專利名稱：：三白草木脂素提取物、其制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種三白草木脂素含量至少在50%以上的三白草木脂素提取物、其制備方法及其在保肝藥品中的應(yīng)用。技術(shù)背景三白草SaururusChinensis(Lour.)baill是三白草科多年生草本植物，全草入藥，具有清熱解毒、利尿消腫之功效。主要分布在我國中南、西南地區(qū)，四季均可采收，資源豐富。三白草含多種生物活性成分，已從中分離出的有揮發(fā)油、黃酮類、木質(zhì)素類、生物堿類、鞣質(zhì)類、多糖類等，發(fā)現(xiàn)這些成分具有抗炎、去毒、降糖、保肝、利尿等活性。木脂素是三白草中的主要化學(xué)成分之一，也是其中具有保肝和治療肝炎疾病的主要有效成分。文獻(xiàn)(李擇友，陳峰，等.三白草的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展.中國藥房[J].2007，18(6):473~474)記載，三白草中的木脂素成分有三白脂素(Saucernetin)、奧斯楚拜脂素-5(Austrobailignan-5)、三白脂素-8(Saucernetin-8)、三白脂素-7(Saucernetin-7)、三百草素(Sauchinin)、三白草酮(Sauchinone)、三白草酮A(SauchinoneA)、l，-表三白草酮(l，-epi-sauchinone)、三白草醇A、三白草醇B、三白草醇C(SaucerneolC)、紅楠素D(MachilinD)、4-甲氧基紅楠素D等木脂素類成分，其中研究表明三白草中的3個非對映木脂素三白草酮、三白草酮A和l，-表三白草酮能顯著降級四氯化碳損傷的大鼠肝細(xì)胞中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)的分泌，提示具有明顯的保肝作用。在現(xiàn)有技術(shù)中，還未有專門富集三白草中木脂素類成分的提取工藝相關(guān)研究。
發(fā)明內(nèi)容為彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種三白草木脂素類提取物，本發(fā)明三白草提取物中，木脂素類成分的含量至少在50%以上，優(yōu)選在70%以上。本發(fā)明的另一目的在意提供一種產(chǎn)品，該產(chǎn)品具有保肝作用，可用用于肝臟疾病如肝炎或肝損傷或肝纖維化等病變。所述產(chǎn)品中含有本發(fā)明三白草總木脂素提取物及其制藥上可接受的賦形劑。本發(fā)明三白草提取物中，木脂素類成分應(yīng)含有三白草酮、三白草酮A或表三白草酮，總木脂素含量應(yīng)在50%以上。本發(fā)明的還一目的在于提供一種制備本發(fā)明所述三白草木脂素提取物的制備方法，制備本發(fā)明三白草木脂素提取物的不過如下步驟(1)三白草藥材處理后用50%~95%的選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種醇室溫或加熱回流提取后，提取液減壓濃縮，使其含有機(jī)溶劑量不高于15%，總體積為原藥材量的0.51.0倍，濃縮后的提取液室溫放置過夜，過濾，取上清液；(2)上清液減壓蒸至無醇味后，以己烷或石油醚萃取脫脂，至萃取液顏色變淡，經(jīng)萃取后的藥液用堿調(diào)pH值為9.0-10.0，以有乙酸乙酯繼續(xù)萃取，合并乙酸乙酯萃取液，(3)乙酸乙酯萃取液減壓濃縮至原體積的1/3后，用pH為3.0-4.5的酸水萃取，棄酸水萃取液，乙酸乙酯層減壓濃縮得木脂素含量在50%以上的提取物。本發(fā)明中，乙酸乙酯還可以用氯仿或乙醚代替。所用的堿是指氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀中的任一種，所用的酸水是指稀鹽酸水溶液或稀硫酸水溶液。本發(fā)明三白草總木脂素提取物的制備方法還可以進(jìn)一步包括純化步驟，所述的純化步驟是指重結(jié)晶、凝膠柱層析、硅膠柱層析或大孔吸附樹脂柱層析、聚酰胺吸附柱層析，或者它們的組合、或者將浸膏拌于硅膠或硅藻土中，晾干后有機(jī)溶劑回流洗脫。