取分離得到。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述紫薇屬植物選自絨毛紫薇、西南紫薇、大葉紫薇、大果紫薇、小葉紫薇、長毛紫薇的干品或鮮品中的一種。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述紫薇屬植物選自絨毛紫薇、西南紫薇、大葉紫薇、大果紫薇、小葉紫薇、長毛紫薇的葉。全文摘要本發(fā)明提供樺木酸及其可藥用的鹽在制備糖苷酶抑制劑的藥物中的應(yīng)用。所述化合物是從紫薇屬植物中分離得到的一個羽扇豆醇型五環(huán)三萜酸化合物，藥理實驗證實該化合物對α-葡萄糖苷酶具有明顯的抑制作用，其抑制活性超過一線用藥阿卡波糖100％，因此該化合物或其可藥用的鹽，以及與制劑允許的藥物賦形劑或載體制備成的藥物組合物可在制備預(yù)防或治療II型糖尿病也即非胰島素依賴型糖尿病藥物中應(yīng)用。本發(fā)明式(1)所示結(jié)構(gòu)式如上。文檔編號A61P3/10GK101416971SQ20081016281公開日2009年4月29日申請日期2008年12月11日優(yōu)先權(quán)日2008年12月11日發(fā)明者旭婁,張榮平,蘇曾,輝竇,約阿施·史托克希特,董曉武,昱趙,鄭漢其,郝小江申請人:浙江大學(xué)