其中所用的有機(jī)溶劑可以是氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、正丁醇、乙醇、丁酮、乙醚中的任一種或幾種的組合。本發(fā)明中，含有總木脂素含量至少在50%以上的產(chǎn)品是指膠囊劑、片劑或丸劑，將50%以上的木脂素提取物與制藥上可接受的藥用賦形劑結(jié)合，采用常規(guī)的制劑方法制得。本發(fā)明所述的產(chǎn)品，既可以是藥品，也可以是保健食品。本發(fā)明中，所述的木脂素含量是指木脂素在總提取物中的重量百分比含量。本發(fā)明提取物還可與其它提取物，如黃芪提取物、五味子提取物、丹參提取物等聯(lián)合使用。進(jìn)一步地，本發(fā)明的制備方法包括三白草藥材干燥，粉碎，以50%95%選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種醇室溫或加熱回流提取后，提取液減壓濃縮，使其含有機(jī)溶劑量不高于15%，總體積為原藥材量的0.51.0倍，濃縮后的提取液室溫放置過夜，過濾，取上清液，上清液減壓蒸至無醇味后，以己烷或石油醚萃取脫脂，至萃取液顏色變淡，經(jīng)萃取后的藥液用堿調(diào)pH值為9.0-10.0，以有乙酸乙酯繼續(xù)萃取，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液減壓濃縮至約萃取液的1/3體積，用蒸餾水洗滌2~3次，再用pH為3.0-4.5的酸水(稀鹽酸水或稀硫酸水)液萃取35次，棄酸水萃取液，乙酸乙酯層再用蒸餾水洗2~3次，棄水洗液，最后將乙酸乙酯層減壓濃縮，得總木脂素含量在50%以上的提取物，將此提取物用乙醇重結(jié)晶、或者經(jīng)凝膠柱層析、或者經(jīng)硅膠柱層析、或者經(jīng)大孔吸附樹脂層析、或者經(jīng)聚酰胺柱層析、或者將提取物拌入硅膠或硅藻土中，用有機(jī)溶劑回流提取拌入提取物的硅膠或硅藻土，可得到木脂素含量在70%以上的提取物。木脂素含量可用紫外分光光度法或高效液相法測定。三白草中除含木脂素類成分外，尚含有富含多酚羥基或羥基的黃酮或鞣質(zhì)類酸性成分，含氮原子的生物堿類成分，以及一些低極性的葉綠素類成分，本發(fā)明采用不高于15%的醇溶液靜置處理，可將一些低極性的葉綠素類成分沉淀除而除去，用己垸或石油醚萃取又可去除一些極性很小的脂溶性成分，釆用堿水有機(jī)溶劑混合體系萃取和酸水有機(jī)溶劑混合體系萃取，可以分別除去一些酸性成分和堿性成分，從而提高提取物中木脂素的含量。具體實(shí)施例下面的實(shí)施例可以進(jìn)一步說明不發(fā)明，但不是以任何方式來限制本發(fā)明。實(shí)施例1三白草藥材干燥10kg，粉碎，以10倍量80%選乙醇加熱回流提取3次后，過濾合并回流提取液，提取液60。C下減壓濃縮，使其含乙醇量約為10%，總體積IOL，濃縮后的提取液室溫放置過夜，過濾，取上清液，上清液減壓蒸至無醇味后，至約8升體積量后，以己烷萃取脫脂，至己烷萃取液顏色變淡，經(jīng)萃取后的藥液用碳酸氫鈉調(diào)pH值為10.0，以乙酸乙酯繼續(xù)萃取至乙酸乙酯萃取層顏色變淡，合并乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液減壓濃縮至約萃取液的1/3體積，用蒸餾水洗滌3次，再用pH為3.5的鹽酸水溶液萃取4次，棄酸水萃取液，乙酸乙酯層再用蒸餾水洗2次，棄水洗液，最后將乙酸乙酯層減壓濃縮，得三白草提取物101g，總木脂素含量為52%。實(shí)施例2將實(shí)施例1所得的三白草提取物用150mL的95%的乙醇回流溶解，趁熱緩慢加入蒸餾水，邊加邊充分振搖，至乙醇濃度為約45%時(shí)(即當(dāng)?shù)稳胨笥休p微渾濁)，搖勻，密封，室溫冷卻至室溫溫度，改放置冰箱中過夜靜置，待其析出結(jié)晶，過濾，取結(jié)晶，得結(jié)晶I;母液加壓濃縮至干，加入約90mL95。/。的乙醇回流溶解，緩慢加水重復(fù)上述操作進(jìn)行二次重結(jié)晶，得結(jié)晶II;合并結(jié)晶I、II，得三白草提取物48g，木脂素含量為87%。實(shí)施例3將實(shí)施例1所得的三白草木脂素提取物用盡量少的無水乙醇溶解后，拌入100目硅膠中，所用硅膠為提取物重量的2倍，水浴上蒸干乙醇，拌入提取物的硅膠用乙酸乙醇回流提取23次，合并乙酸乙酯回流提取液，減壓濃縮，得三白草提取物65g，木脂素含量為73%。實(shí)施例4藥理實(shí)施例本發(fā)明木脂素提取物對CC14誘導(dǎo)肝纖維化大鼠的治療作用將40只小鼠隨機(jī)分為對照組、CC14模型組、聯(lián)苯雙酯組、本發(fā)明提取物組，每組10只。實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)2天后，除對照組及模型組小鼠用蒸餾水0.5ml/鼠灌胃外，其余各組均按劑量灌胃，l次/天，連續(xù)1周。末次給藥后2h，除對照組小鼠外，均按10ml/kg—次性腹腔注射0.P/。CC14花生油溶劑，禁食不禁水，16h后眼眶取血，離心取血清，測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、乳酸脫氫酶(LDH)水平，取肝臟稱重，計(jì)算肝臟系數(shù)。結(jié)果見表l，從表l結(jié)果可知，木脂素提取物對由CC14所致大鼠肝損傷的血清GPT、GOT的升高有明顯的拮抗作用，提示對CC14誘導(dǎo)肝纖維化大鼠有治療作用。表1藥物對CC14致大鼠慢性肝纖維化的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>*:與模型組相比，p<0.05，**:與模型組相比，pO.Ol權(quán)利要求1、一種三白草總木脂素提取物，其特征是所述提取物中木脂素的含量高于50％。2、如權(quán)利要求1所述的三白草總木脂素提取物，其特征是所述木脂素含量高于70%。3、一種具有保肝作用的產(chǎn)品，其特征是含有如權(quán)利要求1或2所述的三白草總木脂素提取物和制藥上可接受的賦形劑。4、一種制備如權(quán)利要求1或2所述三白草總木脂素提取物的方法，其特征在于該方法包括如下步驟(1)三白草藥材處理后用50%~95%的選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種醇室溫或加熱回流提取后，提取液減壓濃縮，使其含有機(jī)溶劑量不高于15%，總體積為原藥材量的0.51.0倍，濃縮后的提取液室溫放置過夜，過濾，取上清液；(2)上清液減壓蒸至無醇味后，以己烷或石油醚萃取脫脂，至萃取液顏色變淡，經(jīng)萃取后的藥液用堿調(diào)pH值為9.0-10.0，以有乙酸乙酯繼續(xù)萃取，合并乙酸乙酯萃取液；G)乙酸乙酯萃取液減壓濃縮至原體積的1/3后，用pH為3.0-4.5的酸水萃取，棄酸水萃取液，乙酸乙酯層減壓濃縮得木脂素含量在50%以上的提取物。5、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征是乙酸乙酯還可以用氯仿、乙醚代替。6、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征是所述的堿是指氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉、碳酸氫鉀中的任一種。7、如權(quán)利要求4所述的方法，其特征是所述的酸水是指稀鹽酸水或稀硫酸水。8、如權(quán)利要求4所述的方法，其還可包括進(jìn)一步的純化步驟，所述的純化選自重結(jié)晶、凝膠柱層析、硅膠柱層析或大孔吸附樹脂柱層析、聚酰胺吸附柱層析，或者它們的組合、或者將浸膏拌于硅膠或硅藻土中，晾干后有機(jī)溶劑回流洗脫。9、如權(quán)利要求3所述的產(chǎn)品，其為片劑、膠囊劑或丸劑。全文摘要本發(fā)明涉及一種木脂素含量高于50％的三白草提取物、其制備方法以及在保肝藥品及保健品中的應(yīng)用，三白草藥材經(jīng)乙醇提取、有機(jī)溶劑萃取和一系列的純化步驟后可得富含木脂素類成分的三白草提取物。文檔編號A61K36/185GK101254253SQ20081010379公開日2008年9月3日申請日期2008年4月11日優(yōu)先權(quán)日2008年4月11日發(fā)明者張樹祥,熊國裕申請人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